文摘gydF4y2Ba
客观的gydF4y2Ba。修改c反应蛋白(mCRP)是参与upregulation和放大的局部炎症反应。本研究调查了循环和地方各级mCRP及其与狼疮肾炎患者临床病理特征之间的关系。gydF4y2Ba方法gydF4y2Ba。九十五肾biopsy-proven狼疮肾炎患者和30名正常对照组都参加这项研究。血浆和尿mCRP筛选,酶联免疫吸附试验(ELISA)。的肾脏沉积mCRP被免疫组织化学和免疫荧光染色检测。人近端肾小管上皮细胞系(HK2细胞)与纯化从狼疮肾炎免疫球蛋白,孵化和c反应蛋白的生产由HK2细胞进一步评估。gydF4y2Ba结果gydF4y2Ba。血浆和尿mCRP显著增加狼疮性肾炎患者与正常对照组相比gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba分别)。相关的尿mCRP水平间质炎性细胞浸润(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.514,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba和间质纤维化(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.270,gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba尿的ROC-AUC mCRP水平阻力指标病变也许可以诊断为0.766。差的尿mCRP水平密切相关的结果(人力资源:1.204,95% CI: 1.029—-1.409,gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba然而,没有发现相关的血浆mCRP水平与临床病理的数据或狼疮肾炎的预后。CRP是沉积在狼疮肾炎患者肾小管,和c反应蛋白的表达明显阻力指标病变也许可以与指数。免疫荧光染色显示mCRP可能与免疫球蛋白colocalize小管。红斑狼疮nephritis-derived HK2细胞免疫球蛋白可以诱导CRP生产。gydF4y2Ba结论gydF4y2Ba。尿mCRP水平显著增加,尿mCRP阻力指标病变也许可以可能的生物标志物在狼疮肾炎患者。肾CRP可能由管状上皮细胞刺激后红斑狼疮nephritis-derived免疫球蛋白,和当地的mCRP可能发挥关键作用阻力指标病变也许可以发展的。gydF4y2Ba
1。介绍gydF4y2Ba
系统性红斑狼疮(SLE)是一种典型的多系统自身免疫性疾病,与狼疮肾炎是一种常见和严重的系统性红斑狼疮的表现,可能会导致不可逆转的肾功能损害。阻力指标病变也许可以除了肾小球损伤,也可以突出在狼疮肾炎(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。先前的研究发现,超过一半的患者狼疮肾炎阻力指标异常(也许可以有gydF4y2Ba2gydF4y2Ba,gydF4y2Ba3gydF4y2Ba]。阻力指标指数也许可以此外,肾的重要独立危险因素的结果在狼疮肾炎(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba,gydF4y2Ba5gydF4y2Ba]。修订的国际肾脏病学会/肾病理学会(是/ RPS) 2018分类系统红斑狼疮肾炎阻力指标病变(也许可以进一步强调的重要性gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。然而,有一个缺乏可靠的和适当的生物标志物阻力指标病变也许可以反映在狼疮肾炎患者。gydF4y2Ba
等离子体原生c反应蛋白(nCRP)被广泛认为是一个高度保守的急性期反应物,主要由肝细胞,以应对组织损伤或感染,引发炎症反应(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba,gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。因此,它被认为是一种非特异性标志物在临床实践中持续的炎症。nCRP属于pentraxin家庭,由5个相同的nonglycosylated球状子单元(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba]。当局部炎症地区nCRP遇到激活膜(gydF4y2Ba10gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba12gydF4y2Ba),中性粒细胞胞外陷阱(gydF4y2Ba13gydF4y2Ba),或酸性pH值gydF4y2Ba14gydF4y2Ba),生化部队贡献五聚物的分离成单体。分离构象称为修改CRP (mCRP)对内皮细胞施加有效的促炎的行动,巨噬细胞和中性粒细胞可以上调和放大局部炎症反应gydF4y2Ba15gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba17gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
水平的nCRP急性期刺激后能显著增加。然而,尽管明显炎症和组织损伤,系统性红斑狼疮未能引起主要nCRP生产(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。然而,水平的提高等离子体mCRP患者又有些皮肤保护方面的新发现了炎症性自身免疫性疾病,如湿疹、牛皮癣、和荨麻疹,而等离子体的水平nCRP患者与正常对照组之间没有显著性差异(gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。此外,c反应蛋白mRNA的表达和合成nCRP已报告在肾小管上皮细胞(gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。Schwedler et al。gydF4y2Ba21gydF4y2Ba)检测管状mCRP沉积在糖尿病肾病患者肾活检,和当地mCRP表达与组织学检测病变的严重程度有关。gydF4y2Ba
因此,我们调查的循环和地方各级mCRP狼疮肾炎患者,及其与临床病理的相关性特征和预后进行评估。gydF4y2Ba
2。材料和方法gydF4y2Ba
2.1。病人和样品gydF4y2Ba
完整的临床病理的数据95年肾biopsy-proven狼疮肾炎患者诊断从2016年1月至2019年7月在北京大学第一医院收集进行分析。所有患者完成了1997年美国风湿病学院修订标准系统性红斑狼疮(gydF4y2Ba22gydF4y2Ba]。狼疮性肾炎患者的招生图所示gydF4y2BaS1gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
早上血浆和尿液样本的所有患者在肾活检获得之前启动的免疫抑制治疗。从30名健康志愿者血浆和尿液样本,年龄和性别匹配,被选为正常对照组。第一个五个活跃的狼疮肾炎患者的血浆置换样本收集演讲。血浆样本5个健康志愿者作为正常对照组。gydF4y2Ba
狼疮肾炎患者肾活检20从北京大学第一医院被选为病理研究。在这些病人中,四个阻力指标肾炎也许可以有严重,另一个16没有(gydF4y2BangydF4y2Ba= 5)或轻度至中度(gydF4y2BangydF4y2Ba阻力指标受伤也许可以= 11)。肾组织从正常的区域进行肾切除手术患者的肾脏从五个单独收集肾细胞癌作为正常对照组。gydF4y2Ba
血浆和尿液都存储在整除−80°C到使用,避免反复冻融循环。从每个病人知情同意了血液和尿液采样和肾活检。研究了符合赫尔辛基宣言的原则,并经当地伦理委员会批准(编号为2014 (749))。gydF4y2Ba
2.2。临床评估gydF4y2Ba
以下记录临床资料:性别、年龄在肾活检,发烧、喷发,光敏性、口腔溃疡、脱发、关节痛,浆膜炎、神经功能障碍、贫血、血小板减少、白细胞减少、血尿、leukocyturia,急性肾损伤(AKI) [gydF4y2Ba23gydF4y2Ba]。系统性红斑狼疮疾病活动指数(咽部)被用来评估狼疮肾炎患者的临床疾病活动和进展(gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
在门诊病人,术后随访狼疮诊所。主要终点是定义为死亡,第二端点被定义为终末期肾病(ESRD),肾移植,或血清肌酐水平的两倍。gydF4y2Ba
2.3。实验室评估gydF4y2Ba
间接免疫荧光试验(EUROIMMUN,吕贝克,德国)是用于检测血清抗核抗体(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。一个gydF4y2Ba短膜虫属luciliaegydF4y2Ba间接免疫荧光试验(EUROIMMUN,吕贝克,德国)是用于检测anti-double-stranded DNA抗体(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。酶联免疫吸附试验(ELISA) (EUROIMMUN,吕贝克,德国)是用于检测anticardiolipin抗体(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。浊度测定法测定速度(“;美国beckman coulter)是用来确定循环C3水平(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。尿中性粒细胞gelatinase-associated lipocalin (NGAL)和肾损伤molecule-1 (KIM-1)检测到商业套件(研发系统,明尼阿波利斯,美国)。gydF4y2Ba
2.4。肾组织病理学gydF4y2Ba
肾活检标本处理使用光学显微镜,直接免疫荧光法和电子显微镜。狼疮肾炎分类确定根据不是/ rp 2018分类系统gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。病理参数,包括活动指标和慢性指标,由两名有经验的评估nephropathologists使用之前报道系统涉及的切片特性的半定量的评分(gydF4y2Ba27gydF4y2Ba,gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]。活动指数(AIs)包括endocapillary内细胞,中性粒细胞/核破裂,纤维素样坏死,cellular-fibrocellular新月,皮下透明存款,和间质炎症,而慢性指数(CIs)包括肾小球硬化,纤维性新月体,肾小管萎缩、间质纤维化。Tubulointerstitial病变是半定量的得分根据tubulointerstitium的受灾地区。阻力指标损伤分级是正常的,也许可以的程度轻微(< 25%),中等(25% - -50%),和严重的(> 50%),和大量的0,1,2,3被分配,分别为(gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
2.5。用ELISA检测血浆和尿mCRP水平gydF4y2Ba
根据先前的研究gydF4y2Ba19gydF4y2Ba),鼠单克隆抗体反人类的C反应蛋白(Sigma-Aldrich克隆8日,圣路易斯,密苏里州,美国)被涂布到微量滴定井(热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国)在1:1000年涂料缓冲区(10毫米碳酸钠/碳酸氢盐,pH值9.6)一夜之间在4°C。所有下面的步骤进行了37°C。盘子被封锁的1%牛血清白蛋白(BSA)在TBS(10毫米三,140毫米氯化钠,2毫米,pH值7.4)为1小时(阻断缓冲区)。稀释样品,阻断缓冲区被添加到井和孵化1小时。然后,羊反人类的c反应蛋白多克隆抗体(BindingSite,伯明翰,英国)稀释1:2000年阻止缓冲区添加到井和孵化1小时。板块是孵化HRP-labeled驴antisheep免疫球蛋白(H + L)(美国Abcam、剑桥、马)1小时。孵化后,油井开发3、3′,5、5′-tetramethylbenzidine(三甲)和停止1 M HgydF4y2Ba2gydF4y2Ba所以gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。测量结果与标在450和570海里。系列浓度urea-denatured mCRP标准从0到20 ng / ml被用来开发一个标准曲线。gydF4y2Ba
2.6。免疫组织化学分析检测肾c反应蛋白的表达gydF4y2Ba
肾组织样本被固定在4%多聚甲醛缓冲和嵌入在石蜡。Deparaffinized幻灯片在压力锅加热与EDTA缓冲区(pH值9)5分钟。heat-mediated抗原检索后,幻灯片是在刚做好的3%过氧化氢浸泡30分钟在室温下淬火内源性过氧化物酶活动。阻止非特异性染色,幻灯片孵化与3% BSA在磷酸盐(PBS)在室温1小时。主anti-CRP抗体(Abcam)应该识别nCRP和mCRP根据产品描述,直接添加到每个幻灯片和孵化一夜之间在4°C。二次抗体和染色进行使用商业套装(ZGSB-BIO,北京)。消极的控制用PBS代替主要抗体。Image-Pro +分析软件6.0(美国媒体控制论、达拉斯、TX),被用来评价c反应蛋白染色的平均光密度的肾小管。gydF4y2Ba
2.7。Colocalization mCRP和肾脏免疫球蛋白免疫荧光染色gydF4y2Ba
用来进行部分被固定在冷丙酮20分钟,其次是阻止3% BSA在室温下为1小时。主要的部分是孵化anti-CRP抗体(σ)一夜之间在4°C。PBS代替使用的空白控制主要抗体。广泛的洗涤后,若丹明(TRITC)共轭山羊antimouse免疫球蛋白(H + L)作为第二抗体(σ)是用于1小时在37°C。然后,部分与Alexa染色萤石488 -共轭山羊反人类的免疫球蛋白(H + L)(美国杰克逊Immunoresearch实验室、西树林、PA)为1小时37°C。DAPI染色后,用共焦显微镜检查部分(奥林巴斯观众1000人,日本东京)。gydF4y2Ba
2.8。纯化的免疫球蛋白gydF4y2Ba
免疫球蛋白是纯化从五个狼疮肾炎患者的血浆置换和五个正常个体的血浆蛋白G亲和柱AKTA-FPLC系统(美国通用电气生物科学、南旧金山,CA) (gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
2.9。水平的分析nCRP和mCRP ELISA的细胞上清液gydF4y2Ba
正常人类近端肾小管上皮细胞系(HK2细胞)从美式文化集合(写明ATCC马纳萨斯,弗吉尼亚州,美国)在DMEM-F12培养基培养(美国纽约Gibco,大岛)补充10%胎牛血清抗生素(青霉素和链霉素Gibco)和1% (Gibco) 37°C和5%的公司gydF4y2Ba2gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
孵化后HK2细胞纯化免疫球蛋白(100gydF4y2BaμgydF4y2Bag / ml) 24 - 72小时,上层的收集和离心机在2000×gydF4y2BaggydF4y2Ba10分钟去除细胞碎片,和水平的nCRP mCRP被自制的ELISA测定根据一项研究[gydF4y2Ba19gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
2.10。RNA提取和聚合酶链反应(PCR)gydF4y2Ba
孵化后HK2细胞纯化免疫球蛋白24 - 72小时,从HK2细胞总RNA提取使用RNeasy迷你包(TIANGEN生物技术,北京)。互补DNA(互补)从总RNA合成(1gydF4y2BaμgydF4y2Bag)使用高容量cDNA反转录试剂盒(Vazyme生物科技、南京、中国)按照生产商提供的方法。定量实时PCR进行使用SYBR绿色主人混合试剂(热费希尔科学)。管家基因GAPDH担任内部控制。人类的CRP引物序列是:向前5′-GTCACAGTAGCTCCAGTACACA-3′;和反向5′-AAAGTTCCCACCGAAGGAATC-3′。c反应蛋白mRNA比使用2 ^ GAPDH信使rna进行了分析gydF4y2Ba−gydF4y2BaΔΔgydF4y2BaCtgydF4y2Ba方法。gydF4y2Ba
2.11。统计分析gydF4y2Ba
SPSS软件,版本26.0(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL),应用统计分析。连续变量表示为平均值±标准偏差(SD)或中位数(四分位范围(差),和分类变量表示为比率。连续变量之间的关联进行了使用皮尔逊相关分析和斯皮尔曼等级相关分析。与独立样本进行统计分析gydF4y2BatgydF4y2Ba以及,Mann-WhitneygydF4y2BaUgydF4y2Ba测试中,单向方差分析或克鲁斯卡尔-沃利斯检验。接受者操作特征(ROC)曲线构造,曲线下的面积(AUC)阻力指标病变也许可以用来区分。使用kaplan - meier曲线测试病人的预后。单变量使用日志等级测试进行生存分析。一个双边gydF4y2Ba 被定义为具有统计学意义。gydF4y2Ba
3所示。结果gydF4y2Ba
3.1。狼疮性肾炎患者的一般资料gydF4y2Ba
狼疮性肾炎病人的详细的通用数据如表所示gydF4y2BaS1gydF4y2Ba。22(23.2%)是男性,73(76.8%)是女性,平均年龄为32.5±13.0岁。根据是/ RPS狼疮肾炎的分类系统,两个病人分为二类(2.1%),27日,第三类(28.4%,包括11个类V + III), 51为四级(53.7%,包括16类V + IV),和15 V类(15.8%)。gydF4y2Ba
3.2。等离子体mCRP水平和尿mCRP狼疮肾炎患者和控制水平gydF4y2Ba
mCRP在狼疮肾炎患者的血浆水平显著高于正常对照组(0 (0 - 0.85)ng / ml和0 (0 - 0)ng / ml,gydF4y2Ba )。gydF4y2Ba此外,狼疮肾炎患者尿mCRP水平显著高于正常对照组(0.66 (0.23 - -1.96)ng /毫克Cr与0.03 (0 - 0.24)ng /毫克Cr,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(图gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
3.3。等离子体之间的关联mCRP水平或尿mCRP水平和狼疮肾炎的临床病理特征gydF4y2Ba
未发现相关性之间的等离子体mCRP水平和临床病理的狼疮肾炎患者(表的数据gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。此外,没有等离子mCRP水平和尿NGAL水平之间的联系(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.063,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba或尿KIM-1水平(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.063,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba在狼疮肾炎患者(图gydF4y2BaS2gydF4y2BaA1, B1)。gydF4y2Ba
进一步分析表明,在狼疮肾炎患者尿mCRP的水平与血清肌酐显著相关(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.460,gydF4y2Ba ),gydF4y2Ba尿NGAL水平(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.390,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba和泌尿KIM-1水平(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.227,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(图gydF4y2BaS2gydF4y2BaA2, B2)。关于肾病理参数,尿mCRP的水平与活动指数得分呈正相关(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.214,gydF4y2Ba ),gydF4y2Baendocapillary肾小球内(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.216,gydF4y2Ba ),gydF4y2Ba间质炎性细胞浸润(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.514,gydF4y2Ba ),gydF4y2Ba慢性指数评分(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.292,gydF4y2Ba ),gydF4y2Ba肾小球硬化(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.241,gydF4y2Ba ),gydF4y2Ba和间质纤维化(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.270,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba狼疮肾炎患者中(表gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
3.4。尿mCRP阻力指标病变也许可以可以分辨水平gydF4y2Ba
在狼疮肾炎患者阻力指标病变也许可以区分,等离子体的ROC-AUC mCRP水平为0.545(95%可信区间(CI): 0.338 - -0.751,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(图gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba)。尿mCRP水平增强ROC-AUC阻力指标病变也许可以预测0.766(95%置信区间:0.619—-0.913,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(图gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba)。的化验尿mCRP水平可能阻力指标病变也许可以识别的敏感性为79.3%,特异性为62.5%。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
3.5。协会的等离子体mCRP水平或尿mCRP水平和狼疮肾炎患者的综合结果gydF4y2Ba
在我们的研究中,经常狼疮性肾炎75例,术后随访,平均随访时间为22.8±11.7个月。长期的结果,一个病人死了(1/75%,1.3%),五ESRD患者达到(5/75%,6.7%),一个病人血清肌酐水平翻了一番(1/75%,1.3%),和一个病人接受了肾脏移植手术(1/75%,1.3%)。重要的是,kaplan meier曲线表明,高水平的患者尿mCRP (> 0.391 ng / ml,尿mCRP的平均值加上两次正常对照组中的SD)已经明显恶化预测(gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(图gydF4y2Ba3 (b)gydF4y2Ba)。随后的单变量生存分析显示,尿的水平mCRP预后的危险因素(风险比(人力资源):1.204,95%置信区间CI: 1.029 - -1.409,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。相比之下,等离子体的水平mCRP并不与狼疮肾炎的预后相关(人力资源:0.979,95% CI: 0.798—-1.201,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(图gydF4y2Ba3(一个)gydF4y2Ba)(表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
3.6。CRP在狼疮肾炎患者肾组织的表达及其病理关联gydF4y2Ba
细胞质中的c反应蛋白染色观察11的小管16从狼疮肾炎患者肾活检(第三类:3;第四类:6;和类V:(图7)gydF4y2Ba4(一)gydF4y2Ba)。狼疮肾炎患者c反应蛋白的表达明显高于正常对照组(gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(图gydF4y2Ba4 (b)gydF4y2Ba)。此外,CRP可以检测到小管的阻力指标肾炎,也许可以四个lupus-related患者和CRP在这些患者的平均光密度明显高于正常对照组(gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(图gydF4y2BaS3gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
(c)gydF4y2Ba
(d)gydF4y2Ba
(e)gydF4y2Ba
(f)gydF4y2Ba
(g)gydF4y2Ba
(h)gydF4y2Ba
(我)gydF4y2Ba
(j)gydF4y2Ba
此外,c反应蛋白的平均光密度呈正相关,慢性指数评分(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.660,gydF4y2Ba ),gydF4y2Ba间质炎性细胞浸润(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.526,gydF4y2Ba ),gydF4y2Ba肾小管萎缩(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.669,gydF4y2Ba ),gydF4y2Ba和间质纤维化(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.591,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(图gydF4y2Ba4 (c)gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba4 (f)gydF4y2Ba)。特别是,积极的间质炎症,肾小管萎缩、间质纤维化与高c反应蛋白的表达(gydF4y2Ba ;gydF4y2Ba ;gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba4 (h)gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba4 (j)gydF4y2Ba)。此外,c反应蛋白的表达之间存在显著正相关性小管和狼疮肾炎患者尿mCRP的水平(gydF4y2BargydF4y2Ba= 0.550,gydF4y2Ba )gydF4y2Ba(图gydF4y2Ba4 (g)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
3.7。Co-localization mCRP和狼疮肾炎患者免疫球蛋白gydF4y2Ba
双重免疫荧光分析表明mCRP表达在肾小管从狼疮肾炎患者和免疫球蛋白沉积在同一地区。mCRP肾染色和免疫球蛋白部分合并。mCRP的染色是很少出现在正常对照组的样本(图的小管gydF4y2Ba5gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
(c)gydF4y2Ba
(d)gydF4y2Ba
3.8。c反应蛋白生产和分泌HK2细胞体外gydF4y2Ba
探讨肾小管上皮细胞合成c反应蛋白的能力,我们孵化HK2细胞纯化免疫球蛋白24 - 72小时。如数据所示gydF4y2Ba6(一)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba6 (b)gydF4y2Ba的水平nCRP和mCRP HK2上层清液的细胞免疫球蛋白治疗狼疮肾炎患者24 - 72小时明显高于暴露于正常免疫球蛋白。上述结果也验证了定量实时PCR(图gydF4y2Ba6 (c)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
(c)gydF4y2Ba
4所示。讨论gydF4y2Ba
在狼疮肾炎Tubulointerstitial病变经常观察,阻力指标病变也许可以增加的证据表明,可怜的有力预测结果(gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba]。因此,阻力指标在狼疮肾炎病变也许可以的重要性已经被广泛认可。然而,阻力指标在狼疮肾炎病变也许可以的发病机制并不完全清楚,有一个缺乏可靠的和适当的生物标志物阻力指标的伤害也许可以反映在狼疮肾炎患者。gydF4y2Ba
我们的研究首次发现,血浆和尿液中mCRP水平显著增加在狼疮肾炎患者与正常对照组相比。进一步分析表明,尿尿NGAL mCRP水平显著相关性和KIM-1水平,这是阻力指标损伤在狼疮肾炎(也许可以敏感的指标gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。关于肾组织病理学评价、尿mCRP阻力指标损伤指标,也许可以水平也与一些相关的间质炎性细胞浸润是最强的。但是,没有血浆mCRP水平之间的相关性被发现和狼疮肾炎的临床病理资料。因此,我们的研究结果表明,尿mCRP水平,而不是循环mCRP水平,可能是一个生物标志物在狼疮肾炎阻力指标受伤也许可以的。此外,尿mCRP水平阻力指标病变也许可以有价值的预测(ROC-AUC > 0.700)在我们的研究中。更重要的是,它是发现,等离子体的水平mCRP并不与狼疮肾炎的预后相关,而尿mCRP水平差的结果根据单变量生存密切相关的分析。这些发现支持,尿mCRP水平可能是一个有用的生物标志物在狼疮肾炎的预后预测。值得注意的是,我们医院是三级转诊中心,和一些患者已经非常危急的时候承认;因此,端点事件可能更高的发病率。gydF4y2Ba
基于上述研究,我们提出了这样的可能性,肾国产mCRP可能尿mCRP在狼疮肾炎的主要来源。来验证我们的假设,我们检测c反应蛋白表达在肾活检的狼疮肾炎病人使用免疫组织化学分析。肾组织的非特异性染色的条件下出现使用anti-mCRP-3H12抗体(残留199 - 206)gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba),提供的合作实验室,或商业单克隆抗体克隆anti-CRP 8,所以主要从Abcam anti-CRP抗体,应该承认nCRP和mCRP,被选择。我们的染色结果表明,c反应蛋白是主要发现在小管领域的狼疮肾炎患者和患者阻力指标肾炎,也许可以autoimmune-related但肾小球是负面的。CRP显著的平均光密度阻力指标病变也许可以与指标,如间质炎性细胞浸润,肾小管萎缩、间质纤维化在狼疮肾炎。这些结果支持强劲阻力指标受伤也许可以c反应蛋白在肾组织的表达。先前的研究表明,管式c反应蛋白染色增加随着肾功能的下降和增加先进的糖尿病肾病患者的组织学病变的严重程度(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba]。此外,我们的研究表明,c反应蛋白染色在小管明显与狼疮肾炎患者尿mCRP水平。因此,肾脏的表达mCRP可能尿mCRP在狼疮肾炎的主要来源。gydF4y2Ba
此外,双重免疫荧光染色的透露,mCRP的确是沉积在小管,和colocalization mCRP和免疫球蛋白的狼疮肾炎患者可被检测到。先前的研究,包括我们,表示循环的抗体水平mCRP流行在狼疮肾炎患者和阻力指标病变(也许可以联系在一起gydF4y2Ba32gydF4y2Ba,gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]。一项研究报道,antidouble链DNA抗体可以绑定到管状上皮细胞,刺激促炎细胞因子il - 6的分泌,白介素1gydF4y2BaβgydF4y2Ba(il - 1gydF4y2BaβgydF4y2Ba)和肿瘤坏死因子gydF4y2BaαgydF4y2Ba(肿瘤坏死因子-gydF4y2BaαgydF4y2Ba)[gydF4y2Ba34gydF4y2Ba),促进炎症细胞的招募和间质炎症的发展。此外,金洛克et al。gydF4y2Ba35gydF4y2Ba]阻力指标炎症也许可以发现,波形蛋白高表达的细胞和原位antivimentin抗体可能参与适应性免疫机制阻力指标炎症。也许可以的因此,我们推测,当地mCRP抗原的存在不仅阻力指标受伤,也许可以是一个生物标志物还参加了狼疮肾炎的发病机制。Anti-mCRP自身抗体和mCRP tubulointerstitium原位形成免疫复合物,导致小管损伤,间质炎症和纤维化,但确切mCRP在狼疮肾炎的发病机制中的作用必须进一步探讨。gydF4y2Ba
更重要的是,在接触狼疮nephritis-derived免疫球蛋白,增加nCRP和mCRP上层清液的含量检测管状上皮细胞。先前的研究已经表明,狼疮肾炎与干扰细胞凋亡和受损的间隙,这可能导致破坏公差对自身抗原和自身抗体的产生gydF4y2Ba36gydF4y2Ba,gydF4y2Ba37gydF4y2Ba]。我们的结果表明,这些自身抗体也可以诱发CRP由管状上皮细胞抗原表达,可能参与狼疮肾炎的进展。gydF4y2Ba
然而,我们的研究有一些局限性。首先,从nCRP mCRP是否分离产生的肾小管上皮细胞或直接原位合成还有待进一步研究。第二,mCRP的确切作用在狼疮肾炎阻力指标受伤也许可以的发病机理需要进一步探索。gydF4y2Ba
总之,我们的工作表明,尿mCRP水平显著增加,尿mCRP阻力指标病变也许可以可能的生物标志物在狼疮肾炎患者。此外,肾CRP可能由管状上皮细胞,和当地的mCRP可能发挥关键作用阻力指标病变也许可以发展的。gydF4y2Ba
数据可用性gydF4y2Ba
的数据支持本研究的发现可以从相应的作者在合理的请求。gydF4y2Ba
的利益冲突gydF4y2Ba
作者宣称没有利益冲突。gydF4y2Ba
确认gydF4y2Ba
这项工作是支持由北京自然科学基金(没有。7192207),北京大学临床科学家培训项目支持的“中央大学基础研究基金”,中国国家自然科学基金(81870479和81870479号),北京大学第一医院研究所的项目(没有。2023 ir35),医学科学(没有凸轮创新基金。2019 - i2 - 5 - 046)。gydF4y2Ba
补充材料gydF4y2Ba
表S1:红斑狼疮肾炎患者的一般资料。图S1:入学的狼疮肾炎患者在北京大学第一医院。乙肝病毒,乙肝病毒。图S2:等离子体之间的关联mCRP水平或尿mCRP狼疮肾炎的阻力指标受伤也许可以水平和特征。(A1, B1)血浆mCRP水平和尿NGAL水平之间的关系和KIM-1水平狼疮肾炎患者。(A2, B2)尿mCRP水平和尿NGAL水平之间的关联和KIM-1水平在狼疮肾炎患者。NGAL mCRP、修改C反应蛋白,中性粒细胞gelatinase-associated lipocalin;KIM-1,肾脏损伤molecule-1。图S3:免疫组织化学染色的CRP与阻力指标肾炎也许可以autoimmune-related肾活检的患者。(())CRP染色明显积极的小管阻力指标肾炎也许可以lupus-related患者(箭头所指)。 (a(B)) CRP staining was barely seen in the tubules of normal kidneys (×400). Scale bars 100 μgydF4y2Bam。(b)的平均光密度CRP在阻力指标肾炎也许可以lupus-related患者和正常对照组。CRP, C反应蛋白;LN、狼疮肾炎。gydF4y2Ba(gydF4y2Ba补充材料gydF4y2Ba)gydF4y2Ba