文摘

客观的。Aquaporin-4 (AQP4)血清自身抗体检测的各种方法。最高灵敏度达到细胞化验,但酶联免疫吸附试验(ELISA)仍然普遍利用全球临床医生。方法。我们进行了回顾性研究,识别所有病人犹他大学曾在奥雅纳AQP4 ELISA检测实验室从2010年到2017年。然后我们回顾他们的诊断评估和最终诊断基于ELISA效价结果。结果。750测试分析了AQP4 ELISA,患者和47个独特的积极滴度确定。只有不到一半的患者(49%)达到了临床标准视neuromyelitis谱系障碍(NMOSD)。在较低的情况下积极滴度(3.0 - -7.9 U /毫升, ),最常见的最终诊断多发性硬化症(52.6%)。在适度积极的群体(8.0 - -79.9 U /毫升, ),只有一半多一点NMOSD群体(64.3%)。与高阳性病例(80 - 160 U /毫升, ),100%的病人符合NMOSD临床诊断标准。结论。我们的数据说明了诊断的不确定性与AQP4 ELISA,化验,仍由临床医生通常命令尽管更敏感和特定的可用性测试,以检测AQP4自身抗体的NMOSD疑似病例。特别是低积极效价AQP4 ELISA结果尤其NMOSD特异性的诊断。可访问性的重要性敏感和临床实践中的特定检测AQP4在怎么强调都不为过。

1。介绍

视Neuromyelitis谱系障碍(NMOSD)是一种自身免疫性炎症条件优先的中枢神经系统(CNS)影响视神经,脊髓,juxtaventricular间脑和脑干的地区1]。2004年发现的致病性自身抗体aquaporin-4免疫球蛋白G (AQP4) [2)允许机械从多发性硬化症(MS)的区别3- - - - - -5]。最近的国际共识指南大纲NMOSD主要和次要的诊断标准,其中抗体检测仍然是一个核心原则(6]。抗体检测的方法首次发现以来已经有了很大进步。发表的报告的总体效用检测AQP4免疫组织化学的描述,包括免疫荧光(如果)7),免疫沉淀反应化验(IPA),以及ELISA (8,9),最近,细胞化验(CBA)和流式细胞术——/ fluorescence-activated细胞排序(流式细胞仪)10- - - - - -12]。

大量研究说明的优越性AQP4-transfected细胞化验,但fda批准的ELISA检测方法仍然是常见的命令通过练习临床医生(13,14]。例如,在最近的12个月里(2/2020-2/2021),ELISA测定占所有的62% AQP4化验下令在奥雅纳实验室(盐湖城,UT)。与奥雅纳实验室,我们对所有病例进行回顾性评估,执行NMOSD的三级医院确定ELISA检测在现代人群的效用。我们预期低在ELISA阳性结果会不准确的重要子集病人和可能与免疫功能障碍和/或神经炎症相关疾病临床与NMOSD截然不同。

2。方法

犹他大学的这项研究是通过IRB (IRB 00108537)以及道德标准委员会的批准进行这项研究。

所有AQP4 ELISA试验订单在奥雅纳实验室对犹他大学病人被确定为半定量的ELISA(测试代码2003036和2013327半定量的反射性的间接荧光抗体ELISA)。每种情况下反复核对了医疗记录病人的数量和出生日期,以避免重复记录。受试者至少有一个积极的AQP4 ELISA结果,电子病历(EMR)被JPW回顾性审查。患者消极的ELISA试验结果或那些缺失的数据被排除在进一步分析。那些没有排除病人的信息。这项研究包括所有科目(包括住院和门诊)从2010年8月到2017年9月(图1)。


图1
评估的结果AQP4的ELISA检测研究期间在我们的机构,犹他大学的。女士:多发性硬化症;NMOSD:视neuromyelitis谱系障碍。

诊断是根据最新诊断标准如下:NMOSD(基于2015年诊断标准)(6),明确的/可能脊髓炎(15(女士),16),和神经系统莱姆病(17]。临床资料,包括临床表型,抗体效价,并记录替代测试方法是识别和记录。当可用,同时共存的自身免疫或神经系统疾病也记录,作为成像特点和脑脊液参数。值得注意的是,实验室值髓少突细胞(MOG)免疫球蛋白G自身抗体并不包括在这一分析商业测试没有在整个搜索。

2.1。奥雅纳实验室Aquaporin-4 ELISA测定

AQP4 ELISA测定(Kronus明星,ID、美国)使用M1-AQP4同种型,直到2015年4月。之后,奥雅纳实验室利用M23-AQP4 ELISA同种型。我们无法包括这些同种型的比较分析考虑到有限数量的病人登记后M23分析在实践中实施。

ELISA结果从两个亚型被报道在任意单位(正值5 U /毫升或更高版本,每制造商)(18,19]。积极的测试结果AQP4 ELISA分为低、中度或高度积极的方面。低积极指定包括3.0和7.9之间的任何测试结果U /毫升(关联最大的大约5%的数值定义最大读数160 U /毫升)。适度的积极结果是定义为一个测试结果在8.0和79.9之间U /毫升(超过5%和50%的最大值),和高阳性结果所需的值介于80.0 U /毫升和读出的上限,这是报告为大于160 U /毫升。奥雅纳的参考范围AQP4 ELISA实验室进化研究期间:参考范围被认为是任何阳性结果大于5.0 U /毫升,但限制是2016年10月下降到3.0 U /毫升。由“低积极”定义为7.9 U /毫升在我们的研究中,我们阻止这种变化报告状态影响的分配之间的任何测试结果患者3.0和5.0 U /毫升。

2.2。Aquaporin-4-Transfected细胞化验

奥雅纳实验室利用Euroimmun M1-CBA (Euroimmun,吕贝克,德国)。稀释四倍(40 1:10日,160年和640年)被用来创建端点滴度。初步(未发表的奥雅纳实验室数据)的数据比较了Euroimmun M1-CBA M23-CBA。M1-CBA是选择由于M23-CBA更高的背景分析,这阻碍了化验结果的解释(19]。

流式细胞仪测定在梅奥医学实验室(罗切斯特,MN)已经被描述在文献[19]。值得注意的是,考虑到回顾性研究设计重点是真实的临床试验性能,我们没有对任何患者样本执行后续的验证性测试,只使用EMR内的信息。

2.3。统计分析

病人的人口统计和临床和影像学特征进行了综述与描述性统计。定性变量表现为绝对频率和百分比。连续变量显示的平均值和标准偏差。双尾成对的学生的 - - - - - -测试与不平等的方差是用于在这些团体意味着结果值的比较,被分配在一个和统计意义 值小于0.05。

3所示。结果

3.1。人口统计资料

750测试命令在研究期间,75人被报告为一个积极的结果,对应于47独特的病人在犹他大学的系统。47例患者,25(53%)不符合最新的国际共识的临床标准NMOSD(图1)[6]。

3.2。分层ELISA AQP4的测试

表1显示队列基于ELISA AQP4的分层测试结果。在低阳性病例( ),最常见的诊断是女士( ,52.6%),其次是视神经炎或骨髓炎(没有纵向病变)。值得注意的是,无论是视神经炎病例的临床特征典型的基于标准中列出的NMOSD 2015 NMOSD诊断标准(6]他们单方面,短音段视神经病变轻度视力障碍(< 20/200)。

表1
Aquaporin-4检测的ELISA诊断的相对水平。

在中度阳性病例( ),总共9(64.3%)例患者有NMOSD。温和的抗体滴度阳性组没有显著差异NMOSD患者和与其他诊断(平均21.8 vs 13.8 U / mL,分别 ;图2)。在高阳性病例(大于80 U /毫升, ),所有的病人(100%)符合NMOSD临床诊断标准。

(一)
(一)
(b)
(b)
图2
值的比较温和的正面AQP4 ELISA NMOSD满足标准的病人和与其他诊断。每组(a)的分布值。多个测试患者平均给每个病人一个测试值(NMOSD组3例)。大标签数据点的中值。每组(b)是测定值。误差线表示标准偏差; 。NMOSD:视neuromyelitis谱系障碍。
3.3。辅助测试结果

五NMOSD患者从确诊的9个温和积极ELISA组脑脊液检测(表2)。3例患者脑脊液细胞增多(21 - 106细胞/毫米范围3, 细胞/毫升),但所有的患者正常的蛋白质水平(27-48 mg / dL, )。独特的脑脊液寡克隆乐队( 乐队)被发现在两种情况下一个病人血清和脑脊液寡克隆匹配。CSF中可用数据三个患者没有NMOSD适度积极的ELISA队列。CSF-unique乐队被发现在两个病人相应的神经系统莱姆病的诊断和患者14女士NMOSD高度阳性组,八CSF测试结果。脑脊液细胞增多是在4例(12 - 282细胞/毫米3)。寡克隆条带的CSF中没有任何病人在这个组,但与乐队CSF /血清出现5例患者中4例。

表2
辅助测试结果。
3.4。比较活细胞分析

总共5在适度积极的ELISA结果NMOSD确诊患者有附加的CBA结果:2被CBA积极,1额外的病人正通过流式细胞仪,和每个方法(表2为负3)。那些没有会议NMOSD的诊断标准,都有额外的测试和所有消极的流式细胞仪( )。其中一个病人也有奥雅纳CBA实验室,这是消极的。

表3
额外的测试适度积极的通过ELISA子群。

4所示。讨论

本手稿描述的临床效用ELISA检测AQP4在现代学术的病人。尽管临床证据和指南推荐的CBA AQP4化验,医生仍然经常使用fda批准的ELISA AQP4检测包(6]。我们的研究结果进一步说明,低浓度测定ELISA结果可能混淆诊断评估、低浓度测定结果不是NMOSD所特有的。甚至适度,high-tier AQP ELISA结果很难解释表明CBA化验应该调查的第一行临床医生如果可用。我们组还支持观察NMOSD患者常伴随标记自身免疫,可以添加另一个设置模棱两可的ELISA诊断挑战AQP4化验结果。

我们的ELISA分层显示更高的相对一致的结果,相关临床相关的结果。没有确认NMOSD例低积极组和最常见的最终诊断是女士至关重要的明确区分女士NMOSD,预后和治疗显著不同,尤其是现在有三个fda批准NMOSD疗法(20.]。女士的误诊的可能性在我们的研究急剧减少AQP4 ELISA结果大于8 U /毫升。的可能性在温和积极NMOSD诊断确诊组近两个高于另一种诊断( 分别与5)。选择测试方法包括CBA和流式细胞仪AQP4 NMOSD例分析更具体。没有记录的假阳性结果,包括那些女士的最后诊断。

在许多临床设置,最容易获得测试NMOSD仍ELISA试验,是否由于实验室供应商合同(包括成本的考虑),临床医生工作流,或违约EMR命令集。如果必须命令作为主要试验和ELISA试验阴性的病人有较高的临床怀疑,应该考虑追求评价CBA或流式细胞仪。同样,低和中等阳性结果ELISA在临床上模棱两可的情况下,应该考虑CBA或流式细胞仪确认测试提高特异性。

人们普遍承认动与其他协会的系统性自身免疫性疾病,如系统性红斑狼疮连同non-organ-specific自身抗体(即。,抗核抗体)[21,22]。这些共存条件支持的假设NMOSD患者易患系统性自身免疫(23]。我们的研究结果是一致的这些观察和证明自身免疫的附加标记/免疫功能紊乱的病人会议NMOSD标准( ,21.7%)。

几个注意事项应该牢记这些数据。本研究是一个单中心回顾性分析,样本大小很小。然而,这群提供了一个大的描述低和适度积极的AQP4 ELISA。此外,这种临床验证评价相对罕见的疾病的一个主要客户(犹他大学)区域参比实验室(ARUP实验室)意味着这些数据的概括性。我们无法完全解释进化在奥雅纳的ELISA测定。有新兴文学AQP4 M23同种型ELISA测定可能改进的敏感性和特异性,但我们无法包括比较AQP4亚型的有限数量的病人在我们的研究中,在M23试验是在实践中实现24]。我们的目标是关注ELISA AQP4试验的特异性,但我们应该注意cba和流式细胞仪检测的高灵敏度已被证明在一个多中心调查(13]。ELISA试验也被报道有相对较高的灵敏度(~ 80%)虽然有很大差异在文献中基于技术方面的测试13,18]。

我们的搜索时间早于商业MOG免疫球蛋白测定的广泛可用性,因此,我们没有包括MOG自身抗体测试数据在这个研究。此外,NMOSD的诊断标准,以及其他疾病,有类似的进化在这个时间。我们使用最新的诊断标准,应用回顾性的方式。

5。结论

这项研究表明使用AQP4的评价ELISA疑似NMOSD低有可能产生积极的结果,不太可能与临床诊断相关联的NMOSD但高度与温和的女士积极ELISA结果通常与NMOSD但也可以出现在其他各种诊断,包括女士和莱姆病。高80 U /毫升或更高的积极结果是NMOSD总是符合临床诊断。在现代,经常练习临床医师继续秩序AQP4 ELISA测试尽管更敏感的可用性和特定的AQP4化验。鉴于这种持续的实验室实践,临床医生应该解释的结果不敏感AQP4化验用额外的谨慎,尤其是在病人没有完成临床NMOSD标准。

数据可用性

相应的作者拥有详细的方法和匿名数据的研究,可以提供合理的请求。由于隐私数据没有公开的或道德的限制。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作的部分支持由芭芭拉Gural斯坦梅茨和西格尔罕见的神经免疫协会。