文摘

积累研究涉及,圆形rna (circRNAs)扮演重要角色在类风湿性关节炎(RA)的发病机理。失调的巨噬细胞极化导致风湿性关节炎的免疫稳态失衡。然而,circRNAs在巨噬细胞极化的改变效果和机制和免疫稳态平衡在很大程度上仍不清楚。我们旨在调查circRNA_17725在RA的潜在作用。高通量序列进行识别在RA circRNAs特异表达。我们确认数据由CCK-8、EdU和膜联蛋白V / PI染色阐明增殖和凋亡。M1 / M2-associated标记的表情证实了使用实时PCR和流式细胞术分析。荧光素酶报告实验和RNA结合蛋白免疫沉淀反应(RIP)被用来演示circRNA_17725的潜在机制。circRNA_17725在体内巨噬细胞的改变效果评估使用胶原诱导的关节炎(CIA)小鼠模型。circRNA_17725被证明在外周血单核细胞CD14表达下调⁺单核细胞从RA病例与健康对照组。负circRNA_17725之间的关联、疾病活动指数(c反应蛋白,ESR, DAS28)观察,表明circRNA_17725 RA疾病活动的至关重要的作用。后再说,coexpression分析基于高测序和生物信息学分析在米兰达和TargetScan数据库,circrna_17725 - mir - 4668 - 5 - p - fam46c竞争内源性RNA(龙头)网络是虚拟的。一系列的细胞学实验在体外有牵连,circRNA_17725可以抑制增殖但增强巨噬细胞的凋亡。降低TNF的表达α,il - 1β的上层清液,并观察MMP-9 circRNA_17725-overexpressed Raw264.7巨噬细胞,暗示circRNA_17725在巨噬细胞炎症介质的抑制作用。此外,circRNA_17725能促进巨噬细胞极化对M2通过瞄准mir - 4668 - 5 - p / FAM46C microrna的海绵。此外,circRNA_17725-overexpressed巨噬细胞缓解关节炎和防止关节损伤和骨破坏,诱导巨噬细胞极化对M2胶原诱导的关节炎(CIA)老鼠。本研究表明,circRNA_17725调节巨噬细胞增殖,细胞凋亡、炎症,和极化骗取mir - 4668 - 5 - p和移植FAM46C RA。

1。介绍

类风湿性关节炎(RA)是一种常见的慢性自身免疫性疾病。它可能导致滑膜增生、炎症、软骨损伤,骨质破坏,甚至残疾(1]。RA的发病机制与单核巨噬细胞特异表达复杂,T细胞和B细胞。已经证据确凿的M1 / M2巨噬细胞失衡,Th17 / Treg和其他免疫细胞导致免疫稳态失衡。M1巨噬细胞与炎症和免疫激活在RA的特定的组织和器官。它已经证明了遗传学、性激素、RA和传染性因素密切相关(2]。慢性炎症影响RA的发病和进展。尽管RA诊断和治疗的进步,说明分子机制RA发病机理是至关重要的对于识别治疗RA的目标更有价值。探索更有效的基于免疫细胞的免疫治疗和潜在的生物目标一直是研究的焦点在RA。

在过去的几年中,非编码RNA的作用(ncRNAs)自身免疫性疾病已引起越来越多的关注,主要包括环状RNA (circRNA),长链非编码RNA (lncRNA),和小分子核糖核酸(microrna) [3]。这些ncRNAs扮演关键角色在维护稳定和正常表达的基因。此外,通过protein-RNA ncRNAs调节炎症和自身免疫或RNA-RNA交互。作为一个关键类型的ncRNA, circRNAs已经提出为RA的研究(4,5]。一些研究已经涉及,circRNAs在RA明确表示,如circ_0008360 circ_0140271, circ_0003972 [6- - - - - -8),主要是参与调节炎症和自身免疫性疾病。circRNA是一种新的竞争内源性RNA(龙头)和高稳定性。他们在免疫系统是至关重要的监管机构,并明确表示在特定的器官、组织或细胞。越来越多的证据已经强调了重要的潜力circRNAs作为诊断和治疗标记多种自身免疫性疾病,包括系统性红斑狼疮(SLE),多发性硬化症(MS)、和风湿性关节炎9- - - - - -11]。然而,所知甚少的效果和机制circRNAs在调节免疫细胞极化和免疫稳态失衡。如前所述(12),我们演示了几个circRNAs异常表达在RA,包括circRNA_09505和circRNA_17725。circRNA_09505一直建议增强炎症损伤和骨损害胶原诱导的关节炎(CIA)小鼠骗取mir - 6089通过AKT1 / NF -作为一个龙头κB信号通路(12]。在RA circRNA_17725显著下调不清楚监管效应和分子机制。在这里,我们专注于改变circRNA_17725在RA发病和进展的影响,特别强调其潜在使用RA作为一个关键的生物标志物。

2。材料和方法

2.1。样品制备和细胞培养

研究关于人类被试被批准的机构伦理委员会的第一附属医院,潍坊医科大学(2021 yx076)。外周血单核细胞(PBMCs)被孤立使用的Ficoll-Paque梯度离心法和28健康对照组35例RA调整年龄和性别。他们都同意书面知情同意。Raw264.7细胞在DMEM培养添加10%胎牛血清(美国Sigma-Aldrich) 37°C和5%的股份有限公司₂。细胞转染microrna的模仿和模仿控制(Ruibo生物科学、广州、中国)。慢病毒质粒overexpressing circRNA_17725和质粒FAM46C-WT(野生型)和FAM46C-MT(突变)是由OBiO技术公司,有限公司(上海,中国)。Raw264.7巨噬细胞被这些质粒转染,用于实验。巨噬细胞的荧光素酶活性是估计的发光设备(日本东洋油墨)根据协议之前报道(12]。

2.2。高通量测序分析

如前所述,我们执行的高通量序列识别特异表达circRNAs RA基于Oebiotech公司的平台(中国上海)12]。分析了相关系数的互补碱基对circRNA_17725 / mrna共享microrna的coexpression circRNA_17725 / mrna在RA PBMCs microrna。circRNA下定决心要有一个积极的与mRNA coexpression相关性,当值小于0.05,皮尔逊相关系数的绝对值超过0.7。对circRNAs-miRNAs-mRNAs筛选根据共享的原则 ,皮尔森的相关性 ,和 。

2.3。细胞增殖和细胞凋亡

简单地说,Raw264.7巨噬细胞( /)被播种在胎儿细胞板牛血清DMEM过夜。随后,巨噬细胞的增殖在24、48、72小时估计使用CCK-8工具包(Vazyme生物技术,南京,中国)。此外,我们使用了5-ethynyl-2 - - - - - -脱氧尿苷(EdU)工具来评估细胞的增殖48 h的协议根据试剂盒(RiboBio,广州,中国)。此外,细胞使用H₂O₂为4小时(100更易/ L)。流式细胞术进行了估计circRNA_17725影响巨噬细胞的凋亡。

2.4。实时聚合酶链反应(PCR)

PBMCs从另一个40 RA病例和30控制进入医院健康检查被CD14纯化⁺磁珠分选(Miltenyi研究,圣地亚哥,美国)后由Ficoll-Paque梯度离心法分离。circRNA_17725在CD14的表达⁺单核细胞也由实时PCR。之间的关联circRNA_17725 il - 10和FAM46C TNF -α据估计。我们应用试剂盒(表达载体、钙、美国)分离总rna,它被用于作为模板(0.5互补脱氧核糖核酸的合成μg)利用RT工具包(Vazyme、南京中国)。ng的互补(5)用作PCR模板使用SYBR绿色Mastermix工具包(Vazyme、南京中国)。混合的Novabio SYBR qPCR工具包(Novabio、上海、中国)被用来放大circRNA。TaqMan microrna的PCR试剂盒(美国ThermoFisher科学)申请microrna的决心。引物如下:circRNA_17725-f、AGGGAGAAAGCTTGATATGAGTTTG3 circRNA_17725-r, AGAAGTAATAAAGCCAGCAGGTACG3;人类CD206-f GGGTTGCTATCACTCTCTATGC,人类CD206-r TTTCTTGTCTGTTGCCGTAGTT;人类IL-10-f GACTTTAAGGGTTACCTGGGTTG,人类IL-10-r TCACATGCGCCTTGATGTCTG;人类肿瘤坏死因子-α- f、CCTCTCTCTAATCAGCCCTCTG、人力TNF -α- r, GAGGACCTGGGAGTAGATGAG;人类GAPDH-f GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT,人类GAPDH-r GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG;人类FAM46C-f GGCCACGTTTTGGTCAAAGAC,人类FAM46C-r GGGAACACAGAACCACATCTC;鼠标FAM46C-f、AACTGGGATCAGGTTAGCCG鼠标FAM46C-r CAACCCAAGCCGTTGTCTT;鼠标CD11c-f、CTGGATAGCCTTTCTTCTGCTG鼠标CD11c-r GCACACTGTGTCCGAACTCA;鼠标CD163-f、GGTGGACACAGAATGGTTCTTC鼠标CD163-r CCAGGAGCGTTAGTGACAGC;和鼠标GAPDH-f AGGTCGGTGTGAACGGATTTG,鼠标GAPDH-r, TGTAGACCATGTAGTTGAGGTCA。

2.5。流式细胞术分析

流式细胞术进行了确定Raw264.7细胞和小鼠脾细胞的基因型。 细胞被resuspended在100年μ与5 L PBS孵化μL / anti-mouse CD14, HLA-DR、CD68, CD11c、CD163使CD206标记抗体(美国BioLegend)在室温下30分钟。洗后使用300的两倍μL PBS,流式细胞术测定细胞。对于凋亡分析,细胞被刺激H₂O₂(100μmol / L)为4 h和离心收获。然后,细胞resuspended 1×绑定缓冲+细胞凋亡检测试剂(5μL /管)根据协议的膜联蛋白V /π凋亡分析工具包(Multisciences生物技术。、杭州、中国)。孵化后在室温下15分钟,细胞的凋亡状态估计通过流式细胞术。

2.6。酶联免疫吸附试验(ELISA)

/ Raw264.7巨噬细胞被播种到96 -细胞板在无血清DMEM 37°C, 5%的公司₂。细胞被LPS刺激(1μg / mL) 48 h。细胞因子在文化上层清液被使用鼠标TNF -检测α、il - 10、il - 1β(美国研发系统)和MMP-9(美国abcam) ELISA包根据协议,如前面谴责(12]。此外,肿瘤坏死因子-α和il - 1β在小鼠血浆样本也确定。

2.7。RNA荧光原位杂交(FISH)

/好Raw264.7细胞被播种到塑料盘(美国热科学Nunc 35毫米)与没有胎牛血清的DMEM一夜之间添加。随后,Raw264.7细胞与多聚甲醛固定使用乙醇(4%)和脱水。我们进行了鱼的位置估计circRNA_17725 Raw264.7细胞,标记的荧光探针在circRNA_17725杂交的过程。

2.8。荧光素酶报告实验

/ 293 t细胞的细胞培养板,孵化,直到细胞融合的70 - 80%。然后,细胞转染microrna的模仿,模仿控制或荧光素酶报告质粒FAM46C-WT和FAM46C-MT使用lipofectamine 2000。最后,293 t细胞在细胞溶解。我们应用Picagene双重SeaPansy发光工具包(东洋油墨,日本)检测荧光素酶活性在细胞根据协议。

2.9。RNA结合蛋白免疫沉淀反应(RIP)

撕裂了估计之间的关系circRNA_17725和mir - 4668 - 5 - p。简单地说,5 ~ 巨噬细胞是细胞溶解。溶菌产物被离心收集,紧随其后的是探针孵化指令的基础上把工具包(美国贝德福德微孔)。Ago2和免疫球蛋白和细胞溶解产物用于免疫沉淀反应。实时PCR进行确定circRNA_17725的表达和mir - 4668 - 5 - p。

2.10。胶原诱导的关节炎(CIA)小鼠模型建设和评估

进行了动物实验的指导方针潍坊医科大学动物保健和使用委员会制度(2021 sdl311)。我们使用牛II型胶原蛋白(4毫克/毫升,Chondrex,华盛顿,美国)和弗氏完全佐剂(美国Sigma-Aldrich)构建CIA小鼠模型通过尾静脉注射的比率1:1。每组6只老鼠。小鼠静脉注射Raw264.7细胞(10⁶细胞在200年μ在第五天,一天15 L PBS)。加强免疫是由100年的使用μL乳液解决方案在21天。估计60天从第一次免疫后,所有老鼠都执行的决心。我们进行Hematoxylin-Eosin())和红色染料O /固绿染色估计鼠标关节和组织的状态。

2.11。统计分析

所有数据分析了SPSS (v20.0)软件和GraphPad棱镜(v8.0)软件。分析的数据参数或非参数测试根据方差齐性评估和坚持正常的曲线。用单向方差分析或执行的参数测试学生的独立样本测试。使用Mann-Whitney非参数进行了测试测试或克鲁斯卡尔-沃利斯测试子组。皮尔森相关分析估计circRNA_17725表达之间的相关性及临床指标的CRP, ESR, DAS28。 在统计学上意义重大。

3所示。结果

3.1。表达式的circRNA_17725外周血单核细胞及其与临床指标

在先前的研究中,我们发现circRNA_17725显著降低在RA所涉及的基因测序分析和实时PCR (12]。在这项研究中,circRNA_17725进一步证明在RA患者PBMCs显著降低(图1(一))。此外,circRNA_17725是负面的表达与疾病活动指数包括CRP、ESR和DAS28(数字1 (b)- - - - - -1 (d))。综上所述,circRNA_17725可能发挥重要作用在RA的发病机制或疾病进展。

3.2。潜在目标预测circRNA_17725巨噬细胞

进行了生物信息学分析评估circRNA_17725的潜在目标。基于高通量测序的表达价值分析,积极coexpression circRNA_17725并观察FAM46C(图之间的关系2(一个)),这是一个巨噬细胞polarization-associated分子。然而,直接绑定到FAM46C circRNA_17725是否需要进一步的示威活动。内源性RNA(龙头)是主要的竞争机制circRNA发挥生物效应。我们后来发现circRNA_17725和mir - 4668 - 5 - p拥有16个互补碱基对mir - 4668 - 5 - p扫描后,米兰达和TargetScan数据库(图2 (b))。此外,mir - 4668 - 5 - p是预测识别3翻译区(UTR) TargetScan FAM46C扫描的数据库(图2 (b))。因此,我们假设circRNA_17725可以作为一个龙头、分子竞争性得罪mir - 4668 - 5 - p和靶向巨噬细胞polarization-related分子,即FAM46C(图2 (c))。是否circRNA_17725 / mir - 4668 - 5 - p / FAM46C导致巨噬细胞极化和免疫平衡在RA权证在后续实验中探索。

3.3。积极的circRNA_17725和FAM46C之间的联系

FAM46C M2巨噬细胞polarization-related分子。在这项研究中,mrna的circRNA_17725 CD14 FAM46C都显著降低⁺单核细胞的RA患者相比,那些控件(数字3(一个)和3 (b))。FAM46C circRNA_17725呈正相关证明了皮尔森相关分析(图3 (c))。此外,circRNA_17725的表达il - 10和CD206正相关,但与TNF -相关负面α关于他们的表达在mRNA水平(数字3 (d)- - - - - -3 (f))。如前所述,il - 10, CD206 FAM46C是M2的典型标记细胞,而肿瘤坏死因子-α是一个M1制造商。M2巨噬细胞可以抑制炎症和维持体内平衡起到免疫调节作用。因此,我们假设circRNA_17725可能导致针对FAM46C M2极化。

3.4。circRNA_17725位置和其监管影响巨噬细胞增殖,凋亡和炎症

在这里,我们进行了一系列的实验阐明circRNA_17725巨噬细胞增长的作用和机制和功能。circRNA_17725在Raw264.7巨噬细胞中利用慢病毒质粒(图4(一))。鱼的测试表明circRNA_17725主要是位于巨噬细胞胞浆(图4 (b))。巨噬细胞的凋亡Lv-circRNA_17725 plasmids-intervened显然是提升比Lv-control plasmid-treated细胞,通过流式细胞仪(图5(一个))。然而,结果EdU和CCK-8细胞增殖检测表明,circRNA_17725显著抑制Raw264.7巨噬细胞的增殖时间的方式(数字5 (b)和5 (c))。此外,炎性细胞因子il - 1β肿瘤坏死因子-α的上层清液,MMP-9 Lv-circRNA_17725 plasmid-treated巨噬细胞明显减少,尽管他们被LPS激活,一个典型的刺激巨噬细胞激活(图5 (d))。il - 10是相对地提高Lv-circRNA_17725文化上层清液的质粒巨噬细胞(图处理5 (d))。综上所述,circRNA_17725可以调节巨噬细胞增殖,凋亡和炎症反应在体外,表明circRNA_17725 macrophage-mediated炎症在RA的关键作用。尽管如此,其对巨噬细胞功能的改变影响表型和潜在的分子机制是需要阐明以下实验。

3.5。circRNA_17725提升M2极化通过针对mir - 4668 - 5 - p / FAM46C

如数据所示6(一)和6 (b),il - 4可以诱导M2 Raw264.7细胞的极化。过度的circRNA_17725增强CD206的百分比⁺平方米,CD163⁺M2细胞,但明显抑制HLA-DR⁺M1和CD68⁺M1细胞百分比(数字6(一)和6 (b))。此外,CD206的mRNA水平升高,而CD11c mRNA表达明显减少circRNA_17725-overexpressed巨噬细胞(数字6 (c)和6 (d))。因此,circRNA_17725提升M2极化在体外。尽管如此,底层circRNA_17725调节巨噬细胞极化的分子机制仍然不清楚。我们进一步进行以下实验来阐明潜在的机制巨噬细胞分化和极化。以前的生物信息学分析表明circRNA_17725 / mir - 4668 - 5 - p / FAM46C龙头、网络(图2)。在这项研究中,Lv-circRNA-transfected Raw264.7巨噬细胞调节FAM46C的表达,但表达降低mir - 4668 - 5 - p与Lv-control集团(数字7(一)- - - - - -7 (c))。此外,荧光素酶记者化验有牵连,mir - 4668 - 5 - p明显下调FAM46C巨噬细胞(图在转录后水平7 (d))。此外,把测试建议circRNA_17725可以结合mir - 4668 - 5 - p和巨噬细胞作为电抗器(数字7 (e)和7 (f))。综上所述,circRNA_17725参与调节巨噬细胞极化通过针对FAM46C circRNA_17725 - mir - 4668 - 5 - p - FAM46C龙头、网络。

3.6。过度的circRNA_17725在CIA小鼠巨噬细胞缓解关节炎,促进M2极化

图8(一个)显示的流程建设和CIA小鼠的干预。如图8 (b)circRNA_17725降低关节炎和持续时间的平均评分关节炎circRNA_17725-overexpressed首先发生在CIA小鼠Raw264.7巨噬细胞。减少关节红肿的老鼠被Lv-circRNA-intervened巨噬细胞在CIA小鼠管理与控制老鼠(图8 (c))。证明了他染色,软骨下骨侵蚀,滑膜炎,炎症淋巴细胞浸润的共同组织切片中发现了CIA小鼠干预circRNA_17725-overexpressed巨噬细胞(图8 (d))。此外,红色染料O /固绿染色显示不太严重的关节软骨损伤和骨损害组织切片相比Lv-circRNA_17725-transfected CIA小鼠的巨噬细胞与Lv-control-transfected macrophage-treated CIA小鼠(图8 (e))。此外,流式细胞仪分析显示CD163增加⁺M2-type细胞但CD11c下降⁺M1-type细胞渗透在CIA小鼠的脾脏Lv-circRNA_17725-transfected巨噬细胞(图9(一个))。同样,实时PCR表明低水平的CD11c mRNA但更高水平的CD163 FAM46C mRNA macrophage-treated CIA小鼠的脾脏单核细胞与未经处理的CIA小鼠相比,曾被Lv-circRNA控制plasmid-transfected巨噬细胞通过尾静脉注射(图9 (b))。此外,降低TNF -的生产α和il - 1β血浆样本中可观察到Lv-circRNA_17725-transfected macrophage-treated CIA小鼠(图9 (c))。综上所述,circRNA_17725防止滑膜炎、关节损伤,和骨破坏体内通过circRNA_17725诱导巨噬细胞极化对M2 - mir - 4668 - 5 - p - fam46c信号轴。

4所示。讨论

随着分子生物学技术的进步,ncRNAs的角色在自身免疫性疾病,癌症和炎症反应的疾病已经阐明,其中一些可以作为疾病诊断和治疗的理想标记。在先前的研究中,特定的表达谱的ncRNAs RA患者已确定,主要包括特定lncRNAs和microrna。其中,lncRNA HIX003209, mir - 6089, mir - 548 - 3 - p被证明是参与调节炎症和自身免疫13- - - - - -15]。特别是lncRNA HIX003209可以海绵mir - 6089 RA和功能作为电抗器,在巨噬细胞反应(13]。Exosomes-delivering mir - 6089和mir - 548 - a - 3 - p在巨噬细胞可以抑制炎症介质的产生,从而减轻关节炎(14,15]。circRNAs ncRNAs封闭的环形结构,ncRNAs占绝大多数。他们是稳定表达和不容易退化。circRNAs各种病理生理过程中扮演关键的角色。积累的研究报道,一些特定circRNAs与风湿性关节炎的疾病活动提供相关(16,17]。我们还发现circRNA_09505调节在RA和参与macrophage-mediated免疫和炎症反应在类风湿性关节炎(12]。因此,小说在RA circRNAs的识别可以提供洞察RA的发病机制和生物疗法。

巨噬细胞是异质细胞表型和功能不同,可分化成经典M1和M2或者激活巨噬细胞激活修改不同介质的微环境的影响。增加水平的促炎介质从M1-type巨噬细胞导致炎症和免疫疾病,如肿瘤坏死因子-α、il - 6和il - 1β(18]。已经证实M1 / M2失衡被发现在RA具有更多的巨噬细胞M1和更少的M2巨噬细胞在免疫微环境19]。M1 / M2失衡可以促进Th1和Th17细胞反应,从而加剧了immunoinflammatory反应,导致滑膜细胞增生,滑膜肥厚,破骨细胞形成和软骨损伤20.]。因此,有效地干预M1和M2巨噬细胞极化的平衡和维持免疫微环境的平衡将是一个有前途的治疗类风湿性关节炎。人们已经发现,家庭使用序列相似性46 C (FAM46C)成员,信号,信号传感器和激活转录33 (STAT3)发挥重要的监管作用在调节巨噬细胞极化(19,21,22]。一些ncRNAs已经证明调节巨噬细胞表型分化和功能通过瞄准STAT3和其他分子与巨噬细胞极化有关,如mir - 221 - 3 - p和lncRNA NTT [23,24]。尽管如此,垃圾的影响了解circRNAs在RA调节巨噬细胞表型。在这项研究中,我们发现circRNA_17725可以减少巨噬细胞增殖而促进细胞凋亡。此外,circRNA_17725减少炎症因子的表达,如肿瘤坏死因子-α和il - 1β在RA。此外,circRNA_17725起到了保护作用,促进M2极化在体外和体内,暗示circRNA的至关重要的作用在调节炎症和自身免疫在RA。

已经证明circRNAs的表达谱是不同巨噬细胞M1和M2巨噬细胞(25),这表明多样和复杂的监管circRNAs对巨噬细胞表型和功能的影响。M1 / M2的偏见会导致慢性炎症和代谢失衡在系统性红斑狼疮,影响目标器官的免疫微环境的平衡,包括肾脏(26]。歌等人报道,circCdyl发挥了关键作用在腹主动脉瘤(AAA)通过促进M1巨噬细胞炎症反应和诱导M1极化(27]。circ_0000518已被证实能促进巨噬细胞和小胶质细胞M1极化在多发性硬化(28]。最近的一项研究也表明circ_0005567的关键作用抑制软骨细胞凋亡和骨关节炎的进展促进通过mir - 492 /平方米极化SOCS2信号轴(29日]。然而,分子机制调节M1 / M2极化的circRNA RA很少报道。在这项研究中,我们发现在RA circRNA_17725显著下调。它能抑制巨噬细胞的增殖和炎症反应,暗示一个关键监管circRNA_17725 macrophage-mediated炎症在RA的效果。此外,它可以提升FAM46C M2-associated分子的表达,从而促进M2-type通过增加CD163 CIA小鼠细胞反应⁺M2巨噬细胞但CD11c下降⁺M1 CIA小鼠的脾脏巨噬细胞浸润。综上所述,本研究已涉及circRNA_17725在RA的保护作用及其对巨噬细胞表型可塑性的影响至关重要。

circRNAs根据他们不同的功能定位在细胞30.,31日]。细胞质中的大多数circRNAs分子局部施加影响,RNA-RNA交互包括骗取和microrna得罪他们的下游mrna转录后的监管影响32,33]。尽管如此,一些circRNAs函数可以通过直接通过rna蛋白质相互作用与蛋白质结合28,34]。在先前的研究中,我们发现circRNA_09505可以加重炎症和关节损伤通过调节macrophage-mediated immunoinflammatory响应在CIA小鼠作为电抗器通过AKT1 / NF - mir - 6089κB轴(12),这表明circRNA的关键机制作为龙头、分子在免疫细胞。circRNA调节巨噬细胞表型的改变影响极化权证深度调查。在这项研究中,研究结果强烈支持,超表达circRNA_17725可以提升CD206⁺平方米,CD163⁺M2细胞百分比,显著抑制HLA-DR⁺M1和CD68⁺M1细胞百分比。此外,mir - 4668 - 5 - p可能在巨噬细胞表达下调FAM46C的表达,而circRNA_17725作为龙头,骗取mir - 4668 - 5 - p和提升FAM46C巨噬细胞中表达。所有的发现都怀着对RA的发病机制。它还提供了新颖的想法的调查更有前途的免疫治疗RA瞄准特定的检查点分子在这个轴。然而,也有一些缺点。一方面,circRNA_17725的作用在调节巨噬细胞极化应该进一步评估局部免疫平衡的关节。另一方面,未来的研究建议调查修改circRNA_17725对影响软骨损伤和关节修复的影响。最后但不是最少,下游信号通路和关键检查点circrna_17725 - mir - 4668 - 5 - p - fam46c轴保证在未来被阐明。

circRNA_17725保护的结论,本研究涉及对滑膜炎、关节损伤和骨破坏通过circRNA_17725诱导巨噬细胞极化对M2 - mir - 4668 - 5 - p - fam46c信号在RA轴。circRNA_17725可能作为一种很有前途的风湿性关节炎的生物疗法的目标。

缩写

circRNAs:	圆形rna
类风湿性关节炎:	类风湿性关节炎
撕裂:	RNA结合蛋白免疫沉淀反应
情报局:	胶原诱导的关节炎
ncRNAs:	非编码rna
circRNA:	环状RNA
lncRNA:	长链非编码rna
microrna的:	小分子核糖核酸
PBMCs:	外周血单核细胞
龙头:	竞争内源性RNA
系统性红斑狼疮:	系统性红斑狼疮
女士:	多发性硬化症
鱼:	RNA荧光原位杂交
FAM46C:	序列相似性46 C
STAT3:	信号和信号传感器和转录激活3
AAA级:	腹主动脉瘤。

数据可用性

所有的数据和材料在这项研究中已经包含在本文中。进一步调查可以直接到相应的作者。

伦理批准

研究机构伦理委员会批准的关于人类受试者的潍坊医科大学第一附属医院。此外,CIA小鼠模型实验进行指导方针的基础上潍坊医科大学动物保健和使用委员会制度。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

D.X.和林亭汝构思项目。C.Y.,W.S., H.W., C.L., and X.H. performed the experiments and analyzed data. C.Y., W.S., D.X. and S.Y. wrote the manuscript. B.N., X.W., W.S., D.X., and S.Y. revised the manuscript. All authors had read and approved the final manuscript. Chunjuan Yang, Biao Ni, Chaoran Li, Wenchang Sun, and Zhangxue Wang contributed equally to this work.

确认

这项工作是由国家自然科学基金的资助,中国(82171790,82171790,82171790,82003042),山东省自然科学基金,中国(ZR2020KC001、ZR2017LH039和ZR2022QH203),和医疗卫生科技发展计划、山东省,中国(202103100273)。