文摘

高级糖化终端产品(年龄),生成通过非酶的糖基化的蛋白质、脂质、核酸,体内积累的时代因此被认为是衰老的标志物。衰老的特征是免疫自我耐受性的分解,导致增加自体抗原的反应性。先前的研究结果表明,年龄和其受体的愤怒可能参与自身免疫反应的发病机制通过树突状细胞(DC)激活。本研究的目的是调查是否白藜芦醇,耐受性影响DCs的多酚抗氧化化合物,能够抵消机制由年龄在DCs /愤怒交互。通过免疫化学和cytofluorimetric化验,我们证明了在体外预处理的人类monocyte-derived DCs与白藜芦醇可以防止直流激活响应glucose-treated白蛋白(AGE-albumin)。我们发现,白藜芦醇抑制DC表面施加一个成熟标志和愤怒回应AGE-albumin老年病。它也抑制促炎细胞因子表达,upregulation allostimulatory能力,增殖蛋白激酶(地图),和NF -B在AGE-albumin-stimulated DCs激活。我们表明,白藜芦醇,拆除年龄/ DCs愤怒信号可能预防或减少老化的反应性增加自体分子。

1。介绍

高级糖化终端产品(年龄)是一组异构的分子通过非酶的产生糖基化(糖化)和氧化蛋白质,脂类和核酸1]。尽管糖化是生理上现在和由几个因素调制,葡萄糖代谢紊乱和系统性自身免疫性疾病相关的炎症和氧化应激可能支持这些产品的形成和积累2- - - - - -6]。值得注意的是年龄通常在体内产生,因此他们积累的年龄被认为是衰老的生物标志物7]。进一步,年龄影响细胞和组织功能源于他们潜在的交叉结合细胞内和细胞外蛋白质从而改变他们的结构和功能,并触发不同的发展与年龄有关的疾病,如神经退行性和心血管疾病(8,9]。蛋白质改性的糖化已经被证明成为抗原从而诱导激活免疫反应(10- - - - - -12]。六个受体识别和结合年龄已确定(13,14],其中最好的特征和广泛地研究受体被愤怒,46-kDa蛋白质,主要表达于内皮细胞的表面,平滑肌细胞,monocyte-derived树突状细胞(dc) [15,16]。虽然有越来越多的证据表明年龄参与衰老(9),不过还需要进一步的调查来澄清的糖化作用老化和老龄化带来的疾病。众所周知,免疫系统经历了连续的形态和功能变化在整个一生中,随着年龄的增长逐渐下降17]。保护性免疫反应的下降外生和传染性病原体伴随着增加反应性对自我或内源性抗原17]。分解的机制免疫自我耐受性尚未完全了解。树突细胞,最强大的抗原递呈细胞(apc),有一个关键的角色在发病和监管的适应性免疫反应和诱导自身免疫(18]。先前的研究表明,AGE-modified血清分子诱导成熟的DCs和增强他们的能力来刺激t细胞增殖和细胞因子分泌可能通过upregulation愤怒的11,12]。这些发现表明,年龄和其受体(愤怒)轴可能参与通过DC活化与年龄相关的自体免疫反应的发病机制。破坏这个轴可能寿命产生有益的影响,因为许多病理机制引发的年龄/愤怒交互是可以预防的。先前的研究表明,白藜芦醇,天然多酚植物抗毒素,防止AGE-induced加速度通过抑制巨噬细胞脂质积累的愤怒的19在激活[]和呈现DCs耐受性20.]。考虑之前的证据,我们的研究的目的是调查是否白藜芦醇对DCs的AGE-induced激活抑制性影响。通过免疫化学和流量仪分析我们确定白藜芦醇的影响在人类monocyte-derived DCs的表型和功能在体外与AGE-albumin刺激。

2。材料和方法

2.1。试剂

一个高度纯化制备牛血清白蛋白(Sigma-Aldrich、米兰、意大利)溶解在糖化缓冲溶液(0.144 g / l KH (GB)₂阿宝₄,0.426 g / l Na₂HPO₄)pH值7.4,10点μg / mL最终浓度,并立即冻结在−80°C,在无菌条件下。然后白蛋白整除孵化,在无菌条件下,在黑暗中,在37°C 10 30或60天,在密封的瓶含有相同浓度(250毫米)的葡萄糖(Sigma-Aldrich)或nonreducing糖D-mannitol (Sigma-Aldrich)使用等渗控制,所述[21]。

在白蛋白内毒素污染,由定量显色鲎变形细胞溶解产物化验(qcl - 1000;BioWhittaker Walkersville,医学博士,美国),小于0.05欧盟/毫升的蛋白质。多粘菌素B在10添加到细胞培养基μg / mL,浓度完全中和活动这些大量的脂多糖(LPS)在所有实验中白蛋白。

白藜芦醇是购自σ。所有使用的化学物质都是最高的纯度。

2.2。表征AGE-Albumin

2.2.1。sds - page分析

整除(50μg) glucose-treated白蛋白,甘露醇白蛋白,白蛋白受到本土使用8 - 12%丙烯酰胺梯度sds - page凝胶准备描述(22]。糖化蛋白的非特异性结合被饱和的塑料表面最小化,每次操作后检查蛋白质的复苏。Novex提供的蛋白质分子量标准(标准分子量,表达载体,卡尔斯巴德,CA,美国)。

2.2.2。年龄荧光研究

荧光研究进行了报道(12]。简单地说,白蛋白(20μg / 200μL GB)是孵化最终成交量为37°C葡萄糖的存在与否或甘露醇为增加时间在黑暗中在无菌条件下,恒温(21°C),收集和稳态荧光发射光谱与FluoroMax-2荧光谱仪(Jobin Yvon-Spex,爱迪生,新泽西,美国)使用的激发波长370 nm和收集排放数据之间的400和650 nm 20°C(激发和发射5/5等于带宽度)。发射峰被记录在440 nm报道(23]。

2.2.3。尺寸排阻色谱法

快速蛋白液相色谱(FPLC)(法玛西亚,乌普萨拉,瑞典)进行了分析评估本地条件下白蛋白和AGE-albumin分子大小。与糖,孵化后整除的50μ蛋白质含量L(1毫克/毫升)注入到Superose S12淀粉微球列平衡在磷酸缓冲盐钙和镁PBS^−−/,pH值7.4。进行洗脱,0.4毫升/分钟流量在室温下,和蛋白质峰被发现在紫外线记录(光密度在280海里)。列是校准的蛋白质分子量标准(法玛西亚)根据制造商的指示。

2.2.4。糖化白蛋白的生物信息学分析

白蛋白的潜力(牛,加入AAA51411数量),糖化和生成时代产品,研究了通过一个web源(NetGlycate 1.0服务器)能够预测糖化ε氨基酸组蛋白的赖氨酸。功能性网站分析的生物信息学工具(24]。结构分析和计算机辅助分子模拟进行了描述(25]。

2.3。代DCs和T淋巴细胞

5健康献血者的血液样本从罗马的La Sapienza大学输血中心被用来获得外周血单核细胞(PBMCs)。依法进行的这项研究是1975年和1983年赫尔辛基宣言。

单核细胞和未成熟树突状细胞(idc)从PBMCs获得,如前所述[12]。0.2未成熟dc刺激了μ0111年g / mL有限合伙人(应变:B4大肠杆菌Sigma-Aldrich) 18个小时获得LPS-matured DCs。idc的纯度高于95%,作为评估流仪分析(使用CellDIVA FACSCanto, BD-Biosciences,圣地亚哥,美国)的细胞染色的CD14-fluorescein异硫氰酸酯(FITC)和CD1a-phycoerytrin (PE)单克隆抗体(mab)(美国PharMingen,圣地亚哥,CA)。CD4⁺T细胞纯化从PBMCs使用anti-CD4磁选择⁺微(Miltenyi研究Belgish格拉德巴赫,德国),根据制造商的指示。积极选择的CD4细胞的纯度⁺T细胞是高于95%,流量仪分析评估。

2.4。流仪分析表型DC成熟

初步剂量反应试验(0 - 200μg / mL)证实AGE-albumin影响DC表型成熟是剂量依赖性:我们确定30μg / mL的最佳试剂浓度DC刺激。五天的人类idc和AGE-albumin刺激(30μg / mL)、白蛋白(30μ0.2 g / mL),有限合伙人(μg / mL) 18个小时或如果离开了。AGE-albumin-stimulated DCs与白藜芦醇预处理或不为1小时37°C, 5%的公司₂在浓度范围从3到80μm .刺激后,DCs收集、清洗和沾PE-conjugated CD1a马伯,CD80、和人类白细胞antigen-D地区相关(HLA-DR)和FITC-conjugated马伯CD83、CD86和CD40 (PharMingen)又用鼠标反愤怒马伯(Chemicon国际有限公司泰梅库拉、钙、美国)或isotype-matched控制在4°C马伯30分钟。评估愤怒表面表达,细胞被洗,沾FITC-conjugated山羊anti-mouse Ab (Sigma-Aldrich) 30分钟在冰上。所有样品都通过流式细胞术分析FACSCanto使用CellDIVA软件(BD-Biosciences)。

2.5。钠十二烷基Sulphate-Polyacrylamide凝胶电泳(sds - page)和免疫印迹

细胞溶解产物1×10⁶如果或刺激DCs混合加载缓冲区(罗斯,卡尔斯鲁厄,德国),加热5分钟在95°C,进行SDS - page 10%与0.1% SDS聚丙烯酰胺凝胶使用标准程序(恒定电压在200 V;50μg蛋白/车道)。蛋白质被涂抹到polyvinylidenfluoride膜(美国微孔,贝德福德,MA)用半干的吸水单元(Trans-Blot SD;Bio-Rad,慕尼黑,德国)三羟甲基氨基甲烷/液对羟苯甘氨酸缓冲。转让后,薄膜被阻断缓冲区(PBS non-fat-dry奶粉Tween-20含0.1%和5%)1小时。愤怒的检测细胞膜孵化了兔子反愤怒多克隆Ab (Chemicon国际)的稀释1:1000年阻止缓冲区过夜。结合抗体与辣根过氧化物酶-可视化(合)共轭山羊anti-rabbit免疫球蛋白G Ab (1: 5000;BioRad)和免疫反应性是由化学发光反应评估使用增强化学发光(ECL)西方墨点法系统(Amersham生命科学)。光密度分析使用一个IMAGEJ 1.43软件。

2.6。细胞因子的生产

文化上层清液收集在18小时后与AGE-albumin DC刺激(30μg / mL)、白蛋白(30μ0.2 g / mL)或有限合伙人(μg / mL)。AGE-albumin-treated DCs与否与白藜芦醇预处理(50μ米)。IL-12p70, TNF -α、il - 10、il - 1βELISA测定(OptEIA包;BD-Biosciences)后,制造商的指示。检测的局限性如下:il - 10, TNF -α,il - 1β:16个pg / mL;IL-12p70: 7.8 pg / mL。

2.7。混合淋巴细胞反应和干扰素-γ⁺CD4⁺t细胞增殖

因为直流特性函数在活的有机体内抗原表示和t细胞激活的关键,如果我们评估allostimulatory能力或刺激DCs在标准混合淋巴细胞反应(高)。LPS-stimulated DCs被用作积极控制。同种异体T细胞(1×10⁵细胞/)孵化与辐照DCs (30 Gy) 3天在不同的应答器/刺激比率(1:4 - 1:64直流:T)在96圆的底板。2天,0.5μCi /的[³H] -methyl-thymidine (Amersham)被添加到每个。在37°C,额外的18个小时后细胞收获在玻璃纤维滤纸(Wallac EG&G公司,图尔库,芬兰),使用一个自动细胞收割机(收割机96,3 M,马赫TOMTEC橙色,CT,美国)。(³H] -methyl-thymidine吸收进细胞DNA是衡量阅读样本β计数器(1450 Microbeta + Wallac)。净每分钟计数(cpm)一式三份的文化测量。

确定增殖干扰素-γ⁺CD4⁺同种异体的CD4 T细胞⁺T细胞是沾染了5 -二乙酸(6)carboxyfluorescein, succinimidyl酯(CFDA-SE、表达载体、米兰、意大利)。简单地说,细胞被广泛清洗和resuspended 10的最终浓度⁷在PBS /毫升。CFDA-SE添加2.5的最终浓度μ在室温下M和孵化4分钟。的反应是由洗细胞停止RPMI 1640,含10% heat-inactivated的边后卫。CFDA-SE-labeled CD4⁺T细胞是孵化与辐照DCs为3天,包括刺激和未刺激1:32 DC: T细胞比例RPMI中含有10%的边后卫血清。细胞被监控CFDA-SE内容和干扰素- 3天γ流式细胞仪细胞因子表达。总之,10⁶细胞被刺激了10⁻⁷米佛波醇12-myristate 13-acetate (PMA) + 1μg / mL ionomycin 4小时10的存在μg / mL brefeldin(从Sigma-Aldrich所有试剂)。细胞被贴上anti-CD4 peridinin-chlorophyll-protein (PerCP) (BD-Biosciences) (5μL / 10⁴细胞,在冰上30分钟),用流式细胞仪赖氨酸溶液,然后用流式细胞仪permeabilizing解决方案(BD-Pharmingen生物科学)。细胞被染色的预先确定的最优浓度anti-IFN -γmAb或适当的同形像控制马伯FACSCanto (BD-Biosciences)和分析。CD4细胞的百分比⁺CFDA-SE⁺T细胞(细胞增殖)干扰素-γ阳性细胞门评估。细胞被封闭的根据他们的光散射特性排除细胞碎片。至少10000个可行的细胞为每个样本进行了分析。

2.8。增殖作用(MAP)激酶p38和ERK化验

快速激活细胞ELISA MAPK分析工具被用来监视p38和ERK激活根据制造商的建议(比利时活跃的动机)。总之,idc在96 -孔板培养和播种在5×10⁴细胞/。不同时期的细胞被刺激(0-60分钟)与AGE-albumin (30μg / mL)预处理后与白藜芦醇(50μ米),白蛋白(5毫米),有限合伙人(0.2μ0.2 g / mL)或PMA (μg / mL)。细胞的数量在每个数和规范化使用结晶紫的解决方案。结果表示为任意单位。

2.9。核因子-κB (NF -κB)易位

NF -κB (p65和p50)转录因子分析工具包(美国活跃的动机卡尔斯巴德,CA)是用于监控NF -κB激活。如果dc和dc刺激为45分钟37°C,在5%的股份有限公司₂与AGE-albumin (30μg / mL),预处理后与白藜芦醇(50μ米)和白蛋白(30μg / mL),细胞溶解。蛋白质含量是量化,激活水平的p65和p50子单元在等量的溶解产物测定Abs针对子单元的使用绑定到包含NF -寡核苷酸κ结合位点B共识。作为一个积极的控制我们使用海拉细胞提取和NF -κ野生型和突变共识的特异性寡核苷酸监控分析,根据制造商的指示。

2.10。统计分析

平均值和标准偏差计算为每个变量的研究。所有的统计程序都由GraphPad棱镜软件(美国圣地亚哥,CA)。数据分析与Kolmogorov-Smirnov测试来验证高斯分布。正态分布数据分析使用Bonferroni单向方差分析事后测试评估统计学意义在所有测试变量组与组之间的差异。值< 0.05被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。表征Glucose-Treated白蛋白

初步评估潜在的糖化网站内血清白蛋白序列评估通过生物信息学分析显示,22日的60个赖氨酸残基有很大概率nonenzymatically糖化(图1(a))。血清白蛋白增加次孵化的D-mannitol或葡萄糖在材料和方法部分描述。为了实现初步的分子表征AGE-albumin准备,荧光,变性sds - page,本机尺寸排阻色谱分析(图1)。荧光在440 nm,特定年龄的形成,测量和确认时间时代的创造产品(图1(b))。值得注意的是,翻倍的糖暴露(60与30天)诱导荧光的患病率增加,作为非饱和预期的反应。这个结果也表明,等级sugar-induced白蛋白改性在30天的暴露不是很高(适度AGE-modified白蛋白)。sds - page实验显示只有轻微的乐队转变对应可能1 - 2 kDa分子大小增加,可能由于一些加合物的形成,包括只有少数赖氨酸组(图1(c))。为了验证是否AGE-albumin可能经历一个重要分子大小修改尺寸排阻色谱分离进行了节中描述2,显示的形成一个分子大小增加可能由于一些加合物的形成(图1(d))。单体的峰值的左移AGE-albumin示例(图1(d))已经决定对应的11%蛋白质改性,确定蛋白质的低品位年龄修改。

在所有的实验报告DC成熟和途径分析了适度AGE-modified白蛋白制剂(30天与250毫米葡萄糖,黑星标志的人物1)使用。

3.2。白藜芦醇可以防止表型DC成熟和愤怒Upregulation在应对AGE-Albumin细胞表面

如果DCs显示一个不成熟的表现型(HLA -和CD83⁻),弱免疫反应性的CD80、CD86 CD40和愤怒。正如所料,经过18个小时的潜伏期,有限合伙人导致DCs成熟,所以CD83出现(图2(一个))和HLA-DR CD80、CD86和CD40表达增加(图2 (b))。愤怒表情DC表面保持不变(图3(一个))。AGE-albumin类似于有限合伙人,但不是白蛋白诱导DC成熟(CD83和HLA-DR:;CD40、CD80和CD86:;数据2(一个)和2 (b))。AGE-albumin诱导也显著upregulation愤怒(;图3)。值得注意的是,愤怒的表情AGE-albumin-stimulated DCs仍然升高直到60小时(;图3(一个)面板(2))。白藜芦醇的浓度50μM的基础上选择剂量反应实验为最优调节DC表型表面标记而不影响细胞的生存能力(数据未显示)。iDC的预处理与白藜芦醇阻止CD83的外观(;图2(一个))和HLA-DR upregulation、CD40、CD86和CD80 (,图2 (b))。这种预处理也阻止了upregulation愤怒与AGE-albumin刺激后(图3)。免疫印迹证实cytofluorimetric光密度分析结果(AGE-albumin紧随其后与AGE-albumin +白藜芦醇:;图3 (b))。有趣的是,白藜芦醇治疗并不影响细胞的生存能力,评估通过台盼蓝染色(数据没有显示)。

3.3。白藜芦醇可以防止Upregulation DCs与AGE-Albumin刺激细胞因子的生产

经过18个小时的文化,AGE-albumin,类似于有限合伙人,引发了统计学意义upregulation IL-12p70, TNF -α、il - 10、il - 1β表达式(;图4)。白藜芦醇预处理的idc (50μ米)防止upregulation AGE-albumin促炎细胞因子的反应(il - 12:;肿瘤坏死因子-α和il - 1β:;图4),而它维持生产il - 10表达不变。控制白蛋白和白藜芦醇独自离开细胞因子表达式修改的。

3.4。白藜芦醇可以防止AGE-Albumin Allostimulatory DCs刺激的函数

当辐照DCs, prestimulated AGE-albumin,测试高钙,增殖能力相对较低(平均cpm)休息的同种异体的T细胞可以实现如果DCs显著增加,从DC / T细胞的比例1:4 (DC / T细胞的比例1:16:如果与AGE-albumin-stimulated:;图5(一个))。这个结果类似于针对有限合伙人获得的。我们观察到与白藜芦醇预处理明显受损与AGE-albumin allostimulatory DCs刺激的函数(在1:16 DC / T细胞比率:)。白藜芦醇,仅当补充道在体外DC成熟期间,并没有改变alloantigen-induced t细胞增殖的程度在应对idc(数据没有显示)。

作为t细胞激活的函数,我们还测量了扩散的百分比干扰素-γ第CD4⁺T细胞。大多数干扰素-γ⁺CD4⁺T细胞会被LPS-matured DCs是增殖细胞(72%)(图5 (b))。高百分比的增殖干扰素-γ第CD4⁺T细胞检测也在回应AGE-albumin-matured DCs (56%)。相反,当CD4细胞⁺与resveratrol-pretreated dc成熟T细胞培养AGE-albumin,增殖IFN -的百分比γ⁺CD4⁺T细胞导致低(56%与36%)。

3.5。白藜芦醇可以防止MAPK和NF -κB为了应对AGE-Albumin激活

增加p38和ERK的磷酸化,达到45分钟,观察到AGE-albumin-stimulated DCs相比,如果的(p38:兵:;图6(一))。白藜芦醇预处理的iDC预防的upregulation MAPKs回应AGE-albumin (;图6(一))。

在AGE-albumin-stimulated DCs,活跃p65 idc和p50水平相比显著增加(,;图6 (b))。白藜芦醇预处理的idc阻止活跃的upregulation p50和p65 AGE-albumin ()。

4所示。讨论

在这项研究中,我们表明,白藜芦醇产生在体外成熟的抑制性影响人类monocyte-derived DCs在回应AGE-albumin愤怒的机制,包括减少表面表达,促炎细胞因子生产和NF -κB信号。我们所知,这是第一次证明白藜芦醇影响直流充满成熟应对时代产品从而导致不成熟/ semimature DC表型。

白藜芦醇,红酒和葡萄中含有的多酚化合物,起着潜在重要的作用在许多疾病(26]。anti-proliferative具有抗氧化,抗炎,抗血管新生的影响,和许多信号通路是其分子目标之一。白藜芦醇也被认为是有益的在增加寿命和健康老龄化26]。老龄化的特点是宽容的侵蚀,导致增加反应性自体抗原(27,28]。白藜芦醇行动的知识在底层机制老化,尤其是在免疫衰老和自身免疫,仍然是不完整的。

DCs是最强大的装甲运兵车,发病的关键作用和调节适应性免疫反应。他们控制Th1 / Th2和Th17 / Treg自体抗原的极化和宽容的国家。未成熟dc诱导调节性T细胞,从而促进宽容,而成熟的dc刺激效应T细胞免疫支持(29日- - - - - -32]。

DCs还能够调节炎症反应通过分泌细胞因子和趋化因子(30.,31日]。

一项研究表明,AGE-albumin诱导成熟的DCs和增强他们的能力来刺激t细胞增殖和细胞因子分泌可能通过upregulation愤怒和清道夫受体(11]。这之前的证据的基础上,我们设计了本研究调查的衰减效应在体外白藜芦醇AGE-albumin-matured DCs。白蛋白一级结构的生物信息学分析表明,一些潜在的糖化分子内存在的网站。我们验证的发生在glucose-treated糖化白蛋白增加白蛋白分子的维度和荧光的形成年龄。我们初步AGE-albumin分子特征还表示,在我们使用的准备在体外研究适度AGE-modified白蛋白,蛋白质折叠修改可能涉及新的抗原特性由于年龄加合物。当我们分析了DCs的表型特征与AGE-albumin刺激后,我们证实了以前的发现AGE-albumin诱导DC成熟的能力。我们的实验也表明,idc的预处理与白藜芦醇阻止了一个完整的表型和功能DC成熟AGE-albumin和诱导一个典型的不成熟/ semimature DC表型。这种表型特点是降低CD83, HLA-DR, CD40, CD80、CD86表达与低白介素、肿瘤坏死因子-α,il - 1β生产。符合他们的semimature表型,AGE-albumin-stimulated DCs用白藜芦醇预处理没有增加休息外源的T淋巴细胞的增殖能力较低标准混合淋巴细胞反应。进一步白藜芦醇抑制活动DCs信息来自我们的实验调查愤怒表情回应AGE-albumin DC表面。我们的研究结果表明,愤怒,年龄的特定受体(13- - - - - -15),仍然抑制在AGE-albumin-stimulated idc用白藜芦醇预处理时间超过48小时。最后发现可以解释白藜芦醇可能损害成熟AGE-albumin DCs的反应。众所周知,年龄到愤怒的绑定激活多种信号级联,包括Erk1/2 MAPKs,和活性氧的生成33]。这些细胞信号可能诱导激活下游效应器如NF -κB (33]。在我们的实验条件下,白藜芦醇愤怒干扰信号级联激活AGE-albumin在DCs通过沉默MAPK p38 ERK途径和NF -κB易位从而导致观察到的不成熟/ semimature表型。这些发现符合MAPK级联的差别,对这些观察到的血管平滑肌细胞(34]。我们的结果在NF -白藜芦醇的抑制作用κB通路支持先前的发现LPS-matured DCs (20.]。

我们的在体外研究结果有助于解释为什么上成为免疫原性在活的有机体内。

如今,人们普遍认为一些自身免疫性疾病与异常相关的神秘或neoepitopes DCs的自体抗原。因为抗原决定基的主导地位是影响蛋白质结构、糖化和glyco-oxidation事件可能会改变分子的蛋白质抗原表位(改变二级或三级结构),从而允许高效的神秘和neodeterminants表示。这是由我们的观察中,我们报道了氧化改性蛋白质增加他们的免疫原性12,35- - - - - -39]。尽管增强糖尿病、年龄积累也发生在正常的老化(40),和系统性自身免疫性疾病(41,42),尽管降低度,由氧化应激和炎症或仅仅通过食源性餐后hyperglycaemic峰值。增加氧化应激和年龄积累可能导致过度愤怒的43,44]。愤怒表达增加炎症环境和出现在衰老,他反过来可能特别暴露年龄的有害影响。AGE-RAGE交互可能在这些主题作为促炎的循环,从而导致慢性低度炎症的前体老龄化带来的疾病(43]。

5。结论

我们的在体外研究结果可能有助于解释年龄老化期间积累的不利影响,特别是对自我或内源性抗原的反应性增加观察老年个体。可能是慢性氧化应激条件年龄岁个人原因在体内积累。的年龄和增加促炎的机制提供了一种强大的反馈循环持续氧化应激,持续一代年龄和自身免疫。增加与年龄有关的修改现有的自体分子可能事实上增强免疫原性的潜力和可能启动一个本地自身免疫过程岁受试者与顺向发展不同的与年龄有关的疾病。

我们的在体外发现现在呼吁研究岁个人验证糖化蛋白的致病的作用,触发特定的体液和细胞免疫反应。

我们的研究结果表明,抗氧化剂白藜芦醇治疗或预防饮食,除了抑制糖化和glyco-oxidation反应,也可以直接拆除年龄/愤怒的信号,从而防止或减少增加反应性自体分子在衰老。

利益冲突

作者没有竞争金融利益与本研究。

确认

复杂的蛋白质混合物的支持(CPM)分析设施史Superiore di Sanita罗马,是承认。作者感谢博士Giuseppina Mandarino帮助修改的论文。