MicroRNA表达在皮肤的红斑狼疮:了解其发病机制的新窗口

文摘

背景。microrna在皮肤的红斑狼疮的发病机制还没有研究。客观的。是评估选定的水平循环microrna的面板,可以参与免疫反应的调节、炎症和纤维化在皮肤的红斑狼疮。方法。这是一个横断面研究。我们包括22患者亚急性(SCLE)和20个铁饼状的(DLE)病变和19个健康献血者(HD)。在外周血中存在的microrna的分析,流式细胞术,和皮肤免疫组织化学进行确定CD4 T细胞和监管细胞的分布及其相关性与循环microrna。结果。mir - 150, mir - 1246、miR-21 miR-23b, mir - 146水平在SCLE表达下调vs。高清。mir - 150、mir - 1246和miR-21 DLE水平表达下调vs。高清。外围CD4⁺/ CD25^{- - - - - -}/ il - 4⁺细胞和CD4⁺/ CD25^嗨/ Foxp3⁺与miR-23b负相关,CD4吗⁺/ CD25^{- - - - - -}/干扰素-γ⁺随着SCLE mir - 1246,而CD123⁺/ CD196⁺/我⁺细胞与mir - 150在DLE呈正相关。在组织,CD4细胞⁺/ il - 4⁺和CD20⁺/ il - 10⁺细胞与miR-21和CD4呈正相关⁺/干扰素-γ⁺与miR-31 SCLE,而CD4细胞⁺/ il - 4⁺和mir - 150细胞呈正相关,CD20⁺/ il - 10⁺细胞和mir - 1246在DLE mir - 146 a。SCLE, mir - 150水平较低与高CLASI分数。KEGG通路富集分析显示,细胞周期调控通路,p53, TGF -β、甲状腺激素和癌症信号通路miR-21之间共享,miR-31, miR-23b, mir - 146 a, mir - 1246和mir - 150。结论。的差别是对这些mir - 150, mir - 1246,和miR-21 CLE品种vs。高清决心。

1。介绍

皮肤的红斑狼疮(CLE)是一种自身免疫性疾病,理解各种皮肤症状和临床表型。它的发病机制是多方面的,涉及到遗传素质、环境因素(紫外线B),和异常的先天和适应性免疫反应。在这种背景下,一些促炎细胞因子的参与,如干扰素-α,il - 1、il - 6和TNF -α一直也承认1,2]。组织学分析CLE皮肤的特点是,密集periadnexal和血管周围淋巴细胞浸润,主要由CD4细胞⁺辅助T细胞、CD8⁺细胞毒性T细胞、B细胞和巨噬细胞(1]。此外,Th17和Th22 CD4的参与⁺T细胞以及调节性T细胞最近描述(3,4]。此外,通过模式识别受体通路的激活(PRR)信号,Janus激酶-(木菠萝)信号传感器和转录激活(STAT)信号和核因子-κB (NF -κ在继续教育(B)信号也有作用5]。

最近的研究显示小分子核糖核酸(microrna)的潜在贡献不同的自身免疫性疾病(6]。microrna是一类小非编码rna调节基因表达的转录后的水平。他们绑定到目标信使RNA,导致平移镇压或退化。microrna调节各种生理过程,他们的失调会导致异常反应包括免疫功能受损(6- - - - - -8]。

例如,在系统性红斑狼疮(SLE), microrna的表达中发现了等离子体(9),血清(10)、尿液和外周血单核细胞(PBMCs) [11]。不同的microrna的模式已与一个特定的特性,如肾参与(mir - 146 - a),儿童发病(mir - 516 - a - 3 - p, mir - 629,和mir - 525 - 5 - p),和整体疾病活动(miR-21和mir - 146 a) (9- - - - - -11最近,在盘状红斑狼疮(DLE) (miR-31和mir - 485 - 3 - p) (12]。事实上,一项研究建议miR-29b作为一个潜在的系统性红斑狼疮诊断的生物标志物。作者在研究中,使用ROC曲线分析,展示了AUC为0.75 (95% CI 0.64 - -0.86)诊断SLE (13]。

另一方面,研究集中在理解microrna的监管信号通路的作用可能导致开发新的生物标志物和新的治疗方法。从这个意义上讲,循环miR-29b也提出了作为生物标志物来评估狼疮活动与咽部得分呈正相关,anti-dsDNA效价和反向与补体C3水平和临床治疗后反应13]。

在此,我们假设一个循环microrna的表达签名可能区分CLE病人及其亚型。因此,我们的主要目的是评估选定的循环水平的microrna小组根据他们可能参与调节免疫反应,炎症和纤维化患者教育。具体来说,我们评估以下microrna: miR-29家庭调节T细胞极化(14];mir - 150 B和Th17细胞分化和TGF -β信号(15];有关IL-17 miR-23b, TNF -α,il - 1β表达式[16];mir - 1246 B细胞活化(有关17];miR-21 Th2和Th17分化Foxp3签订⁺表达式[18];miR-31调节Treg细胞,NF -κB激活,纤维化(19];mir - 146似乎表达下调NF -κB和TLR / MyD88炎性信号通路(20.,21];mir - 155,有助于Th1和Th17细胞分化[22];mir - 485参与Th2细胞分化[12];和mir - 197,允许il - 22生成响应(23]。此外,我们还将这些血清microrna与T, B,和监管细胞亚群在皮肤组织和外周血以及CLASI活动得分。最后,我们阐明其可能参与CLE发病机理,应用生物信息学。

2。材料和方法

2.1。病人

这是一个横断面研究在三级保健中心。我们包括患者连续42蜡烛:22与亚急性皮肤红斑狼疮(SCLE)和DLE 20。合格,系统性红斑狼疮患者还必须满足分类标准根据ACR标准(24),有一个活跃的lupus-specific病变与SCLE或DLE兼容。蜡烛的诊断成立于共识风湿病学家和皮肤科医生,以及通过活检。此外,患者不应在局部治疗包括类固醇在过去6周。然而,患者可以保持基底口服类固醇和免疫抑制剂。患者被排除在外,如果他们有任何伴随皮肤的损伤不是归因于狼疮或重叠自身免疫状况。

我们包括19个健康的捐赠者(HD)控制。对照组没有任何并发感染和自身免疫性疾病和/或不接受强的松或免疫抑制剂。

我们测量了CLASI,验证指数量化疾病严重程度(25]。这个乐器措施活动和破坏,在目前的研究中,我们只使用活动领域,范围从0到70(更高的分数表明更严重)。

此外,病人的临床记录根据预先制定的协议是经过仔细审查收集人口以及其他临床和血清学的特性。

2.2。皮肤样品

皮肤穿孔活检(4毫米直径),福尔马林固定,评估hematoxylin-eosin染色的典型的组织学评估皮肤红斑狼疮的特性。然后,剩余的标本是免疫组织化学存储。微观审查蒙蔽的方式进行诊断被观察者。

总的来说,大部分的皮肤红斑狼疮活检与photoexposed地区本地化的手臂,胸腔或头皮。控制组织切片也取自photoexposed区域,如果可能的话,从同一解剖区。

2.3。免疫组织化学

我们跟着Mendez-Flores等的方法。26]。简单地说,IL-22-expressing细胞测定4μ米厚的部分组织。deparaffinization和解蔽的抗原后,组织被封锁H为3%₂O₂。然后,非特异性背景染色与IHC避免背景拦截器(恩佐生命科学)。组织孵化了山羊多克隆反il - 22生成抗体(圣克鲁斯生物技术、圣克鲁斯、钙、美国)在10μ克/毫升。绑定与生物素化的驴抗体IgG抗体识别(ABC染色系统;圣克鲁斯生物技术)。幻灯片是孵化与辣根过氧化物酶(合)链霉亲和素,其次是孵化与过氧化物酶底物3、3-diaminobenzidine (DAB) (Sigma-Aldrich) 10分钟。的部分与苏木精复染色。负控制染色进行正常的人类血清稀释1:100年,而不是主要抗体,IHC普遍消极控制试剂(包含IHC普遍消极控制试剂,恩佐生命科学)。被动的空白与磷酸盐缓冲saline-egg孵化白蛋白(Sigma-Aldrich)而不是主要的抗体。两个控制排除非特异性染色或内源酶的活动26]。脾和神经节样本作为一个积极的控制(图S1)。

2.4。Double-Staining过程

我们跟着Mendez-Flores等的方法。26]。确定CD4的族群⁺/ IL-17A⁺- CD4⁺/ il - 4⁺- CD4⁺/干扰素-γ⁺CD25表达T细胞⁺/ Foxp3⁺调节性T细胞,CD20⁺/ il - 10⁺第B细胞,CD123⁺/我⁺pDC细胞亚种群,同时检测了(多视图(mouse-HRP / rabbit-AP)恩佐生命科学)。deparaffinization和解蔽抗原的抗原检索试剂(恩佐生命科学),组织被封锁H为3%₂O₂。过程是一个连续的双重染色,第一个抗原(正常血清-控制、兔多克隆anti-IL-17A anti-IL-4, anti-IFN -γ,anti-IDO IgG抗体,鼠单克隆anti-IL-10或者anti-Foxp3免疫球蛋白₁抗体(圣克鲁斯生物技术)10μg / ml)可视化使用辣根过氧化物酶(合)/ 33-diaminobenzidine (DAB)和第二个抗原(正常血清负控制或第二初级兔多克隆anti-CD20 anti-CD25 IgG抗体或鼠标单克隆anti-CD4, anti-IgG₁抗体(圣克鲁斯生物技术),或anti-CD123 IgG抗体(英国Abcam pcl、CA) 10μg / ml)可视化使用碱性磷酸酶(美联社)/永久的红色。组织与迈耶的苏木精复染色和安装在水介质。Cytokine-expressing细胞以及双阳性细胞被估算评估积极染色细胞的数量在两个字段(X320)和被报道的百分比免疫反应性的炎性浸润细胞位于表皮和真皮。结果表示为 平均误差(SEM)的细胞程序量化的图像专业+版本5·1·1 (26]。

2.5。外周血样本

静脉血样本来自每个主题进行流式细胞仪分析和RNA隔离。

2.6。流式细胞术

外周血单核细胞(PBMCs)是通过梯度离心法Lymphoprep (Axis-Shield PoC,奥斯陆,挪威)。细胞颗粒在1毫升RPMI resuspended cell /毫升,细胞悬液处理2μl细胞激活鸡尾酒的phorbol-12myristate 13-acetate (40.5μ和ionomycin (669.3 M)μ米)在DMSO (500 x)和brefeldin (BioLegend Inc .)、圣地亚哥、钙、美国)6小时37°C有限公司₂孵化器。

PBMCs孵化了5μl人类TruStain FcX™(BioLegend Inc .)在100毫升每百万细胞PBS 10分钟,然后,他们被贴上5μl的反人类的CD3-FITC-labeled,反人类的CD4-PeCy5-labeled,反人类的CD161-APC-conjugated单克隆抗体(BD生物科学,圣何塞,CA);反人类的CD3-FITC-labeled,反人类的CD4-PeCy5-labeled,反人类的CD25-APC-conjugated单克隆抗体(BD生物科学);反人类的CD19-APC-labeled,反人类的CD24-FITC-conjugated,反人类的CD38-PeCy5-labeled单克隆抗体(BD生物科学);或反人类的CCR6-PerCP / Cy5.5-conjugated和反人类的CD123-FITC-labeled单克隆抗体(BD生物科学)分离管在20分钟37°C在黑暗中。细胞与200年permeabilizedμl cytofix / cytoperm解决方案(BD生物科学)在4°C 30分钟。细胞内染色进行了反IL-22-PE -, IL-17A-PE, IL-4-PE、干扰素γIL-10-PE - pe、Foxp3-PE, IDO-PE-labeled鼠单克隆抗体(BD生物科学)30分钟在黑暗中在4°C。电子门是为CD3⁺/ CD4⁺/ CD161^{- - - - - -}细胞、CD3⁺/ CD4⁺/ CD161⁺细胞、CD3⁺/ CD4⁺/ CD25^{- - - - - -}细胞、CD3⁺/ CD4⁺/ CD25^嗨细胞,CD19⁺/ CD38^嗨/ CD24^嗨细胞,CD123^嗨/ CD196⁺细胞。结果表示为il - 22生成的相对比例⁺,IL-17A⁺,il - 4⁺干扰素-γ⁺,具体⁺,il - 10⁺,我⁺在每个门表达细胞。同形像控制、IgG1-FITC / IgG1-PE IgG1 CD45-PeCy5老鼠卡巴(BD老套,BD生物科学)被用来设置阈值和盖茨在血细胞计数器。我们跑一个清白的(自体荧光控制)和permeabilized PBMC样本。自体荧光控制相比single-stained cell-positive控制确认染色细胞在规模为每一个参数。此外,BD校准3珠被用来调整仪器设置,设置荧光补偿,并检查仪器灵敏度(BD校准,BD生物科学)。荧光- 1 (FMO)控制并行彩色面板的使用顺序遗漏的一种抗体的抗体,除了anti-IL-22 anti-IL-17A anti-IL-4 anti-IFN -γ,anti-IL-10 anti-Foxp3 anti-IDO抗体,取而代之的是一个同形像控制而不是简单地省略。最后,分析了T子集通过流式细胞术和Accuri C6 (BD生物科学)。总共500000 - 1000000事件记录为每个样本和分析与FlowJo X软件(树明星,Inc .) [26]。

2.7。小分子核糖核酸RNA分离和定量实时PCR分析

血清总RNA分离试剂盒试剂(英杰公司)根据制造商的指示。的浓度和质量总RNA被NanoDrop 1000分光光度计测量(NanoDrop技术,沃尔瑟姆,质量)。量化microrna,互补脱氧核糖核酸合成使用Mir-X microrna的第一链合成装备(Clontech)根据制造商的指示。互补DNA(互补)放大通过实时PCR SYBR green-based使用Maxima SYBR荧光方法绿色/火箭qPCR大师混合(2 x)(热科学)。U6作为一个内生控制规范化表达式的值。我们选择microrna的后面板,它们的影响在不同监管细胞研究的文献报道。用于实时PCR引物序列如下:hsa-miR-21-5p 5 - - - - - -TAGCTTATCAGACTGATGTTGA-3 ;hsa-miR-29a 5 - - - - - -TAGCACCATCTGAAATCGGTTA-3 ;hsa-miR-29b 5 - - - - - -TAGCACCATTTGAAATCAGTGTT-3 ;hsa-miR23b 5 - - - - - -TGGGTTCCTGGCATGCTGATTT-3 ;hsa-miR-31 5 - - - - - -AGGCAAGATGCTGGCATAGCT-3 ;hsa - mir - 146 - 5 - - - - - -TGAGAACTGAATTCCATGGGTT-3 ;hsa - mir - 155 5 - - - - - -TTAATGCTAATCGTGATAGGGGT-3 ;hsa - mir - 150 5 - - - - - -TCTCCCAACCCTTGTACCAGTG-3 ;hsa - mir - 1246 5 - - - - - -AATGGATTTTTGGAGCAGG-3 ;hsa - mir - 197 - 3 - p, 5TTCACCACCTTCTCCACCCAGC-3 ;hsa - mir - 485 p, 5AGAGGCTGGCCGTGATGAATTC-3 ;和U6, 5 - - - - - -GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3U6反向,5 - - - - - -CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3 。

在StepOne存在化验进行实时PCR仪(生活技术,培育城市,CA)。10分钟的反应进行了孵化在95°C紧随其后40 95°C的周期为1分钟15秒和60°C。所有反应都是运行在一式三份,平均阈值计算周期和SD值。转录水平的阈值为基础的计算周期(C_t使用δC)_t方法措施两个样本之间的相对目标RNA通过比较它们标准化控制RNA (U6)。

2.8。目标基因和通路富集分析

我们确定了基因的目标识别microrna使用DIANA-TarBase v8 (http://www.microrna.gr/tarbase),这是一个数据库,其中包含实验验证miRNA-target交互。我们使用DIANA-miRPath v3.0 (http://www.microrna.gr/miRPathv3)和《京都议定书》百科全书的基因和基因组(KEGG)数据库的识别网络和通路浓缩所选的microrna的目标基因。丰富通路显示统计学意义( )受到进一步的分子分析和interactome网络建设。Interactome网络构造连接microrna的假定的目标基因(或浓缩通路)在选定的强化途径;由此产生的网络出口Cytoscape v3.1.0 (http://cytoscape.org/index.php)可视化。

2.9。道德的考虑

这个工作是根据表达的原则进行《赫尔辛基宣言》。研究伦理委员会批准(参考822)从西班牙de Ciencias y Nutricion萨尔瓦多Zubiran书,和一份书面知情同意是获得所有科目。

2.10。统计分析

进行描述性统计,分类变量比较使用Chi-2测试或确切概率法。我们使用Mann-Whitney - - - - - -两个中位数的测试比较。单向方差分析排名克鲁斯卡尔-沃利斯,如果克鲁斯卡尔-沃利斯检验是很有意义的,事后分析(邓恩的测试)所有成对进行多重比较程序。据报道中位数和microrna的相对表达范围(5日/第95百分位数)。我们报道非参数使用斯皮尔曼相关系数在血清学相对microrna的表达和CLASI得分。很强的相关性之间的斯皮尔曼系数被定义为±0.50±1,媒介之间的相关性和±0.30±0.49,低于0.29和微弱的相关性。我们还进行了多元线性回归分析来评估可能有意义的microrna协会和外围和皮肤细胞亚种群之间的品种。

所有统计测试进行双向的;值小于0.05被认为是具有统计学意义。SPSS(21.0)和GraphPad棱镜(v . 5)软件是用于统计分析。

3所示。结果

3.1。临床和人口特征

临床和人口特征的总结了组表1。大多数的参与者女性和年龄相仿。我们并没有发现显著差异对系统性红斑狼疮持续时间、强的松的剂量,使用抗疟药物和免疫抑制剂组与继续教育。然而,正如所料,中位数SCLE CLASI活动评分的患者高于DLE患者的得分。

3.2。microrna测定SCLE和DLE患者

六个microrna的分析揭示了微分循环水平(mir - 150、miR-23b mir - 1246, miR-21, miR-31,和mir - 146)在患者组和控制(图1)。在这方面,mir - 1246水平循环(减少)372.7倍,mir - 150(183.1倍减少),miR-21(减少)14.7倍,miR-23b 14(减少),和mir - 146(此方案减少)SCLE患者显著低于健康对照组。DLE患者也有低水平的miR-21(减少)4.6倍,mir - 1246(3.8倍减少),mir - 150比健康对照组(1.7倍减少)。当我们组与SCLE与DLE相比,SCLE组较低水平的mir - 1246(75.5倍减少),mir - 146(40.6倍减少),miR23b(减少23.2倍)。

3.3。microrna与CLASI活动之间的相关性得分

除了mir - 150的子群SCLE患者(95% CI -0.78到-0.11, ),我们没有找到任何相关的CLASI活动评分和其他循环miRNA级别。

3.4。microrna协会和循环和皮肤细胞的亚种

我们进行了多元回归分析来评估不同的microrna的协会和循环和皮肤细胞的子集。

在外周血SCLE的集团,我们观察到与CD4负面联系⁺/ CD25^{- - - - - -}/ il - 4⁺细胞和CD4⁺/ CD25^嗨/ Foxp3⁺和miR-23b(数据2(一个),2 (e),2 (g)、表2)和CD4⁺/ CD25^{- - - - - -}/干扰素-γ⁺mir - 1246(数字2(一个)和2 (f)、表2)。组的病人,有一个积极的和CD123协会⁺/ CD196⁺/我⁺血浆树突细胞和mir - 150(数字2 (b)和2(我)、表3)。

在群SCLE,皮肤,一个积极的协会决定miR-21和CD4之间⁺/ il - 4⁺(图3 (c)、表2);和CD20⁺/ il - 10⁺(图3 (f)、表2)和CD4⁺/干扰素-γ⁺与miR-31(图3 (d)、表2)。在半夜病人的CD4细胞⁺/ il - 4⁺细胞和mir - 150(图相关的积极3 (c)、表3)和CD20⁺/ il - 10⁺细胞与mir - 1246和mir - 146 a(图3 (f)、表3)。

3.5。京都基因和基因组的百科全书(KEGG)通路富集分析microrna在SCLE和DLE患者差异表达

预测的目标和途径的差异表达microrna及其相关性与特定的循环和皮肤T细胞亚群在临床条件(SCLE: miR-21、miR-31 miR-23b DLE: mir - 150, mir - 1246,和mir - 146 a)通过使用KEGG通路富集策略进行了分析。预测的目标和途径的分析显示,在SCLE miR-21与河马信号,细菌侵入上皮细胞的转录调节癌症、催乳激素信号,FoxO信号,脂肪酸的生物合成和降解。有趣的是,miR-31也与癌症通路与miR-21和miR-23b有关。此外,我们发现miR-31明显与肿瘤坏死因子信号有关。

关于DLE, mir - 146 a的表达明显与免疫相关的途径包括nf -κB信号,toll样受体信号。mir - 1246细胞凋亡和病毒的致癌作用。最后,mir - 150在蜡烛HIF-1信号和癌症通路密切相关。

有趣的是,interactome分析显示一组的途径与具体的microrna表达SCLE和DLE患者。在这种背景下,细胞周期调控,p53信号,TGF -β甲状腺激素信号,信号和癌症通路miR-21之间共享,miR-31,和miR-23b (SCLE表示)和mir - 146 a, mir - 1246, mir - 150表达DLE患者(图4)。

重要的是,协会的程度之间的差异表达microrna的签名和特异性T细胞亚群在SCLE和患者及其浓缩了提到的通路图所示5。详细的价值观和特定microrna的关联程度和功能通路被招募的人物S2和S3。

4所示。讨论

microrna在基因组的转录后的调控是关键决定因素(27,28),参与许多生物过程包括炎症的控制(29日]。众所周知,一个不受控制的免疫炎症反应可能导致自身免疫的发病机制。

在目前的工作中,我们探讨了如果循环microrna的表达签名可能识别教育患者和他们的品种,如被独家等人miR-31和mir - 485 - 3 - p超表达相比,DLE SCLE (12]。我们最相关的研究结果,mir - 150, mir - 1246, miR-21, miR-23b, mir - 146表达下调SCLE比健康对照组。此外,mir - 1246、miR-23b和mir - 146表达低比DLE SCLE。我们观察到一些差异表达和外围的协会和组织群microrna根据CLE品种。尽管SCLE组,miR-23b miR1246开车Th2和Th1外围反应;而在半夜,mir - 1246与IL-10-producing B细胞的浸润。

mir - 150表达不同血统的免疫细胞,并参与细胞成熟从pro-B前b淋巴细胞,以及在开发和功能NK活性和iNKT细胞谱系(30.,31日]。关于mir - 150的参与在皮肤生物学,促进角化细胞增殖的差别已经证明了其对这些通过针对HIF-1在缺氧的条件下α和VEGF-A32]。除此之外,与差别mir - 150对这些本构I型胶原过度硬皮病皮肤成纤维细胞通过整合素的诱导β₃(33]。mir - 150似乎发挥重要作用的感应myofibroblast增殖和抗细胞凋亡(34]。此外,mir - 150也表达下调与皮肤参与其他自身免疫性疾病,包括牛皮癣和弥漫性皮肤的系统性硬化症(SSc)皮肤损伤(32]。具体来说,促进差别在SSc,对这些TGF -β信号和Smad3磷酸化,导致I型胶原蛋白基因的转录激活和组织纤维化(32]。在这种背景下,研究描述,DLE患者表现出一种独特的超表达签名profibrotic标记包括TGF -β和SMAD312]。与这些研究,我们的研究表明,mir - 150的差别,对这些蜡烛可能会影响慢性炎症和profibrotic通路的激活。

另一方面,mir - 1246的作用在正常皮肤和自身免疫性疾病的特点还很少。在系统性红斑狼疮患者,发现表达下调。这种低表达可能与承诺hyperactivation B细胞。有趣的是,B细胞从一般mir - 1246的系统性红斑狼疮患者也有类似的表达水平与健康志愿者(相比17]。此外,它已经表明,mir - 1246促进UVB-induced细胞凋亡的表达下调RTKN2表达式在角化细胞35]。在此,我们也观察到这种microrna的表达下调SCLE和DLE患者。

关于mir - 146,它已经发现黑色素瘤病变过表达(36]。牛皮癣患者,mir - 146 a与IL-17呈正相关表达式在皮肤损伤和PBMCs [37]。此外,mir - 146 a调节促炎TLR / MyD88通路通过瞄准IRAK1, TRAF638]。mir - 146——也会导致系统性红斑狼疮的发展,由于它的原因是消极的I型干扰素通路的监管机构针对IRF5, STAT1, IRAK1, TRAF6 [34]。系统性红斑狼疮患者,在此,我们观察到蜡烛的基因数。因此,降低PBMCs mir - 146 a的表达可能导致增强的I型干扰素(干扰素的生产α/β在人类狼疮)。

miR-23b,人类角质细胞分化的标志(通过镇压TGIF1和激活的TGF -β-SMAD2信号通路),是人类主要的UVA照射后显著调节角质细胞和行为通过targeting-related RAS病毒致癌基因同族体2 (RRAS2),强烈表达了在高度侵略性的恶性皮肤癌(39,40]。此外,miR-23b促进皮肤伤口愈合通过抑制炎症反应的定位ASK1 [41]。

此外,我们报道的基因数miR-21 miR-31 CLE病人,但不是之一。miR-21以及miR-31,主监管机构的T细胞活化在系统性红斑狼疮(42]。几项研究已经表明,miR-21的异常表达参与SSc和牛皮癣的发病机理。miR-21调节基因,如SMAD3 SMAD7, I型胶原蛋白,所有参与纤维化(34]。此外,它已被证实甲状腺激素之间的相互调节和miR-21 miR21会使刺猬pathway-driven皮肤肿瘤发生(基底细胞癌)43]。过度的miR-21还能抑制黑色素瘤细胞的生长和转移目标MKK3 [44]。

在系统性红斑狼疮患者,miR-31表达下调和负相关的疾病活动和蛋白尿,而miR-21高表达与咽部得分和蛋白尿。此外,减少miR-31似乎改变生产- 2的表达在系统性红斑狼疮患者T细胞,可能影响核转录因子激活T细胞的表达(NFAT) [45]。

另一方面,最近的一项研究描述了一个特定的microrna的皮DLE签名,包括miR-31和mir - 485 - 3 - p。它表明,过度的miR-31被紫外线刺激,TGF -βNF -这microrna的激活κB信号刺激促炎反应导致中性粒细胞和巨噬细胞浸润在皮肤2]。miR-31是一个关键的调节促进伤口愈合过程中角化细胞增殖和迁移(46),并在SSc,系统性疾病的特点是广泛的纤维化(47,48]。

最后,一些免疫反应途径的参与包括PRR信号,JAK-signal换能器,STAT信号,NF -κB信号,增殖蛋白激酶(MAPK)信号级联被描述在蜡烛5]。,几个途径与循环microrna在继续教育差异表达。Interactome网络分析显示循环之间有着紧密联系microrna在SCLE和DLE组织特别坚实的网络连接,如细胞周期调控通路,p53信号、TGF -β信号、NF -κB信号,HIF-1通路,甲状腺激素信号和癌症通路。他们中的一些人,如前所述,被描述的蜡烛,但是别人没有,打开新领域的研究。总的来说,新见解蜡烛的发病机制可能允许的发展新目标治疗这些免疫途径的抑制等。

当然,我们承认,我们的研究有以下限制:首先,样本容量有限和缺乏一个复制队列。尽管,我们仔细的临床选择样本,并能够发现不同的microrna的表达在不同组的患者。第二,我们没有评估皮肤活检microrna的存在。然而,我们有兴趣学习循环microrna与进一步的目的使用它们作为未来潜在blood-based生物标志物来评估复发和对治疗的反应,没有皮肤活检的需要。最后,在外围和皮肤亚种群的分析,没有一个循环microrna表达下调与Th17有关和Th22细胞以前被认为是参与发病。因此,它是非常可能的,其他microrna可能也涉及这些细胞亚群的调节。除了这些限制,我们考虑到我们目前的手稿是缺乏信息的相关性特别是蜡烛的发病机理。

总结,我们的差别决定对这些mir - 150, mir - 1246, miR-21 CLE病人。SCLE品种mir - 1246的水平最低,mir - 146和miR-23b。总的来说,这些microrna开车的存在不同的外围和皮肤亚种群和参与多样化的途径。这还需要进一步的研究来验证我们的结果在其他人口和临床生物标志物来评估这些microrna的作用。

数据可用性

数据将根据要求提供。

附加分

已经知道这个话题是什么。(1)皮肤红斑狼疮(CLE)是一种自身免疫性疾病,理解各种各样的皮肤表现,可以独立出现,或之前,系统性红斑狼疮。(2)蜡烛的发病机制是多方面的,包括遗传素质、环境因素,先天和适应性免疫反应异常。(3)最近的研究揭示了潜在的贡献microrna在信号通路的调控。本研究添加什么。(1)循环mir - 150, mir - 1246, miR-21减少病人。(2)SCLE水平较低的品种有关miR-21, miR-23b, miR-31。(3)DLE水平较低的品种有关mir - 146, mir - 150和mir - 1246。这些microrna开车的存在不同的外围和皮肤亚种群和参与多样化的途径。平移的消息是什么。(1)循环microrna可以作为未来潜在blood-based生物标志物来评估复发和对治疗的反应,没有皮肤活检的需要。(2)调节循环microrna治疗教育可能是有用的。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

SMF得到病人同意参与,随访患者,收集临床信息组织和血液样本,进行实验,分析数据,并写了手稿。克、LJA ACL, NERZ BOQ进行实验,分析数据,并写了手稿。生理改变、GHM和JFC设计研究,实验执行,监督的研究,分析了数据,并写了手稿。

确认

这项研究被内心的财务支持。西尔维亚Mendez-Flores博士学位项目的学生:项目Posgrado en Ciencias书,Odontologicas y de la祝您健康,大学根据墨西哥。

补充材料

补充图1:代表(a)组织化学染色IL-22-expressing细胞,(b) IL-17A-expressing细胞,(c) IL-4-expressing细胞(d)干扰素-γ表达的细胞,(e) Foxp3-expressing细胞,(f) IL-10-expessing细胞,(g) IDO-expressing从脾细胞组织切片。最初的放大是×600。补充图2:热图KEGG通路富含基因受结合hsa - mir - 150 - 5 - p - mir - 1246, hsa - mir - 146 a - 5 - p DLE患者。补充图3:热图KEGG通路富含基因受hsa-miR-23b-3p、hsa-miR-21-5p, hsa-miR-31-5p SCLE患者。(补充材料)

引用

1. m·g . Kirchhof和j.p. Dutz“皮肤红斑狼疮的免疫病理反应,”风湿性疾病诊所北美,40卷,不。3、455 - 474年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
2. a·库恩·d·拜因,g . Bonsmann“红斑狼疮tumidus 100周年,”自身免疫的评论,8卷,不。6,441 - 448年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
3. y, y . f .汉j . Wu z . r .史和l .王”皮肤的红斑狼疮的发病机制相关联,并且没有系统性红斑狼疮红斑,”自身免疫的评论,16卷,不。7,735 - 742年,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
4. s . Mendez-Flores g . Hernandez-Molina a.b. Enriquez et al .,“细胞因子和效应/监管细胞的生理病理学特征皮肤红斑狼疮红斑的:横断面研究,“炎症介质卷,2016篇文章ID 7074829, 15页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
5. j .文策尔,“皮肤红斑狼疮:新的见解发病机理和治疗策略,”自然评论风湿病学,15卷,不。9日,第532 - 519页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
6. 戴秉国r和s a·艾哈迈德”理解免疫调节的新范式,微rna,炎症和自身免疫性疾病,”转化研究,卷157,不。4、163 - 179年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
7. d . t .谢谢,p·d·Katsikis。”小分子核糖核酸:免疫调节的关键组件,”实验医学和生物学的发展卷。780年,15-26,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
8. 张,问:王,x,“小分子核糖核酸的动物和植物和其监管的角色,”细胞生理学杂志,卷210,不。2、279 - 289年,2007页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
9. s . o . Steen l . v .球队a . l . Carlsen et al .,“循环microRNA在游离系统性硬化明显不同于健康对照组和系统性红斑狼疮,”风湿病学杂志》,42卷,不。2、214 - 221年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
10. l . s . g . Wang Tam, e·k·李et al .,“血清和尿免费microRNA在系统性红斑狼疮患者,”红斑狼疮,20卷,不。5,493 - 500年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
11. 戴y, y s .黄m .唐et al .,“微rna表达的微阵列分析的系统性红斑狼疮患者外周血细胞,”红斑狼疮,16卷,不。12日,第946 - 939页,2007年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
12. c .唯一多明戈,费雷尔,t . Moline j . Ordi-Ros和j . Cortes-Hernandez“微表情分析识别miR-31和mir - 485 - 3 - p铁饼状的皮肤红斑狼疮的发病机制的监管机构,”《皮肤病学研究杂志》上,卷139,不。1,51 - 61,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
13. c x Wang,陈y, z . Wu和w·史”CircIBTK抑制DNA脱甲基作用和激活的一种蛋白激酶信号通路通过miR-29b外周血单核细胞在系统性红斑狼疮,”关节炎研究和治疗,20卷,不。1,p。118年,2018。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
14. Liston a, a . s . Papadopoulou d . Danso-Abeam和j·杜利,“MicroRNA-29适应性免疫系统:设置阈值,“细胞和分子生命科学,卷69,不。21日,第3541 - 3533页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
15. j·l·m·l . p . Tan Wang Robertus et al .,”B细胞子集的microrna测定:特定的microrna的概要的生发中心B细胞变异centroblasts和中央细胞之间,“实验室调查,卷89,不。6,708 - 716年,2009页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
16. 朱,w•潘x歌et al .,“微miR-23b抑制IL-17-associated自身免疫性炎症通过瞄准TAB2, TAB3和IKK -α”,自然医学,18卷,不。7,1077 - 1086年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
17. g . s .罗y Liu梁et al .,“微rna的作用- 1246 B细胞活化的规定和系统性红斑狼疮的发病机制,“临床实验胚胎学,7卷,p。24日,2015年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
18. t . x, j . Hartner e . j . Lim et al .,“MicroRNA-21限制激活体内免疫response-mediated il - 12 / IFN-gamma通路,Th1偏振,dth的严重程度,”免疫学杂志,卷187,不。6,3362 - 3373年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
19. n . a . Stepicheva和j·l .歌曲”功能和监管microRNA-31的发展和疾病,”分子繁殖和发展,卷83,不。8,654 - 674年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
20. m·m·佩里,s . a . Moschos a·e·威廉姆斯,n . j .牧羊人h . m . Larner-Svensson和m·a·林赛,“微rna - 146 a表达消极的快速变化调节IL-1beta-induced人类肺部肺泡上皮细胞、炎症反应”免疫学杂志,卷180,不。8,5689 - 5698年,2008页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
21. 傅h . x, x p .粉丝,m·李·m·j·刘,问:l .太阳mir - 146 a减轻肾损伤小鼠通过调节与系统性红斑狼疮NF -κB通路。”欧洲医学和药理科学审查,23卷,不。16,7024 - 7032年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
22. w·j·张,y Cheng崔,m . Li b·李和l .郭”微rna - 155调节Th1和Th17细胞分化与多发性硬化症和实验性自身免疫性脑脊髓炎,”神经免疫学杂志,卷266,不。1 - 2日,56 - 63,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
23. g . Lerman m .莎朗·r·Leibowitz-Amit y Sidi,和d . Avni“il - 22生成之间的串扰信号和mir - 197在人类角质细胞,”《公共科学图书馆•综合》,9卷,不。9篇文章e107467 2014。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
24. m . c .业务“更新美国风湿病学院修订标准分类的系统性红斑狼疮,”关节炎和风湿病,40卷,不。9日,第1725条,1997年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
25. j .阿尔布雷特·泰勒,j·a·柏林et al .,”的CLASI(皮肤红斑狼疮疾病面积和严重程度指数):皮肤的红斑狼疮,结果仪器”《皮肤病学研究杂志》上,卷125,不。5,889 - 894年,2005页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
26. s . Mendez-Flores g . Hernandez-Molina d . Azamar-Llamas j .祖尼加j . Romero-Diaz和j . Furuzawa-Carballeda“炎症趋化因子概况及其相关性效应CD4 T细胞和监管细胞亚群在皮肤的红斑狼疮,”细胞因子卷,119年,第112 - 95页,2019年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
27. r·c·李·r·l·Feinbaum和诉安布罗斯·秀丽隐杆线虫heterochronic基因lin-4与反义互补编码小rnalin-14”,细胞,卷75,不。5,843 - 854年,1993页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
28. b·怀特曼。哈,和g . Ruvkun heterochronic基因的转录后的调控lin-14通过lin-4在秀丽隐杆线虫调节时间模式形成,”细胞,卷75,不。5,855 - 862年,1993页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
29. 即Alevizos g . g . Illei,“小分子核糖核酸作为风湿性疾病的生物标记物,”自然评论风湿病学》第六卷,没有。7,391 - 398年,2010页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
30. c, d . p . Calado g·吉利莲et al .,“mir - 150控制针对转录因子c-Myb B细胞分化,“细胞,卷131,不。1,第159 - 146页,2007。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
31. n . a . Bezman t . Chakraborty t·本德和l·l·尼尔,“mir - 150调节NK和iNKT细胞的发展,“《实验医学杂志》上,卷208,不。13日,2717 - 2731年,2011页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
32. x y, j . Su f . Li Chen和g .张“mir - 150调节人类通过针对HIF-1角化细胞增殖在缺氧的条件下α和VEGFA:影响牛皮癣治疗。”《公共科学图书馆•综合》,12卷,不。4篇文章e0175459 2017。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
33. n .本田m . Jinnin t Kira-Etoh et al .,“mir - 150下调有助于本构I型胶原过度硬皮病皮肤成纤维细胞通过整合素的诱导β3,“美国病理学杂志》上,卷182,不。1,第216 - 206页,2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
34. j .问:陈g . Papp p . Szodoray和m . Zeher”小分子核糖核酸的作用在自身免疫性疾病的发病机制,“自身免疫的评论,15卷,不。12日,第1180 - 1171页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
35. r·h·w·李,y . f . Wu, h, c, h .钱,“mir - 1246版本RTKN2-dependent阻力在HaCaT UVB-induced凋亡细胞,”分子和细胞生物化学,卷394,不。1 - 2、299 - 306年,2014页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
36. m . Aksenenko n . Palkina a . Komina l . Tashireva和t . Ruksha“微rna表达差异相邻皮肤,黑色素瘤、健康”BMC皮肤病,19卷,不。1,p。2019。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
37. p .夏,x, z h . Zhang et al .,“失调miRNA146a和IRAK1诱发IL-17持久性银屑病皮肤损伤,”免疫学的信,卷148,不。2、151 - 162年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
38. k·d·Taganov m . p . Boldin k . j . Chang和d·巴尔的摩NF -κB-dependent感应microRNA mir - 146,一种抑制剂针对信号蛋白的先天免疫反应,”美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国,卷103,不。33岁,12481 - 12486年,2006页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
39. l . Barbollat-Boutrand n . Joly-Tonetti m·多斯桑托斯et al .,“MicroRNA-23b-3p调节人类角化细胞分化通过镇压TGF-ß-SMAD2 TGIF1和激活的信号通路,”实验皮肤病学,26卷,不。1,51-57,2017页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
40. a . Kraemer I.-P。美国亨宁et al .,“UVA和UVB照射不同调节微rna表达在人类主要的角化细胞,”《公共科学图书馆•综合》,8卷,不。12篇文章e83392 2013。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
41. h·李韩x k .左et al .,“miR-23b促进皮肤伤口愈合通过抑制炎症反应的定位ASK1,”Biochimica et Biophysica学报,50卷,不。11日,第1113 - 1104页,2018年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
42. k . s . Amr f·s . Bayoumi f·T·Elgengehy s o·阿卜杜拉·h·h·艾哈迈德和e . Eissa”的角色microRNA-31和microRNA-21监管生物标志物埃及狼疮患者T淋巴细胞的活化,”风湿病学国际,36卷,不。11日,第1625 - 1617页,2016年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
43. d . Di Girolamo r . (m·a·德·斯特凡诺et al .,“互惠的相互影响甲状腺激素和microRNA-21调节刺猬pathway-driven皮肤肿瘤发生,”《临床研究杂志》上,卷126,不。6,2308 - 2320年,2016页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
44. w·m·周x, z Jing,和c,“过度的微rna - 21抑制黑色素瘤细胞的生长和转移目标MKK3,”分子医学报告,20卷,不。2、1797 - 1807年,2019页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
45. w .粉丝,d .梁y唐et al .,“识别microRNA-31作为小说监管者导致受损白介素2生产从系统性红斑狼疮患者的T细胞,”关节炎和风湿病,卷64,不。11日,第3725 - 3715页,2012年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
46. 王d·李,李x i, a . et al .,“MicroRNA-31促进皮肤伤口愈合,增强角化细胞增殖和迁移,”《皮肤病学研究杂志》上,卷135,不。6,1676 - 1685年,2015页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
47. b .周x x左,y s . et al .,“集成的微rna和mRNA表达谱在系统性硬化症患者的皮肤,”科学报告,7卷,p。42899年,2017年。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索
48. h·朱y李,美国et al .,“微rna表达异常在有限的皮肤硬皮病和弥漫性皮肤硬皮病,”临床免疫学杂志,32卷,不。3、514 - 522年,2012页。视图:出版商的网站|谷歌学术搜索

版权

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