文摘

一种新型细菌素分泌butyricum梭状芽胞杆菌ZJU-F1孤立使用硫酸铵分馏,阳离子交换色谱、亲和色谱法、反相高效液相色谱法(rp)。细菌素,名叫CBP22 PSAWQITKCAGSIAWALGSGIF包含22个氨基酸的序列。分析其结构和物理化学性质表明CBP22分子量2264.63 Da, + 1净电荷。CBP22显示活动对e . col K88,大肠杆菌ATCC25922,金黄色葡萄球菌ATCC26923。细菌素的影响和潜在机制CBP22在先天免疫反应研究脂多糖(LPS)诱导小鼠模型。结果表明,预处理与LPS-induced CBP22预防损伤上皮组织和显著降低血清免疫球蛋白水平,IgA, IgM, TNF -α,sIgA。此外,CBP22治疗增加了表达zonula occludens和降低渗透率以及细胞凋亡在空肠LPS-treated老鼠。总之,CBP22抑制肠道损伤,防止肠道屏障功能障碍引起的有限合伙人,暗示CBP22治疗肠道损伤的潜在用途。

1。介绍

益生元,首次发现于1905年,被用来操纵微生物在宿主体内改善测量健康状况(1]。益生菌butyricum梭状芽胞杆菌(c . butyricum)已经被广泛报道在主机有好处,包括预防细菌和病毒感染,免疫调节,减轻急性胰腺炎、肝损伤和减少脂肪生成,以及具有抗肿瘤作用。我们先前孤立c . butyricumZJU-F1应变从健康的猪的粪便和保存在中国普通微生物菌种保藏中心(CGMCC No。8939年,中国上海)。我们以前的研究已经表明c . butyricumZJU-F1可以减轻生长迟缓和肠道屏障功能障碍引起的断奶(2]。然而,特定的组件c . butyricum负责有益的生物功能,到目前为止,还不清楚。

我们的许多知识,益生菌的机制是基于细菌素。细菌素是一类具有生物活性的多肽或蛋白质,是由特定的细菌基因和编码核糖体的合成。在过去的十年中,细菌素在食品保鲜领域的广泛研究和替代抗生素。越来越多的研究表明,细菌素具有多种生物功能,包括抗病毒活动,antiinfection胃肠道的杀精子的活动,和抗癌活性3- - - - - -6]。例如,plantaricin,细菌素分泌乳杆菌通过强化,潜在的好处食源性肥胖老鼠肠道上皮细胞之间的紧密连接(7]。细菌素的Lmo2776单核细胞增多性李斯特氏菌可以针对的共生体普氏菌copri和调节肠道感染8]。

到目前为止,三个细菌素c . butyricum7423年butyricin butyricum M588, perfringocin 1105,分子量为32.5 kDa, 8 kDa,和76.0 kDa,分别为(9,10]。bacteriocinogenic质粒的序列分析c . butyricum发现butyricum M588与83个氨基酸的编码基因ORF3和具有较高的抗菌活性beijerinckii梭状芽胞杆菌和c . pasteurianum(10]。Butyricin 7423改变的渗透性c . pasteurianum细胞膜,使代谢产物的释放和离子(11]。据报道,生长性能的改进c . butyricum与减少或防止障碍造成的损害ETEC K88小猪和肉鸡(12- - - - - -14]。从力学上看,研究表明c . butyricum调节免疫反应是通过TLR2-mediated MyD88-independent信号通路(15,16]。然而,潜在的生物功能和细菌素分泌的作用机制c . butyricum在肠道健康尚未阐明。

小肠包含最多的任何组织的免疫细胞在体内保持宽容和促进免疫反应与多种临床重要的病原体(17,18]。肠易激综合症(IBS),其特点是不规则的排便习惯,影响21世界人口的10%^圣世纪,但其病因学基本上仍待定(19,20.]。研究表明,肠道感染、炎症和肠道菌群的失衡会导致肠易激综合症(21- - - - - -23]。最近的一些研究表明较低的肠道微生物多样性和更高的不稳定患者肠易激综合症(20.,22]。此外,研究报告的相对丰度的增加厚壁菌门,主要是梭状芽胞杆菌集群XIVa和Ruminococcaceae和减少的相对丰度拟杆菌门肠易激综合症患者的肠道(22,24- - - - - -26]。我们之前的研究表明保持紧密连接复合体可以调节炎症反应,保护肠道健康(27]。肠道功能障碍在系统性炎症的发生中扮演着关键角色,表明小肠是系统性炎症的“引擎”28]。肠道粘膜形成物质代谢障碍,限制病原体的传播,毒素和过敏原从肠道流明到循环系统。肠道屏障的完整性需要一个精确的和增殖和凋亡之间微妙的平衡29日,30.紧密连接蛋白的表达,如ZO-1 ZO-2, occludin, claudin-1 [31日,信号分子如黏蛋白、细胞因子,toll样受体,趋化因子(32]。

在这项研究中,我们分离和特征细菌素CBP22butyricum梭状芽胞杆菌ZJU-F1。细菌素的影响和潜在机制CBP22肠道免疫反应进行了评估改变肠道屏障与脂多糖(LPS)诱导肠道损伤小鼠模型。综上所述,我们发现了一种新的细菌素CBP22和提供证据的功能和免疫调节中作用的机制。

2。材料和方法

2.1。试剂

butyricum梭状芽胞杆菌ZJU-F1来自我们的实验室。金黄色葡萄球菌ATCC5923,大肠杆菌ATCC25922,大肠杆菌K88,大肠杆菌K12,铜绿假单胞菌CMCC27853,粪肠球菌EC533,粪肠球菌EC618购买来自中国普通微生物菌种保藏中心。RCM媒体和Mueller-Hinton (MH)汤从Hopebio购买(青岛)。脂多糖(LPS) O111: B4和4 kDa荧光素isothiocyanate-conjugated右旋糖酐(FD4)从Sigma-Aldrich购买。

2.2。细菌素纯化

在培养ZJU-F1 RCM介质在37°C和225 rpm,直到 ,上层清液被隔离。Tris-HCl(20毫米, )慢慢地添加到上层清液,紧随其后的是一个非常缓慢的硫酸铵在4°C。搅拌2 h后,收集沉淀,离心(15000 rpm, 10分钟)和resuspended绑定缓冲(20毫米Tris-HCl, 500毫米氯化钠,20毫米咪唑,10毫米2-mercaptoethanol, pH值8.0)然后透析在4°C对同一个缓冲区12 h。使用的方法烹调的菜肴等。33),透析初步提取应用于阳离子交换柱(美国通用电气医疗集团,芝加哥,IL)和被应用程序筛选了盐梯度从0到50% ( )氯化钠在20毫米Tris-HCl和10毫米2-mercaptoethanol (pH值8.0)。山峰都是汇集和分析了钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page),然后在绑定缓冲透析4°C 12 h。透析混合物被应用于Ni-NTA树脂柱(1毫升)平衡与绑定缓冲,其次是一步梯度洗脱缓冲。峰值分别又分析了sds - page和收集之前集中到10毫克/毫升。每个分数检测抗菌活性,抗菌活性的分数被进一步分离,反相高效液相色谱(rp) [34]。样品被溶解在溶剂(5%含0.1%乙腈( )组织),然后应用于产物。分离进行了使用一个线性梯度从15%到45%溶剂B (0.1% ( )组织在95%乙腈)40分钟2.0毫升/分钟的流量,测量在215海里。简而言之,洗脱蛋白的原理与倪NTA列是倪NTA列包含琼脂糖微球。琼脂糖螯合介质的作用下,微球与镍螯合^{2 +}和螯合镍^{2 +}可以与咪唑环上,半胱氨酸,或Trp,从而达到蛋白质分离。然后,纯化蛋白质的序列测定埃德曼降解方法。细菌素的合成是化学合成基于氨基酸序列,用于后续实验在体外和在活的有机体内。

2.3。抗菌检测

的最小抑制浓度(麦克风)测定根据国家临床实验室标准委员会的修改版本汤采用方法(35]。微生物检验记录阶段生长在MH肉汤,转移到新的MH肉汤最终的浓度 。细菌素的浓度稀释了双重的连续稀释到2.5,5、10、20、40、80、160,320,640,1280,2560μ克/毫升。细菌的解决方案(90毫升)和细菌素(10μ不同浓度l)被添加到一个96孔板。积极的和消极的控制共100名μ和100 l型细菌的解决方案μ分别l MH肉汤。中等收入国家测量孵化24 h后37°C。每个实验进行了一式三份。

2.4。结构和理化性质的分析

埃德曼降解方法被用来确定纯化肽的氨基端氨基酸序列的指令应用生物系统公司的气相蛋白质音序器。螺旋轮的阴谋,二级结构和物理化学性质进行了预测和分析的在线资源HeliQuest (https://heliquest.ipmc.cnrs.fr/)[36)和密歇根大学张实验室(https://zhanglab.ccmb.med.umich.edu/)[37]。

2.5。溶血试验

溶血试验用描述的方法进行高et al。35]。短暂,新鲜实际上猪血收集从健康捐献者(杭州)聚碳酸酯含有肝素管。血液与PBS洗两次,然后在PBS稀释到1%有或没有10%胎牛血清。CBP22是连续稀释0.01%醋酸为0μ克/毫升到256μ克/毫升。不同浓度(10μl)与红细胞(90 CBP22被孵化μ在37°C l) 2 h 96孔板。离心后,上清液被转移到一个新的96孔板测量吸光度在405海里。正面和负面的控制在10红细胞孵化μl 0.01%的醋酸和1%的特里同x - 100,分别。溶血(%)计算如下:

2.6。动物和实验设计

60 ICR雄性老鼠,年龄在4 - 6周,购自上海SLAC实验动物中心。老鼠在塑料笼子在标准条件下(12 h光暗周期,22日至25日°C,湿度50 - 70%)和免费的食物和水。所有动物实验进行的动物保健和使用委员会下浙江大学。

如图1,老鼠被随机分为6组,每组10。6天,在有限合伙人和CBP22 + LPS组小鼠腹腔注射LPS(10毫克/公斤,200μl每个鼠标)1 h后CBP22或PBS治疗;另一组注射同等体积的PBS。老鼠被牺牲,通过心脏穿刺收集血液样本5 h LPS刺激后。此外,有限合伙人和CBP22都溶解在PBS之前管理。

2.7。肠道组织形态学

老鼠的空肠样本在4%多聚甲醛固定24小时,然后嵌入在石蜡块。部分5μ米厚度剪切和苏木精和伊红染色())和图像通过一个徕卡DM3000微系统(德国徕卡)。绒毛高度和隐窝深度测量使用徕卡显微镜(DM3000;徕卡,位于德国)配备CCD相机(DFC420;徕卡)。所有程序执行三次,数据提出了平均的三个复制。小肠损伤的程度被赵评估的分数分类38如下:零级,正常粘膜绒毛;一年级结构良好的绒毛,但牙龈空间;二年级,高架绒毛上皮与增加牙龈空间;三年级,一些丢失的绒毛上皮细胞;四年级,绒毛的结构破坏导致脱落和毛细管扩张;五年级,毁灭所有的粘膜,出血和溃疡。

2.8。肠道通透性

肠道通透性的评估是基于测量FD4血清。小鼠,腹腔内注射LPS或PBS有FD4口服填喂法(20毫克/公斤体重)后1 h。血液收集的时候牺牲在4°C在12000转离心5分钟。FD4在血清的浓度决定通过测量荧光使用SpectraMax M5板读者(美国加利福尼亚州圣何塞分子器件、)的激发波长485 nm和发射波长535 nm)。

2.9。TUNEL染色

TUNEL分析是用来确定空肠上皮细胞凋亡。徕卡DM3000微系统是用于分析标记细胞。至少五个观点不同组的每个图像与背景光拍摄图像之间保持不变。五个随机从每组重复进行了分析,nonapoptotic细胞凋亡的比例计算根据正面棕色的颜色,和平均值计算。细胞凋亡指数(AI)是按照下列公式计算:

2.10。免疫球蛋白和TNF -测量α血清中

的血清免疫球蛋白(免疫球蛋白、IgA、IgM)和肿瘤坏死因子-α决定使用酶联免疫吸附试验(ELISA)工具包(Multisciences、杭州、中国)根据制造商的协议。

2.11。测定肠道sIgA浓度

sIgA在回肠组织的表达水平是由double-antibody夹心ELISA,如前所述[39)使用酶联免疫试剂盒购自Multisciences(杭州)。回肠蛋白浓度测定由BCA试剂盒(注册机,中国),和sIgA的浓度被表示为μg sIgA /毫克的蛋白质。

2.12。实时聚合酶链反应

总RNA提取使用试剂盒的空肠试剂根据制造商的指示。RNA是reverse-transcribed cDNA使用cDNA逆转录工具包。gene-specific引物的序列测定从以前的出版物40)和合成和从Sangon购买生物技术(上海,中国)。引物序列和Tm价值观和尺寸表中列出1。放大和检测进行了使用SYBR预混料交货Taq工具包(豆类Clontech,大津,日本)的ABI StepOnePlus实时PCR系统(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)。分析了所有的样品一式三份,负控制包括检查非特异性扩增的引物。

2.13。统计分析

所有使用SPSS统计分析软件(版本20.0中,IBM公司,阿蒙克,纽约,美国),和所有的数据被表示为 (SEM)。实验组和对照组之间的显著差异是由单向方差分析与邓肯的多个测试范围。据统计,一个值小于0.05被认为是显著的。

3所示。结果

3.1。CBP22的分离、纯化和鉴定

上层清液中的细菌素的ZJU-F1初步提取通过硫酸铵沉淀,然后通过阳离子交换柱层析法分离提纯,产生三个分数(图2(一个))。这三个分数被亲和色谱法(图分离和收集2 (b))。然后,我们测试了三个分数的抗菌活性,发现第二个分数显示抗菌活性e .线圈和金黄色葡萄球菌。因此,第二个部分是冻干和集中,其次是纯化产物。sds - page分析表明,第二部分的分子量大约3 kDa。测序表明,细菌素是22-amino酸肽序列PSAWQITKCAGSIAWALGSGIF;因此,肽被命名butyricum梭状芽胞杆菌肽22 (CBP22)。

为了进一步调查CBP22的物化特性,我们使用螺旋轮情节和二级结构预测的在线分析工具(数字2 (c)和2 (d))。结果表明,CBP22的等电点是8.64和分子量为2264.64,+ 1的净电荷和疏水性的0.719和0.134疏水的时刻。

3.2。抗菌活性CBP22

评估CBP22的抗菌活性,细菌素的最低抑制浓度(MIC) CBP22对抗病原菌决心。如表2所示,CBP22表现出温和的活动大肠杆菌K88麦克风的32μ对g / ml,显示低活动大肠杆菌ATCC25922和金黄色葡萄球菌ATCC26923,128年和64年的中等收入国家μ分别g / ml。

3.3。溶血性活动

CBP22反对人类红细胞的溶血活性决定作为哺乳动物细胞的毒性。结果表明,CBP22有杀伤力低红细胞在0到256之间μ克/毫升。只有不到10%的红细胞被杀甚至在256毫克/毫升(图2 (e))。这些结果表明,CBP22真核生物是安全的。

3.4。肠道形态学

进一步调查CBP22对肠道健康的影响,我们用LPS刺激诱导小鼠模型。如图3(一个),他走时染色空肠的控制和CBP22-treated组标本显示集成绒毛和紧密排列的上皮。相反,肠道上皮细胞的空肠LPS-treated老鼠明显损伤上皮剥落,不连续边界,刷和生硬的绒毛。然而,老鼠的空肠绒毛使用4毫克/公斤,8毫克/公斤CBP22相对完整,这表明CBP22显著减轻LPS引起的损伤绒毛。小肠粘膜损伤的得分的基础上,我们发现,预处理与CBP22预防肠道粘膜损伤引起的有限合伙人(图3 (b))。

作为数据3 (c)和3 (d)显示,与对照组相比,小鼠空肠绒毛高度和隐窝深度处理4毫克/公斤,8毫克/公斤CBP22没有显著不同,而高浓度的CBP22导致增加绒毛高度和隐窝深度递减的趋势。然而,绒毛高度LPS组没有显著减少隐窝深度的改变。CBP22预处理明显减轻LPS引起的绒毛缩短27.6%的改善治疗后8毫克/公斤CBP22但没有隐窝深度的影响。这些结果表明,CBP22可以保护小鼠的肠道绒毛有限合伙人的伤害。

3.5。肠上皮细胞凋亡

组织TUNEL染色分析细胞凋亡水平进行空肠。棕色和蓝色染色代表凋亡和正常核,分别。与对照组相比,细胞凋亡指数4毫克/公斤和8毫克/公斤CBP22治疗显示无显著差异,但LPS-treated小鼠显示出显著增加空肠的细胞凋亡指数。而LPS-treated老鼠,老鼠使用4毫克/公斤,8毫克/公斤CBP22接着用有限合伙人,细胞凋亡指数显著下降了82.65%和86.81%,分别为(数字4(一)和4 (b))。

3.6。血清水平的IgA,免疫球蛋白、IgM和TNF -α

确定在LPS-induced CBP22免疫反应的影响,测量免疫球蛋白和细胞因子的水平。有限合伙人治疗导致显著增加血清水平的IgA,免疫球蛋白,IgM与控制。CBP22预处理明显减轻LPS引起的血清免疫球蛋白的高程数据5(一个)- - - - - -5 (c))。

如图5 (d)血清TNF -α浓度的老鼠在4毫克/公斤和8毫克/公斤CBP22组略高但不显著。有限合伙人治疗导致血清TNF -增加3.85倍α浓度相对于对照组( vs。 )。CBP22预处理显著降低TNF -αLPS诱导的分泌水平与对照组相同。

3.7。肠道sIgA和TNF -α水平

进一步确认CBP22对免疫应答的影响,TNF -α在确定空肠mRNA的表达。与血清中的结果类似,TNF -没有显著区别α信使rna在老鼠的空肠处理4毫克/公斤,CBP22 8毫克/公斤。TNF的表达α信使rna的空肠LPS-treated老鼠明显增加,但预处理4毫克/公斤,8毫克/公斤CBP22其次是有限合伙人导致显著降低水平比LPS组(图5 (e))。

回肠sIgA水平的结果如图所示5 (f)。与控制的老鼠相比,没有明显差异的水平sIgA老鼠的回肠末端处理4毫克/公斤,CBP22 8毫克/公斤。然而,有限合伙人治疗导致sIgA水平增加123.08%相对于对照组。预处理4毫克/公斤和8毫克/公斤CBP22明显sIgA分泌降低40.39%和43.84%,分别与对照组没有差异。

3.8。肠道通透性

肠道屏障功能可以调节免疫功能,我们在每个小组评估肠道通透性。如图6(一)与LPS腹腔内注射后,FD4的肠道通透性显著增加,表明屏障功能受损。预处理的LPS-administered小鼠4毫克/公斤,8毫克/公斤CBP22显著降低血清中的FD4浓度表明CBP22可以保护小鼠肠道屏障功能对有限合伙人的挑战。然而,没有明显独自CBP22治疗,对照组的区别。

3.9。肠道紧密连接表达式

进一步调查CBP22在肠道屏障功能的作用,紧密连接标记,如claudin-1 occludin ZO-1,和ZO-2测量。ZO-1 mRNA表达水平的老鼠的空肠处理4毫克/公斤,8毫克/公斤CBP22显著增加剂量依赖性的方式(图6 (b))。有限合伙人的mRNA表达显著减少ZO-1 ZO-2 57%和15%,分别,但并不影响claudin-1和occludin表达与对照组相比。正如预期的那样,完全CBP22预处理,大大废除LPS-induced ZO-1和ZO-2 mRNA(减少数据6 (b)- - - - - -6 (d))。

4所示。讨论

在这项研究中,我们将描述小说的隔离细菌素c . butyricumZJU-F1名叫CBP22分子量为2264.63。然后我们展示了角色和潜在的作用机制使用LPS-induced CBP22影响肠道损伤小鼠模型。

近年来,研究发现许多细菌素,如SA2715 [41],MQ1 [42),乳酸链球菌肽(43),有很大的潜力作为天然防腐剂在食品。此外,细菌素也广泛应用于口腔护理、护肤品,阴道保健和抗癌药物43- - - - - -46]。相比其他三个已知的细菌素c . butyricumCBP22的分子量相对较小,只有2264.35哒,这有利于工业生产和广泛应用于防腐剂在食品和口腔的保健,皮肤,和阴道43,47]。一般来说,细菌素具有较高的毒性。溶血是一个重要的指标来评估细菌素的安全性。如果溶血率小于5%,细菌素被认为没有溶血(48]。我们的研究结果表明,CBP22有很低的溶血活性低于5%,表明其潜在的安全。此外,我们的研究结果发现,CBP22显示抗菌活性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌虽然不影响铜绿假单胞菌,大肠都有效,或粪大肠,这表明CBP22可能是细菌素和窄谱抗菌活性。同时,CBP22显示,它的物理化学性质有一个正电荷,这可能是其脆弱的抗菌活性的原因(49]。如果CBP22用作模型设计衍生肽,通过改变一个或多个氨基酸增加电荷数量和疏水性的时刻,衍生肽具有高抗菌活性和抗菌谱窄,这将有利于抗菌具体和有效的细菌素的发展。

除了抗菌活性,细菌素的免疫调节功能吸引了越来越多的关注。有限合伙人通常用于诱导急性免疫反应在哺乳动物中,破坏了肠道绒毛的自我更新和导致细胞凋亡指数很高。肠道粘膜是营养吸收和消化的主要网站50]。肠道疾病可以直接摧毁的能力吸收和消化的营养,甚至可能导致inflammatory-related影响整个身体的疾病。据报道,细菌素和抗菌肽可以调节组织半衰期和间隙的中性粒细胞通过抑制细胞凋亡(51]。我们的研究结果表明,CBP22缓解肠道损伤引起的有限合伙人和证实损伤和细胞凋亡指数高LPS-treated空肠肠上皮细胞的小鼠使用)染色。正如所料,所有的这些影响被显著地抑制CBP22注入。

细菌素调节通过调节炎症免疫反应,诱导趋化作用,启动特定的免疫,直接增强身体抵抗感染的能力,特别是激活免疫细胞(4,44]。对细菌素调节肠道免疫,这项研究发现单核细胞增多性李斯特氏菌细菌素可能目标共生体普氏菌copri和调节肠道感染8]。除此之外,它也被发现,gassericin,细菌素,肠道微生物分泌的,绑定KRT19蛋白肠道上皮细胞的质膜,并激活细胞内mTOR-mediated磷酸二酯酶活动的差别导致了对这些营地和cGMP水平,从而减少腹泻的发病率在早期断奶仔猪(52]。IgG、IgM IgA,重要的体液免疫效应分子,可以中和细菌毒素的毒性,增强单核巨噬细胞的吞噬能力,结合病毒抗原来调节免疫(53,54]。与先前的研究一致(55),我们的数据表明,有限合伙人的IgA的水平明显增加,血清免疫球蛋白,IgM老鼠。尽管CBP22单独治疗不影响血清免疫球蛋白水平,与CBP22预处理可以降低LPS诱导的免疫球蛋白水平升高。这些结果表明,CBP22可以激活小鼠的非特异性免疫中和,消除有限合伙人。sIgA,粘膜防御系统的重要组成部分,可以抑制肠道上皮细胞的粘附病原微生物和病毒的扩散。我们的研究结果表明,sIgA浓度显著增加腹腔内注射LPS但预处理后回肠CBP22 sIgA浓度下降,表明CBP22可以抑制这种极端的免疫反应来保护健康的老鼠。此外,腹腔内注射LPS后,血清TNF水平α和肿瘤坏死因子的基因表达α在小肠迅速增加,可能是因为LPS激活炎症信号通路如NF -κB和MAPK,从而激活下游促炎因子的表达式(56]。我们的研究结果表明,预处理与CBP22可以显著降低TNF -α水平血清TNF -α小肠mRNA水平,这可能是因为CBP22减轻炎症通过抑制κ退化和NF - BκB激活(57]。

脓毒症的发病机制一直认为,至少在某种程度上,肠上皮屏障的损失(58]。作为第一道防线,障碍起着至关重要的作用在维护肠道健康,防止病原微生物的吸收,木糖醇,有毒大分子抗原,从肠道的腔59]。乳杆菌细菌素提高食源性肥胖小鼠的肠道和身体保持上皮屏障的完整性(7]。从力学上看,细菌素分泌的益生菌乳酸杆菌参与维护粘膜屏障,主要通过MAPK-dependent机制(60]。调查的潜在机制CBP22免疫功能,我们评估了CBP22对小鼠肠上皮屏障功能的影响。健康的肠道组织不透水FD4血液,这是释放到血只有在肠道粘膜屏障受损,所以他们的水平可以直接反映肠道上皮粘膜损伤的程度和渗透率61年]。我们发现CBP22 FD4水平降低,表明CBP22缓解LPS-induced渗透率。紧密连接蛋白,如ZO-1、ZO-2 occludin和claudin-1重要因素调节肠道通透性和组件的主要障碍。我们的研究结果表明,有限合伙人表达下调的基因表达紧密连接蛋白ZO-1和ZO-2导致肠道结构的恶化。这些结果进一步证实了结论CBP22可能调节肠道损伤通过维持屏障功能。

总之,我们孤立和小说细菌素特征CBP22c . butyricum。基于其结构的分析,物理化学性质,抗菌活性,和安全,我们目前的证据支持的角色CBP22肠道损伤的潜在的监管机构,探索它的作用机理通过增强肠道屏障功能。

数据可用性

的数据中存在,免疫印迹和ELISA用于支持本研究的发现可以从相应的作者。

伦理批准

这项研究是通过浙江大学动物保健和使用委员会(协议代码ZJU20160396和协议数据2016-03-04)。

的利益冲突

所有作者宣称他们没有利益冲突。

作者的贡献

王Tenghao和洁同样做出了贡献,分享第一作者。

确认

我们想要谢谢王实验室成员的有益的讨论。这项工作是由中国国家自然科学基金(批准号32002185和32002185),中国浙江省自然科学基金(批准号LQ21C170002),和中国博士后科学基金(批准号2020 m671741)。