表达和Wnt7a人类子宫内膜癌的预后意义

文摘

介绍。Wnt7a分泌糖蛋白,调节正常细胞增殖和分化以及肿瘤发生和进展。然而,少即是了解Wnt7a人类子宫内膜癌的作用。本研究的目的是探讨表达和Wnt7a在子宫内膜癌的预后意义。方法。Wnt7a表达免疫组织化学检查35正常子宫内膜,33 70增生子宫内膜和子宫内膜癌。结果。Wnt7a表达在子宫内膜癌较低的价格相比正常和增生的子宫内膜()。与菲戈阶段(Wnt7a呈负相关)、年级(),淋巴结转移(),子宫肌层的深度入侵(),淋巴血管空间参与()和腹膜细胞学()。之间存在着负相关雌激素受体(ER)和Wnt7a (,)和孕激素受体(PR)之间的正相关和Wnt7a (,)。患者丢失或减少Wnt7a表达了贫穷无进展生存(PFS)和总生存期(OS) (和单变量分析职责)。但在多变量分析,Wnt7a表达式不是PFS或操作系统的一个独立的预后因素。结论。我们的研究结果表明,Wnt7a表达式可以作为一个重要的预后指标。

1。介绍

子宫内膜癌是最常见的女性生殖道恶性肿瘤在世界范围内,这是第七大死因女性患了癌症(1,2]。频繁,这在早期恶性肿瘤诊断和预后比其他癌症。然而,先进的和复发病例预后不良,因为等常规治疗反应不佳的细胞毒性化疗,放疗,或激素治疗。虽然舞台,年级、组织学亚型和肿瘤大小与结果,识别特定分子标记可以为预测子宫内膜癌的预后作出更大贡献。

Wnt分泌蛋白质组成一个大家庭,高度保守的糖蛋白,展览在哺乳动物早期发育至关重要的作用。他们是重要的细胞过程,如增殖,分化,细胞命运的决心,细胞凋亡,致癌作用[3- - - - - -5]。Wnt蛋白质作为配体结合到一个特定的受体位于细胞表面,激活规范或不在经典里的途径:Wnt /β连环蛋白规范途径。没有Wnt信号,激活糖原合成酶激酶3 (GSK3)磷酸化腺瘤息肉病杆菌(APC)和轴蛋白降解,增加他们的活动β连环蛋白有效。实际上wnt与卷曲的交互(Fzd)受体和低密度脂蛋白受体相关蛋白受体5和6 (LRP5/6)可以通过磷酸化GSK3灭活。GSK3灭活是Wnt信号时,细胞质β连环蛋白积累,把原子核,它调节目标基因转录取决于转录因子,T细胞因子(TCF) /淋巴增强因子(LEF)家族(6]。典中的通路并通过Fzd LRP5/6或独立β连环蛋白。Wnt7a主要激活规范的途径;然而,Wnt7a信号由经典之中c-Jun NH Fzd10诱导₂终端激酶反应通路(7]。

Wnt7a在发展中起着举足轻重的作用。老鼠缺乏Wnt7a有女性生殖道畸形8),和老鼠致癌物对待己烯雌酚(DES)表现出低Wnt7a表达水平和一些异常的子宫。他们也显示出颈和/或阴道腺癌在出生后六个月,因此指示Wnt7a参与致癌作用(9]。在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞,恢复Wnt7a Fzd9信号抑制细胞增殖,促进细胞分化,并逆转转化表型,这表明Wnt7a行为作为一个肿瘤抑制基因(10]。按照抑制效应在非小细胞肺癌,Wnt7a也发现hypermethylated在胰脏癌(高频率11]。然而,在上述研究相比,Wnt7a是在结直肠癌细胞系,胰脏癌,胃癌,乳腺癌12]。此外,Wnt7a表达只在恶性卵巢癌和参与迁移和入侵能力的提高卵巢癌细胞系OVCAR3,充当一个致癌基因(13]。这些结果表明,可能存在一种相反Wnt7a不同癌的效果。

Wnt7a中也发现了子宫内膜癌细胞系和子宫内膜肿瘤(14]。在子宫内膜,Wnt7a信息交流的作用,对不同程度的性类固醇激素(15]。雌激素受体(ER)拮抗剂可以反向Wnt7a的减少雌激素在子宫内膜癌细胞系,Wnt7a的差别从而表明对这些部分是由ER (16]。子宫内膜癌是恶性疾病,激素依赖性和ER和孕激素受体(PR)表达与肿瘤发生和临床病理的特性。先前的研究在Wnt7a表达主要是在mRNA水平,和一些在蛋白质水平。在目前的研究中,我们调查了Wnt7a蛋白表达在正常子宫内膜增生的子宫内膜,并通过免疫组织化学endometrioid子宫内膜癌。此外,我们分析了协会Wnt7a表达与子宫内膜癌患者临床病理特征和结果和评估Wnt7a表达和激素受体状态之间的关系。

2。患者和方法

2.1。病人和组织标本

33 70 endometrioid子宫内膜腺癌,子宫内膜增生(16简单子宫内膜增生,17复杂子宫内膜增生),和35正常子宫内膜(12增生的子宫内膜,13分泌子宫内膜,10萎缩性子宫内膜)2000年1月至2004年5月被选哈尔滨医科大学肿瘤医院的知情同意。子宫内膜癌患者手术治疗,手术前没有任何化疗或放射疗法的治疗。分化等级被分配根据世界卫生组织(世卫组织)标准,由两名有经验的病理学家进一步审阅:30 1级,25是2级,15是三年级。外科分期综述了基于国际妇产科联合会(FIGO)系统:30例我分配阶段,9阶段II, III期26,5到四期。无进展生存(PFS)的日期之间的时间间隔定义为进行性疾病的手术和识别的日期。总生存期(OS)被定义为手术日期之间的时间间隔和死亡的日期。

2.2。免疫组织化学

Formalin-fixed,石蜡包埋标本切成4部分μ米厚度,那么部分deparaffinized二甲苯和水化在连续稀释的乙醇。内源性过氧化物酶活动就熄了3%过氧化氢在室温下10分钟。之后,20分钟的部分在微波加热10毫米柠檬酸三钠的缓冲区(PH值7.0)来检索与正常山羊血清抗原,然后封锁了30分钟。一夜之间,部分被孵化在4°C的主要抗体Wnt7a(山羊anti-Wnt7a稀释1:80年,AF3008;研发、明尼阿波利斯,美国),ER(兔子anti-ER稀释1:300年,sc - 543;圣克鲁斯生物技术、圣克鲁斯、钙、美国),和公关(兔子anti-PR稀释1:200年,sc - 538;圣克鲁斯生物技术、圣克鲁斯、钙、美国)。洗后,信号放大与二次孵化的部分抗体45分钟37°C;抗体IgG-polymer辣根过氧化物酶(合;Polink-2 +合山羊轻拍装备,D43-6; GBI, Mukilteo, WA, USA); anti-rabbit IgG-polymer horseradish peroxidase (HRP; Polink-2 Plus HRP Rabbit DAB kit, D39-6; GBI, Mukilteo, WA, USA). Finally, the reaction was revealed with a 3,3′-diaminobenzidine solution. Subsequently, the sections were counterstained with hematoxylin. Pancreatic carcinomas were used as a positive control for Wnt7a and breast carcinomas for ER/PR, respectively. The primary antibodies were replaced with phosphate-buffered saline (PBS) as a negative control.

2.3。染色评估

Wnt7a表达水平分类是基于百分比的总结合分数阳性染色肿瘤细胞染色强度。积极的肿瘤细胞的百分比是评分,得分如下:0(没有),1(1 - 25%),2(26 - 50%),3(51 - 75%)和4 (76 - 100%)。染色强度评分,得分为0(无染色),1(很弱),2(弱),3(温和的)和4(强)。最后得分(主)被积极的得分之和计算,染色强度得分。得分从0到2被认为是负面的,而且分数≥3被认为是积极的。至于评价ER和PR免疫反应性,肿瘤与积极的ER、PR核染色> 10%的肿瘤细胞被定义为ER和PR阳性,分别。所有的组织学幻灯片都检查两个观察者不知道该病临床数据或结果。

2.4。统计分析

卡方检验或确切概率法被用来检查Wnt7a的表达和临床病理特征之间的联系,比如年龄,菲戈阶段,年级,淋巴结转移,子宫肌层的深度入侵,腹膜细胞学和淋巴血管空间(lv)参与。生存曲线被绘制使用测试kaplan - meier方法和生存曲线之间的差异使用生存率较。对于多变量分析,Cox比例风险模型。斯皮尔曼等级相关的测试是用于分析Wnt7a表达之间的相关性和ER / PR表达在子宫内膜癌。这些分析使用SPSS软件13.0版。被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。病人的特点

病人的人口统计特征表中列出1。所有的肿瘤都endometrioid组织学。55.7%的患者是I或II期疾病,和57.1%的肿瘤低分化。本研究的患者平均随访时间65个月。

3.2。Wnt7a人体子宫内膜组织中的表达

Wnt7a疣状局部在导管和腺上皮细胞的细胞质(图1(一))。如数据所示1 (b)- - - - - -1(我),发现Wnt7a在变量水平的免疫反应性。Wnt7a表达在子宫内膜癌(26/70,37.1%)较低的价格相比正常子宫内膜(31/35,88.6%)和增生的子宫内膜(26/33,78.8%)(和职责。)(图2)。然而,Wnt7a的表达水平没有显著不同的增殖与分泌阶段(简单和复杂子宫内膜增生之间)或()。详细的表达式Wnt7a在所有子宫内膜组织中如表所示2。与菲戈阶段(Wnt7a表达呈负相关)、年级(),淋巴结转移(),子宫肌层的深度入侵()、lv参与(),腹膜细胞学(子宫内膜癌(表)1)。之间存在着负相关ER和Wnt7a表达式(,)。之间的正相关公关和Wnt7a也发现(,)(表3)。

3.3。Wnt7a表达的相关性和无进展生存和总生存期

最后的随访期间,14(20.0%)患者死亡的疾病。只有一个病人失去了跟踪。患者5年操作系统的正面和负面的Wnt7a表达式分别为72.1%和92.3%,分别。患者和5年PFS的正面和负面的Wnt7a表达式分别为66.5%和96.0%,分别。操作系统和PFS为阴性的病人Wnt7a表达明显低于患者阳性Wnt7a表达式(和职责。)(表4)。kaplan meier曲线PFS和操作系统的子宫内膜癌患者根据Wnt7a的正面和负面的表达是图所示3。其他变量的单变量生存分析的结果如表所示4。多变量分析使用Cox比例风险模型表明腹膜细胞学,但不是Wnt7a(表是一个独立的预后因素5)。

4所示。讨论

先前的研究已经证明了Wnt蛋白质的表达与预后之间的相关性在不同的人类癌(17,18]。在目前的研究中,我们审查的状态Wnt7a表达在正常,恶性子宫内膜增生性,并分析其可能的角色在子宫内膜癌患者的临床结果。我们可以第一次证明丢失或减少Wnt7a表达与疾病进展和Wnt7a可能是一个有用的子宫内膜癌的预后因素。

在我们的免疫组织化学结果,细胞质Wnt7a展出导管上皮细胞和腺上皮细胞,但不是在基质细胞。然而,据报道,Wnt7a表达在上述三种细胞中利用原位杂交,激光microdissected组织的实时PCR,免疫荧光(19]。相比之下,Wnt7a mRNA表达只在腔的上皮是记录在先前的研究在老鼠和人类子宫内膜4,20.]。第一,矛盾的位置可能是由于不同的监管机制是Wnt7a信使rna和蛋白质的合成和降解。第二,不同的检测阈值和方法学方法也可能导致这种差异。

缺失或减弱Wnt7a表达式中检测出大部分的子宫内膜癌,但只有21.2%的子宫内膜增生和11.4%在正常子宫内膜。有显著差异的Wnt7a正常组织中表达,增生性和癌的子宫内膜。在正常子宫内膜,没有Wnt7a表达之间的相关性和月经周期,这是一致的与其他研究Wnt7a mRNA表达在人类子宫内膜(14,20.]。然而,一系列Wnt7a mRNA表达在子宫内膜癌没有符合我们目前的研究(14]。这种差异可能是由于不同的解释和研究方法。此外,只有四个子宫内膜癌样本选择在前面的研究相对较少,与七十年相比在我们目前的研究样本。

我们证明Wnt7a消极的表达呈负相关,菲戈阶段,年级,淋巴结转移,子宫肌层的深度入侵,lv参与,和腹膜细胞学,表明Wnt7a充当一个肿瘤抑制因子在子宫内膜癌。此外,低Wnt7a表达式在单变量分析与临床疗效不佳,但它不是一个独立的预后因子多变量分析。事实上,Wnt7a最近被描述在其他研究肿瘤抑制效果。据报道,孕激素调节Wnt7a基因表达在子宫内膜上皮细胞,表明upregulation Wnt7a可能与孕激素的肿瘤抑制作用有关(21]。在非小细胞肺癌,Wnt7a的抗癌效应与特定受体Fzd9交互主要是通过ERK-dependent激活核受体介导的基因PPARγ(10]。Wnt7a基因也发现表达下调,因为甲基化在胰脏癌(高频率11]。然而,另一项研究是与上面的意见关于Wnt7a的肿瘤抑制功能。梅里特马等人已经观察到Wnt7a在入侵中,低恶性潜能与良性卵巢肿瘤样本和正常卵巢组织。与此同时,稳定OVCAR3卵巢癌细胞系,过Wnt7a导致迁移和入侵能力的提高(13]。越来越多的证据表明从体外和体内研究表明Wnt7a实际上可能是能做,促进和抑制肿瘤发生。因此Wnt7a可能的功能依赖于器官和肿瘤类型检查。此外,我们推测的机理Wnt7a Fzd受体可能是基于可用性,因为至少10 Fzd家族成员已确定。因此,它是必要的调查主要Fzd受体表达在子宫内膜癌的细胞表面与Wnt7a交互。

此外,观察到Wnt7a和ER状态之间的负相关但Wnt7a之间的正相关和PR在子宫内膜癌的地位表示Wnt7a和卵巢激素之间的联系。研究相关性激素Wnt7a表达式在妇科疾病。在子宫内膜癌石川细胞系,雌激素降低Wnt7a表达式通过其受体ER (16]。另一项研究发现,孕激素调节Wnt7a基因在子宫内膜上皮细胞21]。根据子宫内膜癌,逆相关性Wnt7a和ER之间就非常明显α表达在人类子宫平滑肌瘤(22]。这些以前的结果表明,降低Wnt7a表达式与sex-hormone-dependent子宫内膜癌的发展和平滑肌瘤。

总之,我们已经表明,丢失或减少Wnt7a表达明显与贫穷无进展和整体的子宫内膜癌患者的生存期。这些结果表明首次Wnt7a可能发挥作用在子宫内膜癌的肿瘤抑制。虽然我们的研究结果来自一个有限数量的病人,目前的未来研究提供了重要的依据。进一步的研究在更大的患者群和Wnt7a目标分子的验证Wnt7a表达在子宫内膜癌生存预后的影响。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

彭c和x张同样促成了这篇文章。

确认

作者要感谢通用电气为准备组织卢博士和雪峰王检查样品。这项工作是由中国国家自然科学基金资助(没有。30973188)。

引用

1. a . Jemal r·西格尔·e·沃德,t·默里j .徐和m·j·图恩湖,“癌症统计数据,2007年,”CA:临床医生的癌症杂志》上卷,57号1,页43 - 66,2007。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. d·m·帕金f·布雷,j . Ferlay和p . Pisani“统计数据,2002年全球癌症,”CA:临床医生的癌症杂志》上,55卷,不。2、74 - 108年,2005页。视图:谷歌学术搜索
3. k . m . Cadigan和r . Nusse Wnt信号:动物发展的一个共同的主题,“基因和发展,11卷,不。24日,第3305 - 3286页,1997年。视图:谷歌学术搜索
4. r . Nusse和h·e·Varmus Wnt基因。”细胞,卷69,不。7,1073 - 1087年,1992页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. a . Wodarz和r . Nusse Wnt信号机制在发展。”细胞和发育生物学的年度审查卷14日,59 - 88年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. r·n·d·亨德里克斯,r . Wu Kuick, d·r·施瓦兹·e·r·费伦•k . r .秋,“纤维母细胞生长因子9致癌活性,下游目标卵巢endometrioid腺癌的Wnt信号”癌症研究,卷66,不。3、1354 - 1362年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. k . s .卡和d s宽松,“frizzled-related分泌蛋白4调节两个Wnt7a信号通路,抑制子宫内膜癌细胞扩散,”分子癌症研究》第六卷,没有。6,1017 - 1028年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. c·米勒和d·a·沙逊“Wnt-7a保持适当的子宫模式鼠标女性生殖系统的开发过程中,“发展,卷125,不。16,3201 - 3211年,1998页。视图:谷歌学术搜索
9. m . Mericskay l .法令和d·沙逊”己烯雌酚暴露在子宫内:范例机制导致成人疾病,”出生缺陷研究的一部分,卷73,不。3、133 - 135年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. r·a·韦恩·m·范Scoyk m·哈蒙德et al .,“抗癌效应的Wnt 7 a和Fzd 9在非小细胞肺癌细胞介导通过ERK-5-dependent激活过氧物酶体proliferator-activated受体γ”,生物化学杂志,卷281,不。37岁,26943 - 26950年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. 佐藤n, n .福岛a Maitra et al .,“新靶点的发现胰脏癌的异常甲基化使用高通量微阵列,”癌症研究,卷63,不。13日,3735 - 3742年,2003页。视图:谷歌学术搜索
12. h . Kirikoshi和m . Katoh WNT7A的表达在人类正常组织和癌症,和调节WNT7A WNT7B在人类癌症,”国际肿瘤学杂志,21卷,不。4、895 - 900年,2002页。视图:谷歌学术搜索
13. m·a·梅里特·g·帕森斯t·r·牛顿et al。”表达式分析识别基因参与肿瘤浆液性卵巢癌的变换,“BMC癌症第378条,卷。9日,2009年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. Bui, t·d·l·张m·c·p·里斯r·比克内尔和a·l·哈里斯,“Wnt2表达和激素调控,3、4、5、7、7和10 b在正常人类子宫内膜和子宫内膜癌,”英国癌症杂志》,卷75,不。8,1131 - 1136年,1997页。视图:谷歌学术搜索
15. c·米勒,a .奶油蛋白甜饼和d·a·沙逊“微分Wnt基因的表达模式小鼠雌性生殖系统在开发和发情周期,”机制的发展,卷76,不。1 - 2、91 - 99年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. j·瓦格纳和莱曼雌激素调节基因表达的Wnt-7a培养子宫内膜腺癌的细胞,”分子营养与食品研究,50卷,不。4 - 5,368 - 372年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. j·k·公园,j·h·歌,他t c, s . w .南j.y. Lee和w·s .公园,“Wnt-2在结肠直肠癌的过度表达,”赘生物卷,56号2、119 - 123年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. l . b .球场,c·t·f·大岛渚f·d·o·利马et al .,“比较规范和经典之中Wnt通路:在正常卵巢良性卵巢肿瘤和卵巢癌,”肿瘤的报道,21卷,不。2、313 - 320年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. r . Gaetje Holtrich, t .圆锥形石垒et al .,”表征WNT7A表达在人类子宫内膜异位病变,“生育与不孕,卷88,不。6,1534 - 1540年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. s . Tulac n . r . Nayak l . c . Kao et al .,”标识、描述和监管的规范化Wnt信号通路在人类子宫内膜中,“临床内分泌和代谢杂志》上,卷88,不。8,3860 - 3866年,2003页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. m·k·欧勒z MacKenzie, d . Wallwiener r·比克内尔和m . c .里斯”Wnt-7a由norethisterone调节人类子宫内膜上皮细胞:一个可能的机制,孕激素减少雌激素使子宫内膜瘤形成的风险,”癌症的信,卷186,不。1,第81 - 75页,2002。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. 李,t . c .蒋介石g·r·戴维斯r·m·威廉姆斯诉·威尔逊和j·a·克劳克兰”减少Wnt7a mRNA的表达与雌激素受体的表达呈负相关α在人类子宫平滑肌瘤。”临床内分泌和代谢杂志》上,卷86,不。1,第457 - 454页,2001。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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