毛地黄黄酮变弱il - 1β-通过抑制NF-诱导THP-1粘附ARPE-19细胞κB和MAPK通路

摘要

细胞因子诱导的内皮功能障碍导致视网膜色素上皮（RPE）细胞炎症和血管粘附分子的产生。炎症是视网膜变性（RD）疾病的关键介质，包括年龄相关性黄斑变性（AMD）类黄酮多酚木犀草素（LU）木犀草素具有抗炎和抗糖尿病活性，但其对视网膜保护的作用尚不清楚。在这里，我们检测了木犀草素缓解细胞因子诱导的APPE-19细胞中与RD相关的炎症标志物的能力。我们发现木犀草素降低了白细胞介素-（IL-）的水平6、IL-8、可溶性细胞间粘附分子-1（sICAM-1）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）以及人单核细胞白血病细胞系THP-1对IL-1的粘附减弱β刺激ARPE-19细胞。木犀草素还能提高抗炎蛋白血红素加氧酶-1 (HO-1)的水平。有趣的是，木犀草素可诱导蛋白激酶B (AKT)磷酸化，从而抑制NF-κB从细胞质转移到细胞核并抑制有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)的炎症途径。此外，与MAPK抑制剂和木犀草素联合治疗可降低炎症细胞因子和趋化因子水平，进一步抑制THP-1粘附。总的来说，这些结果提供了木犀草素保护ARPE-19细胞免受IL-1侵袭的证据β通过阻断MAPK和NF-的激活IL-6，IL-8，sICAM-1的，和MCP-1生产的刺激的增加κB信号通路，从而改善炎症反应。

1.介绍

视网膜色素上皮(RPE)是一层色素细胞，与光感受器密切接触，维持视觉功能[1］.RPE暴露在紫外线/可见光下会导致视网膜组织氧化应激和慢性炎症。炎症显然在年龄相关性黄斑变性(AMD)的发展中发挥了作用，这是老年人和糖尿病视网膜病变严重不可逆视力损害的原因[2，3.]多种因素促进视网膜组织变性和AMD进展，包括遗传和环境因素、衰老和氧化应激[4］.AMD累及黄斑的光感受器细胞减少和视网膜色素上皮功能障碍，可分为“干性AMD”或“湿性/渗出性/新生血管性AMD”。与新生血管性AMD相比，干性AMD发生率较高，但视力退化较少，因此较少成为“失明”的原因[5，6］.新生血管性AMD的特点是在视网膜下过度的脉络膜新生血管（CNV），导致视网膜水肿，甚至脱落，从而造成视力减退。值得注意的是，干性AMD可潜在地发展成新生血管性AMD，导致不可逆的视力丧失[7，8］.因此，预防黄斑变性是避免老年人和糖尿病视网膜病变患者视力下降的最佳手段。

现有数据提示，AMD患者血清或眼组织中大量炎性细胞因子和趋化因子升高，包括白介素-6 (IL-6)、IL-8、单核细胞趋化蛋白(MCP-1)和细胞间粘附分子(ICAM-1) [9- - - - - -11］.值得注意的是，与对照组相比，新生血管性AMD患者眼内液中IL-6水平升高，研究结果表明，IL-6和IL-8在AMD进展中促进血管生成[12，13].眼内MCP-1是单核细胞募集的趋化因子，ICAM-1是促进白细胞迁移的粘附分子。研究表明，MCP-1水平升高有助于渗出性AMD患者黄斑下新生血管膜的发育和黄斑水肿的程度，以及可溶性ICAM-1（sICAM-1）的升高水平与脉络膜新生血管相关[13，14］.炎症介质，包括趋化因子和细胞因子，可以上调ICAM-1的表达。IL-6可直接或间接激活白细胞诱发视网膜炎症。研究发现MCP-1可将白细胞招募到损伤部位并激活ICAM-1;因此，ICAM-1诱导白细胞-内皮相互作用，并促进白细胞迁移到参与炎症反应的血管外位置[14，15］.更多的研究发现IL-8和MCP-1可以吸引中性粒细胞和单核细胞迁移到炎症组织。il - 1β是促炎细胞因子，促进RPE中趋化因子的上调，作为局灶性视网膜变性的模型[15］.在本研究中，我们评估了木犀草素在ARPE-19细胞- thp -1单核细胞相互作用中调节炎症的能力。眼组织中炎性细胞因子IL-6、IL-8、MCP-1和ICAM-1的水平与渗出性AMD的发生和进展显著相关[4］.此外,il - 1β激活炎症相关通路，包括核因子(NF-)κB和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号，从而提高了生产的促炎介质的MCP-1，IL-6，环氧合酶-2（COX-2），和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）。促炎介质与视网膜变性疾病的发生和发展[密切相关的15，16］.

毛地黄黄酮(Lu), 3’,4’,5,7-tetrahydroxyflavone, is a flavonoid polyphenolic compound found in numerous vegetables (e.g., celery, carrots, broccoli, and peppers), fruits (e.g., apple, mango, blueberry, peaches, and prunes), and herbs (e.g., chrysanthemum flowers and蒲公英mongolicum) [17- - - - - -20.］.在以前的研究，这是表明，木犀草素示出抗炎，抗癌，神经保护，并在体外和动物模型中的抗病毒性质[21- - - - - -25］.因此，木犀草素已被调查的潜在用途在治疗肥胖症[26]、肥胖相关疾病及抗糖尿病药物[27- - - - - -29]及神经保护疗法[30.，31］.在眼科研究中，木犀草素可保护ARPE-19细胞免受氧化应激相关损伤并减少炎症[32，33］.木犀草素可预防糖尿病引起的视网膜病变进展，据报道可抑制炎症相关标志物NF-的表达κB和il - 1β于，降低脂质过氧化产物丙二醛（MDA）的水平，并增加在糖尿病诱导的氧化应激抗氧化剂谷胱甘肽（GSH）在视网膜[34］.这些结果表明使用木犀草素用于预防和治疗视网膜炎症性疾病的潜力。

根据现有数据，我们推测IL-6、IL-8、MCP-1和sICAM-1可能是AMD治疗或预防的靶分子。在本研究中，我们旨在评估促炎细胞因子IL-1刺激的ARPE-19细胞中木犀草素诱导抗炎作用的机制β(图1）.

2.材料和方法

2．1.材料

木犀草素(≥从Sigma-Aldrich（美国密苏里州圣路易斯）购买98%纯度的TLC）、细胞计数试剂盒-8分析（CCK-8）和DAPI溶液。人重组促炎细胞因子IL-1β酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒购自R&D Systems公司(Minneapolis, MN, USA)。抑制剂PD98059、SP600125、SB202190和Bay 117082购自Enzo生命科学公司(Farmingdale, NY, USA)。抗体β-actin、COX-2、iNOS、HO-1、AKT和磷酸化- (phospho-) AKT购自Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA)。抗JNK、ERK、p38、phospho-JNK、phospho-ERK、phospho-p38的抗体购自Millipore公司(Billerica, MA, USA)。

2.2。木犀草素和细胞培养的制备

木犀草素溶于二甲基亚砜(DMSO)中，制备100mm的原液，在−20℃保存。最终培养基DMSO浓度≤0.1%，如前所述[16］.ARPE-19人视网膜色素上皮细胞系购自生物资源收集与研究中心(BCRC，台湾)，培养于Dulbecco 's modified Eagle 's培养基(DMEM)/F-12培养基(Invitrogen-Gibco，佩斯利，苏格兰)，含10%热灭活胎牛血清(FBS;青霉素G (100 U/mL)、链霉素(100μg/mL)、庆大霉素(50 ng/mL)。细胞在37°C、5% CO的湿化气氛中每2-3天传代一次₂．ARPE-19细胞( ）使用或不使用不同浓度的木犀草素（1-30）进行预处理 μM) 1 h，然后是IL-1β(1μg / mL)补充道。24 h后，对ARPE-19细胞进行western blot分析，培养基样品进行ELISA分析。THP-1人单核细胞白血病细胞系来自美国型培养收集(Manassas, VA, USA)。THP-1细胞在含胎牛血清(10%)的RPMI 1640培养基(Gibco)中培养，37℃，5% CO的湿化气氛₂每3-4天传代一次。

2.3.细胞活力测定

如前所述，我们使用CCK-8试剂盒(Sigma-Aldrich)评估木犀草素对细胞活力的抑制作用[35].细胞在10℃下接种⁵将细胞/孔放入96孔板中，并用浓度为1-100的木犀草素处理 μ静置24小时。处理后加入CCK-8溶液，37℃孵育2 h。最后，使用microplate reader (Multiskan FC;Thermo, Waltham, MA, USA)。每个浓度的CCK-8检测进行三次重复，细胞存活率以相对于没有木犀草素处理的细胞的百分比进行报告。

2.4。ELISA检测

ARPE-19细胞（10⁵木犀草素浓度(1-30μM)在24孔板中浸泡1小时。然后il - 1β(1 ng/mL)，培养24 h。采用ELISA试剂盒检测上清中IL-6、IL-8 MCP-1和ICAM-1的水平。450 nm处的OD值由microplate reader (Multiskan FC;热)。

2．5．总蛋白的制备

ARPE-19细胞(木犀草素预处理或不预处理(1-30μM) 1小时。在6孔板中，分别用或不用IL-1刺激细胞β(1ng/mL) for 24 h to evaluate total protein content, or for 30 min to evaluate phosphorylated protein content. Cells were harvested with 300 mL lysis buffer (50 mM Tris–HCl, pH 7.4; 1 mM EDTA; 150 mM NaCl; 1 mM DTT; 0.5% NP40; and 0.1% sodium dodecyl sulfate (SDS)) containing protease inhibitor cocktail and phosphatase inhibitors (Sigma, St. Louis, MO, USA). The BCA assay kit (Pierce) was used to quantitate all protein concentrations.

2.6。免疫印迹分析

蛋白质样品在10% SDS聚丙烯酰胺凝胶上分离，然后转移到聚偏氟乙烯(PVDF)膜(Millipore, Billerica, MA, USA)。接下来，PVDF膜在4°C下与特异性一抗孵育过夜β-actin (Sigma)， COX-2, iNOS, HO-1, AKT, pAKT (Santa Cruz, CA, USA)， JNK, pJNK, p38，和pp38 (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, USA)。然后用Tween 20 (TBST)缓冲液冲洗3次，与二抗室温孵育1 h。蛋白检测使用鲁米诺/增强液(Millipore)，信号检测使用BioSpectrum 600系统(UVP, Upland, CA, USA)定量蛋白条带。

2.7。单核细胞粘附试验

第一步，AREP19细胞( 木犀草素(1、3、10、30)预处理μM)或抑制剂(10μM SP600125, 10μM PD98059，10 μM SB202190，或5μM Bay 11-7082)在DMEM培养基中1小时。THP-1细胞( 用荧光染料(5μM calcein-AM) in RPMI-1640 medium at 37°C for 30 min in the dark and then washed by centrifugation. Second, the labeled THP-1 cells were cocultured with the ARPE-19 cells in plates for 1 h, and then, the cells were washed three times with PBS to remove nonadherent THP-1 cells. Finally, the extent of adhesion of THP-1 cells to ARPE19 cells was observed under fluorescence microscope (4 per view; magnification, ×200; Olympus Corporation, Tokyo, Japan). The control groups were treated with IL-1β所有的实验都重复了三次。

2.8。免疫荧光染色

ARPE19细胞接种到6孔板中，直至达到50-60％汇合，并用或不用木犀草素（1，3，10预处理和30 μM)作用1 h，然后加入IL-1β15分钟。然后吸出培养基，PBS冲洗细胞。用4% ( ）多聚甲醛与抗nf -孵育κB p65抗体在4°C过夜。次日取出培养液，PBS洗涤细胞，室温与二抗孵育1 h。PBS洗涤2-3次，加入荧光染料(BODIPY493/503或BODIPY581/591)。再用PBS洗涤细胞以去除染料，4 '，6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI;Sigma)染色。最后，使用荧光显微镜(Olympus, Tokyo, Japan)获取图像。

2.9。统计分析

使用Image Lab软件(Bio-Rad)定量western blot条带的强度，使用ImageJ软件(W. Rasband, NIH, USA)测定粘附实验中THP-1细胞的数量。数据以 (SD)至少来自三个独立实验。统计分析包括单因素方差分析(ANOVA)，然后是Tukey的事后检验。一个值< 0.05被认为是显著的。

3.结果

３．１．木犀草素抑制IL-1炎症介质的表达，增加抗炎蛋白HO-1的表达β刺激ARPE19细胞

首先，我们进行了CCK-8测定，以评估在ARPE-19细胞的细胞毒性木犀草素。的木犀草素≤50浓度 μM对ARPE-19细胞无明显的细胞毒性，但浓度≥100时细胞数量显著减少μM(图2(一个)）.因此，所有后续实验均使用1-30进行μ毛地黄黄酮。ARPE-19细胞接种于6孔板，木犀草素处理，1 ng/mL IL-1刺激β．相比之下,il - 1β单独使用木犀草素≥1μM显著抑制炎症介质iNOS的表达(图)2 (b)和2 (c))，但未显著抑制COX-2的表达(数据未显示)。值得注意的是，与IL-1相比β单独治疗，1和30μM木犀草素显著增加抗炎蛋白HO-1的表达(图)2 (d)和2 (e)）.以往的研究表明，AKT的激活可能有助于抑制NF-κ炎症相关疾病中的B炎症通路[36］.我们的研究结果表明，木犀草素在≥1 μM增强IL-1中磷酸化AKT蛋白的表达β与IL-1处理的ARPE19细胞相比β单独（图2 (f)和2 (g)）.

３．２．木犀草素抑制炎症相关细胞因子并降低THP-1细胞对IL-1的粘附β刺激ARPE-19细胞

用木犀草素(1、3、10或30)预处理ARPE-19细胞μM) 1 h, 1 ng/mL IL-1β加入24 h。il - 1β与对照组细胞相比，单独治疗显著刺激ARPE19细胞释放细胞因子和趋化因子。木犀草素浓度为10和30μM明显抑制IL-1β诱导IL-6和IL-8的释放，并降低细胞粘附分子sICAM-1的水平。此外，治疗30μ与IL-1治疗相比，M木犀草素显著降低MCP-1水平β单独（图3(一个)- - - - - -3 (d)）.由于≥10木犀草素浓度 μM强烈抑制sICAM-1水平，我们进一步研究木犀草素是否能减弱THP-1细胞对IL-1的粘附β刺激ARPE-19细胞。木犀草素预处理显著抑制THP-1细胞对IL-1的粘附β与IL-1处理的ARPE-19细胞相比β单独（图3 (e)和3（f））.

3．3.毛地黄黄酮抑制NF -κB激活抑制THP-1细胞粘附IL-1β刺激ARPE-19细胞

我们观察到，木犀草素显著上升AKT激活（图2 (f)和2 (g))， pAKT此前已被证实与NF-的抑制有关κB炎症途径[37］.因此，我们评估木犀草素是否抑制NF-κB与THP-1细胞粘附IL-1的抑制有关β刺激ARPE-19细胞。用木犀草素或不用木犀草素预处理细胞(1-30μM)刺激1小时，然后用IL-1刺激β(1 ng/mL)处理15 min，观察木犀草素是否抑制NF-κB p65易位。免疫荧光染色显示木犀草素≥10μM抑制NF -κ在IL-细胞中，B p65从细胞质转位到细胞核，p65亚基保留在细胞质中β-激活ARPE-19细胞(图4(一)）.然后，我们评估木犀草素是否抑制IκB磷酸化。木犀草素治疗≥1μM显著抑制磷酸化IκB的表达，与IL-1相比β单(图4 (b)）.我们进一步研究木犀草素是否通过抑制NF-的降低THP-1细胞粘附于ARPE-19细胞κB p65激活。首先，ARPE-19细胞用木犀草素(10μM)或11-7082湾(5μM) 1 h后用IL-1刺激β．其次，将预处理后的ARPE-19细胞与标记的THP-1细胞共培养。我们的结果表明木犀草素和Bay 11-7082预处理均显著抑制THP-1细胞对IL-1的粘附β-刺激ARPE-19细胞与IL-1处理细胞的比较β单独（图4 (b)和4（c））.

3．4．木犀草素阻断了MAPK炎症通路，MAPK抑制剂降低了THP-1细胞对IL-1的粘附β刺激ARPE-19细胞

接下来，我们评估木犀草素是否抑制MAPK磷酸化，以及这是否与THP-1细胞粘附IL-1降低有关β刺激ARPE-19细胞。首先，用木犀草素预处理细胞(1-30μM)孵育1 h后与IL-1孵育β(1 ng/mL)处理30 min或24 h，检测MAPK信号蛋白的表达。结果表明木犀草素≥3μM显著降低磷酸化c-JUN n端激酶(pJNK) 1/2的表达，木犀草素在≥10μM显著降低磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK) 1/2的表达，木犀草素≥3μM显著降低磷酸化p38蛋白的表达(图)5（a），5 (b)，6(一)，6 (b)，7(一)， 和7 (b)）.我们进一步评估木犀草素抑制mapk的作用是否与THP-1对ARPE-19细胞的粘附降低有关。ARPE-19细胞经10μM木犀草素和/或10 μM的JNK抑制剂SP60012, ERK1/2抑制剂PD98059，或p38抑制剂SB202190孵育1 h，然后与IL-1孵育β(1 ng/mL)孵育24 h。所有预处理均降低THP细胞对ARPE-19细胞的粘附。此外，木犀草素+ SP60012或木犀草素+ SB202190联合预处理，与单独使用这些制剂相比，可以显著降低THP-1粘附(图)5 (c)，5 (d)，6 (c)，6 (d)，7 (c)， 和7（d））.

3.5.MAPK抑制剂介导IL-1中细胞因子和趋化因子的水平β刺激ARPE-19细胞

我们观察到木犀草素显著降低IL-1中IL-6、IL-8、sICAM-1和MCP-1的释放β-刺激ARPE-19细胞(图3(一个)- - - - - -3 (d))，并显著抑制MAPK通路(图5（a），5 (b)，6(一)，6 (b)，7(一)， 和7 (b)）.接下来，我们研究了MAPK抑制剂是否可以减弱IL-1β-刺激炎症细胞因子IL-6、IL-8和MCP-1的产生。ARPE-19细胞用木犀草素和/或MAPK抑制剂预处理(10μM SB202190, 10μM PD98059，或10μM SP600125)孵育1 h后与1 ng/mL IL-1孵育β24 h。有趣的是，MAPK抑制剂和木犀草素预处理可显著降低IL-1中IL-6、IL-8、sICAM-1和MCP-1的水平β-刺激ARPE-19细胞(图8（a）- - - - - -8 (d)）.这些结果表明，IL-1β刺激的ARPE-19细胞，木犀草素通过影响的p38的磷酸化，ERK1 / 2抑制IL-6，IL-8，sICAM-1的，和MCP-1的表达，和JNK1 / 2。

4.讨论

在许多视网膜退化（RD）的疾病，发病机理是炎症诱导的，涉及小胶质细胞和巨噬细胞的募集和激活，炎症介质（COX-2和iNOS）的表达，和感光细胞死亡。促炎细胞因子IL-1β引发炎症反应，吸引炎症细胞迁移到视网膜，促进视网膜损伤和视网膜变性[38，39］.大量研究报道IL-1β激活其他促炎细胞因子的表达并调节趋化因子的表达。促炎细胞因子可在RD发病机制中靶向并诱导视网膜炎症[36，37]，植物化学成分木犀草素具有良好的抗炎特性[32，33]因此，我们在此详细探讨了木犀草素在IL-1中的抗炎作用β刺激ARPE19细胞。

既往研究表明，在AMD的发展和进展中，细胞因子IL-6和IL-8促进血管生成，而趋化因子MCP-1和细胞粘附分子ICAM-1促进白细胞向眼组织转移[4，12- - - - - -14］.升高il - 1β在视网膜脱离患者和小鼠模型中，玻璃体或视网膜中的IL-1水平导致光感受器细胞死亡，同时IL-1降低β抑制光感受器细胞死亡的水平[40］.在本研究中，我们证实木犀草素显著抑制IL-1中细胞因子和趋化因子的释放β-刺激ARPE-19细胞(图3(一个)- - - - - -3 (d)）.先前的研究也表明，ICAM-1在炎症介质的反应中上调，介导白细胞在RPE上的粘附和转运，而ICAM-1水平的降低可以抑制RPE细胞中的单核细胞粘附[41，42］.在这里，我们证明木犀草素抑制sICAM-1水平，减弱THP-1细胞对IL-1的粘附β-刺激ARPE-19细胞(图3 (e)）.我们还发现木犀草素显著抑制iNOS蛋白表达，增加HO-1蛋白表达(图)2 (b)和2 (d)）.这些发现支持了木犀草素确实是一种抗炎植物化学成分，可以在ARPE-19细胞衰减促炎性细胞因子诱导的炎症。

il - 1β激活NF -κB信号与RD疾病密切相关[15，16]， pAKT与NF-的抑制有关κB炎症途径[36］.以往的研究表明，IL-1β激活NF -κB，导致其从细胞质转位到细胞核，随后在ARPE-19细胞中诱导细胞因子和趋化因子表达[43］.我们目前的研究结果表明木犀草素促进AKT磷酸化(图2 (f)和2 (g)),抑制NF -κB p65活化，抑制THP-1细胞粘附（图4）.这些发现表明木犀草素可以促进AKT磷酸化从而阻断NF-κB p65激活，从而抑制THP-1细胞对IL-1的粘附β刺激ARPE-19细胞。许多研究表明MAPK信号通路在AMD中起重要作用[44］.我们观察到木犀草素降低IL-1中IL-6、IL-8、sICAM-1和MCP-1的表达水平β刺激ARPE-19细胞。因此，我们进一步研究木犀草素是否通过抑制MAPK途径来减轻炎症反应。我们的研究结果表明木犀草素显著抑制MAPKs JNK 1/2、ERK 1/2和p38的磷酸化，支持木犀草素可能通过阻断MAPK通路来减少IL-6、IL-8I、sICAM-1和MCP-1的产生(图)5（a），5 (b)，6(一)，6 (b)，7(一)， 和7 (b)）.

人类和动物研究表明，特异性MAPK抑制剂可能是RD疾病治疗的潜在治疗靶点[44］.探索个体的MAPK的重要性，我们使用了MAPK抑制剂SP600125（JNK 1/2抑制剂），PD98059（ERK 1/2抑制剂）和SB202190（P38），单独地和如结合木犀草素cotreatments IL-1β刺激ARPE-19细胞。我们发现木犀草素和MAPK抑制剂降低THP-1细胞对IL-1的粘附β-刺激ARPE-19细胞(图5 (c)，5 (d)，6 (c)，6 (d)，7 (c)， 和7（d））.我们进一步发现这些MAPK抑制剂可减弱IL-1β-刺激炎症细胞因子IL-6、IL-8、sICAM-1和MCP-1的产生(图)8（a）- - - - - -8 (d)）.这些结果表明木犀草素阻断了MAPK通路，抑制了炎症相关细胞因子的表达，从而抑制了THP-1的粘附。

5.结论

我们目前的数据表明，木犀草素通过灭活NF-抑制促炎细胞因子诱导的视网膜色素上皮(RPE)炎症κIL-1的B通路β刺激ARPE-19细胞。此外，MAPK抑制剂和木犀草素共同作用可降低THP-1细胞对IL-1的粘附β刺激ARPE-19细胞。重要的是，木犀草素显著降低IL-1中IL-6、IL-8、sICAM-1和MCP-1的表达水平β刺激ARPE-19细胞。综上所述，我们的研究结果提示木犀草素阻断MAPK通路，从而降低IL-6、IL-8、sICAM-1、MCP-1的表达水平，从而抑制THP-1细胞对IL-1的粘附β-刺激ARPE-19细胞(图9）.我们认为木犀草素可以通过抑制NF-来改善炎症诱导的视网膜变性相关疾病κIL-1中的B和MAPK通路β刺激ARPE19细胞。

缩写

RPE:	视网膜色素上皮细胞
理查德·道金斯:	视网膜变性
AMD：	年龄相关性黄斑变性
ARPE-19细胞:	人视网膜色素上皮细胞
鲁侍萍	毛地黄黄酮
il - 1β：	Interleukin-1β
il - 6:	白细胞介素- 6
引发:	Interleukin-8
sICAM-1:	可溶性细胞间粘附分子-1
MCP-1:	单核细胞化学引诱物蛋白1
HO-1:	血红素oxygenase-1
一种蛋白激酶:	蛋白激酶B
伊诺:	诱导型一氧化氮合酶
NF-κB:	核因子-κB
MAPK:	增殖蛋白激酶
ELISA:	酶联免疫吸附试验
JNK：	c-JUN n端激酶
兵:	细胞外signal-regulated激酶。

数据可用性

用于支持本研究发现的数据可由通讯作者要求提供。

的利益冲突

作者声明，本论文的发表不存在利益冲突。

作者的贡献

黄文忠和刘建军对这项工作贡献相当。

致谢

本研究由长庚纪念医院(CMRPF1G0203, CMRPF1J0041)、科技部(MOST 108-2320-B-255-004-)、台湾长庚科技大学(ZRRPF3J0081)资助。

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