心房利钠肽改善神经突产物从螺旋神经节神经元在体外通过cGMP-Dependent方式

文摘

螺旋神经节神经元(胡志明市)初级传入神经元的螺旋神经节(SG),而他们的变性或损失将导致感音神经性听力损失。cardiac-derived激素,心房利钠肽(ANP)中扮演着一个关键的角色在心血管体内平衡通过绑定功能受体(NPR-A和NPR-C)。ANP及其受体广泛表达于哺乳动物的神经系统,他们可能会涉及多个神经的调节功能。尽管先前的研究已经提供了直接证据ANP的存在及其受体在内耳功能,他们的存在在耳蜗SG和监管角色在听觉神经传递和发展在很大程度上仍未知。基于我们之前的发现,我们调查了ANP的表达模式及其受体在耳蜗SG和分离胡志明市和确定了ANP对神经突的影响结果在体外通过使用organotypic SG外植体和分离胡志明市文化从产后老鼠。我们已经表明,ANP及其受体表达在神经元内耳蜗SG产后的老鼠,虽然ANP可能促进神经突的胡志明市通过NPR-A cGMP / PKG通路剂量依赖性的方式。这些结果表明,ANP将扮演一个角色在胡志明市的正常neuritogenesis耳蜗发育和代表一个潜在的治疗候选人提高再生和再生的神经突胡志明市。

1。介绍

感音神经性听力损失(SNHL)是一个主要的健康问题影响数以百万计的个人世界。SNHL与耳蜗感觉细胞的不可逆变性在内耳的听觉部分,包括毛细胞(高碳钢)和螺旋神经节神经元(胡志明市)。在哺乳动物内耳,高碳钢的螺旋器函数转换的声音机械刺激为主要的声信号(1- - - - - -3],胡志明市的初级传入神经元的螺旋神经节(SG)和发挥重要作用在听证会上,传输主要声学信息从高碳钢更高的听觉中枢的中枢神经系统(CNS) [4- - - - - -6]。高碳钢的损失,主要是噪声带来的创伤,耳毒性的药物,感染,衰老,基因突变,胡志明市的顺序变性,最终导致永久性SNHL [7- - - - - -15]。当前患者首选治疗SNHL深刻HC损失和大部分完好无损胡志明市包括耳蜗植入设备,它使用电极阵列代替mechanosensory高碳钢在听觉神经产生电脉冲(16]。为了促进再生和指导的探明剩余听觉神经元,许多潜在的指导线索正在研究中,由于他们的行为对神经突的影响结果和随后的耳蜗植入设备的性能6,17- - - - - -23]。

SG是神经元和胶质细胞的外围集群位于罗森塔尔的运河,线圈在耳蜗耳蜗轴和形成了听觉神经。胡志明市分为两个亚种群,I型和II型,根据他们的不同形态,突触连接和函数。大约有95%的胡志明市更大、双极和有髓鞘的I型神经元,可以进一步细分为3个亚型(IA型、IB型和类型IC),支配与外围树突内高碳钢主要对听觉信号编码(24- - - - - -26]。剩下5%的胡志明市较小,pseudomonopolar, nonmyelinated II型神经元,这刺激活动外高碳钢和一些支持细胞提供感官的反馈,控制听觉上皮到特定的声音刺激的敏感性。此外,所有类型的perikaryons胡志明市被卫星胶质细胞包围,形成松散的I型神经somata髓磷脂。外围树突和轴突intracochlear I型胡志明市由雪旺细胞有髓,而其中心轴突的peripheral-central胶质过渡区突触(神经胶质limitans)终端在耳蜗核有髓的少突胶质细胞和星形胶质细胞27,28]。有必要了解表达式、函数和信令交互的监管物质影响轴突发育和神经可塑性的初级听觉神经元,提供最优策略操纵感觉上皮之间的连接或植入电极和胡志明市的探明,并最终提供药理目标承诺促进新的和听力障碍的有效治疗方法。

心房利钠肽(ANP)是一个28个氨基酸肽主要是合成和分泌的心脏心房利钠肽家族的第一个成员(29日),其中还包括脑利钠肽(BNP)和c型利钠肽(CNP)。ANP与两个特定、高亲和力利钠肽受体,NPR-A NPR-C,靶细胞的质膜调节其生理效应(30.- - - - - -32]。利钠肽受体(NPR-A,也称为NPR1或GC-A)是一个跨膜受体与微粒guanylyl环化酶(GC)催化合成的第二信使循环guanosine-3 ,5 - - - - - -一磷酸(cGMP)。cGMP调节特定效应分子的活动包括cGMP-regulated磷酸二酯酶的亚型,cyclic-nucleotide-gated离子通道,和cGMP-dependent蛋白激酶G (PKG),进而调节不同的生物反应与血管的语气,transepithelial离子运输、神经元兴奋性,神经发展,和神经突寻路,感觉传导通路基本嗅觉和视觉31日,32]。利钠肽receptor-C (NPR-C)缺乏GC领域,有助于ANP和其他钠尿肽的间隙循环通过受体介导内化和退化。此外,证据表明,NPR-C还可以影响到其他第二信使信号通过激活磷脂酶C和抑制腺苷酸环化酶(33]。

除了心血管系统、组织分布和ANP的函数,NPR-A,在多个组织和NPR-C包括肾、肾上腺、肺癌、脂肪组织和视网膜。此外,ANP及其受体在中枢神经系统,导致我们推测ANP可能函数作为一种神经调质或神经肽参与神经元和神经胶质功能(34- - - - - -36]。重要的是,他们的存在分泌和感官隔间的啮齿动物内耳良好的文档记录,说明ANP可能作为当地激素调节液体和电解质平衡内耳(37- - - - - -51]。先前的报道表明,ANP受体已本地化的豚鼠的耳蜗耳蜗轴(42和老鼠SG51]。然而,鲜为人知的定位和功能角色ANP及其受体在内耳,这里,我们集中我们的注意力。

在我们之前的研究中,我们已经调查了ANP及其受体的表达模式,它提供了直接证据的存在和合成ANP及其受体在耳蜗SG (52,53]。在我们目前的研究中,我们重新评估ANP及其受体的分布在耳蜗SG以及分离胡志明市,并确定ANP对神经突的影响结果在体外通过使用organotypic SG外植体和分离胡志明市文化从产后老鼠。我们已经表明,ANP及其受体表达在神经元内耳蜗SG产后的老鼠,虽然ANP可能促进神经突的胡志明市通过NPR-A cGMP / PKG通路剂量依赖性的方式。

2。材料和方法

2.1。动物和组织准备

所有实验动物保健委员会批准第四军医大学,中国,研究实验动物保健和使用的目的。这次调查中使用的所有cochleae产后第三天(P3)或获得第14天(好)Sprague-Dawley老鼠提供的第四军医大学实验动物中心。所有老鼠幼崽被斩首,牺牲和头骨midsagitally打开。借助解剖显微镜(SZX16;奥林巴斯、日本),大鼠颞骨cochleae被移除,在冰冷的汉克的平衡盐溶液洗(哈佛商学院;美国热费希尔科学),为进一步收集使用。

2.2。制备耳蜗部分和螺旋神经节神经元文化

耳蜗cryosections, cochleae从好老鼠与4%多聚甲醛固定(PFA)磷酸盐缓冲剂(PB;0.1米,pH值7.2)灌注通过圆形和椭圆形的窗户,然后孵化具有相同固着在一夜之间在4°C。cochleae脱钙在5% EDTA溶液2天,其次是cryoprotection一夜之间在30%蔗糖溶液在4°C。样品被嵌入在10月Tissue-Tek化合物(美国樱花Finetek)在-20°C,分为12μ米厚midmodiolar截面使用低温恒温器切片机(CM1850;德国徕卡)和安装在poly-L-lysine-coated幻灯片。

胡志明市的分离的文化准备从P3幼鼠和维护如前所述54- - - - - -56]。短暂,每个SG是孤立于耳蜗在冰冷的哈佛商学院连续切除骨耳蜗胶囊,螺旋韧带,螺旋器的器官,在耳蜗轴离开胡志明市。耳蜗轴组织转移到Ca^{2 +}/毫克^{2 +}免费的哈佛商学院0.25%胰蛋白酶和0.1%胶原酶IV型(所有热费希尔科学)在37°C为20分钟保持酶的分离细胞。酶促反应就熄了添加10%胎牛血清(的边后卫;热费希尔科学)。三个洗培养基后,组织被磨碎机械分离fame-polished巴斯德吸管。分离细胞在神经resuspended维护介质组成的杜尔贝科修改鹰中/火腿的F12培养基(DMEM / F12)与1 x B27补充,1 x N2, 1% penicillin-streptomycin镀(所有热费希尔科学)和密度 细胞/玻璃底菜之前涂上poly-L-lysine(0.1毫克/毫升10毫米硼酸缓冲,pH值8.4;热费希尔科学)坚持4 h 37°C, 5%的公司₂,95%的湿度。在倒置显微镜下附件后确认(Eclipse TE2000-U;尼康,日本),1毫升的神经维护中添加在每个神经元细胞培养和培养48 h与4%的PFA固定前20分钟在室温下(RT)。

2.3。ANP的表达模式分析及其受体免疫荧光

免疫组织化学,耳蜗部分和固定胡志明市文化用磷酸盐(PBS;0.01米,pH值7.4),阻止了5%的牛血清白蛋白(BSA;美国Sigma-Aldrich)和0.1% Triton x - 100在PBS 40分钟37°C,并孵化一夜之间在4°C以下主要抗体稀释抗体溶液(1% BSA和0.1% Triton x - 100在PBS):多克隆兔anti-ANP抗体(1:500;猫# pa5 - 29559热费希尔科学)、多克隆兔anti-NPR-A抗体(1:500;猫# pa5 - 29049热费希尔科学)、多克隆兔anti-NPR-C抗体(1:500;猫# pa5 - 96947热费希尔科学)和单克隆anti-Tubulin老鼠β三世(TUJ1)抗体(1:500;猫# ab78078 Abcam、英国)。洗后的样本处理与适当的二次抗体稀释抗体解决方案2 h RT: Alexa萤石488 -共轭驴anti-mouse免疫球蛋白g (1: 500;猫# - 21202热费希尔科学)和Alexa萤石594 -共轭驴anti-rabbit免疫球蛋白g (1: 500;猫# - 21207热费希尔科学)。每个实验还包括消极的控制主要抗体是省略。冲洗后,标本处理核染色,4 ,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI;稀释1:1000;在RT热费希尔科学)15分钟,安装用延长金防安装介质(热费希尔科学),随后光谱扫描激光共焦显微镜下检查(FV1000;奥林巴斯、日本)。所有的图片都保存为TIFF文件使用奥林巴斯共焦软件(FV10-ASW 4.2;奥林巴斯)和处理Adobe Photoshop CS6(美国奥多比系统)的亮度和/或对比度调整。

2.4。螺旋神经节外植体和螺旋神经节神经元的文化

耳蜗解剖过程进行描述与轻微的修改(先前的研究56- - - - - -59]。从P3 cochleae老鼠浸在冰冷的哈佛商学院;然后,耳蜗细钳和膜将胶囊打开迷宫被撤下的耳蜗轴解剖显微镜。包含SG是仔细的螺旋板与耳蜗轴分开,切成相等的部分300 ~ 500μ在被转移到培养皿。Cell-Tak细胞和组织粘合剂(美国康宁公司)预镀15毫米玻璃底部文化菜(美国发展生物科学)载有100人μL DMEM组成的主要附件中,10%的边后卫,25毫米消息灵通的缓冲区,和1% penicillin-streptomycin(所有热费希尔科学)。然后,每个切割外植体镀上单玻璃底菜,和培养基包含SG外植体从盘子小心翼翼地吸气,只留下10μL让组织3 ~ 5分钟。三维文化,100年μL 20%的基底膜基质(康宁)混合物稀释的主要附件中是掉在组织外植体直接和离开组织坚持一夜之间在37°C, 5%的公司₂,95%的湿度。附件确认后,SG外植体培养神经维护中有或没有20 ng / mL重组脑源性神经营养因子(BDNF);美国PeproTech)作为控制文化。实验文化孕育在神经维护中补充了100海里或1μANP(美国Caymanchem) M, 1μM membrane-permeable cGMP的模拟8 - (4-chlorophenylthio) guanosine-3 ,5 - - - - - -环一磷酸(8-pCPT-cGMP;Sigma-Aldrich),或1μM ANP + 1μ米的PKG抑制剂KT5823 (Sigma-Aldrich),分别。对于每一个条件,三个耳蜗神经外植体培养7天,包含5%的37°C湿润孵化器有限公司₂为研究神经突结果前固定,培养基是改变了每隔一天。

准备的分离胡志明市如上所述,在神经resuspended维护媒介和电镀的密度 细胞/镀膜玻璃底菜。附件后,来自不同实验文化孕育在神经细胞存在的维护中没有或药理试剂与SG外植体相同的文化:20 ng / mL BDNF, 100 nM ANP, 1μM ANP, 1μM 8-pCPT-cGMP,或1μM ANP + 1μM KT5823。对于每个条件,三个文化菜种子分离胡志明市喂养每隔一天用新鲜培养基和培养5天之前固定。

2.5。Immunofluorescent螺旋神经节神经元外植体和神经突的分析结果

后文化时期,SG外植体或胡志明市细胞被固定在4%的PFA 20分钟rt,外植体和细胞被封锁5% BSA和PBS Triton x - 100 0.1%,其次是与anti-Tubulin孵化β第三主要抗体(稀释1:500)和Alexa萤石488 -共轭驴anti-mouse免疫球蛋白(稀释1:500)有选择地污点外植体的神经组件或细胞,然后用DAPI复染色(稀释1:1000)可视化细胞核。所有标本在杯底的菜里都安装了延长金介质和共焦显微镜下检查。

在体外应用的图像文化进行了分析通过使用ImageJ软件(版本1.46 r;美国国家卫生研究院)根据一项研究[60]。神经突的跟踪是由使用“Analyze-Set规模”功能,神经突的像素单位长度测量是在微米。渲染图像分割功能,神经突示踪功能应用在胡志明市细胞体选择起点,导致编译框架呈现神经突的测量。只有那些包含神经突完全在图像进行了分析。神经突的产物SG外植体被测量的数量和长度计算过程。总数和神经突的长度的胡志明市也进行了分析。执行统计分析使用一个单向方差分析(方差分析)其次是Bonferroni事后测试。数据的文本和数字手段和平均数标准误差( )。分析了使用社会科学统计程序软件(SPSS 22.0版;美国IBM公司)。值小于0.05 ( )被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。ANP的分布及其受体在螺旋神经节和产后小鼠螺旋神经节神经元

调查ANP的本地化及其受体在SG,我们从好coimmunostained耳蜗部分大鼠神经元标记抗体,第三类β微管蛋白。没有明显的ANP apical-to-basal梯度及其受体免疫反应性观察SG地区沿着耳蜗音质轴的长度。因此,midcochlear又作为一个代表整个长度的耳蜗细胞本地化ANP的分析及其受体。如图1,NPR-A ANP的免疫反应性或NPR-C与β分别三世tubulin-positive somata的胡志明市。ANP是主要的免疫反应性的神经元perikarya,包括质膜和细胞质的胡志明市(图1(a))。NPR-A的分布(图1(b)和NPR-C(图)1(c))在胡志明市很相似,他们主要是免疫反应性的胡志明市的质膜和细胞质和细胞膜出现更加明显。一些异质性ANP水平的免疫反应性,NPR-A, NPR-C也观察到,少colocalization在胡志明市的族群。没有观察到免疫反应性的消极的控制主要抗体是省略(数据没有显示)。

确认ANP的分布格局及其受体在胡志明市,我们也对SG使用相同的神经元细胞培养进行了免疫组织化学标记。如图2,NPR-A ANP的免疫反应性或NPR-C与β分别三世tubulin-positive胡志明市。详细ANP的分布及其受体免疫反应性的在每个神经元包括躯体和探明。没有免疫反应性也观察到在消极的控制主要抗体是省略(数据没有显示)。

3.2。ANP对神经突的影响在螺旋神经节和神经突长度数量外植体

确定ANP的可能作用在影响神经突的胡志明市,我们首先量化神经突的数量和长度的老鼠从P3 SG外植体保持在培养基补充不同的试剂在体外7 d。代表图像从不同的实验文化如图3。SG外植体培养培养基中没有任何补充被用作一个负面/基线控制,当外植体培养在培养基与BDNF补充营养支持神经突胡志明市的结果作为一个积极的控制。免疫荧光和特异性神经元的定量分析β三世tubulin-positive揭示神经突神经突的数量每外植体 。8,平均神经突长度 μm -控制样品(图3(a))。正如所料,丰富的神经突发芽和延伸在外植体处理20 ng / mL BDNF,和神经突的平均数量和长度的积极控制样本 和 μ分别为m(图3(b))。引人注目的是,强大的神经突扩展从SG外植体用不同剂量的治疗ANP后看到。神经突的数量和长度 和 μ为100 nM ANP-treated样品(图3(c)) 和 1μ米1μM ANP-treated样品(图3(d)),分别。在任何剂量的ANP (100 nM和1μ米),显著增加神经突的-观察控制相比,产物而显著差异相比还发现积极的控制。来洞察ANP的机制在促进神经突产物,我们调查是否通过GC-coupled受体,这种肽作用NPR-A,这可能引起cGMP生产。结果表明,数字( )和长度( μ米)的神经突延伸的SG外植体处理1μM 8-pCPT-cGMP, cGMP模拟,也明显不同于正面和负面的控制(图3(e))。治疗1μM KT5823,包裹的选择性抑制剂,似乎废除胡志明市神经突发芽和副产物( 和 μ米)的1μM ANP(图3(f)),以及由此产生的神经突结果没有显著不同于消极的控制。综上所述,这些结果表明,ANP可以促进SG神经突产物通过NPR-A cGMP / PKG通路剂量依赖性的方式。

3.3。ANP对细胞数量和神经突的长度的螺旋神经节神经元

验证ANP的影响在胡志明市生存和神经突的自然结果,我们随后量化分离的细胞数量和神经突长度从胡志明市P3老鼠维持在培养基添加剂与外植体相同的文化在体外5 d。分离神经元培养培养基中补充有或没有20 ng / mL BDNF作为一个积极或消极的控制,分别。代表图像从不同的实验文化如图4。平均每个培养皿的神经元数量是多少 ,每个神经元和神经突的平均长度为 μ在负控制样品(图4(a))。显著增加神经元的数量( )和延伸神经突产物( μ20米)被认为在细胞培养对待ng / mL BDNF(图4(b))。神经元和神经突的长度的数量 和 μ为100 nM ANP-treated神经元(图4(c)), 和 μ米1μM ANP-treated神经元(图4(d)) 和 μ米1μM 8-pCPT-cGMP-treated神经元(图4分别(e))。这些观察结果都显著不同于消极或积极的控制样品。正如所料,1μM ANP未能增加神经元或诱导神经突的胡志明市( 和 μ米)的1μM KT5823(图4(f))。总的来说,这些结果表明,ANP / NPR-A / cGMP / PKG通路可能促进神经元存活在某种程度上,将增强神经突的胡志明市剂量依赖性的方式。

有趣的是,当治疗ANP,许多分离胡志明市了多个分支从单个神经突。这种效果可以明显看到BDNF, ANP,和cGMP模拟8-pCPT-cGMP-treated神经元,这表明神经营养因子和ANP信号可以发挥营养支持神经突和轴突分支(数字产物4(b) -4(e))。因此,轴突分支的影响或寻路的ANP / NPR-A / cGMP / PKG通路仍需要更全面的评估在耳蜗发育更好地理解的机制听觉电路的组装。

4所示。讨论

促进胡志明市的再生和指导神经突的胡志明市是听觉研究领域的关键科学问题。近年来,许多先前的报道使用转录调控,生物材料,电刺激,磁监管促进胡志明市和其他神经的再生和成熟组织(23,57,60- - - - - -67年]。在我们之前的研究,我们已经研究了ANP的表达模式及其受体免疫组织化学和分子生物学分析,目的是确定细胞本地化、表达水平和潜在的功能在产后的SG老鼠。ANP的免疫反应性及其受体分布在胡志明市和perineuronal胶质细胞水平微分表达式的mRNA和蛋白在老鼠SG产后发展。所有这些数据提供了一个大致的时间和空间表达谱ANP及其受体在耳蜗SG,暗示可能的角色ANP在调制神经元和神经胶质功能在SG听觉神经传递和发展(52,53]。

在我们目前的研究中,我们进行immunofluorescent分析耳蜗cryosections以及分离胡志明市验证ANP的分布及其受体在胡志明市。此外,ANP对神经突的影响结果也由使用organotypic SG外植体和分离胡志明市文化从产后老鼠在体外。我们已经表明,ANP及其受体在耳蜗内胡志明市部分本地化和分离的文化。ANP、NPR-A NPR-C主要是在胡志明市的神经元perikarya免疫反应性的,这是符合我们以前的结果(52,53]。

ANP,以及其他两个主要组件的利钠肽家族,法国巴黎银行和中国出版集团,连同他们的受体(npr),广泛表达于神经元和神经胶质的元素在啮齿动物和哺乳动物的中枢神经系统。此外,间接证据表明,利钠肽受体也分布在外围感觉器官的神经区域,特别是在感觉神经节包括背根神经节(DRG),以及视网膜神经节和内耳(42,51,68年- - - - - -73年]。他们可能涉及的几个方面的规定神经元突触传递和信息处理等功能,神经系统发育、神经保护、神经炎症,神经与血管的血脑屏障完整性,大脑流体内稳态(34- - - - - -36]。特别是,许多最近的研究表明神经发展cGMP信号通路的重要性和神经突寻路在中枢和周围神经系统,从而提供一些提示在轴突利钠肽的可能功能开发。cGMP的激活信号引起跨膜GC-coupled利钠肽受体NPR-B(也称为NPR2或GC-B)的配体CNP控制感官DRG神经元的轴突分岔进入脊髓(74年- - - - - -83年]。有趣的是,同样的现象也在颅感觉神经节神经元进入后脑包括耳蜗胡志明市(84年- - - - - -88年]。同样,鼠标缺乏cGMP-dependent蛋白激酶1 (PKG1)或NPR-B缺陷在中央背根神经节感觉神经元轴突的投影(74年- - - - - -78年,81年- - - - - -83年)或胡志明市(84年- - - - - -88年),分别。因此,所有这些结果强调意义的CNP / NPR-B / cGMP / PKG1通路调节神经突或寻路神经发展产物。

结合之前的研究结果,我们当前的工作证明colocalization ANP及其受体在耳蜗胡志明市,我们假设ANP可能参与调节轴突发展听觉电路,因为ANP也激活NPR-A cGMP-dependent信号级联后绑定。为了测试这个假说,ANP对神经突决心organotypic SG外植体和分离产物胡志明市文化从产后老鼠在体外。因为神经营养因子发挥重要作用在胡志明市开发和维护和促进胡志明市生存和提高神经突伸长(89年,90年)、SG外植体和分离胡志明市文化孵化与BDNF添加剂作为一个积极的控制。没有任何额外的营养支持,神经突从胡志明市从外植体的文化产物-控制样本是非常有限的。观察到的神经突ANP是剂量依赖和引起的结果明显不同于消极的控制文化。此外,额外的实验用细胞渗透cGMP模拟或PKG抑制剂进一步证实了ANP的角色/ NPRA / cGMP / PKG途径在神经突伸长,因为这个活动可以通过使用复制8-pCPT-cGMP和废除了kt - 5823。综上所述,我们的数据表明,ANP能增强神经突的胡志明市通过NPR-A cGMP / PKG通路剂量依赖性的方式,可能在一定程度上促进神经元存活。

总之,我们已经表明,ANP及其受体表达在神经元内耳蜗SG产后的老鼠,虽然ANP可能促进神经突的胡志明市通过NPR-A cGMP / PKG通路剂量依赖性的方式。这些结果表明,ANP将扮演一个角色在胡志明市的正常neuritogenesis耳蜗发育和代表一个潜在的治疗候选人提高再生和再生的神经突胡志明市。我们的数据提供了一个很好的起点确定这些潜在元素和产生新的假设;功能实验必须进行任何感兴趣的基因在这些信号通路,当我们对NPR1 (NPR-A),这启发我们探讨调节ANP对几种类型的神经元功能的影响在SG通过其细胞表面受体可能参与。ANP的作用在神经发育的调控可能支持它的关键调节器在耳蜗SG听觉发展和再生。操纵cGMP水平和激活的包裹通过激活ANP和受体信号代表一个潜在的治疗方法来支持胡志明市生存以及提高再生和再生的神经突胡志明市的,承诺是一个富有成果的领域开发新的和有效的治疗听力障碍。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关这篇文章的出版。

作者的贡献

范阳光、周克Ke-yong田,洁王同样贡献了这个工作。

确认

这项研究支持由中国国家基础研究项目(973项目,2014 cb541700),中国国家自然科学基金(81870732和81870732),陕西省的关键研究和发展项目(2018 pt-01),陕西省创新能力支持计划(2017 zdxm - sf - 061),陕西省自然科学基金(2019金桥- 434),和学科研究启动程序Xijing医院的第四军医大学(XJZT19ML23和XJZT18ML54)。

引用

1. j . y . Liu气,陈x et al .,“血影蛋白在听力发展和耳聋的重要作用,“科学的进步,5卷,不。4篇文章eaav7803 2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. x y . Wang j . Li姚明et al .,“失去CIB2引起深刻的听力损失,并破坏mechanoelectrical转导在老鼠身上,“分子神经科学前沿,10卷,p。401年,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. 王朱,c . Cheng y et al .,“ARHGEF6损失导致毛细胞静纤毛赤字和听力损失在老鼠身上,“分子神经科学前沿p . 362,卷。11日,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. b . a . Nayagam m·a·Muniak, d . k . Ryugo“螺旋神经节:连接周边和中枢听觉系统,”听力的研究,卷278,不。1 - 2、2 - 20页。2011。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. z Rusznak和g . Szucs螺旋神经节神经元:形态学的概述,解雇行为、离子通道和函数,“弗鲁格档案,卷457,不。6,1303 - 1325年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. k·d·张和t . m . Coate”最新进展II型螺旋神经节神经元的发育和功能在哺乳动物内耳,”研讨会在细胞和发育生物学卷,65年,第87 - 80页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. r·k·牧羊人和n . a .坚硬地”Deafness-induced听觉通路的变化:对人工耳蜗,”听力学& Neuro-Otology》第六卷,没有。6,305 - 318年,2001页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. z h, s . y .邹,m . et al .,“核转录因子FoxG1影响的敏感性模拟老化头发细胞炎症通过调节自噬途径,”生物氧化还原第101364条,卷。28日,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. 美国高,c . Cheng王m . et al .,“Blebbistatin抑制neomycin-induced头发状的HEI-OC-1细胞凋亡在耳蜗毛细胞,”细胞神经科学前沿,13卷,p。590年,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. y, w·李,z et al .,“预处理与fasudil防止neomycin-induced毛细胞损伤通过减少活性氧的积累,“分子神经科学前沿,12卷,p。264年,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. w·刘,x, z风扇et al .,“Wnt信号激活TP53-induced糖酵解和凋亡监管机构和防止cisplatin-induced小鼠耳蜗螺旋神经节神经元损伤,”抗氧化剂和氧化还原信号,30卷,不。11日,第1410 - 1389页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. 陈y l . Liu, j . Qi et al .,“Wnt激活防止neomycin-induced小鼠耳蜗毛细胞损伤,”细胞死亡和疾病,7卷,不。第三条e2136, 2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. z h·李,y的歌,他et al .,“Meclofenamic酸减少活性氧积累和细胞凋亡,抑制过度自噬,和保护头发细胞样的从cisplatin-induced HEI-OC1细胞损伤,”细胞神经科学前沿,12卷,p。139年,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. 张,y, y董et al .,“击倒Foxg1支持细胞增加了trans-differentiation支持细胞新生小鼠耳蜗毛细胞,”细胞和分子生命科学,卷77,不。7,1401 - 1419年,2020页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. z l .郭,他y蜀et al .,“自噬对neomycin-induced保护听觉毛细胞损伤。”自噬,13卷,不。11日,第1904 - 1884页,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. r·郭x, m .廖et al .,“发展和应用的人工耳蜗植入电声螺旋神经节神经元的刺激啊,”ACS生物材料科学与工程,5卷,不。12日,第6741 - 6735页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. k . g . Li陈,d . et al .,“Laminin-coated实际上电纺再生丝素蛋白垫促进神经祖细胞增殖、分化、和生存在体外,”在生物工程和生物技术前沿,7卷,p。190年,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. k问:风扇,y y, h·l·王et al .,“应激代谢紊乱在外围CD4 + T细胞导致焦虑行为,”细胞,卷179,不。4、864 - 879页。e19, 2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. 问:方舟子,y, x Chen等人“三维石墨烯增强通过代谢调节神经干细胞增殖,”在生物工程和生物技术前沿,7卷,p。436年,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. j .赵m .唐曹j . et al .,“结构可调降低石墨烯氧化物基质维持老鼠胚胎干细胞多能性,”先进的科学》第六卷,没有。12,1802136条,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. d . Li x, y胡锦涛et al .,“双光子图像跟踪的神经干细胞通过铱配合物封装在聚合物团簇,”ACS生物材料科学与工程,5卷,不。3、1561 - 1568年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. 汉族,y, j .太阳et al .,“隔离和分析细胞外囊泡的蝶翼,集成microvortex生物芯片,”生物传感器和生物电子学第112073条,卷。154年,2020年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. l . j . m . Tang Li他et al .,“神经干细胞分化转录组分析石墨烯基板上,“胶体和表面B: Biointerfaces,第182卷,第110324页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. 美国阳光、t . Babola g . Pregernig et al .,“头发细胞转导调节自发活动和螺旋神经节亚型规范在听觉系统中,“细胞,卷174,不。5,页1247 - 1263。e15, 2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. b . r . Shrestha c .贾l .吴s . g . Kujawa m . c . Liberman l . v .古德里奇,“感觉神经元内耳的多样性是由活动,“细胞,卷174,不。5,页1229 - 1246。e17, 2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. a . c . Petitpre h . Wu Sharma et al .,“在听觉传入神经异质性和刻板的连接系统,”自然通讯,9卷,不。1,第3691条,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. a . Toesca“中央和周边鼠耳蜗和前庭神经髓鞘,“神经学字母,卷221,不。1、21 - 24日,1996页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. e . j .全n, l, m·r·汉森,“中央神经胶质的影响螺旋神经节神经元神经突生长,”神经科学卷,177年,第334 - 321页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. A . j . de大胆、h·b·伯伦斯坦A . t . Veress h . Sonnenberg镇上,“快速、有效的静脉注射利钠反应心房心肌提取的老鼠,”生命科学,28卷,不。1,第94 - 89页,1981。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. e·r·莱文·d·g·加德纳,w . k .参孙“利钠肽,”《新英格兰医学杂志》上,卷339,不。5,321 - 328年,1998页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. l·r·波特,s . Abbey-Hosch d·m·迪基,”利钠肽、其受体和环鸟苷monophosphate-dependent信号功能,“内分泌检查,27卷,不。1,47 - 72、2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. l·r·波特,a . r .尤德d . r .植物l·k·安和d·m·迪基,”利钠肽:他们的结构、受体、生理功能和治疗应用,”cGMP:发电机,效应物和治疗意义。实验药理学手册》,191卷f·霍夫曼,h·h·h·w·施密特和j.p. Stasch, Eds。施普林格,柏林,海德堡。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. r·a·罗斯和w·r·贾尔斯,”利钠肽C受体信号在心脏和血管,”《生理学,卷586,不。2、353 - 366年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. L.-H。曹和X.-L。杨,”利钠肽及其受体在中枢神经系统,”神经生物学的进展,卷84,不。3、234 - 248年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. m·a·j·普拉多Baltrons, p . Pifarre和a·加西亚”胶质细胞作为利钠肽的源和目标,“国际神经化学卷,57号4、367 - 374年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. s . Mahinrad a·j·m·德Craen s Yasar d . van Heemst b . Sabayan,”利钠肽在中枢神经系统:小说的目标认知障碍,”神经科学和生物行为的评论卷,68年,第156 - 148页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. y . j . Yoon e·j·李,s . h .金”的心房利钠肽合成兔子内耳,”的喉镜,卷122,不。7,1605 - 1608年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. t·科赫,b . Gloddek和s . Gutzke”结合位点的心房利钠肽(ANP)哺乳动物耳蜗和环磷鸟苷合成的刺激,“听力的研究,卷63,不。1 - 2、197 - 202年,1992页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. g . Krause a . m . Meyer zum Gottesberge, g . Wolfram和r . Gerzer”记录编码三种类型的guanylyl-cyclase-coupled转移膜受体在豚鼠内耳组织,”听力的研究,卷110,不。1 - 2、95 - 106年,1997页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. a . Meyer zum Gottesberge和j . lamprech本地化心房利钠肽结合位点的内耳是额外的调节系统,”Acta Oto-Laryngologica。Supplementum卷。468年,53-57,1989页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. a . m . Meyer zum Gottesberge、m . Gagelmann和w·g . Forssmann“心房利钠peptide-like豚鼠内耳免疫反应性的细胞,”听力的研究卷,56号1 - 2、86 - 92年,1991页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. j . lamprech和a . m . Meyer zum Gottesberge”的存在和定位为心房利钠肽受体在内耳的几内亚猪,”Oto-Rhino-Laryngology档案,卷245,不。5,300 - 301年,1988页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. a . Meyer zum Gottesberge, a . Schleicher c .鼓手和r . Gerzer”保护利钠肽系统的体积在内耳前庭和耳蜗隔间之间比较,”Acta Oto-Laryngologica。Supplementum,第520卷,第1部分,170 - 173年,1995页。视图:谷歌学术搜索
44. l·乔y汉,张平,z曹,j .秋,“检测心房利钠肽及其受体在边缘细胞和耳蜗组织发展中老鼠,”神经内分泌学字母,32卷,不。2、187 - 192年,2011页。视图:谷歌学术搜索
45. t . Seebacher大肠,选h . Kumagami k .野生j . p . Ruppersberg和j·e·舒尔茨”表达的膜结合和胞质guanylyl环化酶在大鼠内耳,”听力的研究,卷127,不。1 - 2、95 - 102年,1999页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. 铃木m . h .北野t Kitanishi et al .,“rt - pcr分析mRNA表达的利钠肽家族及其受体在大鼠内耳,”大脑研究分子,55卷,不。1,第168 - 165页,1998。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. Y.-J。Yoon和s·赫尔斯”的免疫组织化学定位α心房利钠多肽大鼠耳蜗。”Acta Oto-Laryngologica,卷112,不。4、604 - 610年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. y . j . Yoon和m . Anniko alpha-ANP分布在耳蜗和前庭器官,”ORL卷,56号2、73 - 77年,1994页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
49. y . j . Yoon e·j·李,美国赫尔和j·s·金,“心房利钠肽调节听觉脑干反应的老鼠,”Acta Oto-Laryngologica,卷135,不。12日,第1297 - 1293页,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
50. h . x, j·l·王,问:c . Liu和j·h·邱”分布和位置的免疫反应性的心房利钠肽在豚鼠耳蜗纹vascularis,”中国医学杂志,卷107,不。1,53-56,1994页。视图:谷歌学术搜索
51. h . Furuta:森罗l ., A·f·瑞恩”检测信使rna编码的鸟苷酸环化酶/心房利钠肽受体大鼠耳蜗竞争聚合酶链反应和原位杂交,”听力的研究,卷92,不。1 - 2、78 - 84年,1995页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
52. f .阳光、周k s王et al .,“表达和本地化的心房利钠肽及其受体在大鼠螺旋神经节神经元,”大脑研究公告卷。95年,28-32,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
53. p . f .阳光、周k s . Wang Liang m·朱和j .秋,“心房利钠肽及其受体的表达模式耳蜗螺旋神经节内的产后老鼠,”听力的研究卷,309年,第112 - 103页,2014年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
54. n .徐j .恩贝s Khaja l .徐j·j·克拉克,和m·r·汉森”阵营和蛋白激酶的影响从螺旋神经节神经元,神经突长度”听力的研究,卷283,不。1 - 2,33-44,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
55. p . j .阿特金森c·h·曹m·r·汉森和s . h .绿”活动的物亚型导致螺旋神经节神经元,神经突增长”听力的研究,卷278,不。1 - 2、77 - 85年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
56. z . g .太阳,w . Liu风扇et al .,“三维培养系统与人工基底膜和神经营养因子保留体外螺旋神经节神经元的结构和功能,“神经可塑性卷,2016篇文章ID 4280407, 15页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
57. m·瓦美国太阳,c .宣et al .,“骨形成蛋白4促进生存和保护的结构flow-sorted Bhlhb5 +耳蜗螺旋神经节神经元在体外”,科学报告,7卷,不。1,第3506条,2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
58. s . j .量k .西村m . Scheibinger和a . Dabdoub”体外培养方法螺旋神经节细胞,纯化的细胞亚型诱导神经元重组,”神经科学前沿,12卷,p。822年,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
59. k . Leitmeyer a . Glutz c Setz et al .,”辛伐他汀导致剂量依赖性有毒影响螺旋神经节神经元在体外器官型培养试验,”生物医学研究的国际卷,2016篇文章ID 3580359, 7页,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
60. j . s . Kempfle k .阮c Hamadani et al .,“Bisphosphonate-linked TrkB受体激动剂:cochlea-targeted交付神经营养剂的治疗策略的听力损失,”Bioconjugate化学卷,29号4、1240 - 1250年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
61. 美国汉,j .太阳,他s, m . Tang和r·柴”石墨烯生物材料在生物医学中的应用”,美国转化研究杂志》上,11卷,不。6,3246 - 3260年,2019页。视图:谷歌学术搜索
62. j·w·严,w . Liu Qi et al .,“三维培养系统与人工基底膜促进净化螺旋神经节神经元在体外生存和功能,“分子神经生物学,55卷,不。3、2070 - 2084年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
63. y, y, r·柴和z .顾,“设计生物材料和微环境的神经工程学,”神经可塑性卷,2018篇文章ID 1021969, 10页,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
64. m z . Liu, j .赵r·柴和j .康”展望未来:对先进的3 d为干细胞为基础的再生医学生物材料,”先进材料,30卷,不。17日,e1705388条,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
65. s . l .夏w·朱y . Wang,他和r·柴”调控神经干细胞增殖和分化的基于石墨烯的生物材料,”神经可塑性卷,2019篇文章ID 3608386, 11页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
66. 肖r .郭,s, m . et al .,“加速生物神经干细胞的功能开发石墨烯耦合:对神经的影响与导电材料,”生物材料卷,106年,第204 - 193页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
67. w . l .商y Yu高et al .,“仿生学研究各向异性表面润湿性从动态铁磁流体组装模板”先进功能材料,28卷,不。7,1705802条,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
68. e . m . Abdelalim c .此外,Tooyama,”表达的利钠peptide-activated鸟苷酸环化酶胆碱能和多巴胺能无长突细胞的大鼠视网膜,”肽卷,29号4、622 - 628年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
69. e . m . Abdelalim j.p.腹部,Tooyama,“表达NPR-B鼠背根神经节神经元的,”肽,43卷,56 - 61,2013页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
70. 吴z . w . Li b、p .你们,z . y . Tan黄懿慧霁,“脑利钠肽抑制BmK我引起的疼痛,钠channel-specific调制器,在老鼠,”《华尔街日报》的头痛和痛苦,17卷,不。1,p。90年,2016。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
71. a . Marchenkova s Vilotti大肠Fabbretti, a . Nistri“脑利钠肽既定会使P2X3受体通过控制它们的磷酸化状态和膜定位,“分子的痛苦卷。11日,2015 p . s12990 - 015 - 0074。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
72. g . z徐j .田y . m .钟和x l·杨,”利钠肽受体在大鼠视网膜神经节细胞表达,“大脑研究公告,卷82,不。3 - 4、188 - 192年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
73. e . m . Abdelalim和i Tooyama NPR-C表达在胆碱能和多巴胺能无长突细胞在大鼠视网膜,”肽没有,卷。31日。1,第183 - 180页,2010。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
74. a . Dumoulin g . Ter-Avetisyan、h·施密特和f . g . Rathjen”感觉轴突分支瓦解的分子分析cGMP-dependent信号级联,”国际分子科学杂志》上,19卷,不。5日,第1266条,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
75. h·施密特,m·维尔纳,p . a . Heppenstall et al .,“通过cGKI cGMP-mediated信号α需要感觉轴突的指导和连通性,”《细胞生物学》杂志上,卷159,不。3、489 - 498年,2002页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
76. h·施密特,d·m·迪基a Dumoulin et al .,“监管的利钠肽受体2 (Npr 2)近膜丝氨酸和苏氨酸残基磷酸化的感觉轴突的分叉至关重要,”《神经科学杂志》上,38卷,不。45岁,9768 - 9780年,2018页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
77. h·施密特,a . Stonkute r . Juttner d . Koesling a . Friebe和f . g . Rathjen“c型利钠肽(CNP)是一个分岔的因素对感觉神经元,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷106,不。39岁,16847 - 16852年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
78. h·施密特,a . Stonkute r .́。Juttner et al .,“受体guanylyl Npr的环化酶2是必不可少的感觉在脊髓轴突分岔,”《细胞生物学》杂志上,卷179,不。2、331 - 340年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
79. 公司总裁堀尾岸本i t . Tokudome t . et al .,“c型利钠肽是一个雪旺细胞衍生因子感觉神经元的发育和功能”神经内分泌学杂志》,20卷,不。11日,第1223 - 1213页,2008年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
80. c .夏m .阮a . k .驻军et al .,“CNP / cGMP信号调节通过调节微管聚合轴突分支和经济增长,”发育神经生物学,卷73,不。9日,第687 - 673页,2013年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
81. 赵z l .马,“利钠肽激素,调节轴突发展”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷106,不。42岁,18016 - 18021年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
82. z赵,顾y, z . Wang r . Feil f·霍夫曼和l .马”调节轴突分支环磷鸟苷的途径通过抑制糖原合成酶激酶3背根神经节感觉神经元,”《神经科学杂志》上卷,29号5,1350 - 1360年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
83. h·施密特,彼得斯,k .弗兰克·l·温,r . Feil和f . g . Rathjen“背根神经节轴突分岔容忍增加环磷鸟苷水平:磷酸二酯酶的作用2 a和清道夫受体Npr 3,“欧洲神经科学杂志》上,44卷,不。12日,第3000 - 2991页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
84. c . c . Lu j . m .苹果e·a·豪斯曼和l . v . Goodrich“螺旋神经节神经元的发育分析揭示了洞察听觉电路组装,”《神经科学杂志》上没有,卷。31日。30日,第10918 - 10903页,2011年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
85. g . Ter-Avetisyan f . g . Rathjen h·施密特,“从颅感觉神经元轴突的分叉残疾没有Npr2-induced cGMP的信号,”《神经科学杂志》上,34卷,不。3、737 - 747年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
86. c . c . Lu x j .曹赖特,l .妈,d . Oertel和l . v . Goodrich”突变Npr2导致模糊音质组织中央听觉电路在老鼠身上,“公共科学图书馆遗传学,10卷,不。12篇文章e1004823 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
87. 沃尔特,d . Mohrle h·施密特et al .,“GC-B缺乏小鼠与轴突分岔损失展览听觉处理妥协,“前沿的神经回路,12卷,p。65年,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
88. h·施密特和b . Fritzsch Npr2零突变体显示初始过度其次是减少螺旋神经节cochleotopic投影接近正常水平轴突预测相结合,“细胞和组织的研究,卷378,不。1,15-32,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
89. a·j·埃文斯,b·c·汤普森·g·g·华莱士et al .,“促进神经突产物从螺旋神经节神经元外植体使用聚吡咯/ BDNF-coated电极,”生物医学材料研究杂志》上。部分,卷91,不。1,第250 - 241页,2009。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
90. k .斯坦科维奇,里约热内卢,a .夏et al .,“成人螺旋神经节神经元的生存需要erbB受体信号在内耳,”《神经科学杂志》上,24卷,不。40岁,8651 - 8661年,2004页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

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