内皮一氧化氮合酶基因多态性(G894T)和糖尿病(II型)在南印度

文摘

研究的目的是找出是否内皮一氧化氮合酶(以挪士)G894T单核苷酸多态性与2型糖尿病在南印度人口(Tamil)。总数260名受试者包括100 2型糖尿病患者和160例健康人没有糖尿病研究包括的历史记录。DNA分离,以挪士G894T基因分型结果进行使用聚合酶链反应限制性内切酶分析使用紧随其后禁止二世。患者的基因型分布和控制兼容哈迪温伯格的预期()。优势比表明,突变体基因型的发生(GT / TT) 7.2倍(95% CI = 4.09 - -12.71)更频繁的情况下的控制。因此,目前的研究表明有一个协会的内皮一氧化氮合酶基因(G894T)多态性与糖尿病之间的南印度人。

1。介绍

全球糖尿病患病率增加,所有年龄组的全球糖尿病患病率约为2.8%,2000年预计为4.4%在2030年由世界卫生组织(世卫组织)(1]。糖尿病患者的总数预计将从1.71亿年的2000上升到3.66亿年的2030 (1]。印度、中国和美国等三大国家估计最多的糖尿病患者(2]。与此疾病相关的问题是肥胖,高血压,心脏病,糖尿病性视网膜病变、肾功能衰竭、糖尿病神经病变、蛋白尿和其他血管疾病(3]。

有人建议,糖尿病是一种病理状态,减少一氧化氮可能存在。一氧化氮(NO)是一种物质能够维持血管张力,凝血和炎症的平衡。的内皮细胞一氧化氮合成精氨酸通过内皮一氧化氮合酶和分子氧。没有活动可以减少由于生产没有受损,由于解偶联受体介导的信号转导,缺乏NO合酶(NOS)衬底精氨酸,或减少可用性的一个或多个代数余子式的优化功能号(4]。

除了环境因素导致2型糖尿病,如肥胖、吸烟、久坐不动的生活方式,和某些药物,遗传因素也在这种疾病的发病中发挥作用。在基因从而调查中,内皮一氧化氮合酶(以挪士)基因引起了相当大的关注,因为它为血管疾病的实质性贡献。

单核苷酸多态性(G894T)基因编码以挪士发现了外显子7 (5]。结果当鸟嘌呤残留在894位置以挪士基因外显子7的胸腺嘧啶残基所取代(Glutamate-GAG Aspartate-GAT)在密码子2985,6]。多态性在不同的人口,不同的患病率可能反映不同的民族。近年来,以挪士基因多态性也获得了巨大的关注由于其与糖尿病协会监管。

一项研究调查了这多态性在南印度的流行7]。到目前为止,还没有研究进行了阐明这种多态性的角色在南印度的2型糖尿病患者。因此,目前的病例对照研究已经扩展到找出是否有任何关联的基因多态性与2型糖尿病以挪士。

2。方法

2.1。选择的主题

共有260名无关的南印度(Tamil)的男性年龄40-55(50±6.4年),没有历史的心血管疾病、血脂异常、高血压、肾失败,等等,属于南印度泰米尔民族(7研究了。总数260人,其中100人是2型糖尿病患者和160名非糖尿病的控制。道德的间隙。从研究对象获得知情同意。泰米尔人表示,在这项研究中人不仅生活在泰米尔纳德邦,但也属于来自泰米尔纳德邦族群。泰米尔人的身份历来是主要语言,属于那些第一语言是泰米尔人。被认为是糖尿病患者的空腹血糖浓度。糖尿病被认为是现在如果空腹血糖的浓度大于126毫克/毫升。个体与正常血糖浓度(< 126毫克/毫升)被认为是控制。史的人心血管疾病、血脂异常、高血压、肾失败,等等,那些不属于南印度泰米尔民族被排除在研究人口。

2.2。DNA提取

从冻结的血液基因组DNA分离盐析过程。DNA隔离,300L使用的血液,分离DNA储存在−20°C。孤立的DNA证实了0.7%琼脂糖凝胶电泳(HI-Media、孟买)和量化通过紫外分光光度法(日立、日本)。

2.3。PCR分析G894T SNP (7]

PCR分析进行了如前所述[7)使用埃普多夫主循环(德国)。基因组DNA (~ 50 ng)孵化反应总量的50μL含有相同浓度的正向引物5′太极拳CTG gg GCA TGA GGC条t - 3′(70皮摩尔)和反向引物5′TGA GGG柠檬酸CAC gg TTC CT-3′(美国基因脚本corp .), 200年μM deoxynucleotide三磷酸,10 x PCR缓冲ph值包含Mgcl2 15毫米- 8.3和1.5单位的Taq DNA聚合酶(美国新英格兰生物学实验室,贝弗利,质量)。

在95°C DNA最初变性放大前5分钟。PCR扩增是使用30个周期完成的,包括2分钟变性在95°C, 45秒退火在62°C, 1分钟在72°C扩展,最终扩展包括1分钟扩展在72°C。

2.4。限制性内切酶分析

限制消化了总量的10μL扩增子,1μL NE缓冲区(50毫米醋酸钾,20毫米tris-acetate, 10毫米醋酸镁,1毫米硫代threitol ph值在25 - 7.9°C)和8个单位禁止二世酶(新英格兰生物学实验室,Beverely质量,美国)。样本培养5小时37°C和消化PCR产品2.5%琼脂糖凝胶电泳分离。

2.5。确认的PCR直接DNA测序

选定的PCR扩增片段完全自动测序两股ABI 3100基因分析仪(印度班加罗尔GeNei测序服务)。

2.6。统计分析

使用比例绝对计数和分类数据进行了分析。的建立了应急表比较患者和控制使用一个比值比。95%的置信区间(95% CI)也计算。等位基因的等位基因频率计算计数。皮尔逊卡方(χ²)执行测试来发现统计学意义之间观察到的基因型和基因型的选择的人口。

3所示。结果与讨论

“T”这一研究获得的等位基因频率的控制(0.15)与观察到的“T”等位基因频率在前面研究[7),进行相同的南印度人口(Tamil)。卡方分析研究表明,在5%水平的意义在于人口哈迪温伯格平衡()。

在目前的研究中,发生突变的基因型(以挪士- 894 GT / TT)被发现高(75%)在2型糖尿病患者与控制(29.37%)相比(表1)。蒙蒂(mario Monti)进行的一项类似研究[8)描述了一种重要的关联内皮一氧化氮合酶(以挪士)基因多态性与2型糖尿病,建议签署一个新的遗传易感性因素高胰岛素血症,胰岛素抵抗和2型糖尿病。它已经表明,有一个重要的协会eNOS-G894T单核苷酸多态性与终末期肾病(9]。在中国进行的一项为期五年的前瞻性研究主题报道,以挪士G894T多态性似乎预测持续高血糖与葡萄糖耐量(个人10]。

之前的研究在健康的南印度报道的缺失基因型突变纯合子(以挪士- 894 TT) [7]。本研究的结果也显示的完全没有纯合突变体基因型(以挪士- 894 TT)对照组在南印度,而在北印度人中进行的另一项研究中报道的存在基因型突变纯合子(以挪士- 894 TT基因型)在健康个体(11]。这种差异可能是由于不同的背景或民族之间存在印度北部和南印度血统。然而,在目前的研究中,突变体基因型在糖尿病患者观察到。

阿卢瓦利亚(在亚洲印度人中进行的一项研究12)建议,以挪士基因位点与糖尿病肾病相关和功能多态性(−786 T > C & 894 g > T)可能会导致降低以挪士基因的表达。据报道,“T”等位基因与糖尿病患者的糖尿病肾病的发病机制(13]。研究在白色澳大利亚人口的增加频率错义Glu298Asp以挪士基因变体,但这些都与发生和冠状动脉疾病的严重程度(14]。

28协会进行了荟萃分析研究关注的三个NOS3基因的多态性(G894T (Glu289Asp), 4 b / A和t - 786 c)和糖尿病肾病的风险15]。发现G894T是消极与糖尿病肾病相关的欧洲血统的白人人口(或= 0.896,0.817 - -0.983,95% CI),但在东亚DN呈正相关(或= 2.02,1.20 - -3.42,95% CI)和其他人群

在目前的研究中,个体的变异TT基因型有7倍增加患糖尿病的风险。突变体“T”等位基因频率还发现高(0.48)在2型糖尿病患者比对照组(0.15)。因此,杂合性/纯合性(GT / TT) G894T以挪士多态性与糖尿病有关。这可能是由于减少一氧化氮合酶活性与突变个体“T”等位基因,进而可能导致减少一氧化氮的合成。然而,还有另一个研究中同样的南印度人口将以挪士G894T多态性及其与冠状动脉疾病的关系(16]。“T”等位基因频率在研究(0.12)是与本研究中观察到(0.15)。TT基因型在对照组的缺失可能是由于其较低的频繁的在控制,病人组相比,因此,对照组与TT基因型可能会发现如果样本容量大。

外显子7中的呕吐都替换(G894T)决定了谷氨酸和天冬氨酸的保守替换(Glu298Asp),这可能导致紧张的α螺旋,因此增加对降解[17]。以挪士G894T变异生成蛋白质产物具有不同敏感性的乳沟,aminoterminal 35-kDa和羧基末端100 kDa碎片18]。这表明,即使是一个胺基酸替代可能功能影响的功能以挪士蛋白质。此外,它也表明,这种多态性包括蛋白质与监护人蛋白质相互作用控制酶的亚细胞贩运以及蛋白质参与降解处理(8]。

而“TT”突变纯合子频率高(15%)被发现在高加索人(19),这种情况是非常罕见的在亚洲人口20.]。尽管南印度人是亚洲人,2型糖尿病患者在南印第安人“T”等位基因频率高于控制协会坚持“T”等位基因突变在2型糖尿病。

一氧化氮的作用作为一个调制器生理胰岛素分泌的广泛评估(21]。一氧化氮有能力调节外围和肝葡萄糖代谢和胰岛素分泌22]。描述,以挪士活化,特别是局部骨骼肌线粒体,增加肌肉的血流量,增加胰岛素的主要基质,葡萄糖,肌细胞。因此,以挪士的遗传缺陷可能是一个新玩家在高胰岛素血症和胰岛素抵抗的发展正如前面提出(8]。

内皮细胞一氧化氮合酶的频率以挪士基因单核苷酸多态性(snp)之间的不同民族的人口23]。发生的人口可能取决于不同的基因型在不同种族和种族背景的人口。我们所知,这是第一个研究中,与内皮一氧化氮合酶以挪士G894T单核苷酸多态性与2型糖尿病患者在南印第安人。

最后,目前的研究表明有协会内皮一氧化氮合酶基因(G894T)多态性与糖尿病之间的南印度人。这进一步证实通过分析大量的样本并评估患者的一氧化氮水平G894T变体。进一步的研究包括其他以挪士多态性(内含子4 b / a T786C重复基因内区13,1998 c / G)和相关的生化参数包括一氧化氮估计会更好的解释是否有实际减少一氧化氮水平在2型糖尿病患者和是否通过增加NOS活性的风险可以减少糖尿病发展。

承认

金融援助呈现,t·安吉莉,科学与工业研究理事会(CSIR),新德里,印度,。

引用

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