文摘

背景。慢性鼻窦炎和鼻息肉(CRSwNP)是一种常见的上呼吸道炎症疾病术后复发率很高。本研究旨在探索B细胞激活因子的表达(金属)CRSwNP及其与术后复发。方法。80 CRSwNP病人,包括40个主要CRSwNP患者和40个CRSwNP复发患者,40例慢性鼻窦炎鼻息肉(CRSsNP)患者和健康对照组40 (HC)登记在这项研究中,血清和组织样本收集。循环和组织高飞球的一击表达式被酶联免疫吸附试验检测逆转录-聚合酶链反应和免疫组织化学。临床值预测术后复发CRSwNP进行评估。结果。我们确定血清水平的高飞球的一击比CRSsNP CRSwNP组显著增加和HC组( ),和更高浓度的高飞球的一击与外围嗜酸性粒细胞百分比(有关 , )。血清浓度显著高于金属CRSwNP复发组相比,主组( )。多变量分析和接受者操作特征(ROC)曲线,血清水平与术后复发相关金属CRSwNP患者( )。此外,组织水平显著增加金属CRSwNP组比HC组,尤其是在复发CRSwNP集团( ),和增强高飞球的一击RNA表达与血清水平(金属 , )。结论。我们的结果阐明,高飞球的一击表达式在CRSwNP增强病人和与术后复发有关。高飞球的一击可以预测CRSwNP术后复发患者的血清生物标志物。

1。介绍

慢性鼻窦炎(CRS)是一种慢性炎症性疾病导致的上呼吸道的临床综合症,包括鼻涕,鼻塞,减少损失的气味(1,2]。以往的流行病学研究表明,CRS是最常见的疾病之一,估计2 - 4%患病率调查根据地理区域(3,4]。基于鼻息肉,CRS还subclassified与鼻息肉CRS (CRSwNP)和CRS没有鼻息肉(CRSsNP)和CRSwNP往往有严重的疾病症状,预后差,和更高的术后复发,因为大规模的eosinophilic-driven Th2细胞因子渗透在鼻粘膜5- - - - - -7]。之前的出版物显示,短期内息肉复发率约50%功能性内窥镜鼻窦手术后12个月,和长期复发率是60% - -70%8- - - - - -10]。鉴于CRSwNP患者复发频繁发生,这是迫切需要确定术后复发的相关因素,探索客观预测生物标志物其复发,这是关键的开发治疗策略,调整后续协议,实现个性化的治疗。

B细胞激活因子(金属),也被称为B淋巴细胞刺激器(布莱)和肿瘤坏死因子超科13 B (TNFSF13B),广泛表达单核细胞、巨噬细胞、树突细胞和基质细胞和展览各种生物功能,包括维护B细胞体内平衡,促进B细胞存活和分化,调节T细胞的功能(11- - - - - -13]。之前的出版物发现高飞球的一击是在当地组织和外周血和与潜在的恶性肿瘤的发病机制密切相关14),自身免疫性疾病(15,16),炎症性肠病(17,18),和移植排斥反应19,20.]。目前,高飞球的一击在气道炎症疾病的角色吸引了密切关注,并增加水平的高飞球的一击被观察到在血清和过敏性哮喘患者的痰标本21,22]。王等人。13,23]给出了B细胞激活因子是促进异位淋巴B细胞生存的关键在鼻息肉组织,表明参与了金属physiopathologic CRSwNP机制,可能会作为一个客观的生物标志物的个性化治疗。,本研究旨在检测血清和组织的水平金属CRSwNP和评估预测术后复发的潜在价值。

2。材料和方法

2.1。病人

我们招募了40名健康对照组40 CRSsNP患者和80名CRSwNP患者(40主CRSwNP和40 CRSwNP复发)治疗我们系2021年1月至2021年7月。CRSwNP诊断根据体格检查,鼻内窥镜图像和鼻窦电脑断层(CT)发现指欧洲的指南意见书鼻窦炎和鼻息肉201224]。异位的状态医生证实了基于疾病历史,皮肤测试和/或特定的IgE测试和肺功能。所有CRSsNP和CRSwNP病人符合诊断标准指的是欧洲的指南意见书鼻窦炎和鼻息肉2012。复发CRSwNP定义当典型症状的存在尽管抗生素的救援方案,在随访期间口服类固醇和内窥镜图像和/或计算机断层扫描(CT)扫描门诊随访期间获得的证据(如前所述)(25- - - - - -27]。我们排除了这些患者如果他们真菌性鼻窦炎,变态反应性真菌性鼻窦炎、鼻腔或鼻窦恶性肿瘤;伴随自身免疫性疾病或嗜酸性的疾病;消费的免疫治疗药物、抗生素、糖皮质激素或抗过敏药药物在这项研究入学前4周。四十岁,sex-matched健康对照组(高碳钢)没有鼻腔或鼻窦炎性疾病同样被雇佣为对照组,他们没有收到任何免疫治疗,抗生素或皮质类固醇治疗4周内,没有严重的心脏和肾脏功能障碍条件或炎症或自身免疫性疾病。本研究通过第三人民医院医学伦理委员会的成都。所有受试者被要求签署知情同意之前,他们包括在内。

2.2。血清水平金属检测

早上空腹血液样本收集与non-anticoagulant真空采血管从所有参与者和储存在室温下2小时凝固。凝固的血液样本离心机,上层的收获和储存在-80°C到使用。所有血清样本解冻和离心机在使用之前,和商业的血清水平量化金属酶联免疫试剂盒(CUSABIO、武汉、中国)后,制造商的指示。所有化验是由实验者对诊断和临床表现也不清楚。所有样本进行重复来提高检测精度。

2.3。实时聚合酶链反应分析

所有组织标本收集在手术过程中,立即在液态氮冷冻。组织总RNA提取试剂盒试剂(新细胞和分子生物技术、苏州、中国)和反向转录成cDNA使用SureScript合成第一链cDNA工具包(我们光大,苏州,中国)。引物为金属和glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶(GAPDH)是由Sangon设计和合成生物技术(上海,中国)。实时聚合酶链反应(存在)是使用100 ng cDNA执行和SYBR绿色qPCR SuperMix后(我们光大、苏州、中国)协议。基因的mRNA表达比较阈值计算周期(2−ΔΔCT)方法。引物用于放大GAPDH和高飞球的一击是显示在表中S1。

2.4。Hematoxylin-Eosin染色和免疫组织化学

嵌入组织标本用10%福尔马林固定,石蜡,然后分段4μ米厚度和沾hematoxylin-eosin(他)染色。免疫组织化学分析(包含IHC)是如前所述28,29日),包括抗原检索,主要抗体高飞球的一击(亲和力生物科学、常州、中国)和二次抗体孵化。链霉亲和素生物素复杂(南非广播公司)工具包(Weiao生物技术)是用于可视化。组织学变化和表情的金属部分是由两个独立的病理学家观察到的,和图片被选中并显示在每组。

2.5。统计分析

所有的数据都表示为 。单向方差分析(方差分析)或学生的 - - - - - -通常是当变量分布进行测试;否则,克鲁斯卡尔-沃利斯测试或Mann-Whitney测试执行。斯皮尔曼相关测试应用于高飞球的一击的表达和临床变量之间的关系。多变量分析和接受者操作特征(ROC)曲线进行评估的价值水平在预测金属CRSwNP术后复发。统计分析与SPSS统计软件进行版本25.0(美国芝加哥,IBM IL)。一个值< 0.05被定义为具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。基线数据的所有科目

所有参与者的人口学和临床数据显示在表中1。过敏性鼻炎,外围嗜酸性粒细胞计数,百分比显著增加CRSwNP组比CRSsNP和HC组(所有 )。血管评分和Lund-Mackay CRSwNP组的得分都高于CRSsNP组(所有 )。三组之间无显著差异观察其他变量。如表所示2,患者复发组明显高于过敏性鼻炎,外围嗜酸性粒细胞计数和百分比,脉管分数比主组(所有 ),两组之间没有观察到的统计差异的其他变量。

3.2。高飞球的一击CRSwNP血清和组织的水平

作为显示在图1,血清浓度高飞球的一击 CRSwNP组,显著高于CRSsNP集团( , )和HC组( , ),但无统计差异被视为CRSsNP和HC组( )。血清水平显著升高金属复发组相比,主组( vs。 , )。同样,高飞球的一击CRSwNP组水平明显高于CRSsNP ( )和HC ( )组和mRNA表达明显增强复发组相比,主组( ,图2)。斯皮尔曼相关结果表3和图3提出,升高血清金属表现出积极与周边(嗜酸性粒细胞百分比 , )和组织RNA表达水平(金属 , )。的代表,他和包含IHC图像数据4和5、组织水肿、粘膜组织重构和炎性细胞浸润观察CRSwNP CRSsNP病人,特别是CRSwNP复发患者。强烈的免疫反应性金属CRSwNP患者的息肉组织中观察到,而不是CRSsNP患者和高碳钢。高飞球的一击CRSwNP复发病人的表达明显增强比主要的病人,尤其是在鼻腔上皮细胞和粘膜下腺体细胞。

识别预测CRSwNP复发的相关因素:为了探索与CRSwNP复发相关的潜在因素,显著差异的变量被包含在二元逻辑回归分析。结果表明,周边(嗜酸性粒细胞百分比 , )和血清水平(金属 , )与CRSwNP术后复发有关(表吗4)。ROC曲线在图6表明血清高飞球的一击 )提出了一个预测CRSwNP术后复发的潜在价值比外围嗜酸性粒细胞百分比( )。

4所示。讨论

在目前的研究中,我们表明,可溶性形式和膜结合形式的高飞球的一击在CRSwNP升高患者,和形式的高飞球的一击都明显增强CRSwNP复发患者相比,主要CRSwNP病人。统计分析结果表明,血清金属表现出潜在CRSwNP复发的预测价值。综上所述,这些研究结果表明,金属表达造成了CRSwNP复发和血清可能作为一种潜在生物标志物预测金属CRSwNP患者术后复发。

目前,越来越多的证据表明,B细胞生物学和功能深入参与上呼吸道疾病的发病机制包括过敏性鼻炎和CRS (30.,31日]。夸大或B细胞特异表达函数可以驱动T2粘膜炎症在鼻粘膜通过当地抗体生产和其他炎性细胞招聘(32]。高飞球的一击是几个免疫和多发地细胞上表达,作为重要的生物分子在维持B细胞内稳态16,33]。先前的研究发现,金属中外周血和地方组织肿瘤,炎症和自身免疫性疾病,可溶形式的高飞球的一击被证明是一个有前途的生物标志物反映疾病活动和预测预后[14,17,21,33]。最近的一项研究报道,可溶性和组织水平调节在肾移植受者,金属和血清高飞球的一击授予一个潜在的价值区分从稳定的肾移植患者慢性抗体介入拒绝患者19]。Alturaiki等人表明,高飞球的一击表达式是过敏性哮喘患者升高;提高浓度的高飞球的一击激活B细胞上受体信号通路,促进了金属IgE生产然后加重气道炎症反应(22,34]。在目前的研究中,我们观察到两个循环和组织高飞球的一击CRSwNP水平升高的患者相比,高碳钢和血清高飞球的一击水平与外周血嗜伊红血球过多有关。有趣的是,无统计差异的高飞球的一击之间表达CRSsNP患者和高碳钢。因此,CRSwNP Th2免疫反应和嗜酸性粒细胞招募,Th1免疫反应在主导CRSsNP[的发病机制35- - - - - -37]。因此,我们推测,刺激细菌等过敏原,和病毒可能促进金属生产和激活B细胞分化和抗体积累然后三角Th2免疫反应和嗜酸性粒细胞招募,导致过度CRSwNP炎症状态。

虽然医疗和鼻内窥镜手术被证明是有效地提高生活质量和临床结果CRSwNP病人,CRSwNP仍有复发的高速率,特别是在患者组织嗜酸性粒细胞(38,39]。因此,探索与CRSwNP复发相关的风险因素和预测它的复发是极具挑战性和鼻科医生迫切需要。尽管据报道几个变量和指标与术后复发,包括陪同哮喘(10],Charcot-Leyden晶体[40)和外围参数(41),并激活白细胞细胞粘附分子(42),没有可靠的生物标志物在临床实践。在这里,我们首先发现CRSwNP复发患者的表达明显增强,金属和血清水平与CRSwNP术后复发的速度密切相关。统计分析结果表明,血清是一种很有前途的金属值预测CRSwNP复发。以前的出版物显示,Th2反应和嗜酸性粒细胞浸润炎症被认为主要因素与疾病和控制不好复发CRSwNP [35,43,44]。在这项研究中,我们发现外周血嗜酸性粒细胞计数增加CRSwNP病人和与术后复发有关,按照之前的研究。我们还发现血清水平金属与外周嗜酸性粒细胞计数呈正相关,这表明可能促进嗜酸性粒细胞和金属出现复发。最近的一项研究显示,循环高飞球的一击水平升高可以促进Th2炎症和嗜酸性粒细胞的炎症反应在过敏性哮喘34]。高浓度的循环高飞球的一击将使B-dependent Th2激活和细胞因子分泌和促进嗜酸性粒细胞浸润到组织,然后增加CRSwNP患者术后复发的风险。以上数据表明,血清高飞球的一击可能作为一种新的生物标志物CRSwNP术前预测复发的患者。

一些局限性应该说在这个研究。首先,本研究的样本量相对较小,使统计分析的挑战。第二,所有与会者都招募了一个医学中心具有相同的种族背景,增加的风险选择和有限泛化。最后,在国际上没有两厢情愿CRSwNP复发的诊断标准。进一步多中心研究需要更大的样本量和统一的诊断标准确认这项研究的结果。

总之,我们的研究证实了BAFFM和CRSwNP之间的联系。我们首先证明在CRSwNP过度生产,金属与术后复发有关。高飞球的一击可以预测CRSwNP术后复发患者的血清生物标志物和提供一个新颖的干预目标提高精确治疗。

数据可用性

原始数据支持了本文的结论将由作者提供,没有过度的预订。

伦理批准

本研究是依法进行的《赫尔辛基宣言》的建议。人类的成都市第三人民医院伦理委员会批准了这项研究。

同意

所有参与者提供知情同意。

的利益冲突

作者声明没有利益冲突,在准备这篇文章。

作者的贡献

方张写的手稿。Zhenhang徐进行数据分析。他和yj阳光收集样本。Chong赵提供统计数据支持。Jianhui张设计研究。所有作者回顾了手稿,批准了最终版本。方许张和Zhenhang贡献同样这项工作。

确认

这项工作得到了四川省医学研究项目(没有。S2006)。

补充材料

表S1显示了存在的引物序列。(补充材料)