文摘

胸腺基质淋巴细胞生成素(简称TSLP),长期以来被认为与Th2反应,也涉及多个炎症性皮肤疾病和癌症。本研究的目的是为了提高我们理解的表达TSLP在皮肤上的皮肤病。Lesional标本代表几种皮肤病,包括扁平苔癣(LP)、盘状红斑狼疮(DLE)、湿疹、大疱的类天疱疮(BP),牛皮癣寻常的(PsV),结节病,和蕈样(MF),通过免疫组织化学方法回顾性收集和分析。形态学,TSLP在每个皮肤病的表皮广泛表达,但表达弱DLE的标本。半定量的分析,TSLP在LP表皮中表达明显,英国石油公司、湿疹、埃因霍温、结节病、MF。TSLP表达更高的棘层在LP,湿疹、BP、埃因霍温,MF和更高的基底层在结节病和埃因霍温。此外,我们发现积极TSLP真皮浸润炎症细胞的染色BP,埃因霍温,结节病。我们观察TSLP在小说不同的炎症性皮肤病可能提供一个了解TSLP在疾病的机制与小说截然不同的免疫反应模式和显示一个潜在的治疗这些疾病的目标。

1。介绍

胸腺基质淋巴细胞生成素(简称TSLP),一种epithelial-derived细胞因子,最初被确定为一个因素促进B细胞增殖与发展(1,2]。随后,TSLP发现诱导树突状细胞(dc)或直接作用于先天淋巴细胞和CD4 + T细胞的免疫反应,促进辅助T细胞(Th) 2型(2,3]。此外,先前的研究已经表明,TSLP促进Th2极化条件下Th17细胞分化[4),作用于中性粒细胞增加金黄色葡萄球菌杀死的先天免疫反应(5]。造血祖细胞,嗜碱性粒细胞,嗜酸性粒细胞,肥大细胞,单核细胞/巨噬细胞和血小板受体表达胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLPR),从而可以通过TSLP激活(3,6]。

最初,关于TSLP的研究主要集中在过敏性疾病,如过敏性哮喘、过敏性皮炎(AD),过敏性鼻炎,嗜酸性食管炎,食物过敏2,7,8]。这是逐渐显示TSLP广泛参与自身免疫性疾病和癌症3]。此外,发现表达的胸腺基质淋巴细胞生成素参与许多炎症性皮肤病,如牛皮癣寻常的(埃因霍温)9,10),大疱类天疱疮(BP) (11],斑秃(12]。这些疾病截然不同的临床表现,病理,免疫反应模式。

结合临床和病理表型与免疫学和分子遗传学,非传染性炎性皮肤病可以分为六个免疫反应模式(13]。埃因霍温是一个典型的银屑病模式皮肤病和视为Th1 / Th17-induced炎性疾病(13,14]。湿疹是一种常见的炎症性皮肤病,广泛多样的目的和被认为是2型免疫疾病之一。英国石油(BP)最常见的自身免疫性水疱病,主要是由致病性自身抗体和Th2反应。TSLP表达升高血清和病变的患者埃因霍温和英国石油公司(9- - - - - -11,15]。但是,以往的研究没有揭示特定站点TSLP表达的皮肤损伤的皮肤疾病。扁平苔癣(LP),作为一个典型的青苔状的模式皮肤病,主要是通过细胞毒性CD8诱导⁺T细胞攻击角化细胞。先前的研究已经报道,TSLP表达升高患者的口腔上皮细胞和血清LP(口语16,17]。结节病是一种典型的非感染性肉芽肿疾病模式,特点是肉芽肿和纤维化。之前的研究表明,支气管肺泡灌洗液中的TSLP级别的肺结节病并不高于正常对照组(18]。到目前为止,没有研究调查TSLP表达LP和皮肤结节病。总之,TSLP参与多种皮肤病具有不同特征显著。

为了更好地理解TSLP表达的确切位置和模式从不同的皮肤病患者的皮肤,我们通过免疫组织化学分析回顾的样本代表性的几种皮肤病,包括资讯、盘状红斑狼疮(DLE),埃因霍温,英国石油公司、湿疹、结节病、蕈样(MF)。

2。材料和方法

2.1。样本的选择

皮肤病理学数据库系的北京协和医科大学皮肤病医院(北京)查询识别样本与LP一致,LE,湿疹、英国石油公司、埃因霍温、结节病、MF。健康对照组(HC)污渍是从周围正常皮肤痣患者招募,囊肿或脂溢性角化病。本研究进行了符合赫尔辛基宣言的原则(2013年修订)。伦理审查委员会的批准被授予北京协和医学院医院(z - 1735)。潜在参与者收到系统糖皮质激素、免疫抑制剂、生物制剂,或长期被排除在研究局部治疗。样本选择的标准如表所示1。

2.2。免疫组织化学

石蜡切片deparaffinized和屏蔽3%过氧化氢为15分钟,然后用山羊血清孵化1 h在室温下的解决方案。接下来,样本与兔子反TSLP孵化(美国ProteinTech集团Rosemont, IL)一夜之间在4°C,其次是孵化HRP-conjugated AffiniPure山羊anti-rabbit免疫球蛋白(美国ProteinTech集团Rosemont, IL)。标本被沾轻拍(Solarbio,北京),其次是洗涤和与苏木精复染色(Solarbio,北京)。

2.3。标本分级

对于定量图像分析,对幻灯片进行扫描使用2.0 NanoZoomer rs(日本滨松),和五个视觉领域选择随机为每个幻灯片。每个部分是半定量的评分在0 - 3(0:- 1:温和,2:温和,和3:强)由两个皮肤科医生盲目地评估五个随机选择的视觉领域的高(400 x)放大扫描部分。平均坡度大于一的部分被认为是一个积极的例子。的梯度基底层、棘层被减去基底层数学计算分数的棘层。

2.4。统计分析

TSLP表达的成绩在基底层、棘层了 。单向方差分析和Dunnett测试(HC组被认为是控制集团)被用来确定等级的重要性。单群,学生的 - - - - - -测试是用来确定的意义的梯度基底层、棘层。单向方差分析是用来评估一般每个皮肤病组之间的区别,和Bonferroni调整被用来评估每一对皮肤病组之间的差异。等级相关TSLP表达的基底层、棘层之间使用皮尔逊相关性测试评估。统计学意义被分配 。SAS 9.4 (SAS研究所卡里、数控、美国)是用于统计分析。棱镜7软件(GraphPad软件公司,拉霍亚、钙、美国)是用于生成统计图表。

3所示。结果

3.1。TSLP表达的表皮炎性皮肤病

共有76个标本,由LP ( ),DLE ( ),湿疹( ),英国石油公司( ),埃因霍温( ),结节病( ),MF ( ),和HC ( ),收集我们的调查(表吗2)。形态学,TSLP在LP的表皮明显表示,BP,湿疹,埃因霍温,结节病,和MF标本,在表皮与DLE TSLP-positive角质细胞也可以观察到局部,不像其他皮肤疾病普遍在我们的调查。有更少的轻轻染色阳性细胞的表皮HC(图1)。

积极的TSLP表达每个小组展示在表的表皮3,和平均成绩TSLP表达的基底层、棘层呈现在图2。相比,在HC, TSLP表达明显半定量的表皮的基底层与PsV ( )和结节病(p= 0.025)标本和不明显表达了LP ( ),DLE ( ),湿疹( ),英国石油公司( ),和MF ( )(图2(一个))。同样,TSLP表达显著的表皮棘层LP ( ),英国石油公司( ),埃因霍温( ),湿疹( ),和MF ( )标本和不显著表达DLE ( )和结节病( )(图2 (b))。DLE表皮,TSLP表达的半定量的分数并不重要。

进一步调查的多样性TSLP表达在这些皮肤病中,我们比较了年级每两组之间。没有明显差异在TSLP表达棘层和基底层的成绩在这些皮肤病组,这意味着TSLP表达每个疾病组之间没有显著差异。

3.2。TSLP表达的差异之间的基底层、棘层

形态学,TSLP染色强度没有明显差异之间的基底层、棘层。然而,指棘层半定量的分数明显高于在基底层LP ( )标本和低于基底层的结节病( )标本。TSLP表达的差异在基底层、棘层之间在其他皮肤病并不显著(图2 (c)、DLE ,湿疹 ,英国石油公司 ,埃因霍温 ,和曼氏金融 )。

此外,进一步研究梯度的基底层、棘层表达在皮肤疾病,我们每两组之间相比它。基底层、棘层的梯度表达式的TSLP在结节病不同LP ( ),湿疹( ),英国石油公司( ),和MF ( ),分别。梯度其他皮肤疾病之间并没有显著的差异(图2 (c))。

3.3。之间的相关性TSLP表达的基底层、棘层

一般来说,有一个显著正相关TSLP表达之间的棘层和基底层所有标本( , )。类似的相关性也可以发现在LP ( , ),DLE ( , ),湿疹( , ),英国石油公司( , ),埃因霍温( , ),和结节病( , )标本,而在MF ( , )和HC ( , )标本,这种相关性不显著(表4)。

3.4。TSLP在BP的真皮,也表达了埃因霍温,结节病

最后,我们发现积极TSLP在真皮浸润炎症细胞染色BP,埃因霍温,结节病。在英国石油公司,TSLP-positive细胞分散在大量炎症细胞(数字3(一个)和3 (b))。在埃因霍温,TSLP表达在皮肤表面的血管周围炎症细胞和内皮细胞(数字3 (c)和3 (d))。在结节病,TSLP表达“裸”类上皮细胞肉芽肿(数字3 (e)和3 (f))。无论程度的炎症细胞浸润到真皮,我们没有观察到主要TSLP表达在其他皮肤病标本。

4所示。讨论

在我们的研究中,我们调查了lesional TSLP表达与不同的免疫模式代表皮肤疾病。形态,我们发现TSLP表达在某种程度上在每个皮肤病。使用半定量的分析,除了DLE, TSLP表达的基底层、棘层在这些皮肤病,以及每个皮肤病的区别通常并不明显。此外,棘层中的TSLP表达显著高于基底层的LP标本和显著低于结节病标本。此外,TSLP表达的相关性在基底层、棘层之间是显著的,除了MF和HC。此外,我们还发现TSLP表达真皮浸润炎症细胞在BP,埃因霍温,结节病。总的来说,我们的数据表明TSLP表达的升高皮肤的炎症性皮肤病,可能参与其发病机理。

TSLP是一个典型的Th2-related细胞因子,可以诱导DC-promoted幼稚T细胞分化Th2细胞(19]。它还可以直接激活CD4细胞⁺T细胞,肥大细胞,嗜碱性粒细胞,嗜酸性粒细胞促进Th2免疫反应(3,19]。在我们的研究中,我们发现高TSLP表达表皮的湿疹,英国石油(BP)和MF,都是典型的Th2-dominant皮肤病(13,20.]。这个结果与之前的研究一致,证实了TSLP和Th2免疫反应的关系15,21- - - - - -25]。

埃因霍温是Th1 / Th17-induced炎性疾病(13,14]。然而,在我们的研究中,我们发现TSLP表达也是高架在埃因霍温的表皮。类似于我们的发现,先前的研究表明,TSLP高架在病变的水平和血清PsV的病人和疾病的严重程度(9,26,27]。然而,在损伤的小鼠模型和埃因霍温的病人,TSLP水平上升后采用局部维生素D3 calcipotriol对应物,并进行calcipotriol可能诱发TSLP表达,抑制Th1 / Th17和增强Th2 [28,29日]。它可能是由于复杂的原因,TSLP在埃因霍温中扮演截然相反的角色。一方面,TSLP是一种多效性的细胞因子,能促进两组不同的DCs,诱导干扰素的表达——之一γ、IL-17A和il - 22生成时,另一个表达il - 4, IL-5, IL-9, IL-13, il - 1030.]。TSLP还发现有不同的免疫调节功能在不同的炎症环境中(9]。此外,一些调查表明,TSLP的活动是严重依赖于TSLP受体而不是TSLP [27]。因此,TSLP也可能促进Th1 / Th17免疫反应在埃因霍温在某种程度上。另一方面,这些变量的结果可能是由于PsV的异质性。埃因霍温病人可分为两个集群;在一个集群,Th2-related基因,包括TSLP在病变的患者明显高于堂比出现在特应性皮炎(31日]。因此,TSLP可能促进PsV通过th2免疫反应。

在这项研究中,TSLP明显表达了LP的表皮。类似的观察记录了Valdebran et al。24]。其他可用的报告指口服LP和TSLP之间的关系。太阳et al。16)建议TSLP被激活CD8参与口腔LP⁺T细胞。其他研究表明TSLP和Th2-related趋化因子参与了发病机理(17,32),不支持意见在此前的一项研究中,LP是Th1免疫反应(13]。类似于PsV,多种功能的TSLP和LP的异质性可能占结果。

越来越多的证据表明,Th1、Th2和Th17相关的活动和系统性红斑狼疮(SLE)的严重程度33]。TSLP信号通路之间的相关性和系统性红斑狼疮在一项研究中被确定34]。先前的研究表明,在血清和表达式的胸腺基质淋巴细胞生成素系统性红斑狼疮患者病变不明显增加,而HC (35]。同样,Soumelis et al。36)也未能找到TSLP表达增加病灶播散性红斑狼疮病人。在我们的实验中,TSLP-positive角质细胞可以观察到局部表皮的形态,但表皮TSLP表达的意思是成绩没有显著增加评估的半定量的分析。

迄今为止,没有任何研究之间的关系皮肤结节病和TSLP已报告,尽管对特发性肺纤维化的一项研究表明,TSLP水平在支气管肺泡灌洗液的肺结节病并没有高于正常对照组(18]。在我们的研究中,我们发现TSLP表达明显结节病在表皮和真皮类上皮细胞“裸”肉芽肿,这意味着可能分泌TSLP角质细胞和上皮细胞在皮肤结节病。此外,它也可能占TSLP在基底层的高水平。

对于英国石油公司和PsV,真皮浸润炎症细胞也TSLP染色阳性,这表明TSLP表达不仅由浸润炎症细胞角化细胞还在英国石油公司和埃因霍温。这个观察没有报道之前,具体机制仍然未知。然而,TSLP由肥大细胞也表达了,CD163 +巨噬细胞细胞,内皮细胞在其他几种皮肤病(35,37,38]。此外,真皮中的TSLP表达可能与基底层的TSLP表达高于棘层的BP和PsV标本,虽然没有显著的差异。

虽然我们的研究显示之间没有差异TSLP表达的基底层、棘层形态,TSLP表达更强烈的LP的棘层,这是不符合以前的报告24]。通过回顾这些数据在其他的研究中,我们发现TSLP表达的差异在基底层、棘层之间是不明显的15,17,36]。造成这些差异的原因有两点,即一个小样本量的研究和TSLP的多种功能。更全面的研究需要更大的样本量进一步解释这一差别。具体表达式模式可能反映了资源的TSLP皮肤病。例如,LP主要是通过细胞毒性CD8诱导⁺T细胞攻击基底角质细胞,但TSLP表达主要的尖尖的角化细胞。这可能意味着尖尖的细胞的发病机制中扮演更重要的角色比此前认为的LP,而在结节病,TSLP在皮肤上可能来自于真皮或循环。此外,如果TSLP生产从尖尖的角化细胞在这些皮肤病,它将防止TSLP代局部是有价值的。最近,局部药物被发现减少TSLP分泌表皮(39,40]。有可能降低TSLP表达表皮,尤其是尖尖的角化细胞,改善炎症性皮肤病。

最后,本研究有潜在的局限性。如上所述,本研究的样本量很小,在某种程度上,而我们的研究试图进行初步研究,我们的目的是提高担心TSLP及其影响在皮肤疾病与免疫反应的不同模式。我们想扩大样本量进一步研究的具体的皮肤病。此外,我们只检测到的水平TSLP在皮肤标本的病人。等几种皮肤病PsV, BP和结节病,不仅皮肤疾病,而且系统性疾病。它可能是有意义的检测水平的胸腺基质淋巴细胞生成素血清或其他样品和比较结果与皮肤损伤。此外,TSLP与IL-33和其他细胞因子介导Th2免疫反应,以便它是有价值的其他细胞因子检测和比较他们的表情41]。

5。结论

作为一个整体,我们的研究发现TSLP表达的升高皮肤疾病在不同的免疫反应。这一发现增加了越来越多的证据的重要性TSLP在每个炎性疾病。它还有待阐明如果TSLP在某些炎性疾病中所起的作用,如DLE和结节病。Tezepelumab, first-in-class anti-TSLP单克隆抗体,被批准为生物制剂治疗严重的哮喘(42]。随机二期临床试验报道,特应性皮炎患者的治疗下有所改善tezepelumab [43]。有必要进一步研究TSLP在这些炎性疾病,为了发现潜在的新的治疗目标。

数据可用性

本文中包含的数据集可以从相应的作者与适当合理的请求和额外的伦理审批,必要时。

的利益冲突

作者没有利益冲突声明。

确认

这项研究得到了国家自然科学基金(批准号81972944)和北京自然科学基金(批准号7192166)。