文摘

水果,如葡萄、地中海饮食的食物是必不可少的。葡萄提取物具有强力的抗氧化和chemopreventive属性在体外。大量研究了植物提取物的影响政府对氧化还原状态静止在动物和人类,但他们的结果是有争议的。然而,没有研究比较在体外和在活的有机体内植物提取物对氧化应激的影响使用运动作为氧化剂刺激。因此,本研究的目的是调查是否polyphenol-rich葡萄果渣提取的葡萄物种具有在体外抗氧化性能和检查这些属性是否适用于一个在活的有机体内模型在休息和锻炼。我们的研究结果表明,测试提取有力的在体外抗氧化性能,因为它进行清除DPPH•和abt•+自由基和抑制过氧化氢和羟基自由基引起的DNA损伤。一般管理提取大鼠诱导氧化应激后在休息和运动而运动性能没有影响。我们的研究表明,葡萄果渣中提取不相同的行为在体外和在活的有机体内。

1。介绍

活性氧和氮物种参与信号转导等生理过程(1和适应在运动2]。然而,当活性物种过度生产,他们可能会导致肌肉损伤(3和疲劳4]。剧烈运动导致生产过剩的活性物种,因此氧化应激(5- - - - - -7]。一个非常重要的贡献者的活性物种在运动是黄嘌呤氧化酶(2),次黄嘌呤,黄嘌呤氧化的催化尿酸。黄嘌呤氧化酶使用分子氧作为电子受体在嘌呤降解从而导致超氧化物自由基 和过氧化氢(H2O2)生产8]。黄嘌呤氧化酶的作用是双重的,因为它的结果不仅在生产活性物种也在一代的尿酸,其中最有力的抗氧化分子在等离子体9,10]。

各种研究已经检查了使用植物提取物的抗氧化作用在体外测试。他们的研究结果大多表明葡萄提取物强大的自由基拾荒者在体外(11- - - - - -13]。除了葡萄提取物,它也被观察到的摘录,豆类是强有力的抗氧化剂代理在体外(14- - - - - -16]。一般来说,在绝大多数相关文献,提取来自不同植物具有抗氧化性能在体外根据他们的清除自由基的能力。

在许多研究中,植物提取物具有抗氧化特性在体外管理在啮齿动物和人类运动前检查这些影响是否同样适用在活的有机体内。这些研究主要调查了补充植物提取物对氧化应激的影响在血液和其他组织,但结果是有争议的。更具体地说,它已经证明了政府的几个植物提取物保护组织免受运动诱导氧化应激(17- - - - - -19]。相比之下,其他的研究在人类已经研究了植物提取物的影响政府在休息和报道抗氧化剂氧化还原状态(20.)或prooxidant效应(21,22]。绝大多数的植物提取物的影响氧化还原状态通常归因于特定化合物组成。这些化合物是多酚类物质是植物的次生代谢物。他们保护植物免受有害的环境条件,分为两大类,即类黄酮和nonflavonoids [23]。

上述数据表明,潜在的植物提取物的抗氧化功能在活的有机体内不能安全地推断在体外测试,因为他们不考虑()的代谢转换和互动明显影响多酚的生物利用度和生物作用。它是一种常见的做法,使用抗氧化剂来增强运动性能。为了使实用的抗氧化剂的使用,建议使用都是很重要的在体外和在活的有机体内模型。我们实验室的研究表明,一些葡萄中提取的葡萄物种具有强大的抗氧化性能在体外他们清除自由基,如1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH•),2,2′-Azino-bis (3-ethyl-benzthiazoline-sulphonic酸(abt•+),过氧化物 羟基( )和过氧化氢(ROO•)自由基24- - - - - -26]。检查是否将会是很有趣的在体外葡萄中提取的属性也适用于一个在活的有机体内模型,特别考虑到缺乏研究,同样的提取的影响在体外和一个在活的有机体内模型的环境中锻炼。因此,本研究的目的是检查是否polyphenol-rich葡萄果渣提取具有在体外抗氧化性能和是否在体外提取的属性转化为一个在活的有机体内模型提取时,老鼠在详尽的有氧运动。

2。材料和方法

本研究分为两个部分。在第一部分,polyphenol-rich葡萄果渣中提取是研究其可能的抗氧化性能在体外雇佣几个化验。在第二部分中,提取氧化还原状态的影响在活的有机体内模型使用运动作为氧化剂应激源。

2.1。在体外实验
2.1.1。制备的葡萄果渣中提取

使用的葡萄果渣属于物种葡萄和各种Batiki Tyrnavou(红葡萄生长在希腊中部)。原材料是在阴凉干燥,通风良好的地方,提取和乙醇(96%)为4小时50°C。过滤后,溶剂蒸发压力降低,残留物(葡萄果渣提取)保持在−20°C的时间对多酚的调查内容分析。

2.1.2。LC-HRMS提取分析

描述的葡萄果渣提取的多酚含量LC-HRMS方法开发和应用。分析Accela LC系统(美国圣何塞ThermoFinnigan)由一个高效液相色谱泵、脱气装置,autosampler和PDA探测器使用。尤其是,8经分析,Orbitrap光谱仪(美国圣何塞ThermoFinnigan)用连字符连接HPLC-DAD系统使用。轨道器允许质量分辨率约30 000和质量测量精度接近2 ppm。女士系统配备一个应急服务国际公司电离探针和正面和负面的分析模式。海波西尔金列(热科学)(100×2.1毫米,3μ米)是用于分析。一个快速梯度洗脱方法开发和应用。由0.1%使用的流动相水甲酸(溶剂)和乙腈溶剂(B), 400年的流量μ在室温下L / min。使用的洗脱条件是最初的a - b (95: 5);在5分钟a - b (90: 10);在10分钟a - b (80: 20);在15分钟的a - b (70: 30);在22分钟a - b (50: 50);在25分钟a - b (40: 60);在35分钟的a - b(5: 95),持有直到40分钟,5分钟回到初始条件;平衡了10分钟。记录色谱图是在220、280和365海里通过监测光谱的波长范围内190 - 700 nm。 Mass spectra were recorded in a range fromm / z100年到1500年。ESI源操作的鞘气流30 arb,辅助气体流量10 arb,离子喷涂电压的3.5 kV,毛细管温度40°C。所有的高精度m / z测量,质量公差是设置为5 ppm。超出范围的测量被否决。化合物的识别是通过比较保留时间(Rt)、紫外光谱,,8经,光谱峰的样品的标准化合物(Extrasynthese,里昂,法国)。Xcalibur 2.0.7 SP1软件是用于数据的操作和处理。

2.1.3。评估提取总多酚含量

葡萄果渣提取的总多酚含量测定用Folin-Ciocalteu试剂(27]。Folin-Ciocalteu试剂(0.5毫升)和蒸馏水(5毫升)被添加到样品(0.1毫升)。在室温下是孵化3分钟(RT)和随后混合25% w / v碳酸钠溶液(1.4毫升)和蒸馏水(3毫升)。后1 h RT在黑暗中孵化,吸光度测量765海里。空白包含Folin-Ciocalteu试剂和蒸馏水提取。样品的光密度(0.1毫升)25% w / v碳酸钠溶液(1.4毫升)和蒸馏水(8毫升)765海里也是衡量。总多酚含量测定的标准曲线的吸光度值与相关标准浓度(0,150,250,500μ没食子酸的g / mL)。总多酚含量表现为毫克每克没食子酸的提取。

2.1.4。DPPH•彻底清除试验

提取物的自由基清除能力评估用DPPH•激进的(28]。简而言之,在1毫升的甲醇进行反应包含新鲜DPPH•(100μ米)在不同浓度甲醇和提取(2-50μg / mL)。内容积极混合,在RT在黑暗中孵化20分钟,在517 nm和吸光度测定。独自在每个实验中,测试样本在甲醇作为空白和DPPH•独自在甲醇作为控制。

2.1.5节讨论。abt•+彻底清除试验

abt•+提取物的自由基清除能力是决定根据卡诺等。29日用细微的修改。简单,反应在1毫升蒸馏水进行包含abt(1毫米),H2O2(30μM)和辣根过氧化物酶(6μ米),解决方案是大力混合,在RT孵化45分钟直到abt的黑暗•+激进的形成,吸光度测量在730海里。然后,10μ不同的提取浓度(2-50 Lμg / mL)被添加在反应混合物和吸光度下降在730 nm阅读。在每个实验,测试样本在蒸馏水包含abt和H2O2作为空白,abt吗•+激进的解决方案与H2O是用作控制。

2.1.6。%计算自由基清除能力

提取物的自由基清除能力(RSC)是用DPPH的百分比表示•或abt•+消除计算根据以下方程: 交流的吸光度控制和样品的吸光度。为了比较样品的自由基清除效率,IC50值也计算,表达的浓度提取DPPH拾荒•或abt•+激进的50%。所有的实验都是在三个不同的场合进行了一式三份。

2.1.7。过氧化氢Radical-Induced DNA链分离测定

试验是常使用的协议执行et al。30.]。ROO•热分解产生的2,2′-azobis(盐酸2-amidinopropane AAPH)。反应混合物(10μL),包含Bluescript-SK +质粒(1μg),提取不同浓度(1 - 100μg / mL), AAPH磷酸盐(2.5毫米)(137毫米氯化钠,氯化钾2.7毫米,8.1毫米Na2HPO4,1.5毫米KH2阿宝4),是在黑暗中孵化为45分钟37°C。反应被终止的加载缓冲区(3μL 0.25%溴酚蓝和30%甘油)和0.8%琼脂糖凝胶电泳分析了70 V 1 h。凝胶和溴化乙锭染色(0.5μg / mL),反对与水,拍下紫外线translumination使用Vilber Lourmat photodocumentation系统(dp - 001。FDC、Torcy、法国),分析了Gel-Pro分析仪version 3.0(美国媒体控制论,银泉)。

2.1.8。羟基Radical-Induced DNA链分离测定

哦•放松全身的质粒DNA化验的方法执行Keum et al。31日用细微的修改。哦•从UV光解产生的H2O2。反应混合物(10μL)是由Bluescript-SK +质粒(1μg), Tris-HCl EDTA(10毫米,1毫米),提取不同浓度(100 - 1600μg / mL),和H2O2(40毫米)。反应混合物与300 W紫外灯辐照(欧司朗)3分钟50厘米的距离。反应被终止的加载缓冲区(3μL 0.25%溴酚蓝和30%甘油)和凝胶电泳分析了如前所述。此外,Bluescript-SK +质粒DNA独自处理提取的最高浓度(1600使用μg / mL),以测试其影响质粒DNA构象。

2.1.9。抑制Free-Radical-Induced DNA损伤

ROO诱导DNA链断裂•噢,•评估了超螺旋的转换Bluescript-SK +质粒DNA双链打开圆形构象在琼脂糖凝胶电泳分析。提取的预防活动评估通过抑制转换的超螺旋(unnicked)构象打开循环(刻)。抑制百分比radical-induced提取DNA链乳沟的计算使用以下方程: 在负超螺旋构象的比例是控制样品(质粒DNA单), 超螺旋构象的比例是在积极控制样本(质粒DNA与激进的启动因素),然后呢 超螺旋构象的比例是在样本含有质粒DNA提取和激进的启动因素。为了比较预防能力的提取效率,IC50价值评估显示所需的浓度抑制引起的超螺旋构象ROO的放松•和 了50%。所有的实验都是在三个不同的场合进行了一式三份。Bluescript-SK +质粒DNA分离从一个大规模的细菌培养。

2.2。在活的有机体内实验
2.2.1。动物

四十个成年雄性Wistar鼠(9周大,体重285±5 g,意味着±SEM)从希腊巴斯德研究所购买。老鼠被安置在控制环境条件下(12小时光/暗周期,温度21°C,湿度50 - 70%)在笼子里的三人。商业的鼠粮和自来水随意。这个项目是审查和批准的机构审查委员会和适当的国家权力。

老鼠被随机分为四个实验小组如下:(a) saline-administered和牺牲1 h政府后,(b) saline-administered,锻炼1 h后管理和牺牲后立即运动,(c)葡萄果渣extract-administered和牺牲1 h政府后,和(d)葡萄果渣extract-administered,锻炼1 h后管理和运动后立即牺牲。

2.2.2。葡萄果渣中提取管理

单剂量300毫克公斤−1体重的葡萄果渣中提取腹腔内接种1 h急性游泳之前的协议。这是在一般的范围管理剂量的植物提取物在类似的实验协议(19,21,22,32]。测试提取的多酚成分,富含儿茶素,表1。之前它已经被称为多酚1小时就足够了,比如儿茶素,在提取管理达到最大浓度在血液23]。

表1
多酚的组成Batiki Tyrnavou葡萄果渣中提取。
2.2.3。熟悉游泳

7天的老鼠被允许适应动物设施的开始运动前,协议。动物被约定俗成游泳一段前五天的实际协议实施游泳。期间的第一天熟悉老鼠仍在水箱10分钟免费的负载。接下来的两天的大鼠游泳10分钟有一个负载等于1%的体重调整底部的尾巴。过去两天的负载增加动物的体重的2%。最后,老鼠休息三天前发生的游泳协议。

2.2.4。游泳的协议

老鼠接受锻炼个人游,直到疲惫在深水中坦克(直径:1.0米,深度:0.7米)的水温33-36°C,如前所述[5]。恒定负载等于4%的老鼠的体重调整底部的尾巴为了实现不间断游泳。动物被认为已经达到了疲惫的时候不能经常保持鼻子出水面。游泳是作为练习模式选择,因为不像跑步机跑步,它诱发小肌肉损伤(33]。因此,任何游泳对氧化应激的影响只是部分归因于肌肉损伤,增加生产的活性物种。

2.2.5。血液和组织收集

老鼠被斩首后短暂暴露于醚牺牲。血液收集EDTA管和离心立即在4°C 1370 g 10分钟允许等离子体隔离。拥挤的红血球细胞溶解了1:1 (v / v)蒸馏水,倒大力,离心机在4020克15分钟在4°C。组织很快被删除和snaped-frozen液氮。血浆,红细胞溶解产物和组织被储存在−80°C到生化分析。在准备组织生化分析、组织样本最初地面使用迫击炮和杵在液氮中。组织的一部分粉当时均质两部分(重量/体积)为0.01米磷酸缓冲盐pH值7.4(2.7毫米138毫米氯化钠,氯化钾,1毫米EDTA)和蛋白酶抑制剂的鸡尾酒(1μM抑肽酶,1μg / mL亮抑酶肽和1毫米PMSF)补充道。匀浆是大力涡和一个简短的声波降解法治疗应用在冰上。匀浆是离心机在12000 g 30分钟在4°C和上层的收集。

2.2.6款。氧化应激的标记

黄嘌呤氧化酶活性,TBARS浓度,蛋白质羰基含量,减少谷胱甘肽(GSH)浓度,过氧化氢酶活性和总抗氧化能力(TAC)测量如前所述[5,34]。每个试验进行了一式三份。血液和组织样本存储在多个整除−80°C和解冻之前只有一次分析。所有试剂都是购自Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国)。

2.2.7。统计数据

数据的在体外试验分析了单向方差分析(方差分析)其次是Dunnett测试多个成对比较。数据的在活的有机体内实验(氧化应激标志物)分析双向(治疗×时间)方差分析。通过Bonferroni两两进行比较t以及。使用独立的学生的性能数据进行分析t以及。统计学意义是水平 。所有结果都表示为±SEM。数据分析使用SPSS 13.0版本(SPSS Inc .)、芝加哥、生病)。

3所示。结果

3.1。在体外实验
3.1.1。LC-HRMS葡萄果渣提取的分析

ethanolic提取的葡萄果渣使用快速HPLC-HRMS方法进行了分析,在积极的和消极的模式。使用购买标准化合物(纯度≥95%),几类黄酮特别是flavan-3-ols,花青素,花青素,被确定。葡萄酒的知名flavan-3-ols,儿茶素,epicatecin追踪在Rt = 3.83分钟,分别和Rt = 5.93分钟。两个异构化合物中发现积极的和消极的模式基于pseudomolecular离子[M + H]+在m / z291.0863和[M−H]−在m / z289.0707,分别。此外,epicatechin-3-gallate被确认在Rt = 9.25分钟根据其pseudomolecular离子[M−H]−在m / z441.0816。此外,花青素花青色素:二甲花翠素、飞燕草色素和矮牵牛配基检测到9.25分钟,11.74分钟13.55分钟,15.99分钟根据相应pseudomolecular离子[M−H]−在m / z609.1467,[M + H]+在m / z331.0812,[M−H]−在m / z301.0359,[M−H]−在m / z315.0516,分别。同样,花青素myrtillin kuromanin, oenin, peonidin-3-O-glucoside追踪。特别是,Myrtillin检测主要在负模式中,其pseudomolecular离子[M−H]−在m / z463.0888和Rt = 9.53分钟观察。在Rt = 10.63分钟,kuromanin发现通过其peudomolecular离子[M−H]−在m / z447.0939在Rt = 6.72分钟oenin检测通过其peudomolecular离子[M−H]−在m / z491.1201。peonidin-3-O-glucoside也确定了基于其pseudomolecular离子[M + H]+在m / z463.1235在Rt = 5.76分钟。

除了上述类黄酮,两个酚酸、没食子酸(Rt = 0.78分钟)和caftaric酸(Rt = 26.18分钟),也确定了基于pseudomolecular离子[M−H]−在m / z169.0147和[M−H]−在m / z311.0398,分别。最后,黄酮醇Rt = 9.56分钟槲皮素和山柰酚在Rt = 15.79分钟检测和识别方法,特别是根据peudomolecular离子[M−H]−在m / z301.0357和[M−H]−在m / z285.0407。过去四个化合物已经在我们实验室先前孤立和识别及其纯度,由HPLC-DAD分析估计,从86年的98%。重要的是要注意,由于Orbitrap分析器的功能,所有的m / z非常精确的测量,特别是计算 在调查中发现的化合物从0.5到3.2 ppm。

3.1.2。总多酚含量

总多酚提取的内容评价,发现等于648毫克每克没食子酸的提取。

3.1.3。提取物的自由基清除能力

测试提取施加显著的清除DPPH的能力•和abt•+激进分子。结果表示为IC50值。集成电路越低50值,提取的抗氧化能力越高。的集成电路50数据DPPH•和abt•+激进分子分别25 - 5.5毫克/毫升(图1)。

(一)
(一)
(b)
(b)
图1
DPPH•和abt•+葡萄果渣提取物的自由基清除能力。从控制价值(*明显不同 )。
3.1.4。提取的保护性活动反对自由Radical-Induced DNA损伤

DNA测试提取方面表现出显著的保护活动。特别是,它抑制了ROO引起的DNA损伤•噢,•激进分子(图2)。的集成电路50ROO的值•噢,•激进分子分别是1.5和500毫克/毫升。

(一)
(一)
(b)
(b)
图2
保护活动的葡萄果渣提取DNA链断裂引起的哦•和ROO•。对哦(a)中提取抗氧化活性•。Bluescript-SK +质粒DNA被暴露在紫外线+ H2O2(2)道或紫外线+ H2O2在100年的存在μg / mL, 200μg / mL, 400μg / mL, 800μ克/毫升和1600年μ分别提取的g / mL,(车道3 - 7)或1600μg / mL的单独提取(巷8)。(b)对ROO中提取抗氧化活性•。被暴露在ROO Bluescript-SK +质粒DNA•独自一人(巷2)或ROO•在1μg / mL, 2μg / mL, 5μ10 g / mL,μ50 g / mL,μ克/毫升和100年μ分别提取的g / mL,(车道3 - 8)。巷1代表Bluescript-SK +质粒DNA没有任何治疗。从控制价值(*明显不同 )。OC:开放环状质粒的构象,SC:超螺旋质粒的构象。
3.2。体内实验
3.2.1之上。运动性能

游泳表现以20动物的运动团体。一半的老鼠接受生理盐水和另一半提取。没有区别观察saline-treated和extract-treated团体之间的性能。游泳时间为生理盐水和疲惫extract-treated动物为46.1±2.0,45.1±1.4分钟,分别。

3.2.2。氧化应激的标记

等离子体
在黄嘌呤氧化酶(图3(一个)),重要的治疗时间和被发现的主要影响。在事后会比较,黄嘌呤氧化酶活动显著增加saline-treated组运动后。在事后群体间的比较,黄嘌呤氧化酶活性显著降低提取组与生理盐水组相比,静止和运动后。在TAC(图3 (b)),重要的治疗时间和被发现的主要影响。在类内比较,TAC增加锻炼后的盐水,extract-treated组。在群体间的比较,TAC在提取组与生理盐水组运动后。在蛋白质羰基(图3 (c))重要的主要影响治疗,治疗时间以及交互×时间被发现。在类内比较、蛋白质羰基含量增加运动后在盐水和extract-treated组。在群体间的比较、蛋白质羰基含量较高的提取组相比,生理盐水组只在休息。在TBARS(图3 (d))重要的治疗时间和被发现的主要影响。在类内比较,TBARS浓度增加saline-treated组运动后。在群体间的比较,TBARS浓度较高extract-treated组相比saline-treated组只在休息。

(一)
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(b)
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(c)
(c)
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图3
葡萄果渣提取对氧化应激标志物的影响在休息和运动后血浆。*显著不同于其他价值在盐水或提取组( )。#盐水之间明显不同——extract-treated组在同一时间点( )。

红细胞
在蛋白质羰基(图4(一)),重要的治疗时间和被发现的主要影响。在类内比较、蛋白质羰基含量增加锻炼后的盐水,和extract-treated组。在群体间的比较、蛋白质羰基含量较高的提取组相比,生理盐水组只在休息。在TBARS(图4 (b)),重要的治疗时间和被发现的主要影响。在类内比较,TBARS浓度增加锻炼后的盐水,extract-treated组。在群体间的比较,TBARS浓度较高的提取组与生理盐水组只在运动后。在谷胱甘肽(图4 (c))治疗交互×时间被发现。在类内比较,谷胱甘肽浓度减少运动后生理盐水组。在群体间的比较,谷胱甘肽浓度较低的提取组与生理盐水组只在运动后。在过氧化氢酶(图4 (d)),发现了重大的主要影响和交互。

(一)
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(b)
(b)
(c)
(c)
(d)
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图4
葡萄果渣提取对氧化应激标志物的影响在休息和运动后红细胞。*显著不同于其他价值在盐水或提取组( )。#盐水之间明显不同——extract-treated组在同一时间点( )。

腓肠肌肌肉
在黄嘌呤氧化酶(图5(一个)),治疗时间和交互的重要主要影响×时间被发现。在事后会比较,黄嘌呤氧化酶活动显著减少在运动后saline-treated组。在事后群体间的比较,黄嘌呤氧化酶活动减少extract-treated组静止和增加在同一组相比saline-treated组运动后。在TAC(图5 (b)蛋白质羰基(图)5 (c))、谷胱甘肽(图5 (e)),发现了重大的主要影响和交互。在TBARS(图5 (d)),一个交互的治疗×时间被发现。在类内和群体间的比较,TBARS浓度增加saline-treated组运动后。在过氧化氢酶(图5 (f)),重要的治疗时间和被发现的主要影响。在类内和群体间的比较,过氧化氢酶活性增加extract-treated组运动后。

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图5
影响葡萄果渣中提取氧化应激标志物在腓肠肌肌肉静止和运动后。*显著不同于其他价值在盐水或提取组( )。#盐水之间明显不同——extract-treated组在同一时间点( )。

心
在黄嘌呤氧化酶(图6(一))、谷胱甘肽(图6 (e)),发现了重大的主要影响和交互。在TAC(图6 (b)),主要发现了治疗的效果。在蛋白质羰基(图6 (c)),主要影响治疗的时间和交互×时间被发现。在事后会比较、蛋白质羰基含量增加,运动后saline-treated组。在事后群体间的比较、蛋白质羰基含量增加静止extract-treated组。在TBARS(图6 (d)),主要治疗效果和时间被发现。在类内比较,TBARS浓度在运动后增加saline-treated和extract-treated组。在群体间的比较,TBARS浓度增加saline-treated组静止和运动后。在过氧化氢酶(图6 (f)),主要影响的时间被发现。

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(b)
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(c)
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(d)
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(e)
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图6
影响葡萄果渣中提取氧化应激标志物在心脏静止和运动后。*显著不同于其他价值在盐水或提取组( )。#盐水之间明显不同——extract-treated组在同一时间点( )。

肝
在黄嘌呤氧化酶(图7(一)),TAC(图7 (b))和过氧化氢酶(图7 (f)),发现了重大的主要影响和交互。在蛋白质羰基(图7 (c)),主要影响的时间被发现。在TBARS(图7 (d)治疗),治疗的主要作用和交互×时间被发现。在事后会比较,TBARS浓度在extract-treated组运动后增加。在事后群体间的比较,TBARS浓度增加extract-treated组相比saline-treated组运动后。在谷胱甘肽(图7 (e)),主要治疗效果和时间被发现。在类内比较,谷胱甘肽浓度在saline-treated组运动后减少。在群体间的比较,谷胱甘肽浓度降低extract-treated组相比saline-treated组在休息的时候。

(一)
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(b)
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(d)
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图7
影响葡萄果渣中提取肝脏氧化应激标志物在静止和运动后。*显著不同于其他价值在盐水或提取组( )。#盐水之间明显不同——extract-treated组在同一时间点( )。

4所示。讨论

在过去的几十年里,各种植物提取物获得了大量的利益,因为它们对人类健康有益的影响。蔬菜和水果是实质性的地中海饮食的一部分。特别是葡萄,被认为拥有健康相关的属性。它建立了葡萄消费相关慢性疾病如心血管疾病的预防35)和癌症(36]。葡萄提取物的生物学重要性主要归因于他们拥有的多酚类化合物的抗氧化性能35,37]。这是多酚类化合物的主要原因和植物提取物已经越来越多地使用作为饮食的一部分,或作为营养补充剂。然而,茶多酚可能也作为prooxidants诱导自由基的生产主要是通过芬顿反应(38,39]。

本研究的理论基础是比较polyphenol-rich葡萄果渣提取的影响在使用氧化还原状态在体外和在活的有机体内模型。测试提取最初研究其可能的抗氧化能力。结果表明,提取具有强大的抗氧化和chemopreventive属性在体外因为它进行清除自由基(DPPH•或abt•+)和防止ROO引起的DNA损伤•噢,•激进分子。它建立了ROO•的主要因素是启动脂质过氧化的级联反应40]。因此,预防活动的提取ROO的不利影响•在DNA浓度相对较低意味着它可能参与防止脂质过氧化作用。此外,提取可以被视为一个chemopreventive代理ROO•和脂质过氧化导致DNA突变和致癌过程的起始是至关重要的(41]。提取的DNA损伤的保护作用引起的哦•,尽管这是在更高浓度对ROO•,是高度重视的。众所周知,哦•高活性,而且容易导致DNA突变(42]。鉴于紫外线辐射是哦的主要生产商之一•,可能是认为提取具有预防属性在体外对紫外线辐射的影响。这些发现是依照有效在体外其他葡萄提取物的抗氧化和chemopreventive属性葡萄物种(24- - - - - -26]。

此后,本研究的目的是检查如果在体外提取物的抗氧化性能适用于一个在活的有机体内使用运动实验模型作为氧化剂的刺激。游泳被选为实验模型,因为它导致有限的肌肉损伤和抗氧化活性的要求更少是因为一个戏剧性的减少肌肉损伤和修复相关的炎症过程。葡萄果渣中提取是在老鼠详尽的管理通常游泳和诱导氧化应激在休息的时候。这是明显的浓度增加血浆和红细胞蛋白质羰基,等离子TBARS,心脏蛋白质羰基和TBARS,以及减少在肝脏谷胱甘肽浓度extract-treated老鼠盐水同行相比在休息的时候。

运动,如预期,增强的一个主要途径导致自由基的生产在运动中所看到的黄嘌呤氧化酶的活动增加等离子体在生理盐水组运动后。独自锻炼诱导氧化应激的血浆蛋白质羰基含量增加,红细胞,和心脏,TBARS浓度的增加血浆,红细胞,腓肠肌肌肉,心脏,TAC增加等离子体,减少肝脏中谷胱甘肽浓度的盐水组运动后。锻炼独自氧化应激的影响在本文中描述的符合先前的结果。因此,它也被发现,运动增加血浆,红细胞和腓肠肌肌肉蛋白质羰基含量(2,43- - - - - -45在等离子体)和脂质过氧化、红细胞和腓肠肌肌肉(43,45,46]。

在等离子体运动后提取政府抑制黄嘌呤氧化酶活性。在之前的研究中我们的研究小组,已经证明是一个使用的葡萄果渣提取在体外抑制黄嘌呤氧化酶的活性,这可能是一个可能的酶的活性下降的原因(47]。一定要提到黄嘌呤氧化酶活性物种的主要贡献者之一在运动。然而,重点也应该在线粒体的贡献,这是非常加载在艰苦的体育锻炼因为能源需求高。此外,在某些情况下,提取管理结合更多锻炼诱导氧化应激诱导单靠运动如图所示的TBARS浓度增加红细胞和肝脏,过氧化氢酶活性在腓肠肌和TAC在等离子体,以及降低红细胞谷胱甘肽。植物提取物的prooxidant影响运动后也被称为在先前的研究。具体来说,artichoke-leaf提取政府没有限制氧化损伤红细胞在竞争的运动员接受艰苦的训练21]。相反,有证据表明在活的有机体内几种植物提取物的抗氧化活性进行运动前(48- - - - - -50]。应该提到时机是一个变量,可能会影响抗氧化的建议。例如,结果可能不同,如果提取管理运动前、运动后或研究慢性补充。

据我们所知,没有研究比较在体外和在活的有机体内影响植物提取物的氧化还原状态运动前。然而,很少有在体外与在活的有机体内研究测量氧化应激标记以应对其他如糖尿病氧化应激刺激51,52),暴露在外源性物质(1,53)、活性氧(54]。这些研究表明,几种不同提取物表现出抗氧化或chemopreventive属性在体外和在活的有机体内。然而,其他研究表明,抗氧化剂在体外活动并不总是适用在活的有机体内模型。特别是,红茶提取物及其主要多酚抗氧化成分,儿茶素防止水溶性自由基引起的脂质过氧化发电机AAPH在体外。然而,事实并非如此,当它们被人类受试者他们不保护血浆脂质过氧化(55]。此外,尽管个别苹果多酚的抗氧化能力高和苹果提取物在体外摄入大量的苹果和苹果多酚被人类似乎并不等价在活的有机体内抗氧化效果(56]。这个分歧并不奇怪。多酚在消耗被胃肠道吸收,以及他们在等离子体浓度没有达到浓度高于1μmol / L由于其快速的新陈代谢由组织(57]。政府2 g的50毫克的没食子酸和儿茶素(最丰富的多酚类物质在葡萄果渣提取用于摘要)导致了3.5μmol / L和1.8μmol / L血浆浓度,分别58]。多酚类化合物的降解在代谢产物分子量较小的部分是负责他们的不同在体外和在活的有机体内影响氧化还原状态(59]。此外,茶多酚代谢等典型的外源性物质和代谢改变或减少他们的抗氧化能力57]。这些数据引起严重问题是否有潜在的抗氧化多酚氧化还原状态的影响在活的有机体内可以从他们的抗氧化活动简单的推断在体外。

本研究的主要发现是,葡萄果渣提取的管理并不影响运动表现,几乎相同的游泳时间表示的盐水,extract-treated团体之间的疲惫。几项研究,检查补充抗氧化剂对运动性能的影响已报道有争议的结果。更具体地说,运动后性能没有影响政府的维生素E,抗坏血酸和其他抗氧化剂在人类和老鼠60- - - - - -64年)或补充黑加仑提取物(20.),洋蓟提取物(21),红景天提取物(22在人类,或人参提取(65年在人类和硒政府在大鼠(66年]。相反,性能得到了改进后管理人类的n -乙酰半胱氨酸(67年),tocotrienols在老鼠68年],以及维生素E [69年),Pseudosasa粳稻叶子(70年),和绿茶提取物71年在老鼠身上。此外,之前报道,补充抗氧化剂几乎不影响运动性能10%以上(72年]。在之前的研究中我们的研究小组别嘌呤醇的政府,一个强有力的黄嘌呤氧化酶抑制剂,显著降低性能和在黄嘌呤氧化酶活动引起了4倍降低等离子体和腓肠肌肌肉5]。因此,有一个抑制尿酸生产,其中一个最有力的抗氧化分子在等离子体9,10]。在最近的研究中,葡萄提取物抑制黄嘌呤氧化酶的活动进行组织只有约30%。别嘌呤醇这个微分效应和葡萄果渣提取黄嘌呤氧化酶活性降低的原因可能是一个提取管理后性能没有影响。

本研究的数据说明在体外抗氧化活性的葡萄果渣中提取并不必然意味着在活的有机体内抗氧化活性静止或运动后。这个发现表明在体外抗氧化活性的特定葡萄果渣提取时没有有效的应用到一个在活的有机体内系统,至少在锻炼是用作氧化剂刺激。根据这些结果,我们建议“抗氧化剂”一词可能系统相关。因此,运动前补充抗氧化剂的惯例应该检查更重要的观点,进一步追究。另一个有趣的建议是,葡萄果渣提取的氧化剂的效果可能是有益的,因为它引发了身体的抗氧化机制以更有效的方式来回应。无论如何它应该是,答案可以在氧化应激领域带来新的证据。