文摘

我们检查了一氧化氮(NO)、il - 6和TNF -分泌物培养palmitate-stimulated PBMNCs或血浆从2型糖尿病(T2MD)患者或非糖尿病患者(ND)控制。游离脂肪酸(FFA)已经提出诱导慢性低度炎症,激活先天免疫系统,造成有害影响血管细胞和其他组织通过炎症过程。的水平不,il - 6、TNF -棕榈酸,MDA高于上层清液的刺激血细胞(PBMNC)或从等离子体的病人。本研究的结果表明,在糖尿病加重高血糖在体外炎症反应与高水平的国家林业局PBMNCs刺激(棕榈酸酯)。这些结果表明,高血糖质数PBMNCs没有,il - 6和tnf分泌在体外FFA刺激相关的分泌炎症生物标记的糖尿病。针对信号通路激活联合治疗高血糖与同步控制高血糖和高甘油三酯血症会建议控制糖尿病并发症的进展。

1。介绍

循环游离脂肪酸(远期运费协议)升高患者2型糖尿病(T2DM)病人体内,肥胖、代谢综合征、血脂异常(1- - - - - -4]。远期运费协议代表一组结构变量的复杂分子储存在体内甘油三酯和发布通过脂解作用[3,5]。远期运费协议进行分类根据碳链长度在短期,中期,和长链脂肪酸双键的存在与否饱和(SFA)和不饱和脂肪酸,分别作为单链不饱和脂肪或是多不饱和双键的数量(PUFA) [6,7]。FFA细胞信号通路的影响取决于化学结构。据报道,慢性接触SFA增加氧化应激和炎症,导致心血管疾病和胰岛素抵抗的发展8- - - - - -12]。

氧化应激,反映prooxidant和抗氧化剂效应器之间的失衡,扮演重要的角色在糖尿病血管并发症13]。过氧化物、一氧化氮和脂质过氧化是体内氧化应激的指标。尽管许多研究关于FFA-induced过氧化物生产过剩(14- - - - - -22),很少有报道关于FFA-induced一氧化氮(NO)的生产。没有是一个高度扩散性的和不稳定的气体,充当一个调制器的血管,在骨骼肌细胞和脂肪细胞葡萄糖运输,血液流动,力量一代在骨骼肌、细胞毒性、炎症(23- - - - - -26]。

FFA也调节免疫系统通过与特定的细胞表面受体的相互作用,如toll样受体(TLR)和G-protein-coupled受体(GPCR),从而激活NF-kappaB和c-Jun伴激酶(物)通路,刺激分泌的促炎细胞因子(IL-1beta, il - 6和tnf)和趋化因子(27- - - - - -30.]。

众所周知高血糖和高脂血症的影响外周血单核细胞(PBMNCs) NADPH氧化酶的活化系统导致活性氧的生产,TLR表达,增强NF-kappaB活动,诱导促炎细胞因子,趋化因子,分泌循环粘附分子(8,21,31日- - - - - -41]。

因此,升高血浆FFA水平作为炎症诱发者,这可能导致血管疾病(27- - - - - -30.,42,43]。因此,本研究的目的是调查在体外棕榈酸酯的影响(0),等离子体的主要国家林业局(44,45调制的),氧化应激和炎症在2型糖尿病患者。棕榈酸有或没有感应,一氧化氮是量化和培养上清液与促炎细胞因子分泌PBMNCs的2型糖尿病患者。协会在原生质的甘油三酯,促炎细胞因子(il - 6和tnf),和氧化应激(丙二醛)进行了探讨。

2。材料和方法

本研究通过Santa Casa医院伦理委员会的批准(Belo Horizonte-MG、巴西)和书面知情同意了所有的参与者在研究。

2.1。主题

2型糖尿病患者(),诊断根据美国糖尿病协会的标准46),与非糖尿病患者控制(),从45到70岁,是从Santa Casa内分泌部门招募医院。2型DM患者接受他汀类药物和β受体阻断剂除降糖药物。在这项研究之前,所有志愿者收到完整的体格检查,详细的病史和实验室分析评估(表1)。孕妇和个人遭受酒精中毒、感染、炎症、痴呆,或恶性疾病和吸烟成瘾被排除在本研究之外。

2.2。制备脂肪酸

棕榈酸酯和low-endotoxin牛血清白蛋白(BSA, FFA-free)从Sigma-Aldrich有限公司购买FFA溶解在0.1 M氢氧化钠在70°C,随后与10% BSA 55°C 10分钟获得500年最后FFA浓度(摩尔比2.4:1)(42,47]。10毫米脂肪酸蛋白复合原液和0.5M BSA控制解决方案是刚做好的,每次实验前过滤、稀释。

2.3。制备外周血单核细胞

PBMNCs从10.0毫升的肝素化静脉血液净化,使用Ficoll-Hypaque梯度如前所述[48),用细微的修改。台盼蓝排斥试验表明,细胞生存能力在所有样本> 95%。

2.4。制备的等离子体

EDTA静脉血样采集使用一个标准的静脉穿刺技术。等离子体是通过离心(200克15分钟,在室温下),和样本存储在−80°C,直到进一步的分析。随后分析之日起3个月内存储。

2.5。促炎细胞因子的量化和PBMNCs上层清液

整除(100L) PBMNC悬架(/毫升)从杜尔贝科T2DM病人和ND控制修改鹰的介质(DMEM)补充10%胎牛血清(的边后卫)孵化的存在与否BSA (0.5米)或棕榈酸酯(500米)72小时37°C下5%的股份有限公司₂。最后成交调整到300L在DMEM补充10%的边后卫。孵化后,细胞被离心机和上层的收集。白细胞介素- 6 (il - 6人类EIA Kit-Enzo生命科学公司,纽约,美国)和肿瘤坏死因子-α(TNF -人类环评Kit-Enzo生命科学公司,纽约,美国)浓度测定通过酶联免疫吸附试验(ELISA)。因为没有不稳定,没有量化的间接决定基于血液的检测亚硝酸盐和硝酸盐水平。没有浓度测量使用总一氧化氮测定工具包(试验设计,恩佐生命科学公司,纽约,美国)。

2.6。量化的、MDA和促炎细胞因子在等离子体

的等离子体水平不,il - 6和tnf如上所述。血浆MDA浓度测量使用TBARS分析工具包(美国纽约ZeptoMetrix Corp .)根据制造商的指示。

2.7。统计分析

值的±标准差(SD)的手段。非参数Kolmogorov-Smirnov测试是用来评估连续变量的正态分布。使用未配对学生的对比组进行t测试。类内使用皮尔逊相关性进行的相关性。所有分析被认为是重要的值< 0.05使用起源6.0软件(Microcal软件公司,北安普顿,妈,美国)。

3所示。结果

3.1。PBMNCs从T2DM病人对棕榈酸酯刺激更敏感比细胞和控制

如图1,棕榈酸酯激活的分泌il - 6和tnf在PBMNCs T2DM病人和ND控件(相比)。棕榈酸酯的诱导效应的结果在2型糖尿病患者和ND PBMNCs控制,表示为±SD,没有,和;il - 6,和;和tnf,和,分别。结果如图1也证明了PBMNCs T2DM病人分泌显著()大量的il - 6 ()和tnf (从ND控件()与细胞il - 6:tnf:)。(没有区别)在没有生产PBMNCs T2DM病人()和ND控件(没有刺激。

生产的促炎细胞因子并没有改变在BSA的存在()在2型糖尿病患者和ND控制:不,和;il - 6,和;和tnf,和,分别。

3.2。Palmitate-Induced PBMNCs没有和il - 6生产相关的2型糖尿病患者,而不是控制

图2显示了皮尔森的水平之间的相关性不,il - 6和tnf PBMNCs T2DM病人和ND棕榈酸酯刺激后控制。之间的关系没有显著的刺激和il - 6 PBMNCs T2DM病人(,)和温和的PBMNCs ND (,)。没有之间的相关性观察和tnf PBMNCs T2DM病人和ND控制。

3.3。血浆MDA和促炎细胞因子(il - 6和tnf)浓度升高2型糖尿病

表2表明,2型糖尿病患者血浆MDA浓度增强,il - 6和tnf与ND ()。没有区别在T2DM病人之间没有层次和ND ()。结果,表示为±SD, MDA,和;il - 6,和;tnf,和;不,和,分别为T2DM病人和ND控制。

3.4。血浆的一氧化氮水平与MDA,从T2DM病人血浆中il - 6水平

没有和il - 6和tnf水平之间的相关性和MDA在图所示3。有很强的正相关关系在T2DM病人中观察到没有与il - 6 (,)。结果还演示了在T2DM病人没有和MDA之间显著负相关(,)。

3.5。在T2DM病人血浆的甘油三酸酯水平与血浆MDA水平,il - 6和tnf

图4显示了皮尔森的甘油三酸酯的水平之间的相关性和il - 6和tnf在T2DM病人和ND的等离子体。与MDA的甘油三酸酯水平呈正相关(,)、il - 6 (,)和tnf (,)在2型糖尿病患者的血浆。

3.6。血浆的2型糖尿病患者的血糖水平与血浆甘油三酯的水平,MDA, il - 6和tnf

图5显示了皮尔森的血糖和甘油三酯的水平之间的相关性,不,MDA,促炎细胞因子水平在2型糖尿病患者的血浆和ND控制。血糖水平与甘油三酯呈正相关(,)、MDA (,)、il - 6 (,)和tnf (,)在2型糖尿病患者的血浆。

4所示。讨论

本研究的结果表明,在糖尿病质数PBMNCs高血糖在活的有机体内,诱导在体外upregulation没有和促炎细胞因子的细胞的刺激与棕榈酸酯。plasmitic评价表现出更高层次的甘油三酯,MDA, il - 6和tnf相比ND T2DM病人。没有区别是观察到的2型糖尿病患者和ND之间没有等离子体水平。此外,这项研究的结果显示,没有与MDA和il - 6的水平,与MDA和甘油三酸酯水平相关,il - 6和tnf T2DM病人的血浆。

糖尿病是一种多因素疾病,其特征是高血糖和高脂血症,这是内皮功能障碍导致心血管事件的重要危险因素(49]。远期运费协议,特别是国家林业局,已被证明导致促炎与肥胖有关,2型糖尿病,胰岛素抵抗和血脂异常4,8- - - - - -11]。文中给出的结果显示炎症的影响饱和脂肪酸棕榈酸酯在PBMNCs T2DM病人而不是细胞(图1),这表明高血糖在palmitate-induced炎症过程中发挥作用。研究表明,高葡萄糖和FFA水平的综合效应在人类单核细胞调节巨噬细胞增殖涉及glucose-dependent氧化低密度脂蛋白,加强细胞毒性效应通过过氧化物生产过剩,并通过TLR[放大炎症21,50,51]。然而,Tripathy et al。32]证明了FFA浓度的增加诱发氧化应激和炎症在人类白细胞从ND科目。这些差异可能与实验协议的差异有关。

的炎性改变棕榈酸酯的存在可能与NF-kappaB激活(21,28,32,52- - - - - -55]。NF-kappaB是一个关键的中介,调节免疫和炎症反应,调节多种促炎的目标基因在内皮细胞、血管平滑肌细胞,巨噬细胞(56]。的激活NF-kappaB导致粘附分子的增加产量,leukocyte-attracting趋化因子,各种炎性细胞因子,包括tnf和il - 6,没有通过进气阀打开表达式(57- - - - - -60]。

没有反或促炎属性(61年]。没有在血管内稳态中起着重要的作用,在免疫细胞,调节抗菌和抗肿瘤的活动,虽然没有生产过剩可能导致组织损伤和急性和慢性炎症有关56,62年]。一氧化氮合酶(NOS)综合没有从精氨酸用NADPH和氧气作为辅被用物(63年]。没有合酶被描述的三个亚型:神经元(nNOS或1号),诱导(间接宾语或2号),内皮(以挪士或号3)[64年]。激活巨噬细胞和中性粒细胞产生大量不通过进气阀打开活动(65年,66年]。这项研究的结果表明增加没有生产和之间的正相关和il - 6水平palmitate-stimulated PBMNCs T2DM病人,表明伊诺表达可以通过palmitate-induced高架促炎细胞因子的分泌。没有观察到的细胞差异ND控件(数字1和2)。飘散的棕榈酸治疗增加骨骼肌(没有生产67年]。然而,在内皮细胞,FFA诱导以挪士的抑制,从而衰减没有生产(68年- - - - - -71年]。

评估在活的有机体内炎症,我们量化的血浆水平不,氧化应激生物标志物(MDA),促炎细胞因子(il - 6和tnf)在2型糖尿病患者和ND控制。符合其他研究[72年- - - - - -93年),本研究的结果表明il - 6和tnf水平升高,反映了激活先天免疫细胞,和高水平的MDA,表明在T2DM病人中存在氧化应激与控制。糖尿病条件(高血糖和高脂血症)增加促炎和氧化应激水平,最终在内皮功能障碍(1,27,42,56,90年,94年,95年]。通过以挪士(氧化应激减少生产56),和过氧化物水平的增加可能没有产生过氧亚硝基反应,剧毒的产品(23,96年]。过氧亚硝基硝酸盐酪氨酸残基的蛋白质和调节功能(97年,98年]。在目前的研究结果没有任何差异的等离子体研究组织(表之间没有水平2)。然而,我们观察到负关联没有从T2DM病人血浆中MDA含量,表明增加氧化应激可能影响没有biodisponibility,导致内皮功能障碍在糖尿病(图3)。

本研究的结果也证明高血浆甘油三酯水平在2型糖尿病患者相比(表和控制1)。远期运费协议的形式存储在体内甘油三酯和通过脂类分解释放到组织,过程监管通过胰岛素99年]。受损的胰岛素信号增加脂类分解,导致增加FFA水平(One hundred.,101年]。本研究的结果表明,甘油三酸酯水平与MDA呈正相关,il - 6,并从T2DM病人血浆tnf水平,但这种相关性不是观察到等离子体从ND控制。没有观察到的相关性血浆甘油三酯和没有之间的研究组织(图4)。血糖水平与甘油三酯呈正相关,MDA, il - 6,并从T2DM病人血浆tnf水平,但不是在等离子体和控制(图5)。

越来越多的证据表明,血脂异常的监管是监管的同等重要的高血糖和高血压患者2型糖尿病的护理。高脂血症是发展的一个主要危险因素血管功能紊乱和动脉粥样硬化(27- - - - - -30.,42,43]。大多数2型糖尿病患者肥胖,升高血浆FFA水平(102年,103年]。此外,高脂肪饮食会引起代谢障碍和炎症通过FFA释放的脂解作用和促炎细胞因子通过下游信号(104年,105年]。

远期运费协议已经提出诱导慢性低度炎症,激活先天免疫系统,造成有害影响血管细胞和其他组织通过炎症过程。本研究的结果表明,在糖尿病加重高血糖在体外炎症反应与高水平的国家林业局PBMNCs刺激(棕榈酸酯)。此外,结果表明,内皮的水平不可能监管通过氧化应激和高甘油三酸酯水平相关的氧化应激和促炎细胞因子分泌在2型糖尿病患者。内皮功能障碍与几位糖尿病病理生理条件56]。结合疗法针对胞内代谢变化机制导致内皮功能障碍是一个很重要的问题与糖尿病血管并发症的预防。同时控制高血糖和高甘油三酯血症有必要改善糖尿病血管病变的进展。

利益冲突

作者证实不存在利益冲突。

确认

作者要感谢FAPEMIG CNPq,斗篷,解开Mineira de Toxina Terapeutica 26/12,和Toxinologia项目的财政支持。