文摘
背景和目的。几个组成部分Cayratia粳稻(CJ)如芦丁和槲皮素抗炎效果,然而它的功能在溃疡性结肠炎(UC)仍有待澄清。本研究的重点是调节CJ对UC的影响以及分子机制CJ调节巨噬细胞极化在加州大学。方法。目标与CJ组件和加州大学,分别获得通过在网上分析和交叉目标选择进行通路富集分析。RAW264.7细胞被刺激与脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞M1。表达式的巨噬细胞极化M1 CD11b标志和M2标记CD206测量来确定巨噬细胞的表型。鼠标模型处理葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导结肠炎观察CJ在加州大学的影响在活的有机体内。结果。的在网上分析表明TLR4的重要意义及其下游MAPK / NF -κB通路在UC CJ的调节效应。此外,实验数据表明,CJ可以促进M2巨噬细胞极化但缓解免疫炎症和降低结肠损伤DSS-evoked UC模型。另外,CJ可以抑制TLR4的表达/ MAPK / NF -κB信号通路来增强M2-like极化。结论。因此,CJ可能起到抗炎作用和抑制作用在加州大学通过抑制TLR4 / MAPK / NF -κB通路和随后M1-like巨噬细胞极化。
1。背景
溃疡性结肠炎(UC)影响数以百万计的人在世界范围内,由广泛的特色结肠损伤包括结肠粘膜和粘膜下层的层(1,2]。主要临床表现为腹泻、腹痛、血脓的凳子上,里急后重,真正影响病人的生活质量(3]。据报道,遗传和环境因素影响的起始加州大学(4]。大多数UC例接受药物治疗首先诱导缓解和之后保持corticosteroid-free缓解,需要使用不同的药物,如口服或直肠5-aminosalycilates管理局(5-ASA) [5]。然而,考虑到加州大学的发病率增加,鉴定新药正在UC治疗(6]。
中国传统医学(中医)负有巨大的责任对UC的治疗7,8];例如,Guchang Zhixie湾是一种常用的中药治疗UC的(9]。Cayratia粳稻(CJ)是一种多年生葡萄树属于葡萄科并已广泛应用在中国民间医药治疗黄疸,痢疾,水肿,风湿痛,丹毒,血尿10]。然而,CJ的角色在加州大学现有文献很少报道,这需要进一步探索。两个主要组件的CJ,芦丁和槲皮素,可用于治疗炎症性肠病(11]。芸香苷还可以抑制脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞炎症通过toll样受体的抑制4 - (TLR4) NF -κB信号(12]。此外,公布了一项研究,TLR4单独股票关联与加州大学(13]。另一项研究揭示了芦丁和槲皮素的组件花椒果皮中提取,通过调节改善实验性结肠炎TLR4和TLR4-associated通路14]。此外,超表达TLR4可能诱导肿瘤细胞微环境的形成支持增长和加速colitis-associated肿瘤发生[15]。TLR4 / NF -κB信号通路可以诱导巨噬细胞活化,重要的是在LPS诱导的急性炎症巨噬细胞(16,17]。总的来说,我们的研究网络药理学和细胞实验来分析CJ治疗UC的药理机制。
2。材料和方法
2.1。药物目标获取
通过PubChem数据库(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/),互动芸香苷的化学结构模型,绿原酸、槲皮素分别检索,下载和三维构象异构体是药效团,随后上传到PharmMapper数据库(http://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper/)来预测目标。通过UniProtKB数据库(https://www.uniprot.org/),官方的基因符号对应目标(限于”智人检索”)。从数据库,供(http://ctdbase.org/),芦丁的相应目标,绿原酸、槲皮素。
2.2。数据集分析疾病目标识别
我们筛选2 UC-related微阵列数据集(GSE48958和GSE65114)从地理数据库。GSE48958数据集包含结肠粘膜样本8正常人和7活跃UC患者,这是配备平台GPL6244注释文件。GSE65114数据集包含12个正常人结肠粘膜样本和16个活跃的UC患者,这是配备平台GPL16686注释文件。与R语言“limma”包中,微分分析筛选差异表达的mrna有意义 作为筛选条件。
2.3。药物和疾病常见的收购目标
使用jvenn工具(http://jvenn.toulouse.inra.fr/app/example.html),上述CJ-related目标分割的GSE48958的分析结果和共同目标,GSE65114数据集获取药物病候选目标进行后续分析。
2.4。京都基因和基因组的百科全书(KEGG)富集分析
R语言“clusterProfiler”包采用KEGG富集分析候选人,紧随其后的是完整的圆的绘制KEGG富集分析。
2.5。可视化和蛋白质相互作用网络建设(PPI)
候选目标是通过字符串的PPI网络数据库,物种有限”智人。”程度值显示连接到其他节点的数量的监管网络。目标排名根据程度值显示前15名的目标。此外,“CJ-component-target”网络图完成后采用Cytoscape软件(v3.8.2)。
2.6。免疫渗滤分析
根据结肠粘膜的样品12个正常人和16个活跃的UC患者GSE65114数据集,基因表达数据检索和分析CIBERSORT算法分析的免疫渗透。每个样本中免疫细胞分数计算,1000次计算机模拟,通过它只在水平的结果 被保留。CIBERSORT,反褶积算法由纽曼et al .,可以描述复杂的细胞成分组织基于归一化基因表达谱(18]。该方法利用量化丰富的特定类型的细胞,由fluorescence-activated验证细胞排序(流式细胞仪)。基因表达数据与标准注释被上传到CIBERSORT门户,和操作的算法LM22签名和1000年排列。
2.7。药物提取和细胞培养
CJ (Bozhentang中药、安徽,中国;http://bozhentang.1688.com/用自来水洗净,用ultramorphic水冲洗三次,晒干,碾碎。石油醚浸泡7 d后的脂肪去除,该药物是干而石油醚过滤。萃取是由溶剂萃取和浓缩。这是溶解在碱性高浓度乙醇(三卷 ;95%浓度)和沉积物被在上层清液收集。浮在表面的解压缩和集中,CJ原油物质干60°C至恒重。细菌过滤使用0.22μm过滤器。脂多糖(LPS);来自美国Sigma-Aldrich L2630)大肠杆菌0111:B4。
小鼠单核巨噬细胞RAW264.7从美国采购类型文化集合(tib - 71,美国)。细胞被孵化的杜尔贝科修改鹰介质(美国热费希尔科学11995040)附加到10%胎牛血清(10099年,热费希尔科学)5%的股份有限公司2和37°C。
2.8。细胞转染
TLR4 CRISPR激活质粒(sc - 423419法案)购买的圣克鲁斯。RAW264.7细胞第一次被消化和播种24-well盘子成长为单层,然后,培养基被丢弃。转染是2000年根据Lipofectamine执行指令(11668 - 019年,表达载体,热费希尔科学、美国)。细胞转染与TLR4超表达向量(oe-TLR4)或负面(NC)控制。转染后细胞培养在37°C和5%的公司26到8 h,然后在完全培养基培养24小时。接下来,细胞治疗有限合伙人(1μ克/毫升)或LPS结合CJ (200μ后24 h g / mL),为后续实验提取RNA和蛋白质。
基于不同的剂量,细胞处理有限合伙人(1μg / mL),低剂量的CJ (50μg / mL),中等剂量CJ (100μ大剂量的CJ (200 g / mL)μg / mL),和/或oe-TLR4。
2.9。一氧化氮(NO)产品的决心
没有一代培养基是由格里斯方法基于亚硝酸盐积累。总之,RAW264.7细胞( 细胞/)被播种在96孔板和LPS处理(1μ克/毫升)或LPS结合CJ(100,或200μg / mL)单独使用介质作为数控。孵化24小时后,孤立的上层清液与同等体积的混合是格里斯试剂(美国Sigma-Aldrich G4410)和孵化了20分钟。吸光度检测在545 nm利用标仪(美国BioTek Winooski, VT)。亚硝酸盐浓度计算使用标准曲线,计算了在不同浓度的纳米的帮助2解决方案(0,20μ40米,μ60米,μ米,80μM,分别),没有计算浓度的亚硝酸盐标准曲线。
2.10。酶联免疫分析法(ELISA)
使用酶联免疫试剂盒(Beyotime,中国),TNF -α(PT512), il - 1β(PI301)和il - 6 (PI326)在细胞水平测定。RAW264.7细胞被播种到24-well板块 细胞/好,CJ(50, 100年和200年μg / mL)添加到细胞有或没有有限合伙人(1μ24 h g / mL),后上层清液收集TNF -的决心α,il - 1β和il - 6水平。
鼠标TLR4酶联免疫试剂盒(美国寿命生物科学LS-F26350)是用于检测TLR4在细胞的蛋白质含量。使用NF -κB p65 (pS536 +总)酶联免疫试剂盒(ab176663, Abcam,英国),NF -的蛋白质含量κnf - B p65和磷酸化(p)κB细胞中p65测量。物的蛋白质含量和p-JNK测量细胞中使用JNK1/2 (pT183 / Y185 +)酶联免疫试剂盒(ab176662)。蛋白质水平的人们,p-p38、ERK和p-ERK测量使用p38 MAPK在细胞α(pT180 / Y182 +)酶联免疫试剂盒(ab221013)和ERK1 (pT202 + Y204)和ERK2 (pT185 + Y187) +总ELISA试剂盒(ab176660),分别。
2.11。定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)
从培养RAW264.7细胞总RNA提取利用试剂盒(15596026,英杰公司)。然后,1μ克总RNA反转录成互补DNA(互补)采用PrimeScript™RT试剂盒与gDNA橡皮擦工具(RRO37A、豆类、日本)。RT-qPCR建成一个ABI7500定量PCR仪(美国热)应用SYBR®预混料聚合TM(RNaseH + Tli)工具包(RR820A、豆类)。与β肌动蛋白作为内部参考,2- - - - - -ΔΔCt对RNA定量法。引物补充表中显示1,这是由Sangon生物技术(上海,中国)。
2.12。免疫印迹分析
提取的总蛋白是由10% SDS-polyacrylamide凝胶电泳分离,然后转移到PVDF膜。与5%脱脂牛奶在室温下阻塞后,细胞膜是孵化与特定抗体的兔子anti-CD206 (ab64693, 1: 1000年,Abcam),兔子anti-CD11b (ab133357, 1: 1000年,Abcam),兔抗β肌动蛋白(# 4970,1:1000年,春秋国旅,美国)一夜之间在4°C,然后用二次孵化抗体加载缓冲区在室温下1 - 2 h。增强化学发光的解决方案(35050年,热)下降到膜当时暴露在凝胶成像系统(ChemiDoc™XRS;美国Bio-Rad)。β肌动蛋白作为内部参考,和蛋白质的灰度值乐队使用“ImageJ”软件进行了分析。
2.13。UC小鼠模型由葡聚糖硫酸钠(DSS)
36个雄性C57BL / 6小鼠(20 - 25克)从北京获得至关重要的河实验动物科技有限公司有限公司(scxk - 2021 - 0011,北京)。所有老鼠都安置在实验动物设施至少1周之前实验和保存在塑料笼子木床单被褥,光/暗周期的12/12 h在室温下( °C),自由地用一个标准的饮食。
以前的研究已经表明UC小鼠模型可以成功地建立了7天2.5% DSS的解决方案(19,20.]。根据以往的文献方法,我们成功地建立了UC小鼠模型。六个随机选择的老鼠喝7天2.5% DSS解决方案,和150毫克/公斤/天5-aminosalicylic酸(5-ASA;A3537 Sigma-Aldrich)口服药物在8 - 14天。其余的老鼠给7天2.5% DSS的解决方案,给出了25岁,50岁,100毫克/公斤/天的CJ填喂法,分别。饮用水和食品提供了实验期间,体重,粪便一致性和直肠出血每天记录。所有动物实验进行了符合指南的护理和使用实验动物国家卫生研究院和出具动物伦理委员会批准常熟医院隶属于南京中医药大学(njucmcsh - ae - 2021 - 1123)。
2.14。疾病活动指数(DAI)
体重、凳子特征和粪便隐血试验期间记录。傣族是计算的评分系统补充表所示2。
2.15。Hematoxylin-Eosin(圆))染色
小鼠安乐死后,结肠段(约2 ~ 3厘米长)是结肠的解剖和洗之前计算长度从肛门盲肠。部分被切割(5μ米厚度),与2分钟苏木精和伊红染色解决方案1分钟。Histomorphological改变光学显微镜下观察(xp - 330, Bingyu光学仪器,上海,中国。总损伤分数决定消费的基础上杯状细胞(21]。
2.16。脾细胞的分离
老鼠被杀后,脾脏是孤立的,其次是脾的权重。脾细胞通过研磨(20.]。最后,调整细胞浓度 使用流缓冲毫升,这对后续的实验被选中。
2.17。流式细胞术
评估在脾细胞巨噬细胞免疫调节的子集,流式细胞仪分析标准的协议。CD11b被选为马克M1表型,CD206被选为马克M2表型。简单,鼠标RAW264.7巨噬细胞和脾细胞第一次孵化一个增强的疣状透化作用缓冲8分钟。然后,RAW264.7巨噬细胞被孵化的抗原呈递细胞(APC),共轭CD206 (MMR)和藻红蛋白(PE)共轭CD11b单克隆抗体(M1/70、ab25482 Abcam)对巨噬细胞的子集进行评估。
小鼠脾细胞与PE-conjugated孵化F4/80单克隆抗体(ab105156 Abcam)在4°C 1 h和APC-conjugated CD11b单克隆抗体(M1/70, ab25482 Abcam)和APC-conjugated CD206 (MMR)单克隆抗体(美国BioLegend 141707)在4°C 1 h。的F4/80+CD11b+细胞被确定为M1 F4/80时巨噬细胞+CD206+细胞被确定为M2巨噬细胞。分析使用流式细胞分析仪(美国贝克曼)。
2.18。免疫组织化学(包含IHC)分析
组织部分脱蜡、水化后,抗原修复了柠檬酸钠缓冲(0.01米, ),和内源性生物素被应用包含IHC生物素阻止工具包。接下来,一夜之间,组织部分被孵化与兔子anti-CD86 (13395 - 1 - ap 1: 100年,Proteintech,中国)和兔anti-IRF4(11247 - 2美联社1:100年,Proteintech)在4°C。组织部分被孵化的HRP-conjugated山羊anti-rabbit二级抗体(1:1000年,ab6721 Abcam) 1 h,沾一点免疫组织化学显色工具包和苏木精和可视化在显微镜下。积极的颜色显示的平均光密度值检测使用Image-Pro +图像分析软件。积极的蛋白表达与5 high-fold视野定量分析。积极的表达被证实为阳性细胞的百分比,并取平均值。
2.19。统计分析
处理所有数据使用SPSS 21.0统计软件(美国纽约阿蒙克)和测量数据的形式表示 。比较两组进行使用 - - - - - -测试和比较在多个团体应该由单向方差分析。一个 显示显著差异。
3所示。结果
3.1。在影响UC CJ的潜在机制
CJ的主要组件包括芸香苷、绿原酸、槲皮素。由于没有数据库显示CJ的直接目标,我们预测的目标通过构建药效团的主要组件。药效团模型是基于药效特征元素,也就是说,类似物具有相同药理作用。首先,我们检索互动芸香苷的化学结构模型、绿原酸、槲皮素,分别通过PubChem数据库(图1(一))和三维构象异构体和上传下载3 d构象异构体的预测目标PharmMapper数据库。芦丁的同时,相应的目标,绿原酸、槲皮素从CTD数据库获得,前50名的选择根据交互计算排名。鉴于PharmMapper和CTD数据库检索的结果,110,111,和99年相应目标的芦丁、绿原酸、槲皮素和,分别与235年药物靶点。此外,我们获得UC-related数据集GSE48958 GSE65114通过地理数据库,与11170年和6739年差异表达目标识别使用 阈值(数字1 (b)和1 (c))。与疾病药物目标分割的目标,产生了60候选目标(图1 (d))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
(h)
此外,60的候选目标导入到数据库字符串PPI(图分析1 (e)),排名根据学位的价值。15大目标是表皮生长因子受体,RELA BCL2L1, CCND1, ESR1, IL10, FN1, STAT5A, TLR4 ANXA5, CXCL8,安全系数,ICAM1 NFE2L2, IRS1(图1 (f))。基于60候选目标,使用Cytoscape drug-component-target网络地图绘制软件,和中间的12个目标(AHR, HCK CCND1, PARP1, NFE2L2, CXCL8, RELA,谷歌价格指数,ZPR1, TLR4 PRM1,和SKP1)担任共同目标至少两个组件(图1 (g))。
此外,KEGG富集分析描述,60候选目标主要富集在炎症和感染相关性途径,以及nf -κB信号通路和AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症,等等。同时,它可以看到,RELA通路浓缩从高到低,安全系数,TLR4通路(图1 (h))。结合数据1 (f)- - - - - -1 (h),这两个目标,RELA和TLR4更关键,多种药物的目标组件。芦丁可以阻止TLR4-NF -κB通路抑制LPS-induced巨噬细胞炎症(12]。
从上面提到的,我们假设CJ可能发挥作用在加州大学通过抑制TLR4及其下游NF -κB / MAPK信号通路。
3.2。巨噬细胞极化在加州大学的重要作用
鉴于抑制巨噬细胞极化的保护对DSS-induced结肠炎损伤(22),我们进一步推测是否CJ的具体途径提高调解TLR4-NF——加州大学κB / MAPK通路与巨噬细胞极化有关。我们分析了免疫渗透在UC-related数据集GSE48958 CIBERSORT算法和免疫细胞分数(数字计算2(一个)和2 (b))。结果表明,B细胞、T细胞和巨噬细胞的大部分控制和加州大学样本,但差异指出关于免疫细胞组件。与正常样本相比,比例的M0、M1、M2巨噬细胞在加州大学样本不同。免疫细胞的进一步微分分析组件在正常和加州大学样本显示相同的结果,与M0巨噬细胞和巨噬细胞M1在加州大学比例明显高于样本,而巨噬细胞M2是相反的(图2 (c))。上述结果描述,巨噬细胞极化可能在加州大学扮演着重要的角色。
(一)
(b)
(c)
3.3。CJ促进M2 DSS-Induced UC小鼠巨噬细胞的极化
接下来,我们构建了一个鼠标DSS-induced UC模型探索CJ的抗炎作用及其对巨噬细胞极化的影响,与5-ASA担任加州大学积极控制治疗。我们首先检查小鼠的体重和结肠长度的变化,发现降低体重和结肠的长度缩短DSS-treated老鼠控件(数据相比3(一个)和3 (b))。傣族DSS-treated分数提高的老鼠相比,控制(图3 (c))。重要的炎性细胞浸润,地穴损失,粘膜层的破坏,和水肿在DSS-treated小鼠,观察相应的总伤害增加(图3 (d))。5-ASA和CJ治疗抑制DSS-induced效果,和CJ显示明显存在剂量依赖的相关性的影响。这表明,CJ可以剂量依赖性抑制DSS-induced UC小鼠的发生。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
流仪结果描绘F4/80明显升高+CD11b+细胞(巨噬细胞M1)和特别是F4/80有所下降+CD206+细胞(M2巨噬细胞)的脾组织DSS-treated老鼠。5-ASA或CJ抑制DSS-induced F4/80积累+CD11b+细胞,提升F4/80的比例+CD206+细胞(图3 (e)和补充图1)。检测CD86的表达和IRF4小鼠结肠组织中包含IHC显示增加CD86表达和减少IRF4表达式DSS-treated老鼠,而减少CD86表达和高架IRF4表达式5-ASA和CJ治疗后被发现(数字3 (f)和3 (g))。
最终,CJ可以抑制DSS-induced M1在UC小鼠和诱导巨噬细胞极化M2巨噬细胞极化。
3.4。CJ增强了抗炎M2巨噬细胞的表型
探讨抗炎活性CJ施加通过促进M2巨噬细胞表型或抑制M1表型,我们使用LPS刺激RAW264.7细胞,然后检查CJ M1中巨噬细胞的作用。LPS-stimulated巨噬细胞产生大量不,而细胞内不水平逐渐下降后治疗与CJ浓度时尚(图4(一))。LPS刺激巨噬细胞增加了细胞内il - 6、il - 1β和肿瘤坏死因子-α水平,而CJ剂量依赖性降低这些炎性细胞因子的水平(图4 (b))。的mRNA表达炎性细胞因子以RT-qPCR与ELISA结果(图是相一致的4 (c))。此外,有限合伙人增加细胞内的蛋白表达M1巨噬细胞标记CD11b CD206 M2巨噬细胞标记和减少;相对地,CJ治疗减少CD11b蛋白表达和增加CD206蛋白表达(图4 (d))。此外,流动仪结果描述,LPS刺激增加CD11b-positive细胞水平,减少CD206-positive的细胞,而CJ的治疗导致了相反的趋势(图4 (e)和补充图1 b)。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
总之,我们的研究表明,CJ施加抗炎活动通过抑制M1巨噬细胞分化,促进M2巨噬细胞极化。
3.5。CJ促进M2极化缓解免疫炎症通过抑制TLR4 / MAPK / NF -κB通路
接下来,我们调查是否CJ随后缓解免疫炎症通过调节巨噬细胞极化的封锁TLR4 / MAPK / NF -κB通路。TLR4和比率的信使rna和蛋白质水平的磷酸化/总p38的兵,物和NF -κB p65蛋白在LPS处理后的巨噬细胞显著增加。CJ治疗上述信使rna和蛋白质水平降低和比率的磷酸化/ LPS-treated巨噬细胞总蛋白水平。进一步reexpression TLR4增强磷酸化/总p38的比率,兵,物和NF -κ(图B p65蛋白水平5(一个)- - - - - -5 (c))。因此,CJ可以抑制MAPK / NF -κ通过抑制TLR4 B途径。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)
我们还研究了CD11b和CD206蛋白的表达。有限合伙人治疗后,CD11b在巨噬细胞蛋白表达增加,而CD206蛋白表达减少。的CJ逆转LPS-induced CD11b和CD206蛋白的变化,并进一步TLR4 reexpression CD11b蛋白表达增加但CD206蛋白表达降低CJ(图的存在5 (d))。另外,有限合伙人治疗增加了细胞内il - 6、il - 1β和肿瘤坏死因子-α水平,促进了没有。然而,CJ治疗减少LPS-induced炎性因子和没有的生产,而超表达TLR4减毒CJ(数据的影响5 (e)和5 (f))。此外,流动仪结果描述,LPS刺激增加CD11b-positive细胞水平,减少CD206-positive细胞。然而,CJ治疗减少LPS-induced CD11b-positive增加细胞,但升高LPS-caused减少CD206-positive细胞,而超表达TLR4减毒CJ(图的影响5 (g)和补充图1 c)。
最终,CJ缓解免疫炎症通过促进M2巨噬细胞极化通过抑制TLR4 / MAPK / NF -κB通路。
3.6。CJ块TLR4 / MAPK / NF -κB通路DSS-Induced UC小鼠
进一步验证CJ DSS-induced UC小鼠的作用机制,我们用ELISA检测TLR4的表达蛋白质的变化相关/ MAPK / NF -κB通路。结果阐述了TLR4蛋白质含量和磷酸化的比率/总p38的兵,物和NF -κB p65蛋白水平是增强DSS-treated小鼠结肠组织中,由CJ治疗剂量依赖性降低数据6(一)- - - - - -6 (e))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
综上所述,CJ可以抑制TLR4的表达/ MAPK / NF -κB pathway-related蛋白质DSS-induced UC小鼠结肠组织的。
4所示。讨论
经常使用DSS诱导的小鼠模型加州大学(23]。之前的一项研究报道,DSS-induced UC的发病机制可能与巨噬细胞极化的不平衡(24]。在这项研究中,我们调查是否和CJ如何影响巨噬细胞极化在加州大学使用DSS-induced UC模型的发展。
通过CJ的成分分析,我们发现CJ的主要组件是芦丁,绿原酸、槲皮素。芦丁是生物类黄酮存在于不同的水果和蔬菜,这是公认的提供疗效DSS-induced急性结肠炎(25]。绿原酸具有强大的抗氧化剂,抗菌,消炎物质,也减轻肠道炎症(26]。槲皮素具有潜在优势等炎性肠道疾病的治疗克罗恩病(CD)和加州大学(27]。我们的动物实验公布了CJ在DSS-induced UC的治疗效果,证明通过抑制炎症细胞浸润和结肠损伤。
此外,我们发现CJ施加保护功能在加州大学通过加速M2巨噬细胞极化。巨噬细胞移植的M1表型释放促炎细胞因子和趋化因子,促进活性氧的生产或氮28,29日]。M1抑制巨噬细胞极化有助于减少DSS-induced结肠炎损伤(22]。我们发现CJ F4/80的数量增加+CD206+细胞DSS-induced UC小鼠,这说明促进M2巨噬细胞极化。当我们5-ASA作为一个积极的控制,数据显示类似的促进5-ASA对M2巨噬细胞极化的影响。5-ASA之前的研究说明,政府改善体重,结肠重量和长度,结肠炎小鼠结肠体重指数和组织病理学损伤而降低结肠组织促炎细胞因子的水平,抑制促炎巨噬细胞激活通过调制M1 / M2结肠炎小鼠表型(30.]。
我们的研究还表明TLR4 / MAPK / NF -κB信号通路参与了CJ在加州大学的规定。现有证据识别NFKB1作为因果基因在炎性肠道疾病的发病机理31日]。抑制TLR4 / NF -κB通路与一个缓解的影响DSS-elicited结肠炎(32]。此外,抑制NF -激活κB和MAPK信号通路可能导致缓解DSS-induced小鼠结肠炎(33]。MAPK / NF -的封锁κB通路参与人参的抗炎和抗氧化功能DSS-induced结肠炎(34]。研究解决TLR通路的调节CJ组件。例如,芦丁是证明减少TLR4的表达12]。绿原酸还可以扭转高脂肪食源性TLR4信号通路的激活及TNF的表达α在肝脏和il - 6 (35]。同时,槲皮素可以减少炎症因子的水平在糖尿病周围神经病变大鼠的差别通过对这些TLR4 MyD88 / NF -κB信号通路(36]。基于上述参考,允许我们的实验结果得出结论,TLR4 / MAPK / NF -κB通路起着分摊在炎症中的作用与加州大学、和CJ可能减轻UC通过抑制TLR4 / MAPK / NF -κB通路。血管紧张素1 - 7可以抑制盲肠的结扎和puncture-induced炎症反应和巨噬细胞极化对M1表型,同时促进巨噬细胞极化对通过TLR4-mediated NF - M2表型κB和MAPK通路(37),这表明TLR4的参与/ MAPK / NF -κB在巨噬细胞极化在溃疡性结肠炎的发病机制。我们的实验结果表明,额外的激活TLR4 / MAPK / NF -κB途径可以提高M1 CD11b标志的表达,减少M2的标记CD206 UC小鼠接受CJ,表明CJ加速M2-like巨噬细胞的极化挡住了TLR4 / NF -κB / MAPK通路。
5。结论
总的来说,我们的工作支撑CJ抑制炎症反应的原始264.7巨噬细胞在溃疡性结肠炎动物模型建立,可能通过TLR4 / NF -的堵塞κB / MAPK通路通过抑制M1巨噬细胞分化,促进M2巨噬细胞极化(图7)。这项研究表明基于CJ UC治疗的一个有前途的治疗策略。
数据可用性
和/或使用的数据集分析在当前研究可从相应的作者以合理的要求。
伦理批准
所有动物实验研究进行了符合指南的护理和使用实验动物颁发国家卫生研究院和动物伦理委员会批准常熟医院隶属于南京中医药大学(njucmcsh - ae - 2021 - 1123)。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
小君太阳设计执行的研究和实验。平赵解释实验的结果。Xufeng丁和李方分析数据。杰江和华黄准备数据。丽江,小君的太阳,和萍赵起草了纸和编辑和修改了手稿。所有作者阅读和批准了最终版本的手稿。
确认
这项工作是由南京中医药大学自然科学基金(Grant /奖号:XZR2020062)、常熟健康委员会重点项目(Grant /奖号:CSWS202119),江苏中医药科技开发项目(没有。MS2021058),开放项目镇江中医脾胃疾病的临床医学研究中心(SSPW2022-KF08)。
补充材料
补充图1:代表对数字图像3 (e),4 (e),5 (g)。补充表1:RT-qPCR引物序列。补充表2:戴评分系统。(补充材料)