细菌体外药敏试验分枝杆菌massiliense从接受关节镜和腹腔镜手术的患者伤口样本中恢复

摘要

快速生长的分枝杆菌(RGM)对抗菌剂的检测已显示出一定的临床应用价值。这项工作根据临床和实验室标准协会(CLSI)制定的指导方针建立了7种抗菌剂的MICs，针对18个分离株分枝杆菌massiliense从接受关节镜和腹腔镜等微创手术的患者的伤口样本中恢复。分离物显示对丁胺卡那霉素敏感(μg/mL）和克拉霉素(μg/mL），但对环丙沙星耐药(μg / mL)、强力霉素(μg/mL），磺胺甲恶唑(μg/mL）和妥布霉素(μg/mL），以及头孢西丁的中间体(μg / mL)。因此，我们建议对任何临床显著的RGM分离株进行抗菌药物敏感性检测。

1.介绍

在世界范围内的微创手术中，由快速增长的分枝杆菌(RGM)引起的感染正在增加[1.–3.］．分枝杆菌massiliense已从起搏器袋感染、肌肉注射和视频手术后感染中分离出来[1.,2.,4.–6.］．分枝杆菌massiliense作为一个独立的物种从m . chelonae脓肿2004年的工作组[4.］．

在巴西，自1998年以来报告了由RGM引起的疫情。以前的爆发发生在激光原位角膜磨镶术(矫正近视手术)、中介性治疗(皮内注射)或乳房植入手术之后。同样，在那些疫情中龟板脓肿菌发现的主要病原菌为大肠杆菌群[7.,8.]最近，巴西七个不同地区报告了外科手术部位感染的流行，令人惊讶的是，它被证明是由一个克隆的m . massiliense[1.,2.,9,10］．

RGM对几种抗生素药物具有内在的耐药性，减少了治疗这些细菌感染的活性药物的数量，因此抗菌药物敏感性试验已被证明可以改善临床结果[11–13].因此，建议对所有具有临床意义的分离菌进行针对选定抗菌剂的测试[14,15］．

临床和实验室标准协会(CLSI)推荐标准的微量肉汤稀释法进行药敏试验偶然分枝杆菌集团(偶然分枝杆菌，游隼分枝杆菌，和偶发分枝杆菌第三变体复合体），龟分枝杆菌,脓肿分枝杆菌。从理论上讲，解释结果的方法和指南也应适用于分枝杆菌mucogenicum,分枝杆菌smegmatis集团(斯梅格马蒂斯先生，古迪先生，和沃林斯基先生)，以及具有临床意义的色素沉着RGM；然而，目前还没有支持这一点的数据[16］．作为一个最近被分类的RGMm . massiliense需要敏感性测试指南，来自不同环境的敏感性测试数据将有助于实现这一目标。

这项工作的目的是检查药物的体外敏感性m . massiliense巴西戈亚斯戈尼亚七家私立医院的关节镜和腹腔镜等视频手术后感染患者伤口样本中的分离物。

2.材料和方法

2.1.分枝杆菌菌株

这些患者来自巴西Goiás州Goiânia市的7家私立医院。患者登记时间为2005年8月至2007年7月。十八株流行菌株m . massiliense在患者签署同意协议后纳入本研究。从18例微创手术(关节镜或腹腔镜)后出现局部感染症状和体征的患者临床样本中分离出微生物。m . massiliense经pcr -酶切鉴定，菌株达到种水平hsp65基因、脉冲场凝胶电泳（PFGE）比较和rpo部分基因测序[1.].在进行试验之前，将分离物保持在Lowenstein-Jensen斜面上，并在35°C下在Mueller-Hinton平板上继代培养3至5天。m .脓肿ATCC 19977被用作质量控制菌株。

2．2.抗菌药物和微量稀释托盘

向Mueller-Hinton肉汤中添加连续两倍稀释的抗菌溶液，以达到抗菌剂的最终浓度（均来自美国Sigma-Aldrich）：阿米卡星（2至128 μg/mL），头孢西丁（4至256 μg/mL)、环丙沙星(0,25 ~ 16μ克/毫升），克拉霉素（1至64 μg/mL），强力霉素（0,5-32 μg/mL），磺胺甲恶唑（2至128 μg/mL）和妥布霉素（0,5-32 μg/mL)，并在96孔板上添加。

2.3.敏感性测试

根据CLSI所述指南，通过肉汤微量稀释法测定所有受试药物的最小抑制浓度（MIC）[16].最终接种量在10%至10%之间^4.和10^5.CFU /毫升。接种板密封在塑料袋内，35°C孵育。所有测试均为三次重复，72小时读取MICs。根据CLSI推荐的断点确定所有抗菌药物的敏感性类别[16］．

3.结果与讨论

18株m . massiliense从接受关节镜等微创手术的患者的伤口样本中恢复()腹腔镜检查().

18株均对阿米卡星(MIC)敏感₉₀= 4 μg/mL)和克拉霉素(MIC₉₀< 1 μg/mL)，但对环丙沙星(MIC₉₀> 16 μg/mL），强力霉素（MIC）₉₀> 32μg/mL），磺胺甲恶唑（MIC）₉₀> 128 μg/mL）和妥布霉素（MIC）₉₀= 32 μg / mL)。所有分离株均为头孢西丁中等MIC₉₀= 64μg / mL)。结果汇总于表中1..

RGM本质上对用于结核病治疗的抗生素具有耐药性，因此使用抗结核药物治疗感染这些细菌的患者可能会受到影响[17]。通过RGM进行感染，如果能够充分和早期识别微生物，将有更好的结果[18].药敏试验是一种强有力的工具，可用于确定最有效药物的使用，从而提高治疗成功率。

我们的易感谱结果与Adékambi等人的结果一致[4.，除了强力霉素的MIC值升高。关于这种特殊的药物，其他研究小组也报告了类似的发现[2.,6.,9］．这一发现强化了一种观点，即强力霉素不应该被用作两种基因之间的鉴别标记m . massiliense和m .脓肿[4.］．

根据CLSI [16，妥布霉素的结果不应报告偶发分枝杆菌或m .脓肿组，因为用该药治疗只会优于阿米卡星引起的感染m . chelonae.没有药敏试验建议可用于m . massiliense但是，根据我们的数据，这种药物不应该被使用，因为所有分离株都对妥布霉素耐药。在磺胺甲恶唑测试菌株中，我们遇到了100%的耐药性，类似于报道的药物敏感性m . chelonaeEm .脓肿[16］．

克拉霉素被认为是治疗RGM感染的首选一线药物[14,19]适合于m . massiliense同样的，我们研究中测试这种药物的所有菌株都是易感的。Koh等人(2010)比较了两种感染的患者的治疗结果m .脓肿或m . massiliense并得出结论，对包括克拉霉素在内的联合抗生素治疗的患者，治疗反应率要高得多m . massiliense比那些有m .脓肿肺部疾病(20］．

据报道，接受单一疗法的患者对克拉霉素的获得性耐药率为2.3%[21]据报道，有一人因感染耐药菌株而死亡[22].以前的克拉霉素单药治疗皮肤病的试验m . chelonae免疫抑制患者(所有患者均使用糖皮质激素)导致10例播散性疾病患者中1例(10%)的分离株获得性耐药性，4例(0%)局部性疾病患者的分离株无获得性耐药性[23].由于与耐药性发展相关的风险，建议使用第二种药物治疗这些细菌感染。阿米卡星似乎是一个很好的候选药物，因为在我们的研究中，所有菌株都对该药物敏感。

另一种与克拉霉素相关的治疗RGM感染的药物是头孢西丁[24]然而，我们的结果表明m . massiliense分离株对该药物表现出中间敏感性。在我们的研究和其他研究中发现的不同的敏感性特征强调需要正确的RGM鉴定，然后进行药物敏感性筛选，以提供最合适的抗生素治疗。

RGM对严重感染的治疗是一个问题，并且受限于少量在组织或/和血液中具有临床可达到的活性的可用药物。必须对每个物种和品系分别进行评估，建议在将药物用于人类治疗之前始终进行体外敏感性试验[25］．

4.结论

总之，这项研究发现，儿童的MIC较高m . massiliense检测头孢西丁、环丙沙星、强力霉素、磺胺甲恶唑、妥布霉素。因此，阿米卡星和克拉霉素具有抗肿瘤活性m . massiliense在我们的研究中分离的菌株。

致谢

作者获得了OPAS/OMS巴西和ANVISA（Termo de Cooperação 37）的资助。A.Kipnis和A.P.Junkeira Kipnis获得了CNPq巴西的研究金。

参考文献

1. A. M. Cardoso, E. Martins de Sousa, C. Viana-Niero et al，“医院的出现分枝杆菌massiliense巴西戈亚斯的感染情况，”微生物和感染，第10卷，第5期。14-15页，第1552-1557页，2008。视图:出版商网站|谷歌学者
2. R. S. Duarte, m.c.s. Lourenço, L. D. S. Fonseca等人，“术后感染的流行由分枝杆菌massiliense”,临床微生物学杂志，第47卷，第7期，第2149-2155页，2009年。视图:出版商网站|谷歌学者
3. A.Carbone，F.Brossier，I.Arnaud等人，“与多重介导疗法注射相关的非结核分枝杆菌皮下感染的爆发，”临床微生物学杂志，第47卷，第6期，第1961-19642009页。视图:出版商网站|谷歌学者
4. T.Adékambi，M.Reynaud Gaubert，G.Greub等人，“昆虫的变形虫共培养”分枝杆菌massiliense从一个血光性肺炎患者的痰中临床微生物学杂志，第42卷，第2期12，页5493-5501,2004。视图:出版商网站|谷歌学者
5. H. Y. Kim, Y. J. Yun, C. G. Park等，“暴发分枝杆菌massiliense与肌肉注射相关的感染，”临床微生物学杂志，第45卷，第9期，第3127-3130页，2007年。视图:出版商网站|谷歌学者
6. K.E.Simmon，J.I.Pounder，J.N.Greene等人，“新出现病原体的鉴定，分枝杆菌massiliense，通过在美国收集的临床分离株的rpoB测序，“临床微生物学杂志，第45卷，第6期，第1978-1980页，2007年。视图:出版商网站|谷歌学者
7. D.Freitas，L.Alvarenga，J.Sampaio等人，“禽流感的爆发龟分枝杆菌LASIK术后感染，“眼科学号，第110卷。2，页276-285,2003。视图:出版商网站|谷歌学者
8. J.L.M.Sampaio，E.Chimara，L.Ferrazoli等人，“四种分子分型方法在蛋白质分析中的应用”偶然分枝杆菌导致乳房成形术后感染的群体菌株，“临床微生物学与感染，第12卷，第2期，第142-149页，2006年。视图:出版商网站|谷歌学者
9. C.Viana Niero，K.V.B.Lima，M.L.Lopes等人，“蛋白质的分子表征”分枝杆菌massiliense和博莱蒂分枝杆菌在从腹腔镜手术和美容手术后感染爆发中收集的分离株中，“临床微生物学杂志，第46卷，第3期，第850-8552008页。视图:出版商网站|谷歌学者
10. s.c. Leão, C. Viana-Niero, C. K. Matsumoto等人，“由快速生长的单个克隆造成的手术部位感染流行分枝杆菌在巴西，”未来的微生物学，第5卷，第5期。6, pp. 971-980, 2010。视图:出版商网站|谷歌学者
11. J.M.Swenson，R.J.Wallace Jr.，V.A.Silcox和C.Thornsberry，“五个亚组的抗生素敏感性。”偶然分枝杆菌和龟分枝杆菌”,抗菌药物和化疗，第28卷，第6期，第807-8111985页。视图:谷歌学者
12. 小R.J.华莱士、J.M.斯文森、V.A.西尔科克斯和M.G.布伦，“由肺结核引起的非肺部感染的治疗”偶然分枝杆菌和龟分枝杆菌基于体外敏感性，”传染病杂志，第152卷，第2期。3，第500-514页，1985。视图:谷歌学者
13. S. Park, S. Kim, E. M. Park等人，“体外抗菌药物敏感性脓肿分枝杆菌在韩国,“韩国医学杂志，第23卷，第1期，第49-52页，2008年。视图:出版商网站|谷歌学者
14. D. E. Griffith, T. Aksamit, B. A. Brown-Elliott等人，“ATS/IDSA官方声明:非结核分枝杆菌疾病的诊断、治疗和预防，”美国呼吸与重症监护医学杂志，第175卷，第4期，第367-4162007页。视图:出版商网站|谷歌学者
15. C. L. Daley和D. E. Griffith， "快速增长的分枝杆菌引起的肺部疾病"胸科诊所，第23卷，第3期，第623-6322002页。视图:出版商网站|谷歌学者
16. CLSI，“分枝杆菌、诺卡氏菌和其他需氧放线菌的敏感性试验。批准标准，”CLSI文档M24-A，第23卷，第18号，第25-32页，2003年。视图:谷歌学者
17. A.J.Eid、E.F.Berbari、I.G.Sia、N.L.Wengenack、D.R.Osmon和R.R.Razoble，“由快速增长的分枝杆菌引起的假肢关节感染：8例报告和文献回顾，”临床感染疾病第45卷第5期6，页687-694,2007。视图:出版商网站|谷歌学者
18. M.普林和D. G.埃克霍夫，龟分枝杆菌全膝关节置换术后感染，“关节成形术杂志，第11卷，第5期。1，页115 - 116,1996。视图:出版商网站|谷歌学者
19. B. A. Brown-Elliott和R. J. Wallace Jr，《致病性非色素或晚期色素快速生长分枝杆菌的临床和分类地位》，临床微生物学综述，第15卷，第4期，第716-7462002页。视图:出版商网站|谷歌学者
20. W.J.Koh，K.Jeon和N.Y.Lee，“肿瘤分化的临床意义”分枝杆菌massiliense从脓肿分枝杆菌”,美国呼吸与重症监护医学杂志.新闻界。视图:谷歌学者
21. R.J.Wallace Jr.，A.Meier，B.A.Brown等人，“细菌分离株对克拉霉素耐药性的遗传基础。”龟分枝杆菌和脓肿分枝杆菌”,抗菌药物和化疗，第40卷，第7期，第1676-1681页，1996年。视图:谷歌学者
22. M.Sanguinetti，F.Ardito，E.Fiscarelli等人，“多重耐药引起的致命性肺部感染脓肿分枝杆菌囊性纤维化患者，“临床微生物学杂志，第39卷，第2期，第816-819页，2001年。视图:出版商网站|谷歌学者
23. R. J. Wallace, D. Tanner, P. J. Brennan，和B. A. Brown，“克拉霉素治疗皮肤(播散性)感染的临床试验龟分枝杆菌”,内科学年鉴，第119卷，第2期。6，第482-486页，1993。视图:谷歌学者
24. A.Scholze、C.Loddenkeper、M.Grünbaum、I.Moosmayer、G.Offerman和M.Tepel，“皮肤脓肿分枝杆菌肾移植后感染肾脏透析移植，第20卷，第2期。8，页1764-1765,2005。视图:出版商网站|谷歌学者
25. C.Cavusoglu，I.Soyler和P.Akinci，“利奈唑胺抗非结核分枝杆菌的活性，”新微生物学，第30卷，第4期，第411-4142007页。视图:谷歌学者

版权

版权所有©2011 Alessandra Marques Cardoso等人。这是一篇根据知识共享署名许可协议，允许在任何媒介上不受限制地使用、传播和复制，但必须正确引用原作。