文摘
背景。类风湿性关节炎(RA)和骨关节炎(OA)是常见的关节疾病与当地的变化,以及全身骨骼结构和破骨细胞功能。我们研究了不同溶性炎性刺激这些疾病如何影响osteoclastogenesis和骨吸收体外。方法。人外周血单核细胞来源破骨细胞在骨片培养与首次治疗RA患者和健康对照组血清和滑液从RA和OA患者获得的样本。29个不同的细胞因子的浓度和相关的蛋白质,包括RANKL和功能,分析了液体测试。结果。RA血清和滑液osteoclastogenesis和骨吸收增加。Osteoclastogenesis和活动增加了更多的文化包含OA RA滑液。破骨细胞培养在不同的文化媒体表现出不同的表型,尤其是细胞培养与OA滑膜液通常是更大,有更多的核。一般增加促炎细胞因子在RA滑膜液和血清中被发现。令人惊讶的是,OA滑膜液表现出低水平的osteoclastogenesis抑制细胞因子,如il - 4和il - 10, RA滑液,这至少在一定程度上解释了osteoclastogenesis更明显。没有发现显著差异在RANKL或功能水平。结论。OA和RA驱动器的炎性刺激单核细胞向炎症osteoclastogenesis和改变破骨细胞分化表型。
1。背景
类风湿性关节炎(RA)是一种慢性自身免疫性炎症性关节疾病,目标主要是滑膜组织,但确切的疾病病因和发病机制不明1]。滑膜组织炎症是一种很常见的疾病,会导致二次损伤软骨和骨(1]。局部炎症被认为增加破骨细胞活动,导致局部骨质流失的特定疾病(2- - - - - -4]。在风湿性关节炎,骨侵蚀是位于一个特殊的环境的关节滑膜衬里的相邻骨和骨不是由关节软骨。风湿性关节炎也与继发性骨质疏松症有关,被认为是广义炎症刺激的结果,源自广义影响关节的炎症(5]。骨吸收过剩的特点表明,有多个可溶性和不可溶性信号分子,导致骨吸收过剩RA。
除了类风湿性关节炎,骨关节炎(OA)是另一个更常见的joint-decaying疾病,这也是导致局部骨代谢的变化。OA是整个关节的疾病相关的机械磨损的关节表面和周围组织的参与,软骨下骨、软骨、滑膜。OA包括轻度炎症的一个组成部分(了6])和补体的激活也被认为参与了发病机理(7]。即使在早期OA,局部炎症组件可以看到,在晚期,这种炎症反应增加导致骨代谢[症状和病理变化8]。在OA,增加破骨细胞活动中发现软骨下骨导致结构破坏形成疝坑。变化也可以发现软骨及滑膜的边界,类似于RA。有趣的是,在OA关节硬化和异位osteophytic骨形成也发生在同一网站增加破骨细胞活动(9]。系统性影响骨骼更频繁地出现在OA和继发性骨质疏松症不是一个共同的特点,可能由于低水平的系统性炎性细胞因子(5]。
本地更改在RA和OA患者膝盖如图1。在类风湿性关节炎,关节磨损和变形的快速进展,由于炎症叫做二次腐蚀的关节炎。在初级OA,增加骨退化通常可以被看作是形成疝坑或退行性囊肿。滑膜炎症与软骨和骨骼退化明显可以看到接受膝盖手术的患者。
(一)
(b)
关键球员导致RA和OA骨改变破骨细胞,这通常称为多核tartrate-resistant酸性磷酸酶,TRAcP,染色阳性巨型细胞突起的骨头(10在合适的环境。在体内,osteoclastogenesis从单核破骨细胞前体诱导的巨噬细胞集落刺激因子(csf)和核因子kappa-B配体受体激活剂(RANKL) [11- - - - - -13]。破骨细胞生成在体外通过刺激周边血液单核细胞RANKL和csf (14),它已经表明,监测骨吸收可以受到许多不同的细胞因子的影响,如,il - 6和TNF -α增加和osteoprotegerin(功能)降低(11- - - - - -13]。自发osteoclastogenesis被描述在细胞培养使用人类的样本,从患者炎性疾病,如风湿性关节炎滑膜组织和单核细胞(2,3]。这表明osteoclastogenesis在活的有机体内是一个复杂的、平衡的过程,受多种细胞因子和影响这个环境不容易重现在体外osteoclastogenesis化验。
破骨细胞的大小与他们的活动,大破骨细胞更多地参与病理性骨吸收(15- - - - - -17]。风湿性关节炎、炎症细胞如巨噬细胞和淋巴细胞,存在于滑膜组织发炎,产生溶性炎性细胞因子和不溶性膜结合信号分子,增加居住破骨细胞的活动,但也有可能增加osteoclastogenesis炎症osteoclastogenesis的形式(2]。在炎症或inflammation-enhanced osteoclastogenesis,各种调节炎症细胞产生的细胞因子抑制或增加破骨细胞前体和破骨细胞的分化和激活。也有观测表明,类似于巨噬细胞,可能有一个杰出的表现型的“炎症破骨细胞”,不同于正常的破骨细胞,即。,炎症破骨细胞小,包含更少的原子核,呈现更macrophage-like表型(2,18]。
我们的目标是创建一个模型来研究当地的复杂性和系统性炎症刺激osteoclastogenesis在体外。人类从小说治疗RA患者血清和滑液(SF)患者膝关节假体的操作,以及人类周边血液单核细胞,被用来产生一个可控osteoclastogenesis模型和骨吸收活动模型。这些方法允许我们更好地理解局部和全身性骨质疏松的病理生理学RA和OA在细胞水平上检测关键细胞因子可能部分解释的不同临床特征的疾病。
2。方法
2.1。滑液、血清和细胞的收购
RA血清,用于破骨细胞培养,收集从六个治疗RA患者早期诊断的时候。在这个时间点,患者没有表现出先进的膝骨关节炎,,他们不接受膝盖手术。没有系统的影像学数据可能的低品位KL分类膝盖或其他关节的变化。RA患者诊断根据ACR /欧拉2010标准RA风湿病学家,和他们血清反应阳性的意思 ;射频(类风湿因子) )。健康对照组血清收集从9名健康志愿者。
滑液从十收购RA和OA患者接受全膝关节置换手术。这些病人都是不同的,我们可以从他收集血清样本,如上所述。所有患者在这一组先进至少在膝关节骨关节炎,运营的膝盖和平均Kellgren-Lawrence分数是三个在RA和OA组。所有RA患者血清反应阳性的意思 ;射频 )。RA患者滑膜液的收集,与各种不同的类风湿性关节炎药物治疗已经改变了无数地。病人数据如表所示1。样品在2000 g离心10分钟4°C移除任何可能的细胞和其他未溶解的材料。上层清液储存在-80°C。用于细胞培养,每组三个滑液和血清样本盲目选择。
由于可用的滑液低容量和已知的高滑液中细胞因子的变化,盲目地选择滑液样本汇集成了一个标准化的疾病的环境。
外周血单核细胞从全血分离健康男性志愿者的捐助使用Ficoll-Paque密度梯度离心方法(通用电气医疗集团)根据制造商的指示。血液样本被收集到heparin-coated管,防止凝固。收购后,新鲜血液样本稀释1:1在PBS和分层的Ficoll-Paque解决方案和离心机400克,在室温下35分钟没有刹车。淡黄色的外套被收集和两次暂停50毫升PBS和离心机170克10分钟去除血小板。分离后,单核细胞分数被收集并立即用于细胞培养。在手术过程中细胞没有冻结。
没有额外的创伤是在样本采集造成的。病人给书面知情同意使用他们的样本。协议遵循赫尔辛基宣言的原则,地区和北部Ostrobothnia医院伦理委员会批准了这项研究和组织收集。
2.2。破骨细胞生成的文化与RA和控制病人血清
外周血单核细胞培养的牛骨片在96 -孔板(300 000个细胞/嗯,15井/测试血清样本)和分化为破骨细胞在alpha-MEM包括青霉素100单位/毫升和100年μg / ml链霉素为20%浓度的血清测试,和额外的RANKL 20 ng / ml, csf 10 ng / ml,肝素5000国际单位/毫升0.20 ml /毫升。三个RA和三个健康控制血清(一男两个女性)被用于这些实验。胎牛血清(的边后卫)被用作参考血清,和消极的控制细胞培养与不添加RANKL和csf的边后卫。细胞培养14天,一半的中等每3 - 4天更换一次。PFA的细胞被固定。
骨片从长牛骨的皮质使用金刚石锯到100年μ米6毫米薄圆片和存储在70%的乙醇。在使用之前,他们在PBS彻底冲洗。适合96 - 6毫米圆形片板菜”井精确为细胞培养和细胞提供一个好的基板可以直接固定。
2.3。破骨细胞生成的文化和滑液
外周血单核细胞培养和分化为破骨细胞相同的协议对于RA血清试验(300 000个细胞/嗯,15井/测试样本),但是这一次,汇集的血清代替RA和OA滑液。池滑液添加到细胞培养基浓度的10% 20%健康的人类血清。控制,文化与10%健康的人类血清是同时进行的。滑液的单核细胞和血清测定收集来自同一个捐赠者,但在不同的时间继续捐献的血液量最低安全水平。在这项研究中,从骨关节炎(OA)患者滑液是用作控制由于道德和体积限制获取健康个体的滑液。健康控制膝盖一直建议遏制 (例如,(19),但实际上只有很少的收藏价值。
2.4。细胞因子测定
27个不同的细胞因子和相关蛋白质浓度(IL-1-beta il - 1受体拮抗剂(IL-1ra)), 2、il - 4, IL-5, il - 6, IL-7,引发,IL-9, il - 10、il - 12 (p70) IL-13, IL-15, IL-17, eotaxin,碱性纤维母细胞生长因子(FGF)、粒细胞集落刺激因子(g - csf)集落刺激因子(gm - csf)、干扰素-γ,MCP-1 IP-10 MIP-1-alpha MIP-1-beta,血小板源生长因子(PDGF-BB),咆哮,TNF -α,VEGF进行了分析使用Bio-Rad Bio-Plex Pro™人类细胞因子27-plex化验,Luminex MagPix仪器和Luminex xPotent软件的滑膜液(10 RA和OA)和血清(6 RA和9健康控制)。每组三个样本用于破骨细胞培养实验。血清样本稀释双重和滑液样品4倍。所有的样品都在重复进行测试。
滑膜液浓度功能测试也对RANKL和使用一个表达载体™eBioscience™ProcartaPlex人类RANKL单工装备和人类ProcartaPlex TNFRSF11B™单工工具包功能。测试是为了避免混淆,RANKL和功能,在细胞培养显示,RANKL浓度使用supraphysiological和RANKL已经出现在样本不影响破骨细胞分化的实验。
2.5。破骨细胞分化和骨吸收的分析
固定细胞被沾染了一个陷阱工具包(Sigma-Aldrich)和赫斯特核染色。陷阱阳性细胞与两个或更多核算为破骨细胞。血清中的破骨细胞数量分析是计算使用光学显微镜从整个6毫米直径的骨片。滑液测定,破骨细胞的数量从5数随机位置下的骨片20 x放大。破骨细胞的数量之间的两个化验不具有直接可比性,即使他们来自同一供者,从细胞从血液中提取在不同时间点、不同生物血液中细胞因子水平等因素可能会影响结果。这样做是为了限制在一次献血的量降到最低。基质细胞数量,陷阱染色强度,在破骨细胞的细胞核数量是量化的盲目和光学显微镜分别由两位研究者从每个骨片。陷阱染色强度与基质细胞的存在量化规模0 - 3的名义。由于破骨细胞大小与他们的活动有关,在破骨细胞细胞核的平均数量,这也代表了细胞大小,指望一个0,2 - 3(小),4 - 7(媒介),或者> 8(大)。此外,这些细胞被可视化使用蔡司LSM 780共焦显微镜。
可视化并确认吸收坑在激光显微镜骨片,片的细胞被拒绝使用小型plastic-tipped刷,和坑沾辣根peroxidase-conjugated WGA-lectin抗体和民建联污渍。吸收的面积和体积坑骨片上测量使用奥林巴斯LEXT OLS4100激光显微镜和软件。骨片分为五个部门和一个随机区域(0.422毫米2)从每个部门和分析20 x放大被捕。吸收测量的面积和体积所捕捉到的每个区域。的平均深度三个独立最深的坑面积测量。
与ibm spss统计分析都做了24个项目。一个非参数Mann-Whitney测试是用来计算可能的显著差异。参数之间的相关性评估使用斯皮尔曼等级相关。p值低于0.05被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。细胞因子测定
患者样本用于细胞接触分析为27个不同的炎症相关的细胞因子分析炎症的状态出现在样品(补充文件S1)。每个样本分析单独复制,和平均浓度为每组计算。当比较新颖的治疗RA患者血清,当时收集的诊断、健康控制血清水平升高的细胞因子在RA血清(表中被发现2和图2(一个))。VEGF是增加了8倍,il - 12 (p70) 7倍,il - 6 4倍和IL-9三倍。其他细胞因子升高小于2倍或RA血清没有升高
(一)
(b)
滑膜液中细胞因子水平除了PDGF-BB都高于血清不出所料,验证我们的细胞因子分析的结果。所有的细胞因子在RA科幻与OA科幻升高。最大的增长被认为引发(182倍),IL-1ra(70倍),IL-17 (59-fold) IP-10 (49-fold) IL-1b(39倍),MIP-1a (31-fold) MIP-1b(27倍)、干扰素γ(20倍)- 2和IL-9(15倍),gm - csf (13)、il - 6),“碳足迹”(11倍,PDGF-BB和il - 4),“碳足迹”(11倍,IL-7(10倍),il - 10和tnf(9倍),和其他细胞因子(表5倍或更少2和图2 (b))。
因为它已经表明,射频多路复用的混杂效应免疫细胞因子分析(20.),我们测试的相关细胞因子与射频水平更大的样本。所有血清细胞因子和科幻小说研究的结果发表在补充文件S1。在血清样本,我们发现MCP1之间负相关和射频( , );滑液样本,我们发现tnf之间正相关( , ),il - 4 ( , ),il - 10 ( , ),g - csf ( , ),IL-17 ( , ),和射频可能表明射频干涉分析或射频与疾病活动。由于可能的射频干扰,这些进行解释时应特别谨慎。
完全,细胞因子是大约十倍集中在滑膜液,相比血清。在补充文件S2,斯皮尔曼的每组内的所有细胞因子之间的相关性来阐明所示连接细胞因子网络。很强的相关性之间的不同的细胞因子被认为尤其在RA滑膜液。
功能没有区别在OA和风湿性关节炎患者滑液的浓度。然而,功能显示与KL得分显著正相关( , )在所有分析科幻样品( ,补充文件S1)。其他细胞因子与KL分数没有显示相关。,但一个RA RANKL测量、检测极限下的下降7.04 pg / ml。然而,在所有的细胞培养,RANKL用于supraphysiological 20 ng / ml浓度,所以在破骨细胞分化的差异最可能的结果除了RANKL在滑液细胞因子。RA血清中的浓度RANKL已知1 ng / ml(下21]。
3.2。破骨细胞形态的显微分析
osteoclastogenesis单核细胞生长在不同的实验条件首先是通过光学显微镜分析。测定血清中破骨细胞的数量呈现在图3(一个)。破骨细胞的光学显微镜照片如图3 (c)和3 (d)。单有核TRAcP阳性细胞都没有算在真正的破骨细胞。RA血清增加破骨细胞的数量明显比健康的血清( vs。 )。两个健康控制片被排除在外样本(即由于技术问题。独立的细胞或细胞计数较低)。破骨细胞的数量是相同的与RA血清和文化的边后卫,破骨细胞数量的变化是更大的在样本的边后卫(补充图S3)。的边后卫被用作参考血清,众所周知从先前的研究,它可以用在破骨细胞培养能达到良好的结果。由于低的胎牛血清样本分析为研究人类血清保存细胞,没有进一步的结论可以对osteoclastogenesis和功能的影响。没有指出不同血清细胞形态差异的文化。负控制样本中没有看到osteoclastogenesis文化没有RANKL和csf。
(一)
(b)
(c)
(d)
破骨细胞数量的滑液实验呈现在图4(一)。类风湿性关节炎( )和OA ( )滑膜液的破骨细胞数量显著增加文化与健康相比,血清( )。三个OA和两个RA样品样品由于技术问题而被排除。OA滑膜液增加破骨细胞数量大大超过RA滑液。血清和滑液文化不能直接与对方因为捐赠者的单核细胞被收集在两个不同的时间点限制的捐献的血液量最小和安全。也,使用健康血清不同实验之间的滑液实验血清(20%和10%)。在滑液的实验中,健康血清作为积极的控制,因为在早期血清实验发现合适的。因此,使用的边后卫是避免滑液的保存细胞实验。
(一)
(b)
(c)
(d)
表3描述了从滑液细胞形态学分析;细胞分析视觉由两位研究者独立和盲目。RA和OA滑膜液显著增加了破骨细胞的细胞核数量相比健康血清;然而,OA滑膜液增加了核数远远超过RA。与OA滑膜液培养的细胞形状不规则,大相比,养殖的RA滑膜液的存在。陷阱的破骨细胞染色强度滑液文化低于控制样品。基质细胞的数量也增加了文化与滑液。破骨细胞大小interobserver可靠性(核)被科恩kappa的评估,这表明强有力的协议, , 。示例图像的基质细胞得分补充所示(S4)。数据4 (b)- - - - - -4 (d)出现了破骨细胞的共焦显微镜图像文化与RA和OA滑膜液和健康的血清。
3.3。分析骨吸收
WGA-lectin染色,光学显微镜是用来确认吸收缺损骨片上出现在血清和滑液测试。示例图像WGA-lectin-stained吸收坑的骨片的血清和滑液实验数据所示5 (c)和5 (d)和6 (c)- - - - - -6 (e)。激光显微镜是用来分析吸收的面积和体积和平均深度最深的三个坑的骨片。破骨细胞培养用的边后卫显示吸收积极的控制。
(一)
(b)
(c)
(d)
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
吸收的体积从血清实验如图5(一个)。RA血清增加区域( μ米2vs。 μ米2)和体积( μ米3vs。 μ米3)的吸收比健康控制血清( )。吸收的增加是在相同的比例增加破骨细胞数量之间的血清。没有发现明显的变化的平均深度最深的坑RA和Ctrl血清之间的人物5 (b)中,见过的小区别是可靠的测量精度。
音量滑液的吸收实验如图6(一)。类风湿性关节炎(面积: μ米2体积: μ米3)和OA(面积: μ米2体积: μ米3)滑膜液的吸收增加骨片,相比健康控制人类血清(面积: μ米2,体积 μ米3)( )。OA滑膜液吸收的面积和体积增加,但变化的平均深度最深的坑RA和OA之间在测量精度(图6 (b))。滑膜液增加的深度最深的坑相比Ctrl血清。坑的深度控制血清的滑液测定是一样的与健康控制RA血清测定血清。之间的显著差异之间的平均深度最深的坑健康血清和所有滑液样品被认为( )。相同比例的增加吸收的破骨细胞数量的变化。一个破骨细胞的吸收能力不同团体之间是一样的。
4所示。讨论
本研究的目的是调查在体外炎性因子的影响出现在RA血清和RA和OA滑膜液osteoclastogenesis和破骨细胞的骨吸收。主要发现新兴从我们的实验,与健康对照组相比,炎症刺激出现在小说治疗RA患者血清显著增加了通用osteoclastogenesis和骨吸收。在现实生活中也会出现类似效果导致二级RA患者的骨质疏松症(5,22]。因为在RA肥厚性滑膜发炎组织RANKL的主要来源和其他炎性细胞因子(18),侵蚀往往开始于perichondral滑膜组织接触的地方骨头不受关节软骨。在某些RA患者,关节会发生衰变非常快。骨侵蚀是由破骨细胞(23]。滑膜细胞不太可能能够再吞入骨头,因为他们表现出更多的巨噬细胞——比一个osteoclast-like表型,因为它们是TRAcP 5不是5 b积极24]。我们的数据表明,系统性细胞因子可能在RA有助于增强骨吸收,所以我们接下来想更详细地研究当地环境相邻关节滑液的准备。
先前的研究已经检查了增加促炎细胞因子在RA和OA滑膜液和血清,发现了和增加细胞因子水平与疾病严重程度(25- - - - - -27]。我们的细胞因子测定数据(表2,图2和补充文件S1)是按照以前的文献。我们整个细胞因子数据(补充文件S1功能)之间的连接滑液和患者KL得分。在早先的研究中,高浓度的功能表达已经被证明在骨关节炎软骨受损28]。在我们的滑液和血清样本,主要促炎细胞因子的水平增加最大的增加与RA相关细胞因子,正如所料,如引发,il - 6, IL-17和VEGF。测量细胞因子大约十倍比血清集中在滑液。滑液的促炎细胞因子通常被认为是当地生产的发炎滑膜组织炎性细胞和有机锡为血清。我们看到,这项研究的结果表示复杂的相互关联的细胞因子网络的影响在不同条件下找到。下面,我们通过这些网络如何解释我们目前的详细结果。
RANKL被认为是破骨细胞分化的主要因素29日]。来验证我们的试验,完全剥夺RANKL在负控制样品抑制osteoclastogenesis也在我们的研究中;因此,我们的数据认为osteoclastogenesis RANKL信号是最重要的元素。评估其他细胞因子和趋化因子的影响出现在患者样本进行了测试,supraphysiological RANKL浓度用于规范化自然RANKL的参与破骨细胞分化。各种细胞因子,促进osteoclastogenesis通过RANKL或另一个途径是相对已经众所周知。
细胞因子增加osteoclastogenesis包括TNF -α、il - 1、il - 6、IL-7引发,IL-15, IL-17 [11)都是发现在RA科幻样品浓度增加而OA。肿瘤坏死因子-α、il - 6、IL-7和IL-17也增加RA血清与健康对照组相比。连同上述细胞因子,其他各种疾病分子和蛋白质如c反应蛋白,VEGF, IL-11, IL-23, IL-34 RA也增加osteoclastogenesis RANKL的独立11,30.,31日]。其他人没有测试,但显著增加VEGF的检测RA滑膜液样本。
我们可以看到pro-osteoclastogenic RA血清的影响破骨细胞培养破骨细胞数量的增加(图3),多的坑,再吸收面积(图5与健康对照组相比。更高的滑液和血清细胞因子的总量进一步增加了osteoclastogenesis。主要可能的解释因素增加il - 6和引发高架在OA和RA滑膜液(表2)。il - 6可以增加破骨细胞的数量(32]除此之外引发刺激osteoclastogenesis和增加他们的吸收活动(33,34]。有趣的是,更高的总数量的促炎细胞因子在RA滑膜液样本,OA滑膜液相比,没有直接导致更强的破骨细胞分化或更高的吸收活动。这可能是由于osteoclastogenesis-inhibiting因素。我们发现il - 10浓度的增加在RA血清样本与健康对照组相比,和干扰素-γ、il - 4和il - 10在RA滑膜液样品相比,OA。虽然这些结果进行解释时应特别谨慎由于低数量的样品和il - 4和il - 10显示射频干涉测量,这些都显示在一些条件下减少osteoclastogenesis [11]。IL-13, il - 4和il - 10所有驱动单核细胞M2巨噬细胞(35];因此,复杂的职业和antiosteoclastogenic影响驱动同时分化和活动。有趣的是,早期的研究也显示浓度的增加其他osteoclastogenesis-inhibiting因素,正-α、IL-3 IL-27, IL-33在RA患者样本36- - - - - -39]。在一起,这些发现可以解释的一些差异在RA和OA骨质流失。因为数量有限的样品在我们的研究中,血清和滑液文化在两个不同的时间点,我们看到我们的结果应该被在一般水平。还需要进一步的研究详细的信号事件的单个细胞因子。
我们发现的证据形态差异的破骨细胞生成在RA和OA滑膜液并相信这种变化在这些细胞的表型是由于炎症osteoclastogenesis [2]。破骨细胞培养与OA滑液和含有更多核比那些与RA滑膜液培养。有人建议,在炎症osteoclastogenesis osteoclastogenesis促炎细胞因子导致增加,但导致破骨细胞保持更多macrophage-like表型少核和小尺寸(2,18]。这反过来会影响骨吸收的规定与其他炎症细胞和沟通。有趣的是,当吸收坑卷分析,细胞形态学的变化并不影响该地区再吸收由一个破骨细胞的骨再吸收体积变化的直接结果是增加破骨细胞的数量。细胞培养是通过使用supraphysiological RANKL水平评估其他炎性细胞因子的影响,以及在这种情况下,高水平的单核细胞分化调节细胞因子导致减少osteoclastogenesis与RA滑膜液样品相比,OA滑膜液用更少的抑制因素。
作为我们研究的局限性,我们承认,RA和OA非常可变的疾病,我们看到这个病人之间的细胞因子水平的变化。即使我们的实验进行细胞从一个捐赠,我们所期望的结果是类似于细微变化如果供者细胞从一个不同的健康。然而,我们必须小心的解释这些数据。尤其是细胞来自RA和OA患者可以给不同的反应由于启动炎症环境或遗传因素。本研究中使用的捐赠者没有任何风湿性疾病或骨关节炎。在进一步的研究中,还应考虑不同的破骨细胞前体捐助者。然而,这项研究显示了一个示例的当地RA和OA炎性环境可以改变健康的个体细胞的行为。
我们的研究将会受惠于首次治疗OA控制RA血清样本和健康的科幻控制假肢的晚期类风湿性关节炎的膝盖在时间的操作。这是由病人的可用性材料OA和健康对照组由于道德原因。OA的诊断主要是在初级卫生保健、完成数据我们没有访问,几年前需要在专门的医疗治疗。也确定将分类作为首次治疗OA患者将会极其困难的病人寻求医疗帮助不同阶段的疾病,因为症状不经常与放射性的发现,和第一行的非甾体类抗炎药物治疗,可以在药店买了柜台。OA患者经过手术治疗是一个异构选择组少。低样品卷迫使我们池滑液细胞培养的样品,我们也可以考虑作为我们研究的一个限制。
5。结论
在这个初步研究中,我们展示了地方和系统性炎性细胞因子在RA有直接影响破骨细胞的分化和骨吸收能力在体外。RA血清和滑液增加破骨细胞分化和骨吸收能力,相比健康的血清。破骨细胞分化和骨吸收增加更在OA滑膜液的存在,可能是由于低水平的单核细胞分化调节细胞因子。这些数据可以帮助我们更好地理解这些疾病和提醒我们如何复杂的炎症过程。进一步研究炎症osteoclastogenesis需要获得理解的最佳治疗干预措施。
缩写
| acpa: | Anticitrullinated蛋白抗体 |
| ACR /欧拉描述: | 美国风湿病学院/欧洲联盟对风湿病 |
| 任务: | 控制 |
| 轻拍: | 3,3 - - - - - -Diaminobenzidine |
| 的边后卫: | 胎牛血清 |
| FGF: | 纤维母细胞生长因子 |
| g - csf: | 粒细胞集落刺激因子 |
| gm - csf: | 集落刺激因子 |
| 干扰素: | 干扰素 |
| IL: | 白介素 |
| KL膝盖分数: | Kellgren-Lawrence膝盖得分 |
| MCP-1: | 单核细胞化学引诱物蛋白1 |
| csf: | 巨噬细胞集落刺激因子 |
| 办公自动化: | 骨关节炎 |
| 功能: | Osteoprotegerin |
| OPN: | 骨桥蛋白 |
| PBS: | 磷酸盐 |
| PDGF-BB: | 血小板源生长因子 |
| PFA: | 多聚甲醛 |
| 类风湿性关节炎: | 类风湿性关节炎 |
| 射频: | 类风湿因子 |
| RANKL: | 核因子k -Β配位体 |
| 咆哮: | 调节激活,可能正常T细胞表达和分泌 |
| SD: | 标准偏差 |
| 科幻小说: | 滑液 |
| 编剧: | 小麦胚凝集素。 |
| 肿瘤坏死因子-α: | 肿瘤坏死因子-α |
| TRAcP /陷阱: | Tartrate-resistant酸性磷酸酶 |
| VEGF: | 血管内皮生长因子 |
| 编剧: | 小麦胚凝集素。 |
数据可用性
使用的数据来支持本研究的结果中包括文章和补充材料。
伦理批准
没有额外的创伤是在样本采集造成的。病人给书面知情同意使用他们的样本。协议遵循赫尔辛基宣言的原则,地区和北部Ostrobothnia医院伦理委员会批准了这项研究和组织收集。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
杰,JH, SP和OV进行科学实验和分析数据。JH和PL组织和收集病人样本。特里、OV和PL提供设施。杰,JH, SP和PL主要写的手稿文本。所有作者参加了研究设计,数据的解释,和审查的手稿。所有作者都阅读和批准的手稿和满足作者的要求。
确认
作者想感激地承认中村Miho博士和教授山下式他们研究所的生物材料,生物工程,东京医疗和牙科大学,让我们用激光显微镜在这项研究。MD Roni Pernu感谢帮助收集健康控制血清样本。医学统计学家帕斯Ohtonen先生承认统计的建议。这项研究是由北部Ostrobothnia医院区研究经费和奥卢大学医院。JL由埃米尔Aaltonen基金会支持,JH芬兰医疗基金,SP部分由风湿性疾病研究基金会和莫雅Lisko基础。除了资金,资助机构没有任何其他角色的设计研究或收集、分析和解释数据,或者在写手稿。
补充材料
补充1。S1表;从血清细胞因子数据和滑液样本。
补充2。S2表:每组样本内细胞因子之间的相关性。
补充3。图:S3和胎牛血清的破骨细胞数量的文化。
补充4。S4文档:示例图像的基质细胞得分滑液实验。