小说海洋保健品对il - 1的影响α介导的肿瘤坏死因子-α从UVB-Irradiated释放人类Melanocyte-Derived细胞

文摘

UV-induced炎症和活性氧形成参与黑色素瘤的发展。天然产物5β-scymnol和有限公司₂超临界流体提取(CO₂超临界流体)的贻贝油含有消炎和抗氧化的特性,它可以帮助减少紫外线辐射的有害影响。因此,它们对释放促炎细胞因子的影响,肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α),从UVB-irradiated人类melanocytic细胞检查。人类表皮黑色素细胞(哼哼)和MM96L黑色素瘤细胞暴露在UVB辐射和il - 1α。细胞生存能力和TNF -α水平测定24小时放射后而p38增殖活化蛋白激酶(MAPK)是观察到15分钟放疗后。当α生育酚,有限公司₂超临界流体贻贝油和5β-scymnol被添加到UVB-irradiated哼哼细胞il - 1处理α肿瘤坏死因子-α水平下降了53%、65%和76%,分别,而在MM96L细胞无明显抑制作用。这种效果并不是由于抑制细胞内p38 MAPK信号通路。这些化合物可能有助于防止inflammation-induced损害正常的黑色素细胞。

1。介绍

太阳散发出不同类型的紫外线(UV)光。我们的皮肤是一种天然的紫外线辐射的目标是参与维生素D₃生产在我们的身体。在高剂量紫外线辐射环境致癌物可引起皮肤损伤以及诱发皮肤癌(1]。它可以通过调节炎症和免疫反应激活的受体,DNA / RNA损伤,和生产活性氧(ROS) (2,3]。它也参与了促炎细胞因子的释放,其中肿瘤坏死因子α(肿瘤坏死因子-α)与肿瘤发生的活动(4]。为了调解的影响,众所周知,紫外线辐射等多个信号级联激活p38增殖蛋白激酶(MAPK) c-Jun终端激酶(物),细胞外signal-regulated激酶1/2 (ERK1/2)和核因子-κB (NFκ在皮肤细胞(B)途径1,5- - - - - -7]。这些作用通路在调节细胞因子的释放,如TNF -α还有待充分的特征。

光老化和皮肤致癌的风险可能会降低通过表皮炎症所致的调制UV-activated细胞信号通路和/或代的氧化应激。外源性抗炎/抗氧化剂代理很可能会改变通路活动。天然产物的应用表明效果减少炎症和氧化应激。Sharma et al。8)表明,食用葡萄籽原花青素(GSP)明显降低UVB-induced (1.2 kJ / m²NF)激活κB通路,诱导一氧化氮合酶(间接宾语),cycloxygenase-2 (cox - 2)和细胞周期蛋白D1蛋白表达在SKH-1无毛的老鼠。GSP还发现防止细胞内抗氧化剂的消耗,抑制UVB-induced ROS生产,和激活MAPK的蛋白质。根中提取的紫草erythrorhizon发现抑制UVB-induced (0.27 kJ / m²)细胞凋亡和抑制细胞因子(TNF -生产α摘要意思,白细胞介素6、IL8)通过p53通路在人类角质细胞(主要9]。从黑大豆抑制NF花青素提取κB途径激活和考克斯和减少前列腺素E₂(铂族元素₂)生产UVB-irradiated无毛小鼠(10]。这些途径也参与促炎细胞因子释放肿瘤坏死因子-α这是证明是通过抑制细胞凋亡参与黑色素瘤进展(4,11]。因此,使用天然产品减少炎症可能有利于减少有害的这些细胞因子的影响。

局部应用α生育酚和α琥珀酸生育酚减少皮肤发炎、色素沉着和SKH-2无毛小鼠皮肤癌的发生率[12]。α生育酚已被证明会降低环丁烷嘧啶photoproducts紫外线暴露的皮肤(13和老鼠UV-induced肿瘤的发病率14]。除了其抗炎性质,它已被证明作为一种抗氧化剂减少紫外线/ ROS-induced损害人类和小鼠皮肤细胞(8,15- - - - - -17]。它的抗氧化特性来自芳环上的羟基礼物捐赠其氢自由基(如羟基和脂质过氧化自由基)形成nonradical稳定的产品(例如,水和脂质分子)18]。

相对较新的化合物像有限公司₂超临界流体萃取)进行小管贻贝石油(19,20.),5β-scymnol (5β-cholestane-3α7α,12α24日,26日27-hexol) [21,22)仍在调查确定其生物活性可能是有益的在减少紫外线照射对皮肤细胞的风险。有限公司₂超临界流体贻贝油p .小管(双壳纲:贻贝科;从哈勒姆湾新西兰green-lipped贻贝,新西兰)抗炎和抗氧化性能19,23]。贻贝石油来源于酒石酸acid-stabilized冻干p .小管的有限公司₂超临界流体法(24)是一种独特的混合n3多不饱和脂肪酸(25),其中包括7、11、14 17-eicosatetraenoic酸(19),一个结构性炎性花生四烯酸的异构体。它已经被证明可以减少炎症在老鼠adjuvant-induced关节炎模型(20.,26]。抗关节炎的效果在一定程度上解释了调制花生四烯酸代谢的基础(即。考克斯和脂氧合酶(LOX)抑制)。

5β-Scymnol存在于胆汁的鲨鱼和黄貂鱼scymnol-26-sulfate [21]。它是一种活性成分的“深海鱼肝油,”作为日本偏方治疗皮肤炎症造成烫伤、烧伤,痤疮(27]。5β-Scymnol金属离子螯合剂在体外和氢氧自由基的清道夫21,28]。Macrides et al。215)发现,β比Trolox -scymnol是一个更强有力的羟基清除剂(α生育酚模拟)和销售碧萝芷准备从松树树皮和葡萄籽中提取。5β-Scymnol的抗氧化剂和金属离子螯合性能驻留tri-alcohol-substituted脂肪族侧链一半(21]。

由于紫外线辐射产生炎症和氧化应激在黑色素细胞可能导致其转型为黑色素瘤,本研究调查的影响有限₂超临界流体贻贝石油和5β-scymnol与α生育酚的释放促炎细胞因子TNF -α通过p38 MAPK通路在人类melanocyte-derived UVB-irradiated细胞。

2。结果

2.1。抗氧化活性的比较

它已经表明,紫外线辐射会耗尽的抗氧化水平,诱导活性氧的生产melanocyte-derived细胞内弯可以增加炎症(29日- - - - - -32]。因此,外源性抗氧化剂的来源可能需要提高细胞内抗氧化水平从而减少UV-induced炎症。因此,在比较有限的影响₂超临界流体贻贝石油和5β-scymnol的α生育酚UVB-irradiated人类melanocytic细胞系(哼哼和MM96L),其抗氧化效果首先用DPPH和芬顿化验。α生育酚被用作控制在这项研究中,因为它是亲脂性的像有限公司₂超临界流体贻贝石油和5β-scymnol。它也是一个已知的抗氧化剂18,33,34]。从结构上看,α生育酚是与有限公司₂超临界流体贻贝石油或5β-scymnol。

2.2。2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)测定

DPPH实验措施抗氧化剂的自由基清除能力(35]。一旦DPPH接受电子或氢自由基的抗氧化剂,这是减少到DPPH₂这是一个明确的稳定的产品,失去了吸光度在490海里。本研究中使用的测试化合物溶解在乙醇和作为这载体溶剂被用作控制试验。乙醇不与DPPH反应试验结果(没有显示)。α生育酚(≤10毫克/毫升)快速淬火DPPH自由基,而无论是有限公司₂超临界流体贻贝石油和5β-scymnol(≤10毫克/毫升)引起的任何影响0 30分钟(结果未显示)和3 h段没有变化(图1(一))。

2.3。芬顿反应试验

芬顿反应试验,抗氧化剂与脱氧核糖争夺羟基自由基(36]。抗氧化剂是溶解在乙醇(10毫克/毫升)化验。与乙醇反应试验,它被引入空气蒸发。乙醇的影响(蒸发)脱氧核糖退化(图被设定为100%1 (b))。α生育酚被证明是最保护,因为它阻止了退化的脱氧核糖的33%,而5β-scymnol 23%保护和有限公司₂超临界流体贻贝油没有影响(图1 (b))。

2.4。测试化合物的影响Melanocyte-Derived细胞的可行性

在可行性研究中,乙醇的测试化合物重组。这对虚假的溶剂没有影响,UVB-irradiated哼哼细胞生存能力(图2(一个))。最初,三个不同浓度(0.625、6.25和62.5μ克/毫升)的测试化合物研究和两个高剂量(6.25和62.5μ克/毫升)的有限公司₂超临界流体贻贝油和5β-scymnol被发现是剧毒的MM96L细胞死亡文化(1]。在sham-irradiated哼哼文化,0.625μ克/毫升α生育酚,有限公司₂超临界流体贻贝油和5β-scymnol没有影响附加可行的细胞的数量(~ 86%;图2(一个))。也出现了类似的观察UVB-irradiated哼哼细胞中α生育酚,有限公司₂超临界流体贻贝石油,和5β-scymnol影响即使interleukin-1附加可行的细胞的数量α(il - 1α(图)是礼物2(一个))。

MM96L文化,乙醇没有影响的可行性骗局——或者UVB-irradiated控制(图2 (b))。所有的测试化合物(α生育酚,有限公司₂超临界流体贻贝油和5β-scymnol)影响粘附细胞的生存能力分数时添加到sham-irradiated细胞。的可行性UVB-irradiated MM96L细胞明显低于sham-irradiated控制(图2 (b))。附加的测试化合物辐照细胞没有影响细胞的生存能力(图2 (b))。的il - 1α也没有影响的细胞生存能力辐照细胞治疗。因此,可以看出,在剂量使用,这些测试化合物没有显著影响的可行性哼哼或者MM96L细胞条件下测试。

2.5。测试化合物的影响UV-Induced TNF -αMelanocyte-Derived细胞释放

肿瘤坏死因子-α可能参与反或protumour活动在黑色素瘤的发展11,37]。伊万诺夫和Ronai11发现,肿瘤坏死因子-α促进细胞的生存LU125黑色素瘤细胞ATF 2-mediated抑制TNF -α表达导致UVC-induced (0.06 kJ / m²)对细胞凋亡的敏感性。因此,这些化合物在抑制肿瘤坏死因子-的功效αmelanocyte-derived细胞中释放了。在sham-irradiated哼哼细胞,肿瘤坏死因子的水平α发布很低(7 pg /毫克细胞蛋白质)和附加的测试化合物没有影响这些水平(图3(一个))。UVB辐射没有导致TNF -显著增加α从哼哼细胞释放(11 pg / mg细胞蛋白质;图3(一个))。添加测试化合物后,TNF -α水平低于未经处理的辐照细胞见过。当il - 1α(10 ng / mL)添加到UVB-irradiated黑素细胞文化,TNF -增加α释放(120倍;图3(一个)、表1)相似,在角化细胞培养(结果未显示)和先前的研究38- - - - - -40]。当il - 1α黑素细胞细胞进行刺激治疗α生育酚,有限公司₂超临界流体贻贝油和5β-scymnol, TNF -的水平α脱落的细胞下降了53%,65%,和76%,分别为(图3(一个)、表1)。

在MM96L细胞,添加测试化合物对肿瘤坏死因子的水平没有影响α释放unirradiated细胞(图3 (b))。当il - 1α添加到UVB-irradiated细胞,肿瘤坏死因子水平的增加101倍-α释放细胞观察(图3 (b)、表1)。感兴趣的是,测试化合物对肿瘤坏死因子的水平没有影响α释放il - 1α刺激UVB-irradiated细胞(图3 (b)、表1)。

2.6。测试化合物的影响在紫外线照射过的Melanocyte-Derived p38 MAPK途径的活化细胞

SB202190 p38抑制剂,抑制肿瘤坏死因子-α在UVB-irradiated哼哼和MM96L细胞(1]。作为α生育酚,有限公司₂超临界流体贻贝石油和5β-scymnol抑制UV-induced TNF -α感兴趣的释放,这是观察如果这些化合物抑制p38 MAPK的活动。sham-irradiated哼哼和MM96L细胞内源性phospho-p38表达式显示是最小的(图4)。然而,在15分钟接触UVB-irradiation phospho-p38蛋白表达增加两个细胞系(1]。当il - 1α添加到辐照细胞,增加phospho-p38水平较高哼哼未经处理的UVB-irradiated哼哼细胞(640%比242%)比MM96L(213%比134%未经处理的UVB-irradiated MM96L细胞)细胞。测试化合物没有影响phospho-p38水平骗局——或紫外线照射过的哼哼和MM96L细胞。这表明这些化合物不抑制TNF -α释放在边缘细胞通过抑制p38 MAPK活性。

3所示。讨论

可以看出从DPPH和芬顿反应化验α生育酚能减少DPPH清除羟基自由基而5β-scymnol才能够清除羟基自由基(图1)。虽然5β-scymnol回收羟基自由基,它没有抑制ferrous-induced在鼠肝细胞脂质过氧化作用[28]。有限公司₂超临界流体贻贝石油另一方面没有反应任何这些化验表明,它也无法清除自由基(图1)。怀特豪斯等。26]和Halpern [41)报道,有限公司₂超临界流体贻贝石油中含有抗氧化的类胡萝卜素的清除单线态氧和过氧化氢自由基。有限公司₂超临界流体贻贝油显示抑制液态氧代谢物表明它可以减少LOX-mediated脂质过氧化(42]。然而,这些化合物的清除能力氧化剂哼哼和MM96L不与他们的影响细胞的生存能力。

边缘细胞是那么容易UVB MM96L细胞。附加可行的紫外线辐射后细胞的百分比比MM96L下摆高细胞细胞(图2)。这表明,边缘细胞可能有一个更高效的DNA修复机制或黑色素含量高于MM96L细胞。此外,它是发现黑色素瘤细胞更容易UVB辐射通过XIAP退化和半胱天冬酶3 upregulation [43]。在这项研究中,α生育酚,有限公司₂超临界流体贻贝石油、或5β-scymnol 0.625μg / mL没有明显细胞毒性影响哼哼和MM96L细胞(图2)。然而,有限公司₂超临界流体贻贝石油和5β-scymnol时MM96L细胞细胞毒性剂量大于0.625μg / mL。在0.625μg / mL,这些化合物并没有带来显著的保护从UVB-induced细胞死亡,并建议要么(a)自由基不得参与这个过程或者这些化合物(b)不影响细胞死亡通路。

在体外研究表明,角化细胞、成纤维细胞和皮肤等价物可以产生il - 1α为了应对紫外线辐射(44- - - - - -46]。il - 1α可以启动细胞自分泌/旁分泌的方式信号等邻近细胞黑色素细胞表达摘要意思受体(47,48]。因此,添加外源性il - 1α可以模拟在一个类似的情况吗在体外研究在缺乏其他il - 1α分泌皮肤细胞类型。巴希尔et al。38)发现,il - 1α调节肿瘤坏死因子-α水平UVB-irradiated角质细胞。在我们的研究中,虽然独自紫外线辐射没有诱导高水平的肿瘤坏死因子-α释放,增加il - 1α进一步增强这些水平UVB-irradiated哼哼(120倍)和MM96L(101倍)细胞(表1)。有趣的是,在辐照哼哼细胞,肿瘤坏死因子-α释放大约是两次观察MM96L细胞(图3)。这可能表明,高水平的炎症可能不是必要的细胞获得了恶性肿瘤。

当测试化合物添加到UVB-irradiated哼哼细胞il - 1处理α,抑制肿瘤坏死因子-α从观察这些细胞释放(图3)。5β-Scymnol(76%)是最有效的抑制UVB-induced TNF -α释放之后,公司₂作为石油(65%)和贻贝α生育酚(53%)。然而,在il - 1α刺激UVB-irradiated MM96L细胞,所有三个化合物都无法抑制UVB-induced TNF -α释放。可能不同的机制可能参与UV-induced TNF -α在黑色素瘤细胞和黑素细胞,因此这些测试化合物可能抑制某些机制而不是其他人导致不同功效的抑制。Pupe et al。49)表明,在角化细胞,抗氧化剂叔丁基羟基茴香醚(底部钻具组合;200年μ米)完全抑制UVB-induced (0.3 kJ / M²肿瘤坏死因子-α释放;3毫米防治(NAC)诱导抑制2.5倍;儿茶素(EGCG;50μ米)和维生素C(1毫米)影响很小而维生素E (50μ米)没有影响。底部钻具组合是一个LOX抑制剂等自由基清除剂和底部钻具组合可能导致一个完整的抑制TNF -α由于它的自由基淬灭能力以及抑制液态氧可能抑制的机制不同于其他抗氧化剂使用(49]。

在这项研究中,有限公司₂超临界流体贻贝油抑制UVB-induced TNF -α在边缘细胞(图3)。有人建议,有限公司₂超临界流体贻贝石油可能具有抗氧化和消炎作用,因为它含有多不饱和脂肪酸和类胡萝卜素(26,41]。自TNF -α促炎细胞因子是COX通路产生的紫外线,可能公司吗₂超临界流体贻贝油抑制这个版本通过其抗炎性质(49]。桑多瓦尔et al。50)发现,在小鼠巨噬细胞,猫爪草抑制lipopolysaccharide-induced TNF -α释放在所需剂量低于其抗氧化活性。因此,它是可能的,有限公司₂超临界流体贻贝石油可能需要被添加在更高浓度在边缘细胞表现出抗氧化活性。而α生育酚和5β-scymnol还可以抑制肿瘤坏死因子-α释放,目前还不清楚这种效果是由于抗氧化和消炎作用。需要进行进一步的研究来证实对TNF -如果这种抑制作用α版本是介导的转录、转录后的或边缘细胞蛋白质的分泌水平。

它已经表明,p38 MAPK在UVB-irradiated调节皮肤细胞(1]。伊万诺夫et al。37]发现p38 MAPK通路的抑制导致降低TNF -α转录激活。因为这些化合物抑制TNF -α在哼哼细胞释放,他们影响p38 MAPK通路活动检查(图4)。p38 MAPK通路的激活似乎并未受到的任何测试化合物UVB-irradiated哼哼和MM96L细胞。相比之下,以前的研究已经表明p38 MAPK通路可以被激活等自由基和抗氧化剂针对这些氧化剂也应抑制通路的激活(16,51]。当UVB (4 kJ / m²)或UVC-irradiated (0.06 kJ / m²)JB6 C141小鼠表皮细胞过氧化氢酶处理,结果表明,H₂O₂激活物和p38 MAPK途径在这些细胞(51]。拉尔森et al。52)发现,α生育酚预防损失的谷胱甘肽和(NF的易位κB)亚基核的UVB (0.6 kJ / m²)和UVA-irradiated (60 kJ / m²黑色素细胞。因为所知甚少的影响有限₂超临界流体贻贝石油或5β-scymnol信号转导途径,其影响在其他途径中间体等物,NFκB, ERK在紫外线照射过的细胞将在未来的研究调查。

一般来说,测试化合物抑制肿瘤坏死因子的释放α从UVB-irradiated哼哼细胞而不是通过抑制p38 MAPK通路活动。这表明这些化合物间接通过其他信号通路的影响。此外,在5β-scymnol和有限公司₂超临界流体贻贝油具有潜在的抗炎和抗氧化性能,他们或其他营养物质可能是有用的补充增加防晒霜。这些化合物可能有助于减少紫外线辐射的有害影响皮肤的保护细胞免受炎症和/或氧化应激的结果。进一步研究机制被5β-scymnol和有限公司₂超临界流体贻贝在紫外线照射过的皮肤细胞,目前正在调查中。

4所示。材料和方法

4.1。材料

以下化学和生化药剂:1640年RPMI介质,介质254年,补充人体黑素细胞增长,penicillin-streptomycin-glutamine, PBS(磷酸盐),trypsin-EDTA解决方案和酚红免费哈佛商学院(汉克的缓冲盐溶液)获得表达载体(澳大利亚墨尔本);的边后卫(胎牛血清)和BSA(牛血清白蛋白)来自Bovogen(澳大利亚墨尔本);Chemilucent装备,山羊合共轭antirabbit immunoglobin, antimouse immunoglobin来自微孔(澳大利亚悉尼);Phospho-p38兔多克隆抗体来自Genesearch(黄金海岸,澳大利亚);AccuKine人类肿瘤坏死因子-α酶联免疫试剂盒是Scientifix(澳大利亚墨尔本)。所有其他化学物质来自σ(澳大利亚悉尼),除非另有指示。组织培养器皿都是来自Diethelm凯勒SiberHegner(大昌华嘉,墨尔本,澳大利亚);虽然Microcon YM-10 micro-concentrators (10 kDa)来自微孔(澳大利亚悉尼)。

4.2。细胞类型

下摆(人类表皮黑色素细胞)细胞获得拔克西木属科学(澳大利亚布里斯班)和MM96L黑色素瘤细胞(53)请捐赠的格伦博伊尔博士(QIMR,布里斯班,澳大利亚)是生长在文化37°C。边缘细胞培养介质254 1% (v / v)补充补充人体黑素细胞增长和1% (v / v) penicillin-streptomycin-glutamine(10000单位/毫升青霉素G钠,10000μg / mL硫酸链霉素和29.2毫克/毫升谷酰胺)。花文化媒体被抛弃,取而代之的是新鲜的每两到三天。MM96L与RPMI培养基培养细胞1640补充5% (v / v)的边后卫和1% (v / v) penicillin-streptomycin-glutamine。花文化媒体被删除和丢弃每三到四天,取而代之的是新鲜的RPMI媒体。

4.3。亚文化

当哼哼和MM96L细胞培养达到融合,各自在文化媒体吸气和细胞洗两次与无菌磷酸盐(PBS)和一次trypsin-EDTA解决方案。之后,这些细胞被孵化与无菌trypsin-EDTA解决方案,使胰蛋白酶化细胞用于种子培养皿或6-well板用于实验。组织培养中使用的所有解决方案都保持在37°C MM96L细胞和RT (20°C)边缘细胞,除非另有指定。

4.4。紫外光照射

紫外线内阁(Wayne电子、澳大利亚悉尼)安置3菲利普斯UVB紫外线8 TL20 W / 01 RS灯(菲利普斯、埃因霍温、荷兰)。这些细胞只有暴露在UVB辐射(305 - 315 nm),有一个最大输出在311 - 312海里。输出的变化(mW /厘米²使用UVB紫外线灯)的测量探测器(附加到一个il - 1400 a光度计(美国纽国际光)。Kuchel et al。54)发现,平均紫外线剂量诱导1地中海41±2 kJ / m²当暴露于solar-simulated紫外线。据估计,阳光的UVB成分是5%,我们选择了一个剂量的2 kJ / m²代表的UVB成分1地中海阳光太阳能(40 kJ / m²)。辐照协议进行了描述,黄齐et al。5]。

4.5。细胞生存能力

细胞生存能力确定24小时after-UV辐射采用台盼蓝排斥法如前所述[5]。

4.6。测试化合物

有限公司₂超临界流体贻贝石油获得green-lipped贻贝收获在新西兰的南海岸。贻贝是稳定与酒石酸和冷冻乾粉干粉。集中贻贝油提取的粉末通过超临界萃取的方法Macrides和Kalafatis24]。有限公司的脂质成分₂超临界流体贻贝石油使用薄层特征以及气相色谱法(42]。5β-scymnol鲨鱼胆汁盐是分离和纯化的方法Amiet et al。22]。¹³5 CNMR谱的分离和纯化β-scymnol完全相同的Amiet et al。22]。

细胞培养在60毫米培养皿进行24 h为0.625μ克/毫升α生育酚,有限公司₂超临界流体贻贝石油或5β-scymnol溶解在乙醇(21,23,26]。年底这段时间,文化媒体被和细胞培养与PBS洗两次。经过两个洗与PBS的文化功能与汉克's-buffered盐溶液(哈佛商学院)和暴露在UVB辐射如上所述。辐照后,哈佛商学院被阅读和测试化合物的细胞,培养不同时间点的结果部分。

4.7。DPPH实验

DPPH分析是用来确定测试化合物清除DPPH自由基的能力。测试化合物(α生育酚,有限公司₂超临界流体贻贝油和5β-scymnol)在乙醇来确定连续稀释的浓度测试化合物有效清除DPPH自由基(55]。一旦DPPH补充说,其吸光度(490海里)立即被测量在不同时间点在24小时内使用珀金埃尔默的胜利者³板读者(Wallac,图尔库,芬兰)。

4.8。芬顿反应试验

为了确定这些测试化合物的清除羟基自由基的能力,芬顿反应测定了所描述的Macrides et al。21]。

4.9。西方墨点法

这些细胞被收获15分钟放疗后。细胞与冰冷的细胞溶解NETN缓冲区(100毫米氯化钠,20毫米三羟甲基氨基甲烷(pH8)液1毫米EDTA, 0.5% (v / v) BRIJ35, 4% (v / v)蛋白酶抑制剂,1% (v / v)磷酸酶抑制剂)(56]。细胞蛋白质溶解产物是准备和用于所述免疫印迹5]。尼龙膜相关抗体孵育(1:1000年phospho-p38兔多克隆抗体,1:1000β肌动蛋白(加载控制))在一夜之间在4°C。之后,他们孵化与适当的二次抗体(1:1000只山羊合共轭antirabbit immunoglobin)。呈现膜Chemilucent开发的解决方案,使用Chemidox XRS单元(BioRad)。微的数字图像进行了分析使用数量一个数码影像软件版本4.5.1 (BioRad)。phospho-p38水平控制sham-irradiated细胞表达为100%,辐照细胞被表示为一个百分比的这个值。

4.10。ELISA

肿瘤坏死因子的水平α释放UVB-irradiated细胞培养24 h放疗后测定。紫外线照射后,新媒体被添加到细胞。在一些实验中,10 ng / mL的il - 1α被添加到媒体,因为它刺激TNF -α释放紫外线照射过的角化细胞(38]。整除的文化媒体集中使用Microcon YM-10 micro-concentrators。肿瘤坏死因子的水平α在这些媒体样本决定使用一个AccuKine人类TNF -α酶联免疫试剂盒。

4.11。统计分析

这一研究获得的结果被表示为平均值±标准偏差(SD)一式三份样品。统计学意义是取决于学生的配对的使用,单侧t以及与被认为是重要的。

确认

作者承认资助医学科学的学校(RMIT大学)学生支持格兰特和国家卫生和医学研究理事会资助(没有。616621)。诉Muthusamy医学科学是一个学校的收件人(RMIT大学)研究生研究生奖学金。

引用

1. 诉Muthusamy和t . j . Piva”皮肤的紫外线反应:MAPK的审查,NFκB和肿瘤坏死因子α信号转导途径。”皮肤档案研究,卷302,不。1,5 - 17页,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. d·科瓦奇s Raffa大肠Flori et al .,“角化细胞生长因子下调细胞内ROS生产UVB诱导,“皮肤病学的科学杂志,54卷,不。2、106 - 113年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. 通用汽车韩礼德”,炎症,基因突变和photoimmunosuppression UVR-induced氧化损伤导致photocarcinogenesis,”突变的研究,卷571,不。1 - 2、107 - 120年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. v . c . Gray-Schopfer m . Karasarides r·海沃德和r . Marais说“肿瘤坏死因子-α块黑素瘤细胞凋亡抑制BRAF信号时,“癌症研究,卷67,不。1,第129 - 122页,2007。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. t . t .黄齐,k . s . Chan和t . j . Piva“紫外线辐射对pp38MAPK的表达的影响和人类keratinocyte-derived furin细胞系,”Photodermatol Photoimmunol Photomed卷,25页,2009页。视图:谷歌学术搜索
6. 罗h .愣,x, l .妈,k .康和z郑,“逆转的紫外线B-induced抑制免疫抑制的细胞外signal-regulated增殖蛋白激酶,”Photodermatol Photoimmunol Photomed25卷,第269 - 264页,2009年。视图:谷歌学术搜索
7. c . Bivik和k . Ollinger物介导UVB-induced凋亡上游溶酶体膜透化作用和bcl - 2家族蛋白质,”细胞凋亡,13卷,不。9日,第1120 - 1111页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. s·d·沙玛,s m . Meeran和s . k . Katiyar”饮食葡萄籽原花青素抑制UVB-induced氧化应激和激活增殖作用的蛋白激酶和核因子-κ体内SKH-1无毛小鼠B信号”,分子癌症治疗》第六卷,没有。3、995 - 1005年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. t石田和坂口,“保护人类UVB-induced炎症使用根提取的角化细胞紫草erythrorhizon”,生物和医药公告,30卷,不。5,928 - 934年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. k . Tsoyi b . p . Hyeong y敏金et al .,“花青素从黑大豆种子层抑制UVB-induced炎症cylooxygenase-2基因表达和产生PGE2通过监管核因子-κB和磷脂酰肌醇3-kinase / Akt通路。”农业与食品化学杂志》上卷,56号19日,8969 - 8974年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. 诉n·伊万诺夫和z . Ronai下调肿瘤坏死因子α表达式通过激活转录因子2增加UVC-induced晚期黑色素瘤细胞凋亡,”生物化学杂志,卷274,不。20日,第14089 - 14079页,1999年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. k·E·伯克j .克莱夫·g·f·库姆斯j . Commisso c . l .敏锐和r . m .中村”外用和口服维生素E对色素的影响和紫外线照射引起的皮肤癌Skh: 2毛的老鼠,”营养和癌症,38卷,不。1,第97 - 87页,2000。视图:谷歌学术搜索
13. m . w . Chen Barthelman, j·马丁内斯,d .爱和h·l .詹斯勒”,抑制环丁烷嘧啶二聚体形成表皮p53基因的紫外线照射过的老鼠α生育酚”,营养和癌症卷,29号3、205 - 211年,1997页。视图:谷歌学术搜索
14. m . Kuchide h·德田j . Takayasu指出et al .,“癌症chemopreventive口服喂养的影响α生育酚的紫外线B诱导photocarcinogenesis无毛的老鼠,”癌症的信,卷196,不。2、169 - 177年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. y . x, y . x苗族,p . Li w·杜和c b . Wang“ROS的参与/ ASMase /物抑制HaCaT UVA-induced凋亡的细胞信号通路的多肽斗篷farreri”,自由基的研究,42卷,不。1,19,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. s . k . Mantena和s . k . Katiyar”葡萄籽原花青素抑制UV-radiation-induced氧化应激和激活MAPK和NF -κ人类表皮角质细胞,B信号”自由基生物学和医学,40卷,不。9日,第1614 - 1603页,2006年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. c .曹Wan,问:江et al .,“All-trans视黄酸变弱紫外辐射诱导下调aquaporin-3和水渗透在人类角质细胞,”细胞生理学杂志,卷215,不。2、506 - 516年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. k . n .女士“α-生育酚:展望未来一种抗氧化剂,分子的愿景15卷,第860 - 855页,2009年。视图:谷歌学术搜索
19. a·p·特雷肖夫l·d·霍奇斯·f·莱特·m·韦恩n . Kalafatis和t . a . Macrides”小说从新西兰green-lipped贻贝抗炎omega - 3欧,进行小管”,比较生物化学和生理学卷,147年,第656 - 645页,2007年。视图:谷歌学术搜索
20. m·辛格·l·d·霍奇斯p·f·a·赖特et al .,”公司₂作为原油脂质提取和自由脂肪酸提取进行小管有抗炎作用adjuvant-induced关节炎的老鼠。”比较生物化学和生理学B,卷149,不。2、251 - 258年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. t . A . Macrides A . Shihata n . Kalafatis p·f·赖特,“比较的氢氧自由基清除属性鲨鱼胆汁类固醇5β-scymnol和植物碧萝芷,”国际生物化学与分子生物学,42卷,不。6,1249 - 1260年,1997页。视图:谷歌学术搜索
22. r . g . Amiet: Kalafatis, t . a . Macrides“合成scymnol,”澳大利亚化学杂志,46卷,第1354 - 1347页,1993年。视图:谷歌学术搜索
23. s . McPhee l·d·霍奇斯p·f·a·赖特et al .,“Anti-cyclooxygenase从新西兰green-lipped贻贝脂质提取的影响,进行小管”,比较生物化学和生理学B,卷146,不。3、346 - 356年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. t . a . Macrides和n . Kalafatis超临界从贻贝脂质提取抗炎活动,”美国专利6083536,2000。视图:谷歌学术搜索
25. k·j·墨菲,b·d·穆尼n . j .曼·d·尼科尔斯和a·j·辛克莱脂质、FA和甾醇组成新西兰绿唇贻贝(进行小管)和塔斯马尼亚蓝贻贝(贝壳类),“脂质,37卷,不。6,587 - 595年,2002页。视图:谷歌学术搜索
26. m·w·怀特豪斯t . a . Macrides n . Kalafatis w·h·贝茨·d·r·海恩斯和j . Broadbent”抗炎活性脂质部分(Lyprinol)新西兰green-lipped贻贝,”Inflammopharmacology,5卷,不。3、237 - 246年,1997页。视图:谷歌学术搜索
27. Y Kosuge, t . Kosuge k .教授h .石田和j·m·Broadbent”Scymnol硫酸盐盐从鲨鱼组织分离治疗肝脏和皮肤疾病,”(专利:PCT Int达成。我们8801274 - c.i。C07J31/00)。化学。抽象的110,1989克,88640。视图:谷歌学术搜索
28. l . l . Glowacki调查的王亚南机制鲨鱼胆甾醇,scymnol澳大利亚墨尔本,RMIT大学博士论文,2003年。
29. f . Di Domenico m . Perluigi c Foppoli et al .,“阿魏酸乙酯对氧化应激的保护作用由UVB照射在人类表皮黑色素细胞,”自由基的研究,43卷,不。4、365 - 375年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. 大肠Kvam和r . m . Tyrrell“黑色素的作用诱导的氧化DNA基础伤害通过紫外辐照的DNA或黑色素瘤细胞,”皮肤病学研究杂志》上,卷113,不。2、209 - 213年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. a . j . Schetter n . h . Heegaard和c·c·哈里斯,“微rna炎症和癌症:交织、自由基、细胞因子和p53通路,”致癌作用没有,卷。31日。1篇文章ID bgp272 37-49, 2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. m . Podda m·g . Traber c·韦伯l . j .燕和l .封隔器”紫外光照射耗尽抗氧化剂和人类皮肤引起氧化损伤模型中,“自由基生物学和医学,24卷,不。1,55 - 65、1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. m . Lopez-Torres j·j·蒂埃尔、y Shindo d·汉和l .封隔器”,局部应用α生育酚调节抗氧化网络和减少ultraviolet-induced在小鼠氧化损伤皮肤,”英国皮肤病学杂志》上,卷138,不。2、207 - 215年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. E . s . Krol k . Kramer-Stickland, d . c . Liebler“使用维生素E,光保护作用”药物代谢的评论,32卷,不。3 - 4、413 - 420年,2000页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. l . m . Magalhaes m a, s .里斯和j·l·f·c·利马”方法对体外抗氧化性能评价方面,“分析Chimica学报,卷613,不。1 - 2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. b·哈利维尔“如何描述一个生物抗氧化剂,自由基研究通讯,9卷,不。1、学会年会,1990页。视图:谷歌学术搜索
37. v . n .伊万诺夫o . Fodstad和z . Ronai表达环finger-deleted TRAF2糖分会让通过上调p38的转移性黑色素瘤细胞凋亡,肿瘤坏死因子α和抑制NF -κB活动。”致癌基因,20卷,不。18日,第2253 - 2243页,2001年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. m·m·巴希尔·m·r·沙玛,v . p . Werth“UVB和促炎细胞因子激活TNF -增效剂α通过增强基因转录生产的角化细胞,”皮肤病学研究杂志》上,卷129,不。4、994 - 1001年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. v . p . Werth m·m·巴希尔和w·张,“白介素完全阻塞ultraviolet-induced肿瘤坏死因子的分泌α从培养皮肤成纤维细胞和角质细胞。”皮肤病学研究杂志》上,卷120,不。1,第122 - 116页,2003。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. c . m . de Jongh l . Khrenova s Kezic t . Rustemeyer m . m . Verberk和s . m .约翰,“interleukin-1基因多态性影响角质层interleukin-1α浓度不参与的慢性刺激性接触性皮炎患者的皮肤,”接触性皮炎,卷。58岁的没有。5,263 - 268年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. 通用汽车Halpern,“稳定脂质提取物的抗炎作用进行小管(Lyprinol),“过敏等Immunologie32卷,第278 - 272页,2000年。视图:谷歌学术搜索
42. 美国McPhee,”新西兰green-lipped贻贝的抗炎作用,进行小管”,澳大利亚墨尔本皇家墨尔本理工大学,2004。视图:谷歌学术搜索
43. b . Thayaparasingham a . Kunz n .彼得斯和d . Kulms黑色素瘤细胞的致敏UVB-induced和NF -小道κxIAP的差别B-mediated对这些。”致癌基因,28卷,不。3、345 - 362年,2009页。视图:谷歌学术搜索
44. c·拉斯穆森k·格拉茨,f . Liebel et al .,”的StrataTest®人体皮肤模型,一个一致的体外毒理学测试,选择“毒理学体外,24卷,不。7,2021 - 2029年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. g . Vielhaber s Grether-Beck o·科赫,w . Johncock和j . Krutmann“防晒霜的吸收最大≥360海里提供最佳保护UVA1-induced表达矩阵metalloproteinase-1 interleukin-1,和人类皮肤成纤维细胞,白细胞介素- 6”光化学与光生物学的科学,5卷,不。3、275 - 282年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. a . v . Marionnet y Chardonnet, j . Viac和d·施密特的差异反应interleukin-1和肿瘤坏死因子α生产和分泌非创伤和紫外线B-irradiation正常和转换角化细胞文化”实验皮肤病学》第六卷,没有。1、22 - 1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. c d . j . p . Lee Lee Chan s w·陈,陈,和c . Jamora”的动态表达表皮细胞凋亡蛋白酶8模拟伤口愈合反应,”自然,卷458,不。7237年,第523 - 519页,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. o . Kholmanskikh:货车压印垫板,f . Brasseur et al .,“白细胞介素1α和1β分泌的黑色素瘤细胞系强烈减少MITF-M和黑素细胞分化抗原的表达,“国际癌症杂志》上,卷127,不。7,1625 - 1636年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. a . Pupe h . Degreef和m . Garmyn诱导肿瘤坏死因子-αUVB:活性氧中间体的作用,类花生酸。”光化学与光生物学,卷78,不。1,第74 - 68页,2003。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. m·桑多瓦尔r . m . Charbonnet n n Okuhama et al .,“猫爪抑制TNFα生产和自由基拾荒:cytoprotection作用。”自由基生物学和医学卷,29号1,第78 - 71页,2000。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
51. s . s . m .叮,j . Li伦纳德et al .,“微分过氧化氢在UV-induced信号转导中的作用,“分子和细胞生物化学卷,234 - 235,81 - 90年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. p·拉尔森,k . Ollinger Rosdahl,“紫外(UV)和UVB-induced氧化还原变化和激活核因子-κ人类melanocytes-protective B的影响α生育酚”,英国皮肤病学杂志》上,卷155,不。2、292 - 300年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. j . h .教皇、l·莫里森和d·j·莫斯“人类恶性黑色素瘤细胞株,”病理学,11卷,不。2、191 - 195年,1979页。视图:谷歌学术搜索
54. j . m . Kuchel r . s . c . Barnetson韩礼德和通用汽车,“紫外线增强solar-simulated紫外线辐射诱导当地人类回忆起反应的抑制,”皮肤病学研究杂志》上,卷118,不。6,1032 - 1037年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. 佐藤a (t, t .藤井裕久“indapamide及其代谢产物的抗氧化活性,化学和制药公告,38卷,不。1,第257 - 255页,1990。视图:谷歌学术搜索
56. a·j·伯吉斯,s . Pavey r·沃伦et al .,“老年病${\text{p21}}^{\text{WAF1 / CIP1}}$通过组蛋白脱乙酰酶抑制剂降低细胞毒性。”分子药理学,60卷,不。4、828 - 837年,2001页。视图:谷歌学术搜索

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