IL-37发挥抗炎作用在自发早产胎膜通过NF -κB和il - 6 / STAT3信号通路

文摘

自发早产(sPTB),定义为交付在妊娠37周之前,被认为是一种多因子的综合症。然而,炎症不平衡在母胎界面促进过度分泌炎症因子和凋亡和降解细胞外基质(ECM),随后可导致早产。il - 1的抗炎分子家庭,interleukin-37 (IL-37)主要起到了抑制作用在多种炎性疾病。然而,作为一个典型的炎性疾病,没有先前的研究已经进行了探索sPTB IL-37所扮演的角色。在这项研究中,进行了一系列分子生物学实验在临床样品和人类羊膜上皮细胞系(威斯塔研究所苏珊海弗利克(希望))调查缺乏IL-37和潜在的作用机制。首先,结果表明IL-37的表达在人类周围等离子体和胎膜sPTB组明显减少。后来,证明IL-37可以显著抑制肿瘤坏死因子-的生产α(肿瘤坏死因子-α),interleukin-1β(il - 1β)和白细胞介素- 6 (il - 6)希望细胞。同时,一旦沉默IL-37, LPS-induced细胞凋亡和活动的基质金属蛋白酶(MMPs) 2和9显著增加。此外,免疫印迹数据显示IL-37执行其生物效应通过抑制NF -κB和il - 6 / STAT3通路。总之,我们的研究结果表明,IL-37限制过度的炎症和随后通过NF -抑制ECM重塑和细胞凋亡κB和il - 6 / STAT3信号通路在胎膜。

1。介绍

自发早产(sPTB),发生在妊娠37周之前,怀孕是一个特定的疾病。每年大约有1500万早产儿出生,占全球约10.6%的活产,sPTB被认为是新生儿最常见的死亡原因,第二个在全球5岁以下儿童的年龄1,2]。此外,那些幸存下来的早产儿有较高的多种并发症,包括神经系统发育异常、呼吸窘迫综合征、新生儿肺炎、坏死性小肠结肠炎,和视网膜疾病,这对家庭和社会造成沉重的负担(3,4]。sPTB被认为是多因子的综合症,有关衰老,功能孕激素撤退,宫颈疾病、压力(5]。然而,它的病因和发病机制仍不清楚,最近年来吸引了更多的关注。

许多研究提到,早产的发病机制密切相关,母胎界面的微环境的变化。Gomez-Lopez等人,苏珊等人指出,它是容易形成一个炎症级联,导致早产的发生炎症时平衡是中断在母胎界面(6,7]。我们已经知道母胎界面主要由胎膜,蜕膜和子宫。其中,胎膜是独一无二的,因为它不仅是功能必不可少的组件分离胎儿从母亲的身体,但也操作了解早产的病理生理学的重要窗口(8]。胎膜中富含细胞外基质(ECM)。ECM的降解通常是早产的发病率密切相关(9]。此外,在所有不同的胎膜细胞,羊膜上皮细胞吸引了最多的注意力,因为它被认为是最早的细胞接收fetal-derived信号(10]。人类羊膜上皮细胞的细胞凋亡也参与早产(11]。与此同时,人类羊膜上皮细胞很容易被外部的刺激激活包括脂多糖(LPS),激素,和机械牵引,并随后释放大量炎症因子,如肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α),interleukin-1β(il - 1β)和白细胞介素- 6 (il - 6),最终调解与早产相关的过度炎症(12,13]。

因此,很明显,推测最关键环节过度炎症是大量的促炎因子的释放。近年来,随着数据的积累,发现白细胞介素发挥重要作用在调节促炎因子的释放。例如,IL-33可以诱导的表达progesterone-induced阻塞因素(PIBF1)功能蜕膜B细胞从早产的预防效果造成LPS-induced促炎因子(14]。Dambaeva等人发现il - 22生成也可以防止早产和胎儿宫内死亡减少促炎因子的生产受到有限合伙人(15]。作为典型代表的促炎因子,il - 1及其家庭成员安排数量的炎性疾病,包括早产。然而,interleukin-37 (IL-37)是一个独特的il - 1家族的成员,2000年在网上发现的,功能的自然抑制炎症和免疫反应。IL-37位于染色体的基因2和分子量大约17∼25 kDa。IL-37的结构类似于il - 1的家庭,由十二人β金属管道结构。它有6个外显子编码5亚型的IL-37,命名为IL-37a, IL-37b, IL-37c IL-37d, IL-37e。此外,IL-37可以在多个人体组织,如肺、胸腺、骨髓、子宫组织(16,17]。在生理条件下,IL-37处于一个低水平的表达。然而,一旦刺激炎症,IL-37的表达将急剧增加18]。Ellisdon等人提到IL-37可以显著改善LPS-induced炎症在脓毒症19]。你们等人表示,IL-37可以抑制炎性细胞因子的生产在系统性红斑狼疮(20.]。此外,在围产期领域,Southcombe和Yu等人已经证明IL-37可以表达异常在子痫前期患者胎盘和脐带组织和妊娠期糖尿病,分别为(21,22]。这些研究主要集中在表达上的差异。人们很少知道机制。然而,早产是一个典型的炎性疾病,和没有发现数据揭示IL-37的角色。因此,我们推断是否缺乏IL-37在人类胎儿膜sPTB的发病机制有关。本研究旨在证明IL-37可以限制过度的炎症和随后抑制inflammation-induced ECM重塑和人类羊膜上皮细胞的凋亡在NF -κB和il - 6 / STAT3通路,这可能会进一步丰富理论sPTB策略。

2。材料和方法

2.1。样品收集

受试者参加重庆医科大学第一附属医院和道德是获得伦理委员会批准通过的重庆医科大学第一附属医院。所有的参与者签署知情同意并招募到研究如果他们一个单例妊娠。sPTB定义根据发布的指导方针美国妇产科杂志》上。所有的参与者和慢性精神障碍患者被排除在外,包括糖尿病、心血管疾病、感染性疾病、自身免疫性疾病、慢性肾脏疾病、慢性高血压,代谢疾病。胎膜组织收集后立即交付,并从静脉血液样本被两sPTB患者( )和控制孕妇( )。研究对象的临床信息如表所示1。获得样品后,他们都被转移到实验室与冰盒内1小时在无菌磷酸盐缓冲溶液洗了三次为了消除组织的血迹。血液样本在3000转离心10分钟4°C。所有的样品都存储在-80°C的分析。

2.2。细胞系,细胞培养

希望(苏珊海弗利克维斯达学院)细胞株购买商业化的公司。美国在MEM细胞培养(Gibco)完全培养基含有10%胎牛血清(锅、德国),1%不重要的氨基酸(Solarbio生物技术,北京),和1%青霉素(110 U /毫升)和链霉素(100μg / ml) (Beyotime生物科技、上海、中国)。然后,细胞在5%孵化有限公司₂在37°C。

2.3。免疫印迹

人羊膜上皮细胞治疗IL-37重组蛋白(rhIL-37、研发系统、美国),重组il - 6蛋白(美国PeproTech rhIL-6)和胎膜组织细胞溶解在里帕裂解缓冲(美国MedChemExpress)。总蛋白浓度检测利用BCA蛋白质分析工具包(Beyotime生物科技、上海、中国)。使用下面的蛋白质抗体:IL-37 (1: 500;美国圣克鲁斯);伯灵顿,bcl - 2, MMP9, T-NF -κB, p-NF -κB (Ser536),β肌动蛋白(1:1000;美国细胞信号技术);MMP2、STAT3 p-STAT3 (Tyr705) (1: 1000;美国亲和力生物科学);β微管蛋白,GAPDH (1: 1000;Servicebio生物技术,武汉,中国)。同样体积的蛋白质(40μg)由sds - page分离electrophoretically,转移到PVDF膜(罗氏公司、德国)。转让后,膜被封锁和5%的脱脂牛奶1小时孵化一夜之间在4°C表示抗体。第二天,孵化了一个适当的辣根peroxidase-linked二级抗体膜在室温下1小时。与二级抗体孵化后,乐队是由ECL可视化。二次抗体在本研究利用山羊anti-rabbit IgG-HRP (1: 5000;博士德、中国北京)和山羊anti-mouse IgG-HRP (1: 5000;中国,北京,ZSGB-BIO)。图像实验室软件(美国加州Bio-Rad)是用于成像和ImageJ用于光密度分析。

2.4。定量rt - pcr

从胎膜组织和细胞总RNA提取使用试剂盒试剂(美国热费希尔科学)和量化测量的比率A260nm / A280nm使用NanoDrop(美国热费希尔科学)。总RNA反向转录使用EvoScript普遍cDNA大师试剂盒(罗氏公司、德国)。在这项研究中使用的引物是列在表中2(TSINGKE,重庆,中国)。简单地说,实时PCR反应是由2μl (cDNA、1μ每个引物的l, 5μl SYBR绿色qPCR大师混合(美国MedChemExpress),和1μl超纯水,总量的10μl,在进行Bio-Rad排名- 96系统(美国加州Bio-Rad)。反应条件如下:5分钟在95°C, 40 10秒的周期在95°C, 20秒63.3°C,和20秒72°C,分别;融化曲线生成每个端点放大10秒钟后在95°C,紧随其后的是30秒增加为0.5°C从65年到95°C。β肌动蛋白是作为内生参考。2^−△△Ct方法用于计算。

2.5。免疫荧光

血迹从组织中删除时,胎膜和4%多聚甲醛固定24小时,然后在30%的蔗糖溶液脱水6小时。最后,组织是嵌入在最佳切削温度复合和切成部分。当进行免疫荧光,片首先permeabilized 0.1% Triton x - 100 5分钟,然后用5% BSA阻塞1小时在37°C。一夜之间,组织被孵化在4°C目标抗体在适当的稀释。目标抗体IL-37 (1: 50;圣克鲁斯,美国)。第二天,组织处理适当的fluorescein-conjugated二级抗体兔子和老鼠免疫球蛋白(1:100;Abbkine生物技术,武汉,中国)。6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI Servicebio生物技术,武汉,中国)是用于核染色。

2.6。免疫组织化学

胎膜和4%多聚甲醛固定,石蜡嵌入式,切片厚度3 - 5μm。切片在二甲苯脱蜡和梯度酒精脱水的解决方案。抗原检索,片在柠檬酸钠缓冲高温加热4分钟,中间温度为15分钟的微波炉。然后,内源性过氧化物酶活性被3%的H₂O₂10分钟和阻塞山羊血清1小时。片是孵化IL-37抗体(美国圣克鲁斯1:50)一夜之间在4°C。第二天,部分被孵化biotin-labeled二级抗体(ZSGB-BIO,北京)。3,3 - - - - - -Diaminobenzidine (DAB)和苏木精(蓝色)是利用品牌目标和细胞核,分别。最后,超级敏感的彩色部分被评估™链接标签包含IHC检测系统(美国BioGenex,圣拉蒙,CA)。

2.7。细胞凋亡检测

根据制造商的协议的膜联蛋白V-FITC工具包(Beyotime生物技术,北京),这些细胞被镀成6-well板块 细胞/毫升每口井。凋亡的评估是通过流式细胞术和IL-37 siRNA细胞转染后48小时。收集细胞并与冷磷酸盐缓冲溶液洗了三次,然后混合膜联蛋白V-FITC和π绑定缓冲了20分钟。最后,分析了混合使用流式细胞分析仪(BD生物科学,圣何塞、钙、美国)。

2.8。EdU DNA合成试验

与IL-37 siRNA 48小时,转染后细胞增殖试验进行了使用5-ethynyl-20-deoxyuridine (EdU)检测设备(Ribobio、广州、中国)。根据制造商的指示,细胞处理50μmol / l EdU 2小时37°C,然后用4%多聚甲醛固定30分钟。之后,细胞被孵化2毫克/毫升0.5%甘氨酸处理前5分钟特里同x - 100在磷酸缓冲溶液10分钟和沾1×阿波罗在室温下反应鸡尾酒30分钟。随后,与赫斯特进行了细胞核的对比染色。扩散率由EdU staining-positive细胞占总细胞的比例。在荧光显微镜下捕获图像。

2.9。细胞生存能力分析

希望细胞种植到96孔板(5000个细胞/),然后用IL-37 siRNA转染48小时后附着力。两个荧光探针(现场/死亡细胞成像工具,表达载体,美国)/ 500(1下降μl培养基)被用于每个好然后孵化前15分钟在荧光显微镜下摄影。每组六个字段的视图被抓获。然后,计算总和死细胞的计数。

2.10。转染的核

序列采用IL-37 siRNA, 5 - - - - - -UCUACUGUGACAAGGAUAATT-3小干扰rna (si_NC)和消极的控制,5 - - - - - -UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3 。这些都是设计和合成了GenePharma(上海,中国)。细胞种植到6-well 10板的密度⁵细胞/好,然后用IL-37转染核或消极控制核使用脂肪2000试剂根据推荐的协议。转染24小时后,细胞准备RT-qPCR和免疫印迹的48小时。证实了转染效率RT-qPCR和免疫印迹。

2.11。ELISA试验

IL-37人类外周血血浆浓度是衡量人类IL-37酶联免疫试剂盒(美国RayBiotech)。酶联免疫试剂盒用于测量细胞上清液中il - 6的表达从Elabscience购买(武汉,中国)和ELISA试剂盒测定il - 1的表达β肿瘤坏死因子-α在细胞上清液买来4生物技术(中国,北京)。所有的实验根据制造商的指示。上层清液的吸光度是评估在450 nm MultiskanGO板读者(热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国)。

2.12。明胶Zymography

胎膜和细胞的总蛋白提取使用相同的方法作为免疫印迹。蛋白质分离10%聚丙烯酰胺凝胶含有十二烷基硫酸钠(SDS)和2μg / ml明胶。经过电泳,凝胶是用2.5% Triton x - 100 1.5小时删除SDS和孵化48小时孵化解决方案包含50 mM Tri-HCl, CaCl 200毫米氯化钠5毫米₂,0.02% Brij-35在37°C。孵化后,凝胶染色在0.5%/考马斯亮蓝r - 250在37°C 1小时,然后用脱色解决孵化可视化gelatinolytic乐队。不同蛋白酶乐队进行了定性、定量分析与凝胶图像软件(美国加州Bio-Rad)。

2.13。统计分析

学生的 - - - - - -测试是用于确定两组之间的显著差异。比较在多个团体是由单向方差分析发现显著差异。所有的数据都显示为 (SD)。所有实验至少重复三次。所有统计分析了利用GraphPad棱镜软件,版本8.0 (GraphPad软件公司,拉霍亚,CA,美国)。结果被认为是显著时 的水平。

3所示。结果

3.1。IL-37表达显著减少sPTB怀孕

首先,我们比较IL-37早产和术语的表达组。结果表明,IL-37显著降低外周血血浆中sPTB期限劳动(相比 vs。 , , ;(图1(一))]。此外,IL-37的mRNA和蛋白表达水平也低的胎膜sPTB组比术语组( vs。 , , ;图1 (b); vs。 , , ;数据1 (c)和1 (d)]。此外,免疫荧光(如果)和免疫组织化学(包含IHC)是利用。如数据所示1 (e)和1 (f),IL-37本地化人类羊膜和绒毛膜层。总的来说,这些结果表明,IL-37的表达在人类周围等离子体和胎膜sPTB组显著低于这个词群。

3.2。IL-37限制过度炎症

在我们确定IL-37显著减少胎膜sPTB集团的我们都想知道它是如何工作的。确定希望IL-37对细胞因子的影响生产细胞,定量实时PCR和ELISA用于屏幕各种炎性细胞因子。当希望细胞治疗与有限合伙人(1μg / ml)和rhIL-37 (10 ng / ml, 50 ng / ml, 100 ng / ml) 6小时、12小时、24小时,信使rna和蛋白质il - 1的表达β、il - 6和TNF -α减少剂量和时间的方式(数字2(一个)- - - - - -2 (d))。最显著的减少发生在100 ng / ml的浓度和时间点24个小时,所以这个浓度和时间点被选为进一步研究。接下来,我们小干扰rna (si_IL-37)和消极控制转染IL-37核(si_NC)希望细胞和转染效率经定量实时聚合酶链反应和免疫印迹(图2 (e))。然后,进行实验。结果表明,击倒IL-37显著增加了信使rna和蛋白质的下游炎症因子(il - 1的表达β、il - 6和TNF -α)当暴露于有限合伙人,逆转rhIL-37管理局(图2 (f))。然而,IL-37 siRNA集团不再表达下调il - 1的表达β、il - 6和TNF -α在缺乏LPS刺激。显著,在三种炎症因子,il - 6的变化是最明显的一个。

3.3。IL-37抑制ECM降解

结果表明,IL-37可以抑制胎儿膜下游炎症因子的释放,从而限制过度的炎症。先前的研究显示,IL-37可以抑制释放基质金属蛋白酶(MMPs)在其它疾病,如子宫内膜异位症(23]。因此,我们推测IL-37将在早产调节基质金属蛋白酶的影响。首先,MMP2和MMP9的作用是验证(图3(一个))。提出了图3 (b),MMP9的活性明显升高在早产胎膜组织。然后,rhIL-37 MMP2和MMP9活动的影响,表达希望细胞测量。我们的数据表明,rhIL-37治疗显著降低LPS引起的mRNA MMP2和MMP9的表达(图3 (d))。然而,类似的结果只是观察到MMP9的蛋白质水平(数字3 (e)和3 (f))。虽然MMP2也下降,但差异无统计学意义。此外,rhIL-37 LPS-induced MMP9的活性显著降低,而MMP2没有影响(图3 (c))。相应地,IL-37 siRNA-mediated击倒的显著调节MMP9的活动,而没有影响MMP2(数字3 (g)和3 (h)),这是按照mRNA(图中发现的结果3(我))和蛋白质含量(数字3 (j)和3 (k))。然而,政府仅rhIL-37产生不影响MMP2和MMP9的表达与活动(数据3 (c)- - - - - -3 (f))。

3.4。IL-37抑制人类羊膜上皮细胞的凋亡

细胞增殖和细胞凋亡维持生命活动。然而,早产的发生离不开羊膜上皮细胞的增殖和凋亡9]。因此,影响IL-37羊膜上皮细胞增殖和细胞凋亡的研究。EdU染色显示,击倒的IL-37显著降低希望细胞DNA合成( vs。 , ;数据4(一)和4 (b)]。此外,死细胞占总细胞的比率显著地增加IL-37 siRNA组相比si_NC集团( vs。 , ;数据4 (c)和4 (d)]。因此,看来IL-37不足不仅可以抑制扩散也可促进细胞死亡。根据这些数据,凋亡细胞的比例显著增强后用流式细胞仪检测转染IL-37 siRNA成希望细胞( vs。 , ;数据4 (e)和4 (f)]。为了确定IL-37 apoptosis-related蛋白质的影响,分析了bcl - 2、Bax的表达免疫印迹(图4 (g))。如图4 (h),伯灵顿的表达显著调节IL-37 siRNA组当si_NC组相比,虽然bcl - 2减少。此外,与si_NC组相比,磷酸化STAT3 (p-STAT3)激活IL-37 siRNA组(数字4(我)和4 (j))。这些数据表明,IL-37可以有效地抑制细胞凋亡,调节凋亡分子bcl - 2和proapoptotic分子通过STAT3通路伯灵顿。

3.5。通过NF - IL-37发挥抗炎作用κB和il - 6 / STAT3信号通路

分子机制的进一步探索IL-37 LPS引起的炎症过程,NF IL-37——的影响κB和STAT3信号在希望细胞检查(图5(一个))。免疫印迹数据显示rhIL-37明显减毒磷酸化的NF -κB和STAT3 LPS诱导的希望细胞(图5 (b))。与此同时,希望细胞被rhIL-6管理和rhIL-6 + rhIL-37确定il - 6 / STAT3信号通路参与了IL-37-mediated抗炎效果。如数据所示5 (c)和5 (d),磷酸化STAT3 rhIL-6处理后被激活,而由rhIL-37逆转。这些结果表明,IL-37可能发挥其抗炎作用主要通过NF -κB和il - 6 / STAT3信号通路在人类羊膜上皮细胞。

4所示。讨论

sPTB新生儿死亡率和发病率的主要原因是全球5岁以下儿童,家庭和社会带来了沉重的经济负担(24]。它是一种多因子的综合症,研究炎症的机制在最近几年得到了广泛的关注。炎症因素如il - 1β肿瘤坏死因子-α和il - 6都报道,涉及在早产的发病机制25,26]。肿瘤坏死因子-的浓度升高α羊水中核转录因子激活κB (NF -κB)通路,从而引发炎症过程的放大导致早产(27,28]。最近,增加羊水怀孕中期的il - 6水平与sPTB的发病有关,这使得它的潜在生物标志物(29日,30.]。正如我们所知,il - 1β最深入研究分子领域的早产,一直被认为是分子主导的炎症级联母胎界面(31日]。il - 1家族是由11个不同的细胞因子,也存在结构和共享一个类似的功能。然而,他们被激活的途径有很大的不同从一个到另一个地方。令我们吃惊的是,il - 1的家庭成员可以直接相互作用。Gallenga等人,Franza等人指出,IL-37可以抑制IL-1-mediating活动和IL-38可以抑制促炎IL-36活动(32,33]。作为il - 1家族的一员,IL-37施加一个完全不同的il - 1的抗炎效果β。Nold等人发现IL-37释放从上皮细胞和巨噬细胞几乎完全抑制了几个促炎的因素(主要是il - 1的表达β、il - 6和TNF -α)在体外对脓毒症诱导的小鼠有限合伙人,和保护在活的有机体内(34]。据报道,IL-37执行保护作用在结肠炎、关节炎、胰腺炎和其他炎性疾病由外源诱导刺激(16]。然而,IL-37在早产的作用,炎症疾病,也没有明确报道。因此,我们假设IL-37会影响早产的发生通过限制过度炎症在母胎界面的影响。

首先,我们想知道是否IL-37有不同的表达式在孕产妇早产组和对照组之间的组织。结果表明,等离子体中的表达IL-37和胎膜减少与术语组相比,这表明IL-37可能与早产的发生有关。接下来,我们验证IL-37是否真的发挥抗炎作用在细胞水平上与人类羊膜上皮细胞系(希望)。我们的数据表明,IL-37确实抑制炎症因子(il - 1的表达β、il - 6和TNF -α)。正如我们所知,炎症级联,由不同的炎症调节因素,如il - 1β、il - 6和TNF -α在母胎界面中扮演着关键角色,其中包括子宫收缩性和膜破裂sPTB有关。值得注意的是,在上述三种炎症因子,il - 6的水平显示最重要的希望细胞的变化。之前的研究表明,居民的绒毛膜和蜕膜细胞能合成和分泌il - 6,和它的生产是由LPS刺激或促炎因子如il - 1β和肿瘤坏死因子-α(35]。此外,另一项研究表明,il - 6分泌调节早产胎膜的怀孕,表明il - 6可能是一个关键因素在加速早产发生的事件36]。因此,这是可以理解的,il - 6的变化是其中最明显的一个标志。总之,IL-37能够抑制il - 1的生产β、il - 6和TNF -α,这可能在早产儿治疗领域中扮演着重要的角色。

胎膜不仅是一个重要的机械屏障的母亲和胎儿之间还有一个重要前线的炎症反应。胎膜的破裂可能导致积极的反馈循环炎症导致早产(9]。然而,强度和灵活性的胎膜主要是由ECM重塑的关键分子,MMP2和MMP937]。一系列研究发现,MMP2和MMP9可能导致导致ECM重塑的网状蛋白水解作用,促进膜破裂,最后导致早产(8]。它已经表明,il - 1β肿瘤坏死因子-α,il - 6可以诱导MMP2和MMP9的表达羊水,胎儿膜(38,39]。根据我们的结果,IL-37可以抑制il - 1的生产β肿瘤坏死因子-α,在人类羊膜上皮细胞il - 6,所以我们推测IL-37会抑制MMP2和MMP9表达。澄清这一假说,MMP2和MMP9的表达与IL-37希望细胞治疗后测定。令人惊讶的是,MMP9的表达被发现IL-37治疗后显著下调。然而,没有发现差异在MMP2的表情。根据先前的研究,IL-37的确影响MMP2和MMP9表达在子宫内膜异位症,动脉粥样硬化,和人类的肺腺癌40- - - - - -42]。但是为什么变化只发生在MMP9。事实上,专门生产MMP9羊膜上皮细胞,而只有MMP2羊膜间充质细胞产生。因此得出结论,MMP2和MMP9表现出特异性表达在人类胎儿膜(43]。因此,这是可以理解的,IL-37只能调节MMP9相反MMP2的羊膜上皮细胞。

另一方面,早产是由细胞凋亡,这可能是影响因素,如感染和外部刺激(9]。风险信号刺激toll样受体的激活导致NF -κB和随后增加主要的促炎因子包括il - 1的表达β、il - 6和TNF -α在胎膜11]。其中,TNF -α可以带受体启动信号转导通过TNFR-associated死域(TRADD),激活半胱天冬酶活动最终导致细胞凋亡28]。il - 1β和il - 6可能增加核的分裂导致细胞凋亡以及[44]。它已经证实IL-37可能会限制过度炎症在这个研究和发表的文章表明,IL-37几个可能影响宫颈癌细胞凋亡和肾癌45,46]。因此,我们想调查IL-37是否可以抑制羊膜上皮细胞的凋亡在早产。众所周知,伯灵顿和bcl - 2同源蛋白在线粒体凋亡通路。不平衡的伯灵顿/ bcl - 2能够导致细胞凋亡。Fortunato等人报道,伯灵顿的表达增加,而bcl - 2是减少sPTB怀孕的胎儿膜(47]。最近的一项研究表明,IL-37可以抑制bcl - 2通过STAT3信号(48]。因此,我们推测,IL-37也能够抑制细胞凋亡影响的平衡伯灵顿/ bcl - 2通过STAT3通路。根据我们的研究,结果表明,以上的差别,对这些IL-37能促进细胞凋亡增加proapoptotic伯灵顿的蛋白质的表达和减少细胞凋亡蛋白bcl - 2在希望。流式细胞术分析所示的一致的结果。此外,如图4(我)和补充图1击倒和治疗与IL-37 STAT3信号的影响。因此,它是证明IL-37可以影响早产通过STAT3信号通路调节细胞凋亡。

根据上述结果,在sPTB IL-37-mediated抗炎效果起着至关重要的作用。接下来,我们初步探索其具体的分子机制。有限合伙人,组件的革兰氏阴性细菌,通常可以激活NF -κB信号通路,引起各种炎症反应和触发器促炎细胞因子的生产,包括il - 1β、il - 6和TNF -α(49]。根据我们的结果(图5(一个)),NF -κB信号通路被LPS刺激后激活。与此同时,如图2 (f),il - 1β、il - 6和TNF -α都增加了,尤其是il - 6。先前的研究已经表明,il - 6,最著名的STAT3的传统催化剂,是许多人类慢性炎症状态的标志,包括脓毒症、类风湿性关节炎(RA),炎症性肠病(IBD) (50]。因此,它可能是假设有限合伙人可以施加其影响通过il - 6 / STAT3信号通路在sPTB间接。基于我们的研究结果,STAT3调节处理后il - 6的分泌。因此,这是可以理解的,有限合伙人可以激活的磷酸化STAT3通路间接通过il - 6。先前的研究表明,IL-37可以抑制NF -的激活κB和il - 6 / STAT3信号通路,抑制炎性反应的发生重症肌无力(MG)影响Tfh和B细胞,和在影响A549肺癌细胞(46,51]。然而,通过NF - IL-37的抗炎效果κB和il - 6 / STAT3通路早产仍然遥遥无期。结果表明,p-NF——的表达κB和p-STAT3 LPS-treated组显著增加,而与IL-37孵化后显著降低。因此,它可以表明LPS激活NF -κB信号通路,然后触发促炎因子(主要是il - 6)的生产,后来磷酸化STAT3。然而,上述影响由IL-37逆转。这项研究证实了以前的研究,进一步说明IL-37利用信号分子的消炎NF -κB和STAT3 (52]。

虽然我们进行了体外研究来验证我们的假设,仍有一些细节需要进一步细化。对于结果的一致性,羊膜上皮细胞应用于我们在体外研究一个细胞系而不是主要的羊膜上皮细胞。因此,我们计划解决这些问题在接下来的实验中,和在活的有机体内研究也正在计划。此外,马斯特森等人表明,间充质干细胞(msc)及其衍生品不能调节IL-37和msc表达IL-37可能增强治疗效果(53]。实际上,胎膜,特别是羊膜,msc,这可能产生有效IL-37维持母胎界面的免疫平衡。因此,IL-37可能在不久的将来sPTB的治疗目标。然而,还需要更多的研究。

5。结论

总之,在胎儿IL-37膜的抗炎效果通过抑制NF -κB和il - 6 / STAT3信号通路可以抑制细胞凋亡和ECM重塑并参与早产。这些发现可能会进一步丰富早产的理论策略。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

信息披露

露露王、郑刘应考虑共同第一作者。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

以下个人感激地承认对他们的援助:E锣,丽安,胡安秦,Chuanyue傅。作者也感谢所有的孕妇参加我们的研究的支持和重庆医科大学第一附属医院,重庆,中国。此外,我们想感谢的支持的“111项目”中华人民共和国教育部、中华人民共和国国家外国专家局和产科的合作,护理和助产人员的第一附属医院的重庆医科大学,重庆,中国。这项工作是支持由中国国家重点研发项目(2016号yfc1000407)的主要研究项目重庆市科学技术协会(没有。cstc2017shms-zdyfX0034),中国国家自然科学基金(81801483)。

补充材料

图S1: IL-37对细胞凋亡的影响通过人类羊膜上皮细胞il - 6。(一)伯灵顿的表达和bcl - 2治疗后被免疫印迹检测rhIL-6和rhIL-6 + rhIL-37 12小时。(b)统计分析的免疫印迹结果(a)。 与rhIL-6;^# 与控制;^{# # #} 。(补充材料)

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