文摘
客观的。的分子机制探索sevoflurane-induced神经毒性和确定lncRNA HOXA11-AS影响sevoflurane-induced神经元细胞凋亡和炎症通过调节mir - 98 - 5 - p / EphA4。方法。莫里斯水迷宫(微波加工)测试是用来检测大鼠的学习和记忆能力,他使用染色观察海马病理学、TUNEL染色用于神经细胞凋亡的检测水平,和RT-qPCR被用来检测HOXA11-AS的表达,mir - 98 - 5 - p, il - 6、il - 1β和肿瘤坏死因子-α。与此同时,il - 6的内容,il - 1β和肿瘤坏死因子-α血清中被ELISA检测。apoptosis-related蛋白质EphA4的表情,伯灵顿,裂解半胱天冬酶3和bcl - 2被免疫印迹检测。dual-luciferase基因记者证实了针对HOXA11-AS之间的关系和mir - 98 - 5 - p和目标关系mir - 98 - 5 - p和EphA4。结果。观察HOXA11-AS sevoflurane-treated老鼠或表达的细胞和促进神经细胞凋亡和炎症。HOXA11-AS独自淘汰,或mir - 98 - 5 - p是过表达减弱七氟醚治疗后神经细胞凋亡和炎症炎症。此外,击倒HOXA11-AS独自被击倒的部分恢复mir - 98 - 5 - p或者EphA4的过度。结论。抑制lncRNA HOXA11-AS变弱sevoflurane-induced神经元细胞凋亡和炎症反应通过mir - 98 - 5 - p / EphA4。
1。介绍
每年,数以百万计的儿童全身麻醉,便于手术操作,考试,和七氟醚是一种最常见的儿童吸入麻醉药(1,2]。虽然全身麻醉一直被认为是安全的和可逆的成年人,然而,最近的临床研究表明,暴露的不成熟的大脑七氟醚在新生儿期可能诱导神经元凋亡,突触赤字,神经炎症,τ磷酸化,和其他的侮辱,最终导致影响学习和记忆能力(1,3,4]。然而,七氟醚对大脑发育的影响尚不清楚。因此,机械引起的神经毒性研究七氟醚是重要的,找到一个有效的方法来改善神经行为功能障碍引起的全身麻醉。
研究发现,神经细胞凋亡和炎症的主要机制是认知障碍引起的七氟醚(5,6]。同源框A11反义(HOXA11-AS)是一种lncRNA,位于HOX基因簇。当前研究HOXA11-AS主要聚焦于癌症。发现上调HOXA11-AS出现在各种癌症,这是通常与不良预后相关。
发现HOXA11-AS是调节多种癌症和通常是与不良预后相关(7]。到目前为止,HOXA11-AS也被发现在神经炎症和neuroapoptosis扮演一个角色。例如,李et al。8)发现HOXA11-AS加剧神经炎症造成的创伤性脑损伤后小胶质细胞。曹et al。9)发现抑制HOXA11-AS改善神经炎症和神经细胞凋亡在MPTP-induced帕金森病小鼠模型。然而,HOXA11-AS是否参与神经细胞凋亡和炎症引起的七氟醚尚不清楚。
作为let-7家族的一员,mir - 98 - 5 - p与氧化应激有关,细胞凋亡和各种细胞的生存在许多重要的生物过程(10,11]。太阳et al。10]表明,mir - 98 - 5 - p可以改善神经损伤引起的氧葡萄糖剥夺/复氧(OGD / R)。Upregulation mir - 98 - 5 - p缓解sevoflurane-induced社会和情感障碍在新生儿老鼠12]。EphA4受体调节大脑神经发生和边界的形成发展中(13),以及缺乏EphA4改善神经炎症和组织损伤引起的创伤性脑损伤(14]。此外,研究表明,表达下调EphA4发展中神经元的表达水平可以减少propofol-induced神经毒性(15]。然而,EphA4的角色在七氟醚尚未讨论引起的神经毒性。
因此,本研究将探讨HOXA11-AS是否会影响神经细胞凋亡和炎症引起的七氟醚通过mir - 98 - 5 - p / EphA4。
2。材料和方法
2.1。动物实验
总共有30的雄性SD (SD)大鼠中(7天,体重180 - 200克;Sibf(北京)生物技术有限公司,中国)。在标准实验室条件下大鼠喂养7天(12:12光明与黑暗的交替循环,22°C和60%相对湿度),随机分为3组(每组10大鼠):正常控制(NC)组(暴露在空气中),七氟醚组(老鼠不断给予2.2%七氟醚在21%的氧气3天,每天2 h),或si-HOXA11-AS +七氟醚组(si-HOXA11-AS干扰慢病毒载体注射到双边海马后第一个剂量的麻醉)。所有大鼠复苏后回到笼子里。没有死亡发生在两周内的剂量。经过3天的麻醉,从每组四只老鼠被安乐死,海马收集进行后续分析。其余的老鼠被用于分析认知障碍。所有动物实验伦理委员会批准昆明医科大学第三附属医院并遵循美国国立卫生研究院的实验动物保健和使用指南。
2.2。实时定量PCR(存在)
使用试剂盒包从细胞组织中提取总RNA,然后反向转录成cDNA PrimeScript™RT工具包(豆类、志贺、日本)。使用SYBR®预混料交货TaqTM II工具包(RR820A、豆类等)进行实时荧光qPCR荧光qPCR设备。最后,U6或β肌动蛋白被选为内部参考,放大之后方法应用于计算的相对表达HOXA11-AS和mir - 98 - 5 - p。引物序列见表1。
2.3。莫里斯水迷宫测试(微波加工)
微波加工测试是由操作员不知道治疗组。圆柱形池,150厘米直径和深度60厘米,分为四个相同象限和装满水的深度30厘米( ),然后一个平台(直径10厘米)是隐藏在水下1厘米。七氟醚麻醉后2周,迷宫的老鼠被放置在不同的位置(北、南、东、西),允许他们在60年代中发现隐藏的平台,保持15秒。如果一只老鼠无法找到这个平台在60年代,轻轻地引导平台,允许它保持15秒。运动检测软件(上海移动数据信息技术有限公司,中国)是逃避延迟申请记录。每天测试进行了4次4天,测试间隔时间是30 - 40分钟。第五天,平台被带离。120年代的老鼠被允许自由地游泳从相反的象限,同时和交叉平台数量的老鼠都被记录下来。
2.4。苏木精和伊红染色(他)
海马组织的石蜡切片切成4片μm。部分deparaffinized,与伊红染色后1分钟苏木精为3分钟。部分是脱水和渗透。海马组织的病理改变光学显微镜下观察(xp - 330,上海Bingyu光学仪器有限公司有限公司)。
2.5。TUNEL染色
一种原位细胞死亡检测工具(美国罗氏,印第安纳波利斯)是用于检测神经细胞凋亡和实验程序指的是制造商的指示。细胞核与DAPI染色(2 - (4-amidinophenyl) 6-indolecarbamidine盐酸盐),和TUNEL染色法是评估。它将被视为一个积极的特性如果原子核与DAPI和TUNEL标记。随机选择5个地区观察细胞凋亡。
2.6。ELISA
ELISA试剂盒对il - 1β肿瘤坏死因子-α,il - 6都购自Abcam(英国)和海马组织和细胞水平的炎症水平上层清液检测根据设备指令。
2.7。细胞培养和治疗
hek - 293 T细胞培养在high-glucose杜尔贝科修改鹰的介质(美国Gibco DMEM),添加10%胎牛血清(美国Gibco的边后卫)和1%青霉素链霉素(美国Gibco)解决方案。已经SD大鼠的海马组织块与胰蛋白酶消化。一系列实验操作包括研磨和离心。细胞接种在10毫米培养皿涂poly-D-lysine(10更易/ L)的浓度 在neurobasal培养基培养细胞每毫升(美国Gibco)含2% B27(美国Gibco), 2毫米谷酰胺,50 U /毫升青霉素、链霉素50 U /毫升(美国Gibco) 37°C,和5%的公司2。4小时孵化后,无血清培养系统中改为B27 /神经基础培养基。取代中每3天。这些细胞被诱导在37°C, 5%的公司2,21%的人啊2七氟醚6 h, 4%七氟醚麻醉模拟体外。si-HOXA11-AS, mir - 98 - 5 - p模仿,OE-EphA4质粒转染到神经元根据Lipofectamine 2000(美国表达载体)指令。这些质粒合成,由上海GenePharma有限公司有限公司(上海,中国)。培养过夜后37°C 48 h,它们被用于后续的实验。
2.8。免疫印迹
蛋白质样品中提取使用里帕从组织和细胞裂解缓冲(美国热费希尔科学),及其与bicinchoninic酸浓度进行了分析(BCA)工具包(美国热费希尔科学)。蛋白质,通过sds - page分离,吸附在聚偏二氟乙烯(PVDF)然后堵塞5%脱脂牛奶在室温下了一个小时。接下来,一夜之间,膜被孵化与特定的初级抗体在4°C。第二天,探讨了膜与二次免疫球蛋白标记辣根peroxidasefor 1 h在室温下。所有抗体都购自Abcam PLC,抗体浓度控制参考手册(伯灵顿,1:2000;裂解caspase-3, 1: 2000;bcl - 2, 1: 2000;β肌动蛋白,1:2000;免疫球蛋白g, 1: 500)。蛋白质的相对灰度值乐队相比β肌动蛋白是由ImageJ阅读软件。
2.9。Dual-Luciferase记者分析
野生型(WT)和突变质粒(傻瓜)记者HOXA11-AS EphA4 (WT-HOXA11-AS和MUT-HOXA11-AS、WT-EphA4 MUT-EphA4,设计和提供的GenePharma)与消极cotransfected控制和mir - 98 - 5 - p模仿hek - 293 t细胞。培养48 h后,荧光素酶活性检测到dual-luciferase记者分析系统(美国Promega)。
2.10。Immumohistochemical染色
海马组织石蜡标本,在37°C和deparaffinized干燥过夜。浸泡片在0.3%甲醇H2O2解决方案。部分被煮10毫米柠檬酸钠缓冲。与鼠单克隆anti-EphA4孵化一夜之间(Abcam 1: 100年,英国)在4°C。随后,孵化与50μL二次抗体(Abcam 1: 100年,英国)。部分沾diaminobenzidine,与苏木精复染色,然后用光学显微镜观察和拍摄(奥林巴斯、日本)。神经元的积极率高于10%是正面的表达。
2.11。统计分析
所有数据都表示为 。所有实验至少重复3次。学生的测试被用来比较两组。单向方差分析和事后测试被用于比较多个组。SPSS 26是用于分析。 被认为是一个统计上的显著差异。
3所示。结果
3.1。抑制HOXA11-AS缓解七氟醚在老鼠身上引起的认知障碍
RT-qPCR结果表明,七氟醚显著诱导HOXA11-AS表达增加大鼠的海马,和HOXA11-AS si-HOXA11-AS组表达水平低于七氟醚组(图1(一))。我们选择HOXA11-AS作为重点来研究它和它的下游影响sevoflurane-induced神经元细胞凋亡和炎症。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
在微波加工实验,治疗后与七氟烷逃逸潜伏期显著增加,平台过境点的数量明显减少。HOXA11-AS击倒后,所占的时间百分比老鼠呆在目标象限的人数明显减少,以及平台口岸数量的增加(数据1 (b)和1 (c))。他染色显示,控制老鼠的海马神经元排列得整整齐齐,细胞核清晰,细胞质均匀染色;七氟醚治疗组海马神经元的松散排列,和神经元肿胀和退化,核固缩、胞质色素沉着;海马神经元的形态学HOXA11-AS组改善(图1 (d))。TUNEL染色显示,治疗后神经细胞凋亡增加与七氟烷和神经元细胞转染后细胞凋亡减少si-HOXA11-AS(图1 (e))。此外,炎症因子(il - 6、TNF -α,il - 1βsevoflurane-treated老鼠的海马)含量显著增加。si-HOXA11-AS转染后,炎症因子水平降低(图1 (f))。这些结果表明,抑制HOXA11-AS可以减少sevoflurane-induced神经元细胞凋亡和炎症,改善sevoflurane-induced认知障碍。
3.2。抑制HOXA11-AS减少七氟醚体外神经细胞凋亡和炎症引起的
由于神经细胞凋亡和炎症的重要原因引起的认知障碍大鼠七氟醚(5,6),我们研究了影响HOXA11-AS七氟醚体外神经细胞凋亡和炎症引起的。RT-qPCR七氟醚可以上调HOXA11-AS表达水平,结果表明,和HOXA11-AS表达水平显著降低后推倒HOXA11-AS(图2(一个))。TUNEL染色,七氟醚显著诱导神经细胞凋亡和免疫印迹显示,调节凋亡诱导因子(伯灵顿和裂解半胱天冬酶3)表达水平,抑制细胞凋亡抑制因子bcl - 2表达水平,抑制HOXA11-AS缓解sevoflurane-induced神经元细胞凋亡(数字2 (b)和2 (c))。分别RT-qPCR和ELISA检测炎症因子水平。结果表明,七氟醚显著调节神经元和抑制炎症因子水平HOXA11-AS七氟醚(缓解炎症反应引起的数据2 (d)和2 (e))。可以看出,抑制HOXA11-AS减少神经细胞凋亡和炎症引起的七氟醚体外。
(一)
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(d)
(e)
3.3。mir - 98 - 5 - p是HOXA11-AS的目标
在线工具母星预测,mir - 98 - 5 - p是一个潜在的目标基因HOXA11-AS(图3(一个))。dual-luciferase记者基因承认目标(图的关系3 (b))。此外,我们发现mir - 98 - 5 - p的表达水平调节HOXA11-AS撞倒后(图3 (c))。此外,我们还发现,七氟醚抑制mir - 98 - 5(图- p的表达水平3 (c))。体内实验显示类似的结果。RT-qPCR表明,mir - 98 - 5 - p在七氟醚组表达水平降低和调节与si-HOXA11-AS转染后(图3 (d))。可以看出,七氟醚可以减少mir - 98 - 5 - p的表达水平,mir - 98 - 5的差别和HOXA11-AS目标对这些- p的表达。
(一)
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(c)
(d)
3.4。mir - 98 - 5 - p对Sevoflurane-Induced体外神经元细胞凋亡和炎症
RT-qPCR表明,mir - 98 - 5 - p的表达显著增加后mir - 98 - 5 - p模仿转染(图4(一))。TUNEL和免疫印迹显示,mir - 98 - 5 - p模拟部分抑制神经细胞凋亡引起的七氟醚;downregulation凋亡诱导因子表达水平,促进了细胞凋亡抑制因子表达水平(数字4 (b)和4 (c))。分别RT-qPCR和ELISA检测炎症因子的水平。结果表明,mir - 98 - 5 - p模拟部分恢复神经炎症引起的七氟醚(数据4 (d)和4 (e))。可以看出,mir - 98 - 5 - p模拟减少神经细胞凋亡和炎症引起的七氟醚体外。
(一)
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3.5。mir - 98 - 5 - p EphA4的目标
进一步,我们探索的下游机制mir - 98 - 5 - p。一个在线工具母星预测的目标基因mir - 98 - 5 - p,我们发现EphA4的目标基因mir - 98 - 5 - p(图5(一个))。dual-luciferase记者基因承认目标(图的关系5 (b))。此外,免疫印迹显示,mir - 98 - 5 - p模仿显著下调EphA4表达式(图5 (c));然而,七氟醚调节EphA4表达式(图5 (c))。体内实验显示类似的结果。免疫组织化学显示EphA4表达水平增加了七氟烷和EphA4表达减少治疗后mir - 98 - 5 - p模拟(图5 (d))。可以看出,七氟醚可以增加EphA4的表达,和治疗mir - 98 - 5 - p模仿EphA4的差别会导致对这些基因的表达。
(一)
(b)
(c)
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3.6。通过HOXA11-AS调节Sevoflurane-Induced神经元细胞凋亡和神经炎症mir - 98 - 5 - p / EphA4分子轴
免疫印迹分析表明,击倒HOXA11-AS EphA4的upregulation诱导减少了七氟醚;mir - 98 - 5 - p抑制剂和OE-EphA4恢复si-HOXA11-AS的抑制效果(图6(一))。TUNEL和免疫印迹和RT-qPCR ELISA用于验证是否HOXA11-AS调节sevoflurane-induced通过神经元细胞凋亡和神经炎症mir - 98 - 5 - p / EphA4分子轴。结果表明,si-HOXA11-AS抑制对神经细胞凋亡的影响和引起的神经炎症七氟醚;mir - 98 - 5 - p和OE-EphA4是反向si-HOXA11-AS neuroapoptosis和神经炎症的抑制作用(数字6 (b)- - - - - -6 (e))。可以看出HOXA11-AS调节sevoflurane-induced通过神经元细胞凋亡和神经炎症mir - 98 - 5 - p / EphA4分子轴。
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3.7。HOXA11-AS缓解七氟醚在老鼠引起的认知障碍mir - 98 - 5 - p / EphA4分子轴
鼓励通过上面的结果,我们进一步研究HOXA11-AS sevoflurane-induced监管的大鼠神经元细胞凋亡和神经炎症在动物水平通过mir - 98 - 5 - p / EphA4分子轴。在微波加工实验,治疗后与七氟烷逃逸潜伏期显著增加,平台过境点的数量明显减少。HOXA11-AS击倒后,所占的时间百分比老鼠呆在目标象限的人数明显减少,平台口岸数量的增加;mir - 98 - 5 - p抑制剂或超表达EphA4逆转上述结果(数据7(一)和7(b))。免疫印迹分析表明,击倒HOXA11-AS EphA4的upregulation诱导减少了七氟醚在老鼠;mir - 98 - 5 - p抑制剂和OE-EphA4恢复si-HOXA11-AS的抑制效果(图7(c))。他染色显示,控制老鼠的海马神经元排列得整整齐齐,细胞核清晰,细胞质均匀染色;七氟醚治疗组海马神经元的松散排列,和神经元肿胀和退化,核固缩、胞质色素沉着;海马神经元的形态学HOXA11-AS组改善;mir - 98 - 5 - p抑制剂或超表达EphA4逆转上述结果(图7(d))。TUNEL染色显示,治疗后神经细胞凋亡增加与七氟烷和神经元细胞转染后细胞凋亡减少si-HOXA11-AS;mir - 98 - 5 - p抑制剂或EphA4超表达促进大鼠神经细胞凋亡(图7(e))。免疫印迹结果、RT-qPCR和ELISA表明si-HOXA11-AS抑制神经细胞凋亡和神经炎症的影响引起的七氟醚;mir - 98 - 5 - p抑制剂和OE-EphA4反向si-HOXA11-AS neuroapoptosis和神经炎症的抑制作用(数字7(f) -7(h))。可以看出HOXA11-AS调节sevoflurane-induced通过神经元细胞凋亡和神经炎症mir - 98 - 5 - p / EphA4分子轴的老鼠。
4所示。讨论
在过去的20年中,大量的动物研究表明,麻醉(GA)代理可能会导致神经元细胞凋亡和其他发展中哺乳动物大脑的神经退行性改变16]。与此同时,它也被发现,长时间暴露于多个麻醉剂在新生儿可能导致广泛的凋亡神经退化与时间和剂量依赖性长期神经发育障碍(17]。七氟醚是一种挥发性麻醉剂,被吸入诱导耐受良好。吸入麻醉药七氟醚可以诱导细胞凋亡等多个区域的老鼠的大脑,包括大脑皮层和海马(18]。最近,大量的临床研究表明,儿童接受重复长期GA在4岁之前有糟糕的精神表现的孩子没有经验GA (3]。
众所周知,lncRNAs与许多生物过程在开发过程中(如神经元发育、可塑性、疾病和演化)和有关七氟醚(19,20.]。例如,过度Gm15621 [21]或击倒Gm43050 [22)减弱sevoflurane-induced神经元细胞凋亡和炎症反应。魏et al。23)还发现,推倒NEAT1改善sevoflurane-induced神经毒性通过mir - 298 - 5 - p / SRPK1。我们的研究发现,HOXA11-AS高度表达在人类七氟醚和海马体神经元SH-SY5Y细胞诱导的动物模型(图1)。击倒的HOXA11-AS阻止神经元细胞凋亡和炎症引起的七氟醚治疗(图2)。
microrna能调节蛋白的表达通过信使rna降解或转化抑制(24,25]。它们参与调节几乎所有的病理生理过程,包括经济增长、发展、炎症、肿胀,神经退行性疾病(24]。多个microrna在接触后提供七氟醚在新生儿啮齿动物模型。这表明microrna的可能与七氟醚诱导神经退行性疾病的发生和发展。例如,熊等。26]发现mir - 125 b - 5 - p是七氟醚建立大鼠模型中高度表达,和减少mir - 125 b - 5 - p阻止sevoflurane-induced鼠海马细胞凋亡和炎症。沈et al。27)报道,mir - 211 - 5 - p治疗后显著增加了七氟醚在新生儿啮齿动物模型中,并击倒mir - 211 - 5 - p减少神经细胞凋亡。在我们的研究中,double-luciferase结果表明OXA11-AS目标mir - 98 - 5,和mir - 98 - 5 - p低表达在七氟醚诱导的海马组织神经元细胞和动物模型(图3)。mir - 98 - 5 - p的过度抑制神经元凋亡和炎症反应引起的七氟醚治疗(图4)。
Erythropoietin-producing肝细胞(以弗所书)酪氨酸激酶受体(rtk)膜结合蛋白,以及它的配体ephrins(以弗所书receptor-interacting蛋白质)(28]。他们是重要的发育过程,如细胞迁移,轴突引导,和空间组织在中枢神经系统开发(29日]。视为pan-receptor, EphA4 EphA受体家族的成员。它结合所有ephrin配体广泛;五糖基磷脂酰肌醇与膜结合型ephrins和三个跨膜型ephrins包括在内。这表明EphA4与A型和B型交互ephrins调节正常和病理生理功能。即阻塞EphA4可能更有效的与其他弗或ephrin相比30.]。研究也发现,在神经系统的发展,EphA4起着至关重要的作用在轴突的指导31日,32),也可以直接作用于运动神经元导致细胞死亡(30.]。目前的研究表明,EphA4抑制剂对阿尔茨海默病神经的影响,脊髓损伤和中风在小鼠模型33]。我们的研究发现,double-luciferase结果表明,mir - 98 - 5目标EphA4;EphA4高度表达七氟醚和海马神经元细胞诱导的动物模型(图5)。击倒的HOXA11-AS抑制神经细胞凋亡和炎症引起的七氟醚治疗通过抑制EphA4表达导致mir - 98 - 5 - p。
为了进一步验证HOXA11-AS调节sevoflurane-induced神经元损伤和sevoflurane-induced认知损伤的老鼠通过mir - 98 - 5 - p / EphA4分子轴,我们在细胞(图进行了验证实验6(图)和动物水平7)。结果表明,击倒的HOXA11-AS抑制sevoflurane-induced神经元细胞凋亡和抑制il - 6的分泌,TNF -α,il - 1β;mir - 98 - 5 - p抑制剂或超表达EphA4逆转上述结果。动物实验表明,逃避延迟明显增加,平台过境点的数量显著降低;神经元细胞凋亡和分泌il - 6、TNF -α,il - 1β在鼠hippopus增加,治疗后与七氟醚。HOXA11-AS击倒后,所占的时间百分比老鼠呆在目标象限的人数明显减少,平台口岸数量的增加;它能抑制sevoflurane-induced神经元细胞凋亡和炎症细胞因子il - 6的分泌,TNF -α,il - 1β;mir - 98 - 5 - p抑制剂或超表达EphA4逆转上述结果。
随着实验技术的提高,科学家们深入神经细胞损伤的分子机制。例如,李等人的研究结果表明,mir - 424抑制细胞凋亡和炎症反应引起的七氟醚通过TLR4 / MyD88 / NF -κB通路(34]。李等人发现木樨草素的抑制作用sevoflurane-induced神经元细胞凋亡和炎症反应通过激活自噬起源于upregulation血红素oxygenase-1 (HMOX1),从而减轻sevoflurane-induced小鼠的认知障碍(35]。此外,过度的lncRNA Gm43050缓解七氟醚治疗引起的细胞凋亡和炎症反应通过调节mir - 640 / ZFP91 [22]。在我们的研究中,我们进行了讨论,并证实HOXA11-AS调节sevoflurane-induced神经元损伤和sevoflurane-induced认知损伤的老鼠通过mir - 98 - 5 - p / EphA4分子轴,为神经细胞损伤的治疗提供新观点由麻醉引起的。然而,这项研究还没有讨论其他因素影响的信号通路,在未来的研究需要进一步加强。
数据可用性
和/或使用的数据集分析在当前研究可从相应的作者在合理的请求(原始数据链接:https://www.jianguoyun.com/p/DTTLg4MQgKrPChj-0c0EIAA)。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
李赵京彭负责概念化;Qunfen李赵,辉Wang Tao, Jing彭方法论;李赵、吴Zeming桠溪Du的软件;李赵、王辉和京彭验证;海涛陈,李赵,翔妈,和吴Zeming正式分析;李赵、吴Zeming和京彭调查;李赵和京彭资源;李赵、王辉和香马为数据管理;海涛陈、桠溪Du和马Weihao原创作品草案的准备;李赵和京彭writing-review和编辑; Yaxi Du, Weihao Ma, Qunfen Tao, and Jing Peng for the visualization; Li Zhao, Zhonghui Wang, Weihao Ma, Qunfen Tao, and Jing Peng for the supervision; Li Zhao and Jing Peng for the project administration; and Li Zhao, Zhonghui Wang, and Jing Peng for the funding acquisition. All authors have read and agreed to the published version of the manuscript.
确认
这项研究支持了云南基础研究项目(批准号202101 ay070001 - 170)。