亚临床感染的细胞和细胞因子在牛奶牛乳腺免疫调节组合使用后按810

文摘

本研究的目的是调查的影响,乳房内的注入天然成分按810年immunomodulating属性在本地非特异性的细胞和体液免疫反应与亚临床乳腺炎奶牛。成分按810年由乳酸、溶菌酶、糖肤,0.9%氯化钠溶液。以下参数进行了研究:(1)白细胞微分分布在牛奶,牛奶中(2)表达细胞因子白细胞,(3)抗菌活性,和(4)牛奶质量。19五泌乳奶牛乳腺被注入了810年GLP 10毫升,和其他19个腺体从五个控制奶牛服用10毫升0.9%氯化钠。后结果表明,乳房内的成分GLP管理810三次间隔48小时,以下对牛奶中白细胞数量的影响观察:(1)多形核白细胞和淋巴细胞的数量的增加,(2)减少巨噬细胞的数量。减少病原菌的数量也被检测到。肿瘤坏死因子-α的分析、白细胞介素- 10”和beta-defensin-2透露,上述细胞因子的生产显著增加,而对interleukin-1和caspase-6表达无显著影响牛奶中白细胞被记录下来。然而,乳腺之间有显著差异,高和低牛奶体细胞数。结果表明GLP组成810对乳腺有免疫调节作用,可用于提高免疫反应与亚临床乳腺炎奶牛在哺乳期间。

1。介绍

乳腺炎、乳腺炎症是一种疾病在全球乳制品行业主要经济重要性的讨论(其他地方1,2]。亚临床乳腺炎是一种乳腺的特定条件,其特征是一个长期低强度乳腺组织的感染和随后的损伤导致牛奶成分的变化。动物免疫状态的发展中扮演着重要角色乳腺炎后细菌的入侵到乳腺;因此,动物卫生的维护通过鼓励的天然免疫防御包括使用免疫调制剂可以作为一个重要的替代抗生素治疗。主要,乳腺炎的治疗仍然是基于使用抗生素,但据蒸煮汁(3)和Persoons合作者(4),这种治疗的总体费用是相当昂贵的,同时其有效性不断下降,与重大危害公共卫生因为牛奶中残留的存在可以促进抗生素耐药性的发展。

对抗细菌耐药性的发展是基于谨慎和合理使用抗生素,这是一个优先级的任务在全球人类健康部门和兽医,但还需要治疗乳腺炎的替代方法来执行这项任务。作者表明,使用天然物质,如乳铁蛋白(5),乳酸链球菌肽(6],lacticin [7),而益生菌乳酸杆菌(8- - - - - -10]在牛乳腺炎的治疗也有效。本研究的目的是调查的影响,乳房内的注入天然成分按810年immunomodulating属性在本地非特异性的细胞和体液免疫反应与亚临床乳腺炎奶牛。

2。材料和方法

2.1。成分按810

免疫调节成分按810 (PCT专利WO2017010856A1)用于本研究准备研究所的微生物学和里加Stradins大学的病毒学和下面的成分包含在每个单剂量的准备:乳酸500毫克,溶菌酶300毫克,糖肽乳酸菌helveticus10毫克,0.9%氯化钠溶液在水中10毫升。

2.2。动物和实验设计

十个荷斯坦和拉脱维亚中间棕色奶牛泌乳期的2^nd或3^{理查德·道金斯}奇偶校验。他们的平均305天的产量是8000公斤。320头奶牛的群由设在tie-stall安排和挤奶,一天两次。参与本研究亚临床感染牛中的一个或两个乳房glands-six 19哺乳期乳腺在各组奶牛乳房炎造成体细胞计数升高(SCC)大于或等于400000个每毫升每个组合的牛奶。所有的奶牛包含在本研究体细胞计数增加至少连续两个月。牛都没有收到任何与毒品有关的干预治疗开始日期前至少30天。没有牛的历史并发疾病以外的亚临床乳腺炎和没有临床意义上的发现。在研究开始的,没有有任何可见的视觉变化牛奶属性。研究乳腺的单位。19乳腺实验牛组被注入了10毫升的成分按810年三次每隔48 h (1^圣3^{理查德·道金斯},5^th天)。19在控制奶牛乳腺组10毫升的0.9%氯化钠溶液处理同时作为实验组。早上输液进行挤奶后4:00到6:00点。牛的临床评估健康状况进行日常的1^圣到7^th天、第14天,标志着变化在以下参数:系统性变化(体温、牛奶产量和需求),临床乳腺的外观(发红、硬度、疼痛、肿胀和热),和视觉外观的牛奶(片、凝块和水外观)。控制解决方案和免疫调节成分融合通过乳头管是使用一个单独的一次性奶头插管J-12(每个乳腺约根森实验室、美国)。在注入之前,奶头擦洗垫浸泡在70%乙醇;然后,四到六流牛奶被吸引和丢弃,和消毒是重复的。灌注后的解决方案,在上行方向进行乳房按摩促进一个更分散的解决方案到乳腺。乳头是蘸碘消毒剂溶液通过执行例行乳房卫生措施。季度牛奶样本所有奶牛都是无菌收集从每个乳腺5倍,即治疗前(1^圣在3 d)和^{理查德·道金斯},5^th7^th,14^th天第一次输液。总共426份牛奶样本在这项研究中获得,以下检查:细菌检查,微分体细胞计数,采用免疫分析,和牛奶质量研究。

这项研究仅限于常规田间观察和测量,包括牛奶样本集合,没有不便或压力的动物。成分按810年,单独使用,包括注册的成分。

2.3。细菌检验

微生物实验室进行微生物检查的食品和环境卫生研究所的拉脱维亚大学的生命科学和技术学院兽医(LLU VMF)。细菌检验分析包括评估的总数mastitis-causing致病性细菌和细菌间隙,即。,没有牛奶中的细菌的增长。

按照标准执行枚举的葡萄球菌lv EN ISO 6888 - 1:1999 / A1:2003”微生物的食物和动物饲养stuffs-Horizontal方法coagulase-positive枚举的葡萄球菌(金黄色葡萄球菌和其他物种)- 1:技术使用Baird-Parker琼脂medium-Amendment 1:包含精度数据”。我们确认的识别金黄色葡萄球菌诊断试剂”Staphytect +”(英国Oxoid),在一个积极的反应(确认金黄色葡萄球菌),根据制造商的指示,是宏观上可见雪花的形成。coagulase-negative葡萄球菌的分离鉴定进行了一个物种水平使用洗液水晶革兰氏阳性ID (Becton, Dickinson和公司、美国)和谱生物型(力量,DE)按照制造商的指示。家庭的枚举的细菌肠杆菌科是由倒盘技术按照标准lv ISO 21528 - 2:2007”微生物的食物和动物饲养stuffs-Horizontal检测和枚举的方法吗肠杆菌科- 2:菌落计数法”。大肠杆菌检测是按照先前描述的技术(11]。隔离链球菌和肠球菌种虫害后细菌进行微生物调查(英国标准12]。此外,PathoDxtra喉炎的症状分组包Lancefield组(A, B, C, D, F和G)链球菌按照制造商的指示种虫害识别使用(英国Oxoid)。乳酸菌的决心(乳酸菌执行spp)。根据作者描述的方法(11]。这种方法是基于需求的标准ISO 15214: 1998年“微生物的食物和喂养动物stuffs-Horizontal嗜中温乳酸细菌菌落计数法测定方法在30°C”。

2.4。微分的体细胞计数

微分计算的牛奶涂片进行根据作者描述的方法(13)指定属于白细胞的数量。这次调查同时进行微生物实验室的食品和环境卫生研究所LLU VMF。涂片检查都是由光学显微镜放大400倍和1000倍,计算100 - 200细胞,确定他们属于白细胞数量:淋巴细胞,巨噬细胞和多形核白细胞(PMNL)。

2.5。采用免疫分析

一个定制的biotin-streptavidin采用方法被许等进行描述。14)来评估炎性细胞因子的表达(il - 1)及肿瘤坏死因子-α(TNF -α),inflammatory-inhibiting细胞因子白细胞介素- 10”(il - 10),抗菌肽beta-defensin-2 (BD-2)表达式,以及细胞凋亡标记caspase-6牛奶。试样的制备和把牛奶沉积物放在玻璃幻灯片进行微生物学实验室的食品和环境卫生研究所LLU VMF,但是染色涂片是研究所的解剖学和形态学实验室里加Stradins大学人类学。以下主要抗体被用于采用免疫染色涂片:兔多克隆il - 1α(代码AB17281稀释比例1:200年,Abcam,英国)和il - 10 (Abcam Ab34843代码,1:400年,英国),山羊多克隆beta-defensin-2 (RD系统代码AF2758, 1: 100年,英国),兔单克隆caspase-6 (Abcam Ab52951代码,1:250年,英国)和兔多克隆肿瘤坏死因子-α(Abcam ab6671代码,1:100年,英国),和biotin-related二级抗体(LSAB +链接,代码K1015,DakoCytomationDK)。

2.6。牛奶质量研究

牛奶质量的检查进行了乳品实验室有限公司(Ulbroka、拉脱维亚)。体细胞的数量取决于fluorooptoelectronic使用Fossomatic FC体细胞计数细胞计数(自由/开源软件a / S, DK)按照标准lv EN ISO 13366 - 2:2007“Milk-Enumeration体细胞cells-Part 2:指导fluoro-opto-electronic计数器的操作”。细菌总数的测定进行了电子设备的“BactoScan俱乐部”(自由/开源软件电动,DE)。测定的脂肪,乳糖,牛奶中蛋白质含量(%)进行了使用红外光谱学方法按照ISO标准9622:1999”全脂牛奶。测定牛奶脂肪,蛋白质和乳糖内容指南中红外仪器的操作。“pH值是用酸度计;它的工作原理是测量牛奶的导电性和显示结果转换成相应的pH值。

2.7。统计分析

结果表示为 错误。比较执行的平均参数的动力学魏克森讯号等级两个示例测试。的Mann-Whitney测试是用于GLP 810和对照组之间比较参数。我们也用卡方检验独立评估两个变量是否不同于彼此。克莱默的测试允许我们评估的力量和相关性两个特性之间的关系,不符合正态分布或两个规模变量。相反,我们使用肯德尔(Kendall tau-b)的相关系数来衡量两个序数变量之间的关系(15,16]。评价细胞因子的表达,BD-2 caspase-6,半定量的计算方法,积极的结构的相对数量(17使用了)。积极的结构根据其数量成免疫反应性的细胞被分成几个组:(-),(+),平均(+ +),和(+ + +)。通过采用比较结果的分布方法,相对使用频率计算模型(18]。统计学意义是 所有统计分析。

3所示。结果

3.1。牛奶中白细胞动力学

用牛奶白细胞微分计算,显著增加的数量多形核白细胞(PMNL)观察到发生的牛奶实验(约56 - 63%, )和对照组(45 - 63%, , )乳房内的注入后,如表所示1。PMNL数的增加一直持续到14日^th天,实验组乳腺可能不再,而14 PMNL的数量减少^th在对照组牛奶从基线与无显著差异。

如表所示1淋巴细胞的数量显著增加牛奶的实验组( ),而无显著变化( )在淋巴细胞计数检测对照组乳腺。输液后巨噬细胞的数量减少牛奶的实验( )和对照组( )。应该是巨噬细胞的绝对数量没有改变明显,因为他们的分数比例降低了由于平行PMNL和淋巴细胞的增加。图1显示了一个典型的牛奶涂片的牛鳞状细胞癌高3^{理查德·道金斯}一天的学习。

总之,810年GLP注资后,改变牛奶的PMNL计数(增加50 - 60%)以及淋巴细胞(增长60%)和巨噬细胞(减少65%)数持续在整个观察,即。,从3^{理查德·道金斯}一分。^th的一天。在对照组,细胞分布的重大变化(PMNL的数量已经增长了50 - 60%和巨噬细胞的数量下降了30 - 75%)一直持续到7^th14天但回到基线^th的一天。

3.2。炎性细胞因子的表达

注入前,TNF -α免疫反应性的细胞,主要是巨噬细胞,奶牛的牛奶中发现了组。这些细胞被发现存在于少量在类似的频率(16 - 25%)没有任何相关性SCC和致病细菌的数量。如表所示2,一旦注入GLP 810开始,TNF的表达α在实验显示乳腺一般倾向于增加2.3倍,在接下来的周期从3^{理查德·道金斯}到7^th天保持不变。

TNF的表达α(见图2)明显高于鳞状细胞癌高的样本和大量的致病菌(超过 )较低的比样品鳞状细胞癌( )。此外,肿瘤坏死因子-α从免疫细胞释放的1^圣一天只发现在那些牛奶样品,体细胞组成PMNL的10%以上,淋巴细胞比例不到10%。

810年组成GLP注资后,il - 1的表达在免疫细胞倾向于逐渐减少,和7^th天,il - 1被发现少大约80%基线组(见表2)。在整个研究中,il - 1是只发现实验组的牛奶样品中,金黄色葡萄球菌,葡萄球菌种虫害和细菌属于家庭肠杆菌科包括大肠杆菌分离(1 d克莱姆多项式系数。0.827和 ;三维克莱姆V多项式系数。0.659和 )。相比之下,当病原体不是孤立的,没有检测到细胞中il - 1的表达。

如表所示2,BD-2的表达的频率和强度实验组白细胞的牛奶已经增加3^{理查德·道金斯}天,但是发现了一个显著增加7^th天,当乳汁分泌的80%(15/19)的乳腺被打扰,大部分的牛奶样品(18/19)包含BD-2-positive细胞( )。BD-2-positive免疫细胞在变频控制的牛奶样品组也发现,但观察到的变化无足轻重。

il - 10表达的频率和强度的牛奶样品中实验组按810年注入后显著增加(3^{理查德·道金斯}一天, ;在7^th一天, )直到每个19实验组牛奶样品包含IL-10-positive细胞7^th的一天。il - 10的表达(见表呈下降趋势2在对照组的牛奶样品,和7^th天,这是与牛奶相比明显降低实验样本组( )。il - 10的表达在1^圣天高的牛奶样品中明显高于鳞状细胞癌(Kendall测试0.774 )。

如表所示2,caspase-6表达低,从统计学上看是无关紧要的变化( )在这两个研究小组。实验( )和对照组( )这些牛奶样品中只显示一个表达式的caspase-6 SCC超过 毫升¹。之间的显著关系也观察到的数量caspase-6-positive细胞和牛奶中PMNL的数量,因为很明显更多白细胞意味着更多caspase-6表达在白细胞(GLP 810组 ,在对照组 )。在整个研究中,这种酶的释放在学习小组发现只有在那些牛奶样品PMNL的数量至少是可数细胞的30%。

3.3。细菌检验

前管理成分按810年的乳腺,mastitis-causing细菌存在于84.2% ( )所有实验组的乳腺和47.4% ( )对照组乳腺。检测病原体属于金黄色葡萄球菌和其他属的细菌葡萄球菌和细菌肠杆菌科家庭,包括大肠杆菌,按810注入3^{理查德·道金斯}研究在10的16天提供完整的细菌学的间隙乳腺感染(62.5%)。细菌间隙在对照组3^{理查德·道金斯}一天中检测出4 9乳腺感染(44.4%)。在7^th学习一天,细菌学的间隙在8最初感染诊断乳腺的实验组(50.0%)和5乳腺的对照组(55.5%)这是一个不重要的区别。

此外,致病性细菌的总数是检查。因为它是显示在表中3,显著减少病原菌的总数的3^{理查德·道金斯}天87% ( )和7^th天92% ( )810年按组观察乳腺。

在整个研究中,致病细菌的总数没有变化显著( )最初低SCC和控制奶牛乳腺组,而致病菌的数量显著下降97% ( )在最初感染实验检测奶牛乳腺鳞状细胞癌高。

如图3的数量金黄色葡萄球菌实验组的牛奶中的细菌( )在1^圣一天平均 。两天之后第一次输液成分GLP的810年,金黄色葡萄球菌没有检测到任何牛奶样品,但是7^th天,一个低数量的病原体是孤立的只在一个示例(cfu 10.0毫升牛奶¹-99.9%小于1^圣研究一天)。

的平均数量肠杆菌科只是显著降低牛奶中的微生物样本按810研究小组( ),但的平均数量葡萄球菌种虫害显著减少牛奶在实验( )和对照组( , )(见图3)。

3.4。牛奶质量的评价指标

一般来说,一个快速增长的SCC中检测出牛奶后48小时实验组1^圣和3^{理查德·道金斯}注入GLP 810在对照组乳腺鳞状细胞癌动力学在整个研究期间在统计学上并不显著。鳞状细胞癌的增长主要发生在健康乳腺鳞状细胞癌(低1^圣天)( )在实验和控制学习小组,而鳞状细胞癌并没有改变非常的牛奶从乳腺发炎,如图4。

乳糖的牛奶的数量按810年研究小组大大减少从4.7% 1^圣在3天至4.1%^{理查德·道金斯}一天,7^th学习一天,乳糖含量仍显著降低( ),即。,by 4.2% (see Figure5)。注资后的牛奶蛋白质含量没有显著变化。牛奶中的脂肪含量实验组明显增加了3^{理查德·道金斯}天(从1.6%降至2.4%; ),但对照组表达无显著变化(见图5)。

3.5。牛奶的牛的健康和变化的一致性

视觉变化在牛奶的一致性,即。,一个small number of flakes or clots, were observed every day during the first week of the study. Significantly more frequent changes were found to be in the milk obtained from the experimental group cows from the 3^{理查德·道金斯}到6^th一天的学习。发现片和血栓的形成显著影响牛奶pH值( )因为他们只有牛奶样品中观察到的pH值范围6.40 - -6.52,也就是说,低于平均水平。此外,牛奶一致性的变化可能是由于白细胞的活动增加牛奶,因为几乎所有的牛奶样品(19/20),含有凝块和雪花,SCC(比也高 毫升¹)( )。

4所示。讨论

保护乳腺对非特异性感染是由协调合作或天生的和特定的或获得性免疫机制。因此,牛奶含有,永久或暂时的,各种各样的细胞和体液组件参与免疫反应,从而使牛奶产品生物活性。为了评估免疫调节的影响成分按810的功能状态牛乳腺非特异性细胞免疫系统在本地,我们评估了白细胞的数量。成分的影响按810个白细胞的数量和人口以及淋巴细胞亚群的表面在前面所讨论的牛外周血CD标记通过Gulbe合著者(19]。

目前的研究显示,应用乳房内的免疫调节成分按810年在奶牛亚临床乳腺炎的原因一个激活当地的非特异性细胞和非特异性体液免疫反应,导致经济增长的限制致病菌的乳腺。此外,我们发现,810年GLP拟议中的免疫调节平衡,包括吞噬细胞的同步迁移到乳腺组织和抗炎因子的释放,提供激活先天免疫控制的。观察免疫活动既包括非特异性细胞反应和反应之间的非特异性体液因素3^{理查德·道金斯}和14^th天的研究。

与合作者表示[Alnakip20.),白细胞在乳腺环境中永久存在,因为他们帮助乳房组织的重组在退化(即。,一个poptosis) or after inflammation and also provides immediate immune response in case of invasion of pathogenic bacteria while PMNL are the first recruited immune cells from blood to sites of infection in the mammary gland. As discussed elsewhere [21],PMNL的迁移在乳房内的感染导致的鳞状细胞癌,目的是增加吞噬细菌和产生活性氧分子和抗菌肽能够消除广泛的细菌引起乳腺炎。

PMNL的数量显著增加发生在治疗后的牛奶按810年,而白细胞的总数(在手稿描述(19])和分段中性粒细胞的数量(如表所示3,(22])的外周血没有显著不同于生理标准内的基线,实验组在整个研究期间,可能会得出结论,PMNL的相互作用在外周血和牛奶是指示性的leukocyte-compensated乳腺增生。另一方面,绝对数量的分段控制奶牛的血液中的白细胞组显著增加3^{理查德·道金斯}天超过生理规范当这些白细胞在控制牛奶的相对数量超过了生理标准在任何时候都在研究[22]。

几位作者23- - - - - -25]表明,循环血液中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬活动增加益生菌乳酸菌进入应用程序后通过免疫调节哺乳动物生物属性。也许,我们的研究推翻这个事实,因为注入后巨噬细胞的数量明显减少牛奶的实验和对照组。此外,没有非凡的巨噬细胞代表CD14的总数的变化⁺细胞被发现在牛血19]。认为巨噬细胞的主要功能是开发促进炎症的物质,从而刺激PMNL的吞噬与杀菌活动,但巨噬细胞的吞噬作用不是主要任务。日益增长的巨噬细胞活动注入后按810是由细胞因子表示动力学在手稿进一步描述。尽管我们认为的绝对数量巨噬细胞没有明显改变,他们的分数比例减少由于平行PMNL和淋巴细胞的增加。

我们发现按810对淋巴细胞活动有很大的影响在活的有机体内表示淋巴细胞的数量显著增加牛奶的实验组。考虑到前面描述的结果(19],奶牛血液中淋巴细胞的数量明显减少开始后按810注资,这表明一个短期noncompensated从外周血淋巴细胞迁移到乳腺。

使用牛奶白细胞微分计算,我们发现乳腺的炎症反应是持久因为PMNL和淋巴细胞数的增加,但是,与此同时,巨噬细胞计数下降一直持续到14^th天按810注资。

来衡量进步的乳腺的炎症反应,免疫反应性的细胞被标记的表达特异性的体液factors-interleukin-1 (il - 1)、肿瘤坏死因子-α(TNF -α)、白细胞介素- 10”(il - 10), beta-defensin-2 (BD-2),白细胞和caspase-6-was确定牛奶。

如前所述(其他地方21,26- - - - - -28),il - 1、TNF -α是主要的炎性细胞因子,参与本地和系统性免疫反应通过刺激中性粒细胞从外围血液白细胞趋化性乳腺组织,他们到达几分钟后感染。海军少校(29日)报告,TNF -的存在α中没有检测到健康的乳腺。

在研究的开始,输液前的准备,TNF -α免疫反应性的细胞,主要是巨噬细胞,奶牛的牛奶中发现了组。这些细胞被发现存在于少量在类似的频率(16 - 25%),没有任何相关的鳞状细胞癌和致病菌。当GLP注入的810年开始,TNF的表达α在实验乳腺总体上增加了2.3倍,在接下来的周期从3^{理查德·道金斯}到7^th天依然维持在高水平,表明这种炎症细胞因子在维护的重要性;维护PMNL活动,随着PMNLs数量的牛奶中明显升高期间从3^{理查德·道金斯}到7^th。众所周知,肿瘤坏死因子的主要生产者,中性粒细胞α在炎症。我们发现,TNF的表达α明显高于样品鳞状细胞癌高(平均 细胞毫升¹比样品鳞状细胞癌较低(平均) 细胞毫升¹)。此外,从免疫细胞释放的细胞因子1^圣一天只发现在那些牛奶体细胞组成的样本中,10%以上的PMNL lymphocytes-less超过10%。这样的牛奶中白细胞分布特征受感染的乳腺,Alhussien et al。30.]。

il - 1同样的肿瘤坏死因子-α是一种炎性细胞因子,但il - 1参与乳腺炎发病机制不是决定性的因素,它的重要性受到传染病所讨论的类型Alluwaimi [27]•舒斯特和Kehrli [31日]。810年GLP注资后,il - 1的表达在免疫细胞逐渐减少,和7^th天,这是大约80%低于基线数据。il - 1释放被认为是减少由于(1)巨噬细胞减少,(2)增加抗炎细胞因子il - 10版本,和(3)增加活动的细胞凋亡。

细胞凋亡在乳腺由增加的表达表示caspase-6 immune-reactive细胞在3^{理查德·道金斯}天约60%和巨噬细胞的数量减少65 - 70%的平均3^{理查德·道金斯}到7^th天。其他作者(27,32)也证实il - 1的主要分销商血液中的单核细胞和巨噬细胞的牛奶,但是在细胞凋亡,il - 1的含量减少。

Beta-defensin-2 (BD-2)的特点是杀菌对病原微生物和免疫调节作用的影响在特定和非特异性免疫力。正如前面所描述的Luenser和路德维希33和米德等。34),beta-defensins促进广谱白细胞趋化性炎症的网站。

牛奶中观察到的表达增加BD-2白细胞GLP 810注资后显示其重要作用消除致病细菌,以及促进PMNL和乳腺的淋巴细胞迁移。7上的牛奶了^th天的研究特点是也有条件致病菌的最低数量,数量的最低金黄色葡萄球菌和细菌肠杆菌科家庭和葡萄球菌spp。

彩等。35和旗手29日)表示,il - 10中发挥着关键作用在抑制炎症和行动对限制组织损伤有保护作用,促进组织更新后感染。我们也发现了在il - 10的表达显著增加牛奶的实验组。此外,il - 10在减少炎症的作用得到了证实,这immunity-regulating细胞因子的表达明显高于在牛奶体细胞计数(Kendall多项式系数升高。0.774, )和高架细菌总数(Kendall多项式系数。0.676, )。我们的研究证明il - 10的活动提供的实验组奶牛乳腺炎性反应平衡,其中包括细胞免疫的激活乳腺局部,并一直持续到14日^th研究一天(或9天后,最后注入)导致致病菌的数量减少和体细胞数的数量。

在研究过程中,我们发现810年GLP注资后,牛奶样品中病原菌的数量显著下降了87% (-92% )因为应用的抗菌活性成分。的抗菌活性乳酸、溶菌酶和益生菌被描述在其他地方(8,36- - - - - -38),但研究缺少对这些天然物质的作用在活的有机体内之后介绍了乳房。根据Panwar [39),奥利弗和井40王,et al。41)、溶菌酶和乳酸导致细菌细胞的生理和形态变化,导致细菌生长抑制和细胞死亡。作为作者,水解后的产品来源于细菌细胞壁溶菌酶作用能够提高免疫球蛋白分泌,激活巨噬细胞,快速清除细菌病原体。我们还假设糖肤通过巨噬细胞促进免疫的激活,为了激活T细胞和B lymphocytes-the适应性免疫反应的主要细胞组件是前面描述的Gulbe et al。(2016)。

评估免疫调制剂对牛奶的质量的影响,分析体细胞计数,pH值的牛奶,营养含量的数量(脂肪、乳糖和蛋白质)被检测到。首先,迅速提高体细胞计数实验组的奶后按810观察输液同样在其他研究奶牛的乳房内的生物活性制剂的应用乳酸菌来源(42]和其他物质具有免疫调节特性,如肿瘤坏死因子(43),重组牛CD14蛋白(44),乳铁蛋白(5]。我们发现乳房内的注入与GLP 810年一季度牛奶SCC的增加主要是因为增加低鳞状细胞癌(SCC最初未感染的季度 )。对照组乳腺的SCC动力学在统计学上并不显著。我们的观察的结果部分支持Wellnitz et al。45),0.9%生理盐水灌注不会导致显著增加季度牛奶鳞状细胞癌。

因此,体细胞计数反应后注入的免疫调节物质都是有益的,甚至是不可替代的;白细胞的活动可能会导致牛奶合成和milk-specific成分的数量减少,以及酶活性的增加牛奶,这是破坏牛奶蛋白质和脂肪。然而,我们的观察没有证实牛奶合成的丧失或减少输注后的牛奶成分的准备,除了乳糖的含量。考虑到注入GLP 810没有导致破坏牛奶中的营养成分,我们得出这样的结论:中性粒细胞的浸润乳腺组织中等强度。

在研究过程中,我们没有发现任何恶化的临床条件牛(包括体温、牛奶产量和需求),乳腺和临床状态没有病变(如肿胀、热、硬度、发红,或疼痛)。然而,在810年GLP注入,少量的片或凝块被观察到。牛奶中的血块通常退化的结果酪蛋白的细胞结构。作者(46)报告说,牛奶酪蛋白失去稳定时,酸度在4.6或更低。然而,我们的研究结果并不确定这种可能性,因为牛奶样品分析的pH值在任何没有低于6.2和牛奶的蛋白质含量没有改变大大在研究过程中。可能是血栓的形成和薄片组成的管理按810乳腺导致躯体细胞来源蛋白酶可引起水解β酪蛋白和后续的蛋白水解作用47]。然而,在这种情况下,牛奶中的蛋白酶活性的腺体在研究过程中一直低,因为它只是观察到局部。

5。结论

这项研究的结果证明,按810年奶牛的乳房内的使用可以激活当地的非特异性的细胞和体液免疫反应,导致限制乳腺致病细菌的增长。此外,我们发现提出的免疫调节成分按810年平衡和涉及同时吞噬细胞迁移到乳腺组织和抗炎因子的释放,从而控制激活细胞免疫之间的一系列生理标准3^{理查德·道金斯}和7^th天。

数据可用性

数据(PDF文件)用于支持本研究的发现可以从相应的作者。这个文件包含描述性信息研究牛(品种、年龄、产奶量、哺乳、治疗)和实验室数据之前(第一天)和之后(一天3、5、7、14)治疗包括牛奶细菌和细胞学检查的结果,牛奶含量和细胞因子。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

AV和对设计的整体研究。AV进行体细胞计数差的样品制备。国会议员进行了采用免疫染色的样品和结果的分析和解释。AV和GG牛奶体细胞进行微分计算和评价细胞因子的表达。GG执行政府组成GLP 810头奶牛的乳腺、牛奶样品,和牛奶样品微生物检查。运输与提供的样品到实验室JJ和LP GLP 810的成分。实验室数据分析是由SD。审阅过的手稿的作者是GG的合作者。

确认

我们感激地感谢奶牛农场的兽医人员协作,包括牛的临床监测。我们还要感谢乳品实验室有限公司(Ulbroka、拉脱维亚)执行牛奶质量检测。这项工作由ERAF支持,项目没有。2014/0016/2DP / 2.1.1.1.0/14 /阿皮亚/ VIAA / 075。

引用

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