文摘
高密度脂蛋白粒子富含蛋白质的粒子作为反向胆固醇运输车辆从组织到肝脏。本研究的目的是调查年龄相关性变化的功能活动HDL和高能量饮食的影响指数,以及正确的葡萄多酚的影响下从“Enoant”获得葡萄葡萄。我们观察到高密度脂蛋白粒子的年龄相关性成分变化。结果表明,总脂质和三酰甘油(TG)水平高于24-month-old动物。在肥胖老鼠,高密度脂蛋白24-month-old的总脂质和TG水平高于三个和12个月大的团体,但没有不同于24-month-old组。血浆高密度脂蛋白paraoxonase(其)和卵磷脂,胆固醇酰基转移酶(LCAT)活性水平减少老鼠,一根一根的拔掉和胆甾醇酯转运蛋白(CETP)活动是高老老鼠。保持12个月大的动物高果糖饮食完全夷为平地的年龄差异的数据测量12个月大的老鼠大和24之间。后“Enoant”管理,增加高密度脂蛋白彩球和LCAT活性水平和减少CETP活动被发现在24-month-old和肥胖的老鼠。
1。介绍
冠状动脉血管疾病(心血管病)是成人的发病率和死亡率的主要原因(1]。心血管疾病的主要危险因素除了久坐不动的生活方式和高饱和脂肪和胆固醇的饮食包括家族史、年龄、性别、低密度脂蛋白胆固醇(低密度脂蛋白)升高,降低高密度脂蛋白胆固醇(hdl - c)、高血压、吸烟、糖尿病(2- - - - - -4]。
高密度脂蛋白合成在肝脏和小肠和负责运输20 - 30%的血浆总胆固醇。载脂蛋白-ⅰ是高密度脂蛋白中最丰富的蛋白质。剩余的蛋白质质量是由小两性分子的蛋白质,如apoC、载脂蛋白e,无足的,apoM apoA-IV,酶,如paraoxonase(其)1和acetylhydrolase platelet-activating因素,和glutathionehlt过氧化物酶和脂质转运蛋白、卵磷脂等:胆固醇酰基转移酶(LCAT)和胆甾醇酯转运蛋白(CETP) [5]。
CETP与高密度脂蛋白粒子和促进身体相关的运输从高密度脂蛋白胆甾醇酯apoB-containing脂蛋白。减少CETP活动可能会增加高密度脂蛋白胆固醇和降低VLDL-C和低密度。因此,CETP同时影响的成分和浓度apoA−−和apoB-containing脂蛋白。临床研究表明低胆固醇酯转运蛋白缺乏症患者罹患冠心病的患病率(6]。尽管CETP不足可能通过增加脂蛋白胆固醇水平,防止动脉粥样化形成的影响一直存在争议。在日本进行的一些研究表明,CETP缺乏可能增加心血管疾病的风险(7]。戴维森等人报道了CETP疫苗诱导自体抗体,尤其是绑定和胆固醇酯转运蛋白,抑制内源性的意图增加高密度脂蛋白,减少动脉粥样硬化的发展(8]。LCAT是一种细胞外胆固醇代谢的关键酶(9]。LCAT可能促进胆固醇的吸收外围组织成高密度脂蛋白粒子通过维护一个浓度梯度自由射流的胆固醇(10]。如果LCAT受损,成熟的HDL一代可能会减少,导致增加动脉粥样硬化的11]。
有数据表明,高密度脂蛋白的直接抗氧化作用在低密度脂蛋白氧化,降低脂质过氧化物,是可能由PON1 [12]。高血清胆固醇和胰岛素抵抗,例如,与PON1活性下降(12]。衰老与变更有关PON1活动由于PON1分子在血液中含量较高,这可能与需要应对衰老的负面影响。PON1减少老年人和绝经期的开始(13]。
血清PON1活性和浓度也被证明是调制的生活方式和饮食因素(14]。多酚(出现在酒、茶和果汁)也会增加PON1活动在人类和老鼠15,16]。
在早期,研究表明,红酒消费或其多酚槲皮素或儿茶素载脂蛋白E-deficient老鼠(其等离子体PON1活性低于控制),在其与血清的增加活动(17]。管理红酒多酚的混合物在小鼠肝PON1活性增加,而高剂量水平有一个相反的效果(18]。的低剂量茶多酚还能扭转血浆和肝PON1活动的减少和肝mRNA水平存在于老鼠与半胱氨酸。
最富有的多酚的来源之一葡萄,和产品的加工,包括类黄酮和其他多酚的葡萄,葡萄酒,葡萄籽,由于其抗氧化性能的极大兴趣和清除自由基的能力19]。
体外研究表明,葡萄产品抑制低密度脂蛋白的氧化。在葡萄酒中这些物质氧化抑制剂的活性稀释1000倍明显超过了维生素C和E(类似的值20.]。在我们的研究中,我们使用多酚集中“Enoant”获得葡萄葡萄和由Ressfood制造公司(雅尔塔,乌克兰)。
本研究的目的是调查年龄相关性变化的功能活动HDL和高能量饮食的影响指数,以及正确的方法的影响下葡萄多酚从“Enoant。”
2。材料和方法
2.1。动物
3 - 12,大和24纯种雄性老鼠有免费的食物和水,并保持在24°C的周期12 h光/ 12 h黑暗被用于实验。多酚集中了操作系统每日在21天(9毫克的剂量在重新计算多酚/ 100克体重)(21]。控制动物被给予相应的生理溶液的体积。
老鼠从“肥胖”组,12个月大的老鼠,一直在节食,由60%的果糖。两种饮食所包含同等比例的碳水化合物(70%)、蛋白质(20%),和脂质(10%)22]。
chloralose-urethane麻醉下的动物被斩首。所有程序都是通过药店机构国立大学动物保健和使用委员会,依照小灵通的指导方针。
2.2。隔离的高密度脂蛋白
高密度脂蛋白(1.085 - -1.190 g / mL)是由顺序从大鼠血浆分离超速离心法和被其密度下限。脂蛋白广泛透析与10毫米Tris-HC1缓冲区(pH值7.4),包含150毫米氯化钠,0.01% (w / v)的叠氮化钠,和0.25毫米EDTA (Tris-NaC1缓冲区)。分发血浆脂蛋白,样本离心机在65000 rpm(342000克)4 h在4°C的最适条件xl - 100 K超离心机(贝克曼库尔特)设定在缓慢的加速和减速。样本分级离心1 h内。
2.3。测定血脂水平
脂质提取与氯仿和甲醇(1:2 v / v)描述的2倍(23),收集上清液测定甘油三酯(TG)和胆固醇。TG和胆固醇酶比色测定方法与商业套件(每时,北京)。总胆固醇含量检测标准酶的帮助下胆固醇氧化酶试剂盒(百Diagnostik GmbH,德国)。总脂质浓度的帮助下确定标准工具包(美国鹰诊断)与香草醛试剂反应。
2.4。测定脂质过氧化产品数量
不同样本中提取的脂质氯仿:甲醇(2:1,v / v) (23]。脂质在氯仿相被蒸发回收氯仿在无氧的N2(超纯载体,年级99.99% N2)。最后的总脂质提取溶解在环己烷(1毫克/毫升),然后扫描对环己烷空白在贝克曼模型25分光光度计。光密度测量的波长220 nm(孤立双键的化合物),232海里(二烯配合),和278年nm-for ketodienes和共轭三烯。
2.5。测量的α生育酚
一个修改版的高效液相色谱法(HPLC)过程24)是用来测量维生素e .高效液相色谱系统包括一个150×3.9毫米Nova-Pak C18(4微米)列Guard-Pak precolumn(从水域,米尔福德,妈,美国),水域微孔中医列加热器,水域490多波长检测器,日立655 - 61处理器,日立655个液相色谱,Bio-Rad autosampler - 100。
2.6。测定的PON1
PON1活性化验使用合成对氧磷(diethyl-p-nitrophenyl磷酸盐)作为底物。PON1活性决定通过测量p-nitrophenol初始底物水解率,吸光度是监控在412 nm测定混合物中含有2.0毫米对氧磷,CaCl 2毫米2,20μL 100毫米的等离子体Tris-HCI缓冲区(pH值8.0)。包含孵化的空白样品混合物没有自发的衬底的等离子体是同时运行正确的崩溃。酶活性是计算从E412 p-nitrophenol(18.290烫/厘米),并表示为U /毫升(25]。
2.7。CETP活动
CETP活动重复10μL整除的等离子体孵化项目后决定3H-cholesterol ester-labeled高密度脂蛋白3和低密度脂蛋白。放射性物质从3H-HDL3低密度脂蛋白(以降水与肝素/ MnCl后上层清液2 +)是用来计算CETP活动(表示为从放射性的百分比3H-HDL3每16 h(孵化)低密度脂蛋白(26]。
2.8。LCAT活性
LCAT活性的测定放射性物质的数量在每个地方允许自由胆固醇/总胆固醇比率的计算在每个LCAT反应前后血浆样本,因此酯化率的估计27]。部分酯化率(% h′)的百分比表达自由胆固醇酯化血浆样本中每小时。
2.9。统计分析
结果之间的差异评估使用方差分析(方差分析)和学生的以及。在所有的分析的差异被认为是具有统计学意义。数据表示为±标准差。
3所示。结果
表1显示了实验动物的血脂和载脂蛋白浓度。24-month-old的总胆固醇水平高于三个和12个月大的群体。胆固醇水平更大的胖老鼠比中年和青年动物(),但三个和12个月大的组之间没有差别。甘油三酯、apo A1和apo B水平没有不同的其中三组。在24-month-old HDL水平高于三个和12个月大的群体。低密度脂蛋白水平更高的肥胖大鼠()。
在我们的实验中,我们还观察到高密度脂蛋白粒子(表年龄相关性成分变化2)。结果表明:24-month-old的总脂质和TG水平高于三个和12个月大的群体。在肥胖老鼠,高密度脂蛋白24-month-old的总脂质和TG水平高于三个和12个月大的团体但24-month-old组之间没有差别。高密度脂蛋白胆固醇水平显著低于总24-month-old和肥胖的动物比三个和12个月大的群体。没有区别和肥胖的老鼠一根一根的拔掉。结果表明:二烯配合,ketodienes +共轭,总在24-month-old氢过氧化物水平高于三个和12个月大的群体。孤立双键水平显著低于和肥胖的老鼠一根一根的拔掉。
表3显示了其血浆高密度脂蛋白,LCAT, CETP活动在实验老鼠的不同年龄和肥胖的老鼠。其血浆高密度脂蛋白和LCAT活性水平减少老鼠,一根一根的拔掉,CETP活动水平高老老鼠。
图1显示不同年龄的体重和肥胖组实验动物。这些数据表明,让老鼠fructose-rich饮食导致显著增加体重。“Enoant”政府减少这个索引,但是,没有达到控制值。
“Enoant”政府降低高密度脂蛋白二烯配合,ketodienes +共轭,总氢过氧化物水平24-month-old和肥胖大鼠组和总脂质和TG水平(表增加高密度脂蛋白4)。结果表明,α生育酚水平明显高于在HLD“Enoant”管理。
“Enoant”的影响在其血浆高密度脂蛋白,LCAT, CETP活动水平在实验如表所示4。“Enoant”政府之后,它被发现在其增加高密度脂蛋白和LCAT活性水平和减少24-month-old CETP活动和肥胖的老鼠。
4所示。讨论
我们已经进行了一系列的实验研究年龄相关性高密度脂蛋白的功能活动的变化,高能量饮食这个指数的影响。
我们发现,在年老的动物,有一个显著增加高密度脂蛋白和低密度脂蛋白(表1)。脂质过氧化作用的增加和减少内源性抗氧化剂α生育酚水平和TG水平和增加高密度脂蛋白活动(表的关键酶2和3)可以表明,高密度脂蛋白在古老动物的机能活动低于年轻人。
数据潜在心血管明斯特(PROCAM)的研究表明,在较低的高密度脂蛋白胆固醇水平受试者年龄超过60年的主要特点有心肌梗死病史的受试者相比,60岁以上没有先前的心血管事件(28]。
高密度脂蛋白分数是由异质粒子大小从7到14 nm (2,12]。除了这两个角色在反向胆固醇运输和胆固醇酯化,HDL抗氧化活性,主要是由于其与PON1和抗炎,抗血栓和血管舒张活动可能占antiatherogenic行动的脂蛋白12,13]。
目前,在文献中,有相互矛盾的数据的内容和活动在其年龄相关性变化(28,29日]。虽然PON1活性的主要决定因素是由基因多态性,额外的因素,本文中没有讨论,还应该提到。年龄最相关的作用,PON1活性很低在出生之前,逐步增加在第一年或两个人类的生活30.]。PON1活性与衰老也会下降,可能是因为氧化应激条件下的发展(31日]。
抑制低密度脂蛋白氧化是一个主要antiatherogenic财产HDL (32]。这个活动是,部分由于,高密度脂蛋白相关的蛋白质和酶。然而,这些蛋白质相互作用是否在高密度脂蛋白是未知的抗氧化活性。在一个令人印象深刻的研究来理解这种情况下,低密度脂蛋白和载脂蛋白A1,孵化LCAT, PON1高密度脂蛋白氧化条件下的存在与否。当低密度脂蛋白脂类过氧化物浓度测定、ApoA-1 LCAT, PON1都发现抑制低密度脂蛋白氧化在缺乏高密度脂蛋白和提高HDL抑制LDL氧化的能力(33]。
与年龄相关的损失在其活动中没有老年病人,,然而,与患者群体的异质性34]。众所周知,在其的主要功能之一是保护的高密度脂蛋白脂质过氧化过程。在这项研究中,我们发现在其活动的减少(表之间的关联3)和增加高密度脂蛋白的脂质过氧化反应(表4)。
因此,减少LCAT活性24-month-old动物可能是原因之一在老年(氧化低密度脂蛋白含量的增加35),反过来,可能增加心血管疾病的风险。
的一个主要心血管风险因素是肥胖。保持12个月大的动物高果糖饮食是陪同不仅通过增加体重和脂质代谢紊乱,而且脂蛋白的交换。还应该指出,高热量饮食完全消除了年龄差异研究参数在12个月大的动物与肥胖大和24动物。因此,与肥胖动物往往有更强烈的脂质过氧化反应,低水平的抗氧化剂,LCAT活动水平降低和彩球。
先前的研究在我们的实验室使用代谢综合征的实验模型表明,葡萄多酚的介绍动物复杂的抑制低密度脂蛋白氧化,高密度脂蛋白的脂质过氧化作用,其规范化和CETP活动水平36]。
因此,下一阶段的研究是研究葡萄多酚对高密度脂蛋白的组成和功能状态。我们发现“Enoant”在高密度脂蛋白明显抑制过氧化反应过程和增加高密度脂蛋白酶的活性表明改善高密度脂蛋白(表的功能活动4)。
PON-1也已被证明能够防止心血管疾病:(a)防止氧化形成的高密度脂蛋白和低密度脂蛋白(检测)12];(b)水解thiolactone形式的同型半胱氨酸,改变蛋白在动脉壁37];和(c)水解platelet-activating因子,参与血管疾病发展的生物活性磷脂(38]。一些研究显示,一个低级等离子PON-1活动与动脉粥样硬化的发病率增加,冠状动脉事件(可能是一个独立的危险因素12,39]。
几个膳食多酚,尤其是槲皮素已被证明移植PON1 [15]。白藜芦醇,葡萄和葡萄酒中的一种多酚植物抗毒素,显示增加PON1基因表达在人类肝细胞主要文化和HuH7细胞(40]。这种效应似乎取决于啊受体的激活和涉及PON1 XRE-like元素的启动子在126年和106−−地区。葡萄籽提取物也被报道在其增加血清活动控制,尤其是在糖尿病大鼠体外实验(41]。茶多酚可能上调PON1表达和释放的顺序激活蛋白激酶A和PPAR -γ(42]。除了这些,槲皮素政府缺乏低密度脂蛋白受体的小鼠(LDL−−) 4周报告增加肝脏PON1 mRNA和血清PON1活动40 - 90%,根据剂量(16]。
5。结论
因此,我们的调查结果显示,年龄相关性增加高密度脂蛋白脂质过氧化和活动在其减少肥胖大和24动物,这可能表明降低高密度脂蛋白的功能活动。保持12个月大的动物高果糖饮食完全夷为平地年龄差距在测试之间的指数12个月大的老鼠老鼠大和24。“Enoant”政府恢复了老鼠的血液指标与肥胖和降低过氧化反应流程和规范化的彩球和LCAT活性水平老老鼠。