文摘
间充质干细胞的具体反应,氧化应激可能起到至关重要的作用在调节组织内稳态以及器官氧化损伤后的再生。人类的反应endometrium-derived间充质干细胞(hMESCs)氧化应激仍然还不清楚。在此,我们研究了H的影响2O2对细胞生存能力,诱导过早衰老和细胞凋亡。hMESCs高度抗H2O2相比之下,人类的二倍体成纤维细胞。测试一个假设是否hMESCs可能发生氧化应激过早衰老,细胞被短暂地暴露在亚致死的H2O2剂量。H2O2治疗细胞永久被逮捕,失去了Ki67增殖标记,提高衰老表型包括细胞肥大和SA -β加活动。此外,在p21Cip1强调细胞表达水平,SOD1 SOD2, GPX1升高。hMESCs幸存在压力下无法恢复增殖,增殖潜能的不可逆损失。而低H2O2在hMESCs剂量促进衰老,较高的H2O2剂量也诱导细胞凋亡的细胞群的一部分。值得注意的是,衰老hMESCs表现出较高的抗凋亡。因此,我们首次展示了hMESCs可能进入过早衰老的状态在亚致死的氧化应激反应。
1。介绍
应激反应的人类胚胎和成体干细胞辐射、氧化应激、热冲击,等等被广泛研究建立基于单元的组织修复策略,组织工程,和移植1]。人类间充质干细胞是成人多能干细胞自我更新的能力,进行脂肪形成的成骨,chondrogenic,肌原性的分化2,3]。他们为许多器官和组织的自我平衡的维护(4,5]。不像其他成体干细胞(如造血干细胞)人类间充质干细胞不是不朽的。这些细胞具有体外生长特性的典型的海弗利克模型细胞衰老与寿命有限(6]。最近,据报道,间充质干细胞受到氧化应激(7- - - - - -9)或电离辐射(10- - - - - -12)可能在体外进行压力诱导过早衰老。许多类型的正常和肿瘤细胞过早衰老的也进入一个国家后辐射(13- - - - - -15),H2O2(16- - - - - -19),或治疗组蛋白脱乙酰酶抑制剂20.,21]。过早衰老细胞表现出复制衰老细胞中固有的一些特点,包括一个大型平面形态、senescence-associated增加牛乳糖(SA -加)活动,和永久的细胞周期阻滞14,17]。此外,细胞overactivation和机能亢进,反馈信号电阻,再生的潜在损失被认为是衰老的标志22]。进步在理解细胞衰老的原因和机制对衰老和抑制癌症和衰老的意义了(23- - - - - -25]。
在最近的研究中,氧化应激反应人类的间充质干细胞来源于子宫内膜(hMESCs)进行调查。这些细胞的特定反应压力的我们的知识非常有限,尽管他们被证明是有用的治疗的病理组织损伤与氧化应激有关。与大多数人类的间充质干细胞,隔离的入侵规则是复杂的过程,脱屑的间充质干细胞产生子宫内膜在月经血液通过一个简单的非侵入性的方式提供一个良好的机会去探索hMESCs的应激反应。关于hMESCs,氧化应激引起的过早衰老的现象仍然还不清楚。本研究旨在检验假设是否hMESCs曝光后亚致死剂量的H2O2可能经历压力诱导过早衰老。同时,H的影响2O2对细胞凋亡的细胞生存和发展评估。
2。材料和方法
2.1。细胞培养和细胞治疗
人类间充质干细胞分离脱屑子宫内膜在月经的血液(hMESCs,第2304行),如前所述[26],以及人类胚胎lung-derived二倍体成纤维细胞(HDF, frl线- 9505)在完全培养基培养(DMEM / F12(美国Gibco BRL,马里兰州)补充10%的边后卫(美国HyClone沃尔瑟姆,MA)、庆大霉素1%和1% glutamax(美国Gibco BRL,马里兰州))在湿润孵化器37°C,包含5%的股份有限公司2。hMESCs有积极的表达CD73, CD90 CD105, CD13、CD29、CD44和标记和缺乏造血CD19细胞表面抗原的表达,CD34、CD45、CD117, CD130,和HLA-DR(二类)。Multipotency孤立的hMESCs证实了他们能够分化成其他类型的中胚层细胞,骨细胞和脂肪细胞等。此外,孤立hMESCs部分(超过50%)表达多能性标记SSEA-4但不表达Oct-4。Immunofluorescent派生细胞分析显示神经前体标记的表达巢蛋白和beta-III-tubulin。这表明神经建立hMESCs的倾向。这些细胞具有细胞增殖率高(h倍增时间22日至23日)和克隆效率高(约60%)。细胞在早期文章(6 - 9通道hMESCs和16和21个段落之间HDF)被用于复制衰老的所有实验,以避免并发症。细胞被胰蛋白酶化收获和镀的密度细胞每厘米2。显微镜实验,细胞生长在玻璃盖玻片。H2O2治疗进行subconfluent细胞避免H的可变性2O2毒性。H2O2股票的解决方案在无血清培养基制备从30% H2O2(σ,圣路易斯,密苏里州,美国)之前添加。细胞治疗H2O2在从200年的浓度范围μM - 2000μMTT测定M 1 h。基于LD50值200μM H2O2被选中的亚致死浓度诱导hMESCs过早衰老,而细胞凋亡在更高浓度的H下测试吗2O2(900年和3000年μ米)。无血清培养基的细胞被洗两次删除H2O2然后在新鲜recultured完全培养基为各种时间指定在单独的实验。
2.2。评估细胞的生存能力
细胞暴露于H后生存能力2O21 h评估了酶转化MTT (AppliChem,达姆施塔特,德国,A2231)甲瓒在活细胞。细胞生长的培养基在盘子了,和3 - -2.5 (4.5 -dimethylthiazol-2-yl) -diphenyltetrazolium溴化(麻省理工;0715毫克/毫升)血清生长介质被添加到每个。2 h的解决方案是改变DMSO解决甲瓒。盘子都摇动了在室温下15分钟;此后,吸光度测量在570 nm使用标(Fluorofot“慈善”俄罗斯)。所有的点都读8相似的样本的相似之处。平均吸光度在给定的时间点是规范化的开始时间点。
2.3。流式细胞术
贴壁细胞被胰蛋白酶化冲洗两次PBS和收获。与上层清液分离收集细胞,通过离心分离颗粒状。分离和贴壁细胞终于汇集和resuspended PBS。每个样本的一部分用于propidium碘(PI)染色评估细胞生存能力和另一部分细胞周期阶段分布分析,如前所述执行(27]。50μg / mLπ被添加到每个样品分析前轻轻地和混合。样本分析在库尔特史诗XL流式细胞分析仪(后方Coulter、沥青、钙、美国)。细胞周期分析,每个细胞样本在300年暂停了μL PBS包含200μ克/毫升的皂苷(美国纽约丙烯酰胺),用于细胞透化作用,250年μg / mL核糖核酸酶A(σ,圣路易斯,密苏里州,美国,R4642数量),和50μg / mLπ,30分钟在室温和孵化进行流式细胞仪分析。至少10000个细胞测量每个样品。细胞周期分析使用赢得MDI程序版本2.8和ModFit LT软件(软件真实的房子,Topsham,我,美国)。
2.4。流式细胞仪分析细胞增大
相同的样品制备过程如前所述了光散射血细胞计数。后H2O2坏死细胞治疗和生活上相互非常接近单参数柱状图,两个参数柱状图(FL4LOG与FSLOG)用来区分死细胞和生活。分析每个样本与高样品交付了100秒。细胞的大小控制和H2O2治疗细胞测量仪的光散射PI-stained细胞通过赢得MDI程序2.8版。
2.5。SA -加的活动
细胞表达senescent-associated发现了牛乳糖衰老牛乳糖染色工具包(细胞信号技术,贝弗利,妈,美国9860号)根据制造商的指示。设备检测牛乳糖活动在培养细胞的pH值6只存在在presenescent衰老细胞,没有找到,静止不动,或永生细胞。SA -的百分比-Gal-positive细胞计算通过计算不少于500个细胞。
2.6。免疫荧光染色
细胞培养在盖玻片和PBS / 4%福尔马林固定15分钟,然后用0.1% permeabilized Triton x - 100。与1%的牛血清白蛋白,阻塞后他们孵化与兔多克隆抗体对Ki67 (Abcam,剑桥,英国,15580号)(1:1000)在一夜之间在4°C,然后Alexa萤石568驴anti-rabbit抗体(美国表达载体,卡尔斯巴德,A10042)(1: 500)在室温下1 h与PBS / 0.1%补间广泛的洗后20每一步之间。幻灯片和1复染色μg / mL DAPI(σ,圣路易斯,密苏里州,美国,D9564)和安装使用2%没食子酸丙酯。蔡司Axiovert 200荧光显微镜(德国卡尔蔡司)配备了数码相机DFC 420 c(德国徕卡)利用Adobe Photoshop软件被用来查看和获取图像。
2.7。细胞凋亡检测
细胞凋亡检测是由膜联蛋白V / PI染色根据标准生产协议(BD Pharmingen)。H2O2治疗和控制细胞收获如前所述。然后用冷PBS,细胞被洗两次在1 x绑定缓冲resuspended浓度106细胞/毫升。100年μL的悬架被调到5毫升管,和5μL膜联蛋白V / FITC(膜联蛋白V / FITC凋亡检测装备II, BD生物科学,圣地亚哥,美国)和10μLπ添加;悬架是轻轻混合和孵化在黑暗中在室温下15分钟。之前流仪结果400μL 1 x绑定缓冲被添加到每个样本。
2.8。西方墨点法
总细胞溶解产物如前所述[准备27]。蛋白质含量是由布拉德福德的方法。细胞溶解产物溶解在SDS样品缓冲和分离在8%或12% SDS凝胶。sds - page电泳,转移到硝酸纤维素和免疫印迹与发射极耦合逻辑(美国热科学)检测是根据标准执行制造商的协议(Bio-Rad实验室、美国)。以下使用抗体:兔单克隆抗体(12 d1,数量2947年代)(1:1000)和glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶(GAPDH克隆14 c10, 2118年代)(1:1000),以及辣根peroxidase-conjugated山羊anti-rabbit搞笑(7074年代)(1:10000)。所有抗体都从细胞信号,购买美国。从Amersham Hyperfilm (CEA)(瑞典)。平等的蛋白质加载证实了朱红色年代(σ,圣路易斯,密苏里州,美国,P7170)染色。
2.9。rt - pcr分析
分析基因表达,从细胞总RNA是孤立与RNesy微工具包(美国试剂盒)根据制造商的指示。互补脱氧核糖核酸合成了1μ使用RevertAid H - g总RNA的合成第一链cDNA工具包(Fermentas,立陶宛)根据制造商的指示。特定基因被Taq放大DNA聚合酶(Fermentas,立陶宛)C1000触摸热周期计放大器(Bio-Rad实验室、美国)。程序如下:热start-denaturation在93°C 3分钟,引物退火在51 - 70°C 2分钟,然后伸长72°C 1分30秒;此后,25日至27日周期为45秒93°C的变性,引物退火在51 - 70°C 1分钟,伸长在72°C, 1分30秒,然后最后10分钟72°C伸长;引物感觉5′CCA猫GGT CTT有条件现金援助CTG CTG 3′, 5′反义手枪GTC CGT CAG AAC CCA TG 3′,退火温度55°C(316个基点);SOD1感觉5′GGT有条件现金援助CAC TTT AAT的有条件现金援助CTA T 3′, 5′反义猫CTT TGT CAG CAG柠檬酸猫T 3′,退火温度62°C(96个基点);SOD2感觉5′TGA CAA GTT TAA GGA棉酚GC 3′, 5′反义棉酚TAA GGC CTG TTG TTC C 3′,退火温度56°C(148个基点);GPX1感觉5′公司治理文化CAC公司治理文化GCT答广汽CG 3′, 5′反义GCA GCA CTG CAA CTG CCA AGC AG) 3′,退火温度68°C(238个基点);- - - - - -肌动蛋白基因用于RNA定量控制和DNA污染监测:感觉引物5′gcc GAG CGG棉酚ATC GTG CGT-3′, 5′反义CGG TGG ACG ATG GAG GGG CCG-3′,退火温度70°C(507个基点)。引物都是来自SYNTOL(俄罗斯)。放大产品的电泳在2%琼脂糖凝胶TAE缓冲和溴化乙锭。100 kb DNA梯(Fermentas,立陶宛)作为分子量标记。放大产品可视化在紫外线(302海里)透照器和注册一个数字佳能相机。
2.10。统计数据
所有数据给出的平均值和标准错误意味着从至少三个独立的实验。使用学生的统计差异计算以及,被认为是重要的。
3所示。结果与讨论
3.1。细胞氧化应激下可行性
H2O2培养细胞的治疗是一个常用的模型来测试在不同的细胞氧化应激的敏感性。越来越多的证据指出高阻的间充质干细胞氧化应激引起的H2O2(28,29日]。另一方面,最近报道,某些类型的人类间充质干细胞对H非常敏感2O2接触(9]。易受氧化应激hMESCs性还有待开发。我们早些时候报道,hMESCs接受长期治疗与h(24小时)2O2表现出更高的阻力与人类相比二倍体成纤维细胞(30.]。在这项研究中,一个脉冲细胞治疗H2O2从200年在不同浓度μ米到2毫米1 h应用。人二倍体成纤维细胞(HDF)作为H2O2比较敏感的细胞模型的影响2O2hMESCs细胞毒性。首先,它是必要的,以评估hMESCs可行性在氧化应激对亚致死的H2O2进一步的实验所需浓度。之前我们已经发现,在一个固定的H2O2浓度、细胞毒性和降解率都依赖于H的体积2O2解决方案添加到培养基;因此使用的体积是按比例调整根据表面积为了获得一个一致的H2O2细胞毒性。此外,它是非常重要的控制电镀细胞密度,因为H2O2效果(在同等的体积和浓度)细胞细胞密度呈负相关;,融合性的细胞培养更能抵抗H2O2比subconfluent。细胞生存能力评估通过MTT测定细胞活性的广泛指标,允许评估一系列可行的细胞通过监测线粒体脱氢酶活性。如图1H2O2两个细胞系的细胞生存能力影响剂量依赖性的方式。LD50值描述细胞生存能力与600 - 700μ米(15 - 17.5 pmol /细胞)hMESCs和370 - 400μ米(3.5 - -4.0 pmol /单元)HDF。因此,hMESCs被发现是非常抗H2O2相比HDF。
(一)
(b)
3.2。抗氧化酶的表达
检查这是否高电阻的影响2O2与hMESCs的能力有效地清除活性氧(ROS),表达的基因编码酶参与消除活性氧,如SOD1 SOD2, GPX1进行了测试。以前,我们已经观察到细胞内ROS水平的快速增长在hMESCs暴露在H2O2(数据没有提交)。这里,它表明,在未经处理的细胞的基底的信使rna表达水平的抗氧化剂酶升高,而在治疗后200年μM H2O2每个酶的表达水平调节在不同程度上(图2)。因此,重要的不敏感2O2符合增强抗氧化酶的表达水平。这些发现与以前的报告演示协议人类骨骨髓来源间充质干细胞的高阻氧化应激(29日]。冲突的结果证明人类脐带血液的特殊敏感性间充质干细胞H2O2与低水平的抗氧化剂酶活性(9]。
3.3。一个亚致死的氧化应激诱发hMESCs过早衰老表型
在hMESCs, H现象2O2全身的过早衰老并不是迄今为止。在所有的实验中,early-passage细胞被用来避免不必要的复制衰老的细胞,因为复制和压力诱导衰老的主要特性是已知相似(14,17,18]。测试是否hMESCs治疗后用亚致死的H2O2浓度(200μ米)可以接受小口,我们评估各种senescent-associated生物标志物:细胞形态学的变化,SA -加染色,细胞大小的增加,损失的增殖潜能,细胞周期阻滞,(以下p21)状态。H2O2治疗被发现导致开发senescent-like形态:细胞变大,夷为平地,和异构。应该注意的是,在一个细胞群的一部分,我们可以看到这种形态的变化后24小时内h2O2治疗。此外,衰老细胞表明SA -加染色逐渐增加,最显著的效果是达到7天治疗后:95% H2O2治疗细胞SA -加积极的(图3(一个)和3 (b))。指数增长的控制细胞显示很弱,如果有的话,增加的SA -加染色。重要的是,过早衰老表型是保持在21天的随访期间(数据没有显示)。
(一)
(b)
(c)
增加异质性的细胞H的大小2O2对待hMESCs进一步确认和量化了光散射PI-stained细胞的血细胞计数。显示在图3 (c)H2O2诱导后细胞大小的2倍增加5天与控制相比,以向前散射的平均值的转变。细胞治疗是持续的升高大小不变,至少5天,而控制细胞的大小几乎没有改变。测试是否治疗hMESCs保留其大小受移植者,增加后H2O2治疗细胞培养2天,然后受移植者,此外在正常的细胞培养条件下培养3天。因此,我们观察到类似的增加的细胞大小(1.8倍)受移植者和培养细胞没有重播细胞(图5天3 (c))。重要的是,细胞大小增加伴随着蛋白质含量升高,表明蛋白质合成在H2O2处理细胞。在一起,结果证明细胞肥大在hMESCs人口针对H2O2。
3.4。永久性细胞周期阻滞和损失的增殖潜力hMESCs受到亚致死的氧化应激
为了进一步描述H2O2全身senescent-like hMESCs状态,我们分析了他们的增殖潜力。细胞数量在治疗和H2O2治疗期间计算细胞培养5天。见图4(一)、经济增长的模式曲线表明显著增加(超过两次5天)的数量控制细胞增殖与H2O2处理细胞。因此,200年μM H2O2造成永久性的增长被捕,一个永久的损失的增殖潜力。此外,细胞的增殖状态检查与抗体染色扩散Ki67标志。见图4 (e)在5天后,H2O2治疗,没有Ki67-positive细胞细胞培养,而控制细胞增殖有明显染色。在200年回应hMESCs的可行性μM H2O2没有明显减少(图1),我们建议H2O2全身的生长抑制hMESCs可能与细胞周期阻滞,而不是促进细胞死亡。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
分析细胞周期阶段分布hMESCs表明脉冲H2O2治疗导致逮捕所有的周期阶段(图4 (b),上半部分)。细胞治疗证明了长期逮捕,至少5天。细胞治疗的阶段分布在每个时间点测试的特点是与未成年人积累细胞G0 / G1期,而控制细胞。使用光散射的分布分析证实了这些发现(图4 (b)较低的面板)。测试逮捕细胞是否可以恢复他们的增殖潜能,在治疗后2天细胞受移植者,培养3天。正如预期的那样,受移植者细胞也显示细胞周期阻滞。此外,细胞周期阶段分布受移植者和taken-before-reseeding细胞(图是一样的4 (b))。因此,衰老细胞无法恢复增殖即使受移植者,表明增长不可逆转的逮捕。这些观察经扩散试验(图4(一)),这表明,H2O2治疗细胞无法正常增殖为5天。整体而言,这些结果表明,细胞衰老在hMESCs诱导通过增长逮捕H2O2。
3.5。永久失去增殖潜力hMESCs是伴随着p21水平升高
在人类间充质干细胞,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21最近被证明是调节在H2O2全身的过早衰老(7,8]。p21水平的提高可能调解的起始H2O2全身的细胞周期阻滞通过抑制多种细胞周期蛋白依赖性激酶,促进细胞周期阶段进展(14,16]。找出p21能否参与H的规定2O2全身衰老hMESCs, p21蛋白和信使rna表达水平的测定。200年μM H2O2提升显著提升蛋白质(图4 (c)),信使rna(图4 (d))在治疗后7 h p21的表达。p21的诱导表达时调节与下降后1 - 2天,微不足道,但不是控制水平,是伴随着细胞周期阻滞在同一时间(图4 (b))。重要的是,逮捕了细胞之后可以获得一个衰老形态学(图3(一个)(图),但不能恢复扩散4(一))。我们假设高架p21表达驱动H至关重要2O2在hMESCs全身的过早衰老。支持我们的研究结果,据报道,在骨骨髓来源间充质干细胞暴露于亚致死剂量的H2O2,快速减少的增殖率在3天内被发现,与细胞周期G1期逮捕p21累积在同一时间(时8]。
总之,我们的研究结果强烈表明hMESCs下亚致死的氧化应激能够接受过早衰老。
3.6。高H的影响2O2剂量在hMESCs
H2O2是有据可查引起细胞凋亡的剂量依赖性的方式在不同的细胞类型。根据我们的数据,在200年μM H2O2,没有检测到凋亡细胞人口多达21天;因此我们在这里测试是否H2O2在hMESCs高浓度引起细胞凋亡。为了检测细胞凋亡,膜联蛋白V / PI染色。提出了图5,900年上面板μM H2O2可行的细胞的数量从90.3%减少到69.7%,治疗后48 h增加AnV / PI +细胞的数量。值得注意的是,早期凋亡细胞的数量没有显著的变化(AnV +)与控制观察48 h。相比之下,H2O2在更高浓度(3000μ米)引起的细胞凋亡与以类似的模式,但没有证据表明坏死(图更强的影响5较低的面板)。因此,凋亡水平H2O2对待hMESCs受剂量依赖性的方式。根据我们的初步结果,细胞凋亡是由caspase-8和激活caspase-3;然而,H的确切机制2O2全身的细胞凋亡在hMESCs还有待进一步阐明。
有趣的是,900年μM H2O2触发不仅延迟凋亡,还出现了扩大和扁平细胞在相同的细胞培养。细胞的存在200年的变化μ米和900μM H2O2在外观相似。这些观察结果促使我们测试如果能够与肥大细胞过早衰老。如图6,900年μM H2O2实际上促进了衰老形态学和SA -加染色,永久增长逮捕,大约2倍增加的细胞大小,指着过早衰老的主要细胞群的一部分。值得注意的是,200年引起衰老的主要特性μ米和900μM H2O2被发现是一样的吗。在一起,这些发现表明,hMESCs展览高凋亡阻力与人类间充质干细胞来源于两个脐带血(9和骨髓7),H2O2超过200μM引发细胞凋亡,而100 - 150μM H2O2诱导衰老。此外,在暴露于亚致死剂量的H2O2、衰老hMESCs获得稳定的增加文化和显示增强抗H2O2全身的细胞凋亡(数据没有显示)。许多细胞类型获得抵抗一些当他们变得衰老凋亡信号。所以,人类衰老成纤维细胞抵抗氧化应激诱导细胞凋亡或生长因子不足但不抵制Fas-mediated细胞凋亡(31日,32]。抗细胞凋亡可能在一定程度上解释了衰老细胞的稳定性增强文化。衰老细胞抵抗细胞凋亡的机制研究甚少。沟通的衰老和凋亡调节系统可能通过他们共同的监管机构,p53肿瘤抑制蛋白(33]。
(一)
(b)
(c)
(d)
在这项研究中,我们提供了可靠的证据支持我们的假设hMESCs能够接受的过早衰老引起的氧化应激反应H2O2在一个广泛的浓度从200年到900年μm .根据获得的数据,进入衰老是伴随着快速启动的细胞活动,如细胞表型的变化,SOD1的增加,SOD2, GPX1表达式,p21和upregulation没有随时间而增加,导致不可逆的细胞周期阻滞以及增殖潜在的损失。自2009年以来,当压力诱导过早衰老现象在人类间充质干细胞首次被描述,只有少数出版物有关氧化应激过早衰老的人类间充质细胞来源于骨髓(7,8]和脐带血[9]。即使两个干细胞系在亚致死的压力应对衰老,这一过程的主要特征,特别是,p21的动态积累和细胞增殖率下降,细胞是非常不同的,这取决于上下文。所需的精确分子机制调节氧化应激过早衰老的人类间充质干细胞远不理解。衰老程序似乎发展间充质干细胞由于DNA损伤反应,导致功能激活p53、p21或p16INK4a分子(p16) /视网膜母细胞瘤蛋白(复审委员会)途径,两者都可以建立和保持增长被捕,是典型的衰老23,24]。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p16和p21可能维持复审委员会活动hypophosphorylated状态(34,35]。反过来,复审委员会停止细胞增殖抑制活性的转录因子E2F调节细胞周期进程。我们的初步数据,显示时间和剂量依赖性的形成包含磷酸化的焦点组蛋白H2AX (H2AX)、活化的ATM和p53、p21和upregulation表达式,表明,在hMESCs受到亚致死剂量的H2O2衰老的过程可能是由p53通路控制的。同时,通过监控p38增殖动力学蛋白激酶(MAPK)激活在H2O2hMESCs全身衰老,我们揭示了一个快速和持续p38 MAPK的磷酸化,表明它可能过早衰老的调节作用[36]。另一方面,据报道,复审委员会诱导生长逮捕p38 MAPK的下游分子(37]。考虑这些结果,我们不能排除这种可能性,p16 /复审委员会信号级联也涉及hMESCs衰老晋升。
了解衰老过程的机制将在发展中非常重要的hMESCs在再生医学中的应用提供新的策略在自体移植和生物工程。为主,hMESCs可能申请细胞疗法的不孕与decidualization不足有关。子宫内膜Decidualization是胚胎植入的重要过程,胎盘形成,怀孕和维护38]。无创性和隔离hMESCs容易获得来源,高增殖活性在长期栽培,遗传稳定,缺乏致瘤性(39,低免疫原性使hMESCs承诺来源的干细胞临床应用,包括生殖技术。
总之,我们首次显示hMESCs在氧化应激条件下进行过早衰老。数据获得扩大的概念间充质干细胞衰老氧化应激。综上所述,本文提供的研究结果和数据发布让我们假设感应过早衰老可能是一个常见的生理反应的亚致死的氧化应激在人类间充质干细胞的来源。
缩写
| hMESCs: | 人类endometrium-derived间充质干细胞 |
| HDF: | 人二倍体成纤维细胞 |
| 口: | 压力诱导过早衰老 |
| H2O2: | 过氧化氢 |
| 流式细胞仪: | Flow-activated细胞分类 |
| SA -β加: | Senescence-associatedβ牛乳糖 |
| SOD1: | 胞质超氧化物歧化酶 |
| SOD2: | 线粒体超氧化物歧化酶 |
| GPX1: | 谷胱甘肽过氧化物酶。 |
确认
作者感谢Alekseenko l . l .(细胞学研究所)和rt - pcr的帮助。这项研究受到了赠款的MCB RAS和俄罗斯基础研究基金会(RFBR) (11 - 04 - 01581 a)。