文摘

本研究的目的是调查的监管机制mir - 450 - a - 2 - 3 - p在心房颤动患者心肌纤维化。为此,GSE55296的表达谱提取地理数据库,和差异表达lncRNAs被确定。目标基因的基因本体分析mir - 450 - a - 2 - 3 - p表示,有一个监管LINC00636之间的关系和mir - 450 - a - 2 - 3 - p。此外,分析rna的表达水平被RT-qPCR证实。TGF -β1-induced心脏成纤维细胞(CFs)和人类脐静脉内皮细胞用于建立(通过传代形成细胞心肌纤维化模型和体内endothelium-mesenchymal转换(EMT)模型。我们假设液含有LINC00636规范的表达mir - 450 - a - 2 - 3 - p。LINC00636的表达呈正相关,mir - 450 - a - 2 - 3 - p。mir - 450 a的超表达——2 - 3 - p压制在CFs MAPK1表达式,从而抑制的表达αsma、COL1和COL3和防止CF扩散。在HUVECs, mir - 450 - a - 2 - 3 - p过度调节的表达VE-Cadherin (VE-Cad)和血小板内皮细胞粘附molecule-1 (PECAM-1 / CD31)通过抑制增殖作用的蛋白激酶1 (MAPK1)表达式,而波形蛋白的表达水平,COL1和COL3下降。这些结果表明,LINC00636存在于人类的心包液,是一种抑制MAPK1 antifibrotic分子通过mir - 450 - a - 2 - 3 - p超表达和提高房颤患者的心脏纤维化。

1。介绍

心房颤动(房颤)是最常见的一种持续的室上性心律失常,增加中风的风险1]。底层机制被认为是相关的电气和结构心房重构,导致心脏纤维化(2,3]。心脏成纤维细胞的激活和增殖(CFs),产生过度的细胞外基质(ECM)成分,如collagen-1 COL1和collagen-3 (COL3),发挥关键作用的纤维发生房颤患者(4]。此外,慢性疲劳综合症可以分化成myofibroblasts,细胞,2倍合成胶原蛋白的能力,包括α-平滑肌肌动蛋白(αsma) [5]。虽然在生理条件下心脏纤维化较低,分化的单核细胞,内皮细胞,骨髓祖细胞循环,和外围细胞在病理条件下增加心脏纤维化(6- - - - - -8]。因此,endothelial-mesenchymal过渡(EMT)内皮细胞心脏纤维化密切相关。然而,心脏纤维化的分子机制和房颤中EMT在很大程度上是不清楚。

长非编码rna (lncRNAs)记录超过200个基点的子类没有可识别的开放阅读框架或蛋白质编码能力来源于基因间区域(一个特定基因的反义链)的基因组,蛋白质编码基因的内含子,或通过可变剪接(9]。最近的研究表明,lncRNA LINC00636影响扩散,细胞凋亡,宫颈癌细胞的迁移和入侵(10]。然而,LINC00636对慢性疲劳综合症的影响还没有被研究过。我们之前与RT-qPCR综合生物信息学分析验证表明,mir - 450 - a - 2 - 3 - p在CFs接触转化生长因子表达下调(TGF)β1和人类脐静脉内皮细胞(HUVECs),可以作为小分子核糖核酸(microrna)抑制纤维化(11]。microrna是调节基因表达的能力;他们减少基因表达降低或功能抑制目标mrna转录后(12]。microrna从亲代细胞生物活性形式不破坏生物液体,从而表现出巨大的潜力,疾病生物标记物(13]。因此,心包液(PF)的组件周围心脏,心外膜脂肪组织,和大血管根将血液输送到心脏可能反映了心肌蛋白质表达谱。最近的研究表明,microrna能促进内皮细胞的血管生成在人类PF(液14]。然而,他们的角色在房颤心房重构的液不是很透彻了。

生物信息学分析表明,mir - 450 - 2 - 3 - p / MAPK1通路影响心脏纤维化。根据这个结果,我们集中在上游的目标分子mir - 450 - a - 2 - 3 - p / MAPK1通路在细胞水平上和执行功能表型验证。具体来说,我们关注的影响在CFs和差别LINC00636对这些假设LINC00636介导mir - 450 - a - 2 - 3 - p影响CF细胞活动。此外,我们表明,MAPK1作为下游的目标mir - 450 - a - 2 - 3 - p和功能纤维发生的基因在肝纤维化进程。总的来说,本研究的目的是发现和识别心脏fibrosis-associated lncRNA使用生物信息学分析及其分子机制。我们的发现可能有助于识别房颤的可能机制,为发展更有前途的治疗靶点。

2。材料和方法

2.1。收集和处理PF样本

这项研究是进行符合赫尔辛基宣言,就像2013年的修订。批准的协议都是中南大学湘雅医院的伦理委员会(201803209),并从所有参与者获得知情同意。我们隔离液中氟化钠的PF后续实验。此外,总RNA提取患者的PF液氟化钠( )或房颤( )。

2.2。生物信息学分析

在我们的研究中,我们选择基因表达综合(地理,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo),这是一个公开访问数据库包含基因/微阵列配置文件。的基因表达谱提取GSE55296地理数据库。使用软件和ggplot2(3.3.0)包,我们生成的火山情节和箱线图的选定的基因表达谱。使用lncBase lncRNA-to-miRNA预测执行(http://carolina.imis.athena-innovation.gr/diana_tools/web/index.php?r= lncbasev)。使用igraph包 ,我们创建了一个网络地图。最后,我们创建了一个浓缩地图使用集群Profiler_3.11.0包 。

2.3。隔离和PF的提取液

PF液分离使用ExoQuick工具包(系统生物科学、PA、美国)根据制造商的指示。离心后,PF 3000×15分钟,包含细胞碎片的颗粒被丢弃,上层清液被转移到无菌容器。一个适当的体积ExoQuick-exosome沉淀的解决方案是添加到PF。ExoQuick / PF混合物在1500×再次离心30分钟,上层清液被使用吸入。剩下的小球,包含液,在PBS resuspended。

2.4。透射电子显微镜(TEM)

磷钨酸(大约1%)制备磷酸盐缓冲剂。暂停样例(10μl)下降到涂层铜网,随后被孵化的烤箱在37°C。减少滤纸与尖角形状被用来吸收染色方案。此后,磷钨酸染色方案(10μl)掉在准备样品使用样品的铜网枪。1 - 2分钟后,过量的磷钨酸被洗掉。透射电子显微镜(TEM)使用ht - 7800进行显微镜观察和捕捉图像(日立、日本)的外来体形态。

2.5。荧光成像的外来体吸收

共有50个μL示例包含液隔绝人类PF与稀释剂稀释C最终成交量为250μ1.5 L和标示μL PKH26染色。然后,150年μL外来体样品的孵化与慢性疲劳综合症或HUVECs一夜之间在4°C。洗后,细胞被沾1毫升的1μg / ml DAPI和使用Motic倒置荧光显微镜照片被抓获。

2.6。细胞培养和治疗

CFs HUVECs和鼠主要用于本研究从ScienCell购买(美国CA)。3 - 8代后,这些细胞被选定的实验验证。HUVECs培养在杜尔贝科修改鹰的介质(DMEM)含10%胎牛血清的边后卫和penicillin-streptomycin 1%。CF文化补充1%纤维母细胞生长supplement-2 (ScienCell、钙、美国)。

细胞与0.25%胰蛋白酶消化(Beyotime生物科技、上海、中国)在37°C(包含0.02% EDTA) 5分钟后离心,然后播种到每分钟1000转6-well盘子。总共有20μL Lipo2000(表达载体、钙、美国)稀释1毫升的无血清DMEM和10μL模仿,mimic-control、抑制剂和inhibitor-control (Honorgene,长沙,中国)250年稀释μL无血清DMEM 20分钟。转染介质被包含的边后卫DMEM取代后6 h。24小时后,细胞被孵化与人类TGF - 50 ng / ml的重组β1为24小时。

2.7。RNA提取和定量实时分析(RT-qPCR)

总RNA提取根据制造商的指示。简单地说,1毫升的试剂盒(热费希尔科学、马、美国)添加每10厘米²板表面的区域。mrna反向转录使用逆转录工具包(Cowin,北京)。RT-qPCR执行使用一个UltraSYBR混合物(Cowin,北京)。基因的相对表达计算使用2^−ΔΔCT。样本的microrna的表达规范化与U6小核RNA信使RNA表达的是归一化的样本β肌动蛋白。本研究中使用的所有引物从Sangon获得商业(上海,中国)和补充表所示1。

2.8。免疫印迹分析蛋白表达水平

细胞或液细胞溶解在里帕缓冲区(Beyotime生物科技、上海、中国)。离心后12000×15分钟在4°C,上层的收集。蛋白质浓度测定使用bicinchoninic酸测定使用商业套装(Cwbiotec,北京)。接下来,160年μ使用40 L蛋白质的分离μL 5×加载缓冲区,然后转移到一个硝基过滤膜。膜是孵化5%牛血清白蛋白(BSA)在4°C 1.5 h和孵化一夜之间主要抗体在4°C。主要用于抗体免疫印迹如下:β肌动蛋白(1:5000;美国IL Proteintech), CD9 (1: 2000;美国IL Proteintech)、CD63 (1: 1000;美国IL Proteintech)、Tsg101 (1: 5000;Abcam,剑桥,英国),αsma (1: 1000;美国IL Proteintech)、COL1 (1: 1000;bios,北京),COL3 (1: 500;美国IL Proteintech)、MAPK1 (1: 1000;美国IL Proteintech)、VE-Cad (1: 1000;春秋国旅,妈,美国),PECAM-1 / CD31 (1: 2000;美国Proteintech, IL)、波形蛋白(美国Proteintech 1: 2000年,IL)。隔夜孵化与主抗体后,膜与相应的二次抗体(孵化合山羊anti-mouse免疫球蛋白g, 1: 5000;合山羊anti-rabbit免疫球蛋白g, 1: 6000;美国IL Proteintech) 25°C的90分钟。 Detection was performed using an enhanced chemiluminescence (ECL) system (Advansta, CA, USA). Relative protein expression levels were analyzed using the Quantity One v4.6.2 software.

2.9。免疫荧光(如果)

与PBS三次洗涤后,这些细胞被固定为4%多聚甲醛(ThermoFisher # 28908年,中国)30分钟。接下来,细胞渗透Triton x - 100 30分钟为0.3%。与5% BSA 60分钟的阻塞后,这些细胞被孵化一夜之间在4°C主要BSA抗体。如果是主要用于抗体αsma (1: 50;博士德、钙、美国)、波形蛋白(1:50;美国Proteintech, IL)和VE-Cad (1: 50;春秋国旅,妈,美国)。在37°C细胞随后被孵化90分钟与相应的二次抗体:CoraLite594-conjugated山羊anti-mouse免疫球蛋白(H + L) (1: 200;美国IL Proteintech)和CoraLite594-conjugated山羊anti-rabbit免疫球蛋白(H + L) (1: 200;美国IL Proteintech)。细胞被沾DAPI 10分钟。Motic图像系统是用于观察和采集的图像。使用ImageJ荧光强度进行了分析。

2.10。Dual-Luciferase报告基因分析

确定的直接目标mir - 450 - a - 2 - 3 - p 293 T细胞cotransfected mir - 450 - a - 2 - 3 - p模仿或NC-mimic和3UTR MAPK1或突变体3UTR MAPK1的板材在24-well培养48 h。的结合位点mir - 450 - a - 2 - 3 - p MAPK1 3UTR突变,荧光素酶的活性Renilla reniformis或Photinus pyralis测量。

2.11。细胞增殖实验

细胞计数Kit-8 (Dojindo、日本)是用来评估细胞增殖根据制造商的指示。简而言之,CFs被接种到96孔板与重组人类TGF -β1和mir - 450 - 2 - 3 - p模仿或mir - 450 - a - 2 - 3 - p抑制剂和各自的控制。细胞增殖率测量使用微型板块4 h分光光度计(Huisong、深圳、中国)的波长450 nm。

2.12。划痕试验

转染HUVECs扩散,形成一个完整的层与无菌PBS冲洗。细胞划痕使用无菌吸管提示在沿着培养皿表面细胞单层。细胞迁移到划痕区域创建一个划痕和6 h后立即测量。细胞面积量化使用ImageJ v1.53e(媒体控制论,Inc .,罗克维尔市,医学博士,美国)。HUVECs被定义为的迁移率 。

2.13。统计分析

双尾学生的 - - - - - -测试是用来比较两个不同的条件。在案件中,数据不服从正态分布,Mann-Whitney测试使用。三个或三个以上的实验对比实验小组进行使用图基multicomparison测试或单向方差分析与Dunnett posthoc测试。使用皮尔逊相关性指标进行了分析。所有的数据都表示为 。GraphPad Prism 8.0软件(美国GraphPad软件,圣地亚哥,CA)是用于统计分析。 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。潜在的功能性意义LINC00636 / mir - 450 - a - 2 - 3 - p / MAPK1房颤

我们使用GSE55296数据集进行遗传筛查,包括数以百计的lncRNAs两组之间有明显不同的表达水平如火山地块(图所示1(一)),其中lncRNAs,即AC022532.1, LINC00636,和SNHG16表达下调(图1 (b))。根据Lincbase生物信息学预测,mir - 450 - a - 2 - 3 - p是一个潜在的目标基因LINC00636(图1 (c))。初步探索AF lncRNAs特异表达的潜在功能,功能富集分析目标基因的LINC00636基于执行条款。的mRNA目标mir - 450 - a - 2 - 3 - p包括各种各样的基因,如apoptosis-related基因MAPK1, BCL11A, CBX8(图1 (d))。也观察到类似的结果LINC00636的去分析。去功能注释进行潜在的目标基因在三个层面:生物过程(BP),细胞组件(CC)和分子功能(MF)。营地的信号通路,Th17细胞分化和MAPK1被发现与这些基因(图密切相关1 (e))。

3.2。在临床样本验证lncRNA表达式

确认高温超导研究结果的可靠性,液来自12氟化钠主题和12的PF房颤患者为RT-qPCR收集验证LINC00636和mir - 450 - 2 - 3 p的表达水平。如图2,相对表达LINC00636 PF液减少房颤组相比,氟化钠组,这与高温超导的结果是相一致的。mir - 450 a的表达- 2 - 3 - p在房颤组也低于氟化钠组。根据皮尔森的分析,LINC00636表达水平呈正相关,mir - 450 - a - 2 - 3 - p,这表明房颤的积极影响。

3.3。隔离和表征液源自CFs的PF和液的吸收

我们假设lncRNAs由PF-derived液可能在心肌细胞纤维化起到部分作用。因此,我们首先隔离液PF的氟化钠和房颤组和证实自己的身份通过分析几个外来体标记的蛋白质含量用免疫印迹(图3(一个))。隔离液的图如图3 (b)。CFs和HUVECs与DAPI染色所显示的解决方案表现出有效的吸收液的内化PKH26-labeled液(图3 (c))。

3.4。我LINC00636包含液调节mir - 450 - a - 2 - 3 - p和影响慢性疲劳综合症

探讨液对慢性疲劳综合症的影响,我们cocultured CFs和液孤立PF的氟化钠的病人。表达式使用RT-qPCR CFs的LINC00636水平决定。与控制和PBS组相比,LINC00636高度表达的细胞被孵化液囊。此外,mir - 450 - 2 - 3 p细胞中高度表达的孵化与液比对照组。LINC00636可能调解mir - 450 a - p - 2 - 3表达水平,影响肝纤维化的程度慢性疲劳综合症。的表达水平αsma、COL1和COL3在mRNA和蛋白水平降低(图4)。这些结果进一步表明,exosomal LINC00636可能调解mir - 450 - 2 - 3 - p的表达影响CFs的纤维化程度。

3.5。mir - 450 - a - 2 - 3 - p抑制TGF -β1-Induced激活慢性疲劳综合症

调查的角色mir - 450 - a - 2 - 3 - p在CFs的激活,TGF -β1-induced CFs转染了mir - 450 a - 2 - 3 p -模拟控制模拟,mir - 450 - a - 2 - 3 - p抑制剂,并控制抑制剂。我们测量的表达水平mir - 450 - a - 2 - 3 - p在治疗CFs和TGF -β由RT-qPCR 1-treated CFs。与控制条件相比,mir - 450 - 2 - 3 p表达显著下调CFs对待TGF -β。转染后,mir - 450水平- a - 2 - 3 - p是高在模拟条件下和低比TGF -抑制剂的条件β1-treated CFs,确认转染的模仿和抑制剂是成功的(数据5(一个)和5(我))。mir - 450 a的超表达——2 - 3 - p减毒TGF -β1-induced upregulation的αsma、COL1和COL3转录(数字5 (b)- - - - - -5 (d))和蛋白质(数据5 (e)- - - - - -5 (h))的水平。相反,的表达αsma、COL1和COL3 TGF -β1-induced CFs进一步提升当mir - 450 - 2 - 3 - p的表达被抑制在mRNA和蛋白水平(数字5 (j)- - - - - -5 (p))。同样,如果结果表明,mir - 450 - 2 - 3 - p模仿显著抑制αTGF - sma超表达β1-induced CFs(图5(问)),而相反的观察mir - 450 - a - 2 - 3 - p抑制剂组(图5(右))。基于CCK8化验,TGF -β1刺激促进了CFs的扩散,但这种效应逆转了mir - 450 a - 2(图3 - p模拟治疗5(年代))。相比之下,当转染mir - 450 - a - 2 - 3 - p抑制剂,TGF -扩散β1-induced CFs进一步增加(图5 (t))。在一起,这些结果表明,mir - 450 - a - 2 - 3 - p抑制TGF -β1-induced CFs的激活。

3.6。mir - 450 - a - 2 - 3 - p会使TGF -β1-Induced EMT的HUVECs

调查是否mir - 450 - a - 2 - 3 - p可以持续抑制EMT在HUVECs,我们转染TGF -β1-induced HUVECs mir - 450 - a - 2 - 3 - p模仿,mir - 450 - a - 2 - 3 - p抑制剂,和他们的消极的控制和发现mir - 450 a - p - 2 - 3表达水平HUVECs从不同的治疗组。TGF -β1刺激显著降低mir - 450 a的表达- 2 - 3 - p。然而,这种抑制部分废除了mir - 450 - a - 2 - 3 - p模仿,而加剧了mir - 450 - a - - p抑制剂(图2 - 36(一))。

VE-CAD的蛋白表达水平和PECAM-1 / CD31时减少细胞被刺激了TGF -β1,而波形蛋白的表达水平,COL1和COL3增加。mir - 450 - 2 - 3 p模仿逆转的变化观察到这些基因的表达水平(数字6 (b)- - - - - -6 (g))。mir - 450 - a - 2 - 3 - p抑制剂组,VE-Cad和PECAM-1 / CD31表达水平的抑制,和波形蛋白的表达,COL1和COL3显著增强(数字6 (h)- - - - - -6(左))。这些蛋白的表达水平的变化是一致的变化检测在mRNA水平(数字6 (m)和6 (n))。

VE-Cad的免疫荧光试验进一步验证这些结果(数据6 (o)和6 (p))。增强内皮细胞迁移是EMT的特点之一。实验表明,TGF -β1加速HUVEC迁移,这种效应被mir - 450 - 2 - 3 p模拟(图6(问)),而mir - 450 - 2 - 3 p抑制剂显著促进HUVEC迁移(图6(右))。这些结果表明,mir - 450 - a - 2 - 3 - p具有antifibrotic作用通过抑制EMT HUVECs。

3.7。的目标是MAPK1 mir - 450 - a - 2 - 3 - p

调查的潜在机制mir - 450 - a - 2 - 3 - p在CFs和HUVECs心脏重构,我们评估了信使rna和蛋白质水平的内生MAPK1 CFs和HUVECs。转染mir - 450 - a - 2 - 3 - p -模仿显著降低内生MAPK1 mRNA和蛋白表达水平,而转染mir - 450 - a - 2 - 3 - p抑制剂显著增强MAPK1 mRNA和蛋白表达水平(数字7(一)和7 (b))。

进一步验证是否有针对关系mir - 450 a - 2 - 3 p和MAPK1荧光素酶报告质粒3UTR或3UTR-mut MAPK1被构造。Cotransfection mir - 450 - a - 2 - 3 - p和野生型3UTR MAPK1显著抑制相对荧光素酶活性。此外,转染mir - 450 - a - 2 - 3 - p几乎没有影响的相对荧光素酶活性突变MAPK1 3UTR(图7 (c))。这些结果说明MAPK1 mir - 450的直接目标是- 2 - 3 - p。

3.8。过度的MAPK1中和的效果mir - 450 - a - 2 - 3 - p

我们下一个调查是否需要MAPK1 mir - 450 - a - 2 - 3 - p的活动。CCK8数据显示MAPK1消除了抑制作用的超表达mir - 450 - a - CF(图2 - 3 p8(一个))。此外,划痕试验表明,mir - 450 a的抑制作用——2 - 3 - p模仿HUVEC迁移被MAPK1明显废除(图8 (b))。这些发现表明,mir - 450 - a - 2 - 3 - p是依赖MAPK1调节CF扩散和HUVECs EMT。

4所示。讨论

心房结构重构与心脏纤维化密切相关,这被认为是房颤的发生和进展的基础。在CFs ECM的异常表现,心中最常见的细胞类型,起有害作用在心脏纤维化15]。到目前为止,仍有几心脏纤维化的有效治疗策略由于很难逆转心脏纤维化(16]。因此,研究潜在的目标抑制心肌纤维化是至关重要的开发新策略来预防和治疗心房纤颤。

到目前为止,绝大多数lncRNAs尚未研究的很透彻了。然而,lncRNAs已被证明参与基因调控的方方面面,包括表观遗传调控、印记,核和细胞质贩卖,转录,信使rna剪接。因此,lncRNAs参与许多不同的生物过程,包括细胞周期、细胞增殖、凋亡和分化(10]。后我们发现心包液LINC00636的存在,我们进一步发现LINC00636可以调解的效果mir - 450 - a - 2 - 3 - p在慢性疲劳综合症。我们没有验证是否有两个ncRNAs直接有针对性的监管。近年来,研究表明,lncRNAs可以吸附microrna。因为没有lncRNAs目标促进microrna的表达,我们推测,可能有一个未知的途径LINC00636和mir - 450 - 2 - 3 - p,我们寻求在我们未来的研究调查。

microrna的内源性小非编码rna,扮演了一个重要的角色在调节心脏重塑。例如,miR-30/133调节心肌纤维化的抑制结缔组织生长因子的表达在左心室肥大17]。在这项研究中,mir - 450 - 2 - 3 - p表达式在CFs和HUVECs表达下调的感应下TGF -β1,这可能是一个重要的因素在纤维化的进展。然而,当mir - 450 - 2 - 3 - p的表达调节,TGF -β1-induced COL1的过度表达,COL3,αsma是抑制,表明CF激活的抑制。另一方面,当mir - 450 - a - 2 - 3 - p调节TGF -β1-stimulated HUVECs、VE-Cad PECAM-1 / CD31、波形蛋白,COL1和COL3调节,这表明,mir - 450 - a - 2 - 3 - p抑制TGF -β1-induced EMT HUVECs。TGF -β1是一个最有效的因素诱导心脏纤维化在各种监管刺激AF (18,19]。TGF -β1信号至少涉及两个独立通道,典型Smad-dependent通路(20.)和Smad-independent或某些典型通路(21,22]。研究表明,内皮素1 (ET-1)和TGF -β1共同促进myofibroblast分化[23]。这可能是相关的能力ET-1在成纤维细胞和分化诱导ECM生产myofibroblasts [24]。同样,AngII诱发生产ET-1通过MAPK1和活性氧,从而促进纤维母细胞激活和纤维化(25]。此外,TGF -β1-induced生产需要MAPK1 CTGF的表达,这是一个关键的标志myofibroblast分化(26,27]。在本质上,TGF -β1 / MAPK1通路可能发挥关键作用在心房纤维化(28]。

MAPK1, MAPK家族的一员,据报道参与多种生物学过程,如心肌纤维化(22- - - - - -30.]。在房颤狗模型中,TRPC3发现调节心肌纤维化的扩散影响Ca^{2 +}通过涌入MAPK1 / miRNA-26 / NFAT通路,从而增加心肌中的表达TRPC3 [30.]。一些microrna在病理过程中通过调节MAPK1扮演一个角色。例如,图姆等人发现miR-21 MAPK1信号通路的调节,影响慢性疲劳综合症的发展和相关细胞因子的分泌,从而影响间质纤维化的过程(29日]。我们确认关系mir - 450 - a - 2 - 3 - p和MAPK1通过生物信息学预测分析和双荧光素酶检测。此外,CCK8和划痕化验表明,MAPK1超表达可以抵消的效果mir - 450 - a - 2 - 3 - p。这些结果表明,mir - 450 a的影响- 2 - 3 - p在CF扩散和EMT HUVECs MAPK1受到影响。

总之,exosomal LINC00636可能调解的效果mir - 450 - a - 2 - 3 - p通过MAPK1 CFs的可行性途径,可能用于治疗心肌纤维化。人类心包液液含有LINC00636提升mir - 450 a的表达- 2 - 3 p抑制MAPK1和改善心房颤动患者的心脏纤维化。

数据可用性

的原始数据是GSE55296地理数据库。

伦理批准

作者是负责所有方面的工作在确保相关问题的准确性或完整性的任何部分工作适当的调查和解决。依法进行的这项研究是赫尔辛基宣言》(2013年修订)。研究伦理委员会批准的中南大学湘雅医院(201803209),并从所有的参与者获得知情同意。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

刘Langsha构思和设计实验。Kaibo Lei, Fanyan罗完成了实验。Kaibo Lei, Langsha刘写了论文。所有作者已阅读及同意发布版本的手稿。

确认

这项工作是由中国国家自然科学基金(Fanyan罗;不。81873494)和湖南省自然科学基金(Fanyan罗;不。2018 jj2665)。

补充材料

所有的引物序列被用于这项研究。(补充材料)