文摘

衣原体肺炎(尼泊尔共产党)感染导致多个人类急性和慢性疾病。DCs在宿主防御尼共感染的作用已经被很好地记录下来了。这同样适用于不变的自然杀伤T细胞和NK细胞(iNKT),但细胞之间的相互作用在很大程度上是未知的。在这项研究中,我们调查的影响和机制iNKT细胞NK细胞的分化和功能尼泊尔共产党肺部感染和DCs在这个过程中所扮演的角色。我们发现干扰素-扩张γ感染后第NK细胞迅速发生,但这种反应在iNKT敲除小鼠(KO)改变。的表达激活标记和干扰素的生产γ由不同的KO小鼠NK子集明显低于野生型小鼠(WT)。使用体外DC-NK coculture和体内过继转移方法,我们进一步分析了DCs在iNKT-mediated NK细胞功能的调制。我们发现,NK细胞表达低水平的激活标记和干扰素-较少γ当他们与DCs cocultured KO小鼠比WT老鼠。更重要的是,我们发现过继转移的DCs KO小鼠NK细胞的激活和干扰素诱导少γ生产。结果提供证据iNKT细胞对NK细胞功能的调节效果,特别是这个调制过程中DCs的至关重要的作用。这一发现表明细胞相互作用的复杂性尼泊尔共产党肺部感染,应考虑在设计对疾病和感染预防和治疗方法。

1。介绍

DCs在宿主防御感染的作用一直是定义良好的。特别是,我们和其他人发现了显著的交互与DCs iNKT / NK细胞对感染T细胞反应在不同的设置很重要(1- - - - - -4]。在目前的研究中,我们旨在研究iNKT细胞对NK细胞的调节效应和DCs的参与这一过程。

NK细胞的先天免疫系统的重要组成部分,导致宿主抵抗微生物感染,如病毒、细菌、和某些寄生虫(5- - - - - -7]。一些研究表明,人类和小鼠NK细胞是高度异质种群具有多功能特性(8,9]。在这种背景下,小鼠NK细胞可以分为4个子集基于CD11b和CD27表达式。的CD11b低CD27低,CD11b低CD27高,CD11b高CD27高,CD11b高CD27低NK子集代表一个连续的NK细胞分化过程(10]。在这些子集,CD11b低CD27高和CD11b高CD27高子集具有增强细胞因子的生产和更高的响应能力,同时CD11b高CD27低NK子集似乎更加严格控制由于其高表达抑制性受体(11]。NK的功能性特征子集在免疫反应已经看见几个疾病模型(12,13]。

iNKT是innate-like T淋巴细胞sublineage表达NK细胞标记和有限/累积量T细胞剧目的上下文中识别脂质模mhc i分子CD1d [14,15]。iNKT细胞功能研究表明这些细胞在免疫调控产生重大影响。激活后,iNKT细胞产生多种细胞因子,并提供表面刺激分子激活NK细胞,T细胞、B细胞和DCs (1,16,17]。一些研究表明iNKT的调制效应细胞对NK细胞在感染和noninfection设置。注射可溶性抗原模型α-galactosylceramide (α-Galcer)这是一种特定的受体激动剂iNKT细胞导致NK细胞的活化和增殖能力和生产干扰素-γ在老鼠18,19]。此外,α-Galcer-stimulated人类iNKT细胞还通过IL-2-dependent激活NK细胞机制(20.]。此外,iNKT细胞诱导激活NK细胞分化和NK细胞的影响教育(21]。有趣的是,在感染的设置,iNKT NK细胞功能的影响变量出现在文献[22- - - - - -24]。一项研究表明,NK细胞保持其活动和保护功能没有iNKT细胞中鲁兹锥体感染(22]。另一项研究表明,iNKT细胞抑制干扰素-γ生产后NK细胞急性甲型流感病毒感染(23]。相比之下,我们先前报道,iNKT细胞促进干扰素-γ生产期间,NK细胞c . muridarum,鼠标的衣原体、感染(24]。混合的影响研究结果表明,iNKT细胞对NK细胞感染可能是特定的;因此,重要的是要专门研究特定的病原体。

的成员衣原体家庭是专性细胞内的革兰氏阴性细菌病原体,包括几个种类和各种血清型。之前的研究表明,不同的细胞免疫反应包括NK / iNKT是由不同种类的细胞衣原体特别是尼泊尔共产党和c . muridarum(厘米)[25]。NK细胞起到保护作用厘米感染(26- - - - - -28),但一个报告显示,NK细胞没有导致先天抵抗尼泊尔共产党感染的T细胞和B细胞缺陷29日,30.]。值得注意的是,NK细胞的动力学和功能参与反应尼泊尔共产党感染尚未阐明。因此,重要的是要明确测试NK细胞反应和iNKT细胞的影响尼泊尔共产党感染。此外,我们有报道称iNKT细胞可以调节表型,细胞因子生产和DCs的功能尼泊尔共产党感染(1,31日]。特别是,我们发现iNKT细胞可以提高直流IL-12p70生产CD40L - IFN -γ-,,和contact-dependent coculture系统。考虑到DCs的重要作用在调制iNKT和NK细胞功能,是很自然的研究在这一过程中DCs的参与。

在目前的研究中,通过消耗体内NK细胞和WT和iNKT KO小鼠的直接比较,我们对NK细胞在宿主防御反应的参与尼共感染和影响iNKT细胞NK细胞分化和激活期间感染。此外,我们探讨iNKT细胞调节NK细胞活化的机制和功能,尤其是DCs的参与在这个过程中,使用体外DC-NK coculture和体内过继转移方法。

2。材料和方法

2.1。老鼠

女性C57BL / 6小鼠繁殖和保存在一个特定的无菌动物设施马尼托巴大学的。育种双Jα18基因敲除(Jα18 - / -)小鼠缺乏不变iNKT细胞在B6背景请提供博士学者谷口过敏和免疫学研究中心(日本)和维护在动物保健设施马尼托巴大学的。使用的所有老鼠6至12周大。所有实验符合加拿大动物保护协会的指导方针和协议是马尼托巴大学的伦理委员会批准。

2.2。衣原体

尼泊尔共产党传播、纯化和量化如前所述1]。简单地说,尼泊尔共产党是生长在HEp-2鹰的MEM细胞含有10%的边后卫。48 h后文化,感染细胞收获。基本的身体(EBs)被不连续密度梯度离心法纯化。疣状的纯化EBs测量并存储在-80°C。对小鼠感染, inclusion-forming单位(IFUs)尼泊尔共产党在40μl PBS的最终体积被用来接种小鼠鼻内。使用相同的种子的EBs在整个研究。

2.3。抗体

使马伯和相应的同形像控制从eBioscience购买或BioLegend。分析NK子集的流式细胞术,anti-CD3ε-PE-Cy7、anti-NK1.1-PE anti-NK1.1-APC、anti-CD69-PE anti-CD25-FITC, anti-CD11b-APC, anti-NK1.1-Pacific蓝色,anti-CD27-FITC, anti-CD11b-APC-Cy7使用。

2.4。表面标志和细胞内细胞因子染色

为在活的有机体内实验中,新鲜的脾细胞被anti-CD3染色ε-PE-Cy7、anti-NK1.1-APC anti-CD69-PE, anti-CD25-FITC CD69、CD25表达。染色和分析NK子集进行如前所述[24]。细胞内细胞因子染色,细胞被刺激PMA (50 ng / ml)和Ionomycin (1μg / ml)和孵化完成RPMI 1640中37°C。3小时孵化后,brefeldin补充说,细胞培养3小时积累细胞因子的细胞。细胞随后被清洗和阻塞与anti-CD16 10分钟/ CD32流式细胞仪缓冲区(heat-inactivated的边后卫杜尔贝科的PBS, 2%, 0.09%的叠氮化钠),然后表面沾有适当的Abs。细胞被固定,permeabilized,随后沾APC-anti-IFN -γ30分钟。染色细胞被清洗和分析使用一个LSR II流式细胞分析仪。流式细胞仪的数据随后被分析表达软件。

2.5。隔离DCs和过继转移

DCs是分离脾细胞根据制造商的指示如前所述1]。简单地说,脾脏从Jα18 - / -小鼠或C57BL / 6小鼠感染后的无菌收集在特定的时间和消化成单细胞使用2毫克/毫升胶原酶d DCs纯化使用磁CD11c微和MACS-positive选择列(Miltenyi研究,赤褐色,CA)。孤立CD11c +细胞的纯度高达90%是基于流仪分析。

过继转移,DCs隔绝尼泊尔共产党J来华的α18 - / -小鼠C57BL / 6小鼠,和 DCs在无菌PBS收养静脉注射(注射)转移到天真的C57BL / 6人。24小时过继转移后,小鼠鼻内接种 的尼泊尔共产党。收件人在第三天皮老鼠牺牲。,和the expression of activation markers and IFN-γ生产的NK细胞通过流式细胞仪测定。

2.6。NK细胞净化

脾细胞未受感染的老鼠准备,NK细胞被消极的选择使用一个孤立的NK细胞隔离设备(Miltenyi研究)根据制造商的指示。NK细胞(NK1.1 + CD3e -) > 90%纯分离后,由流式细胞术。

2.7。直流和NK细胞Coculture

纯化DCs ( )从尼泊尔共产党J来华的α18 - / -小鼠或C57BL / 6小鼠cocultured NK细胞( )与未感染C57BL / 6小鼠在一轮96孔底板37°C。48小时后,收集细胞的细胞内细胞因子染色分析干扰素-γ生产上述协议后NK细胞。与此同时,干扰素-的浓度γ在上层清液由ELISA测定。

2.8。NK损耗在活的有机体内

小鼠腹腔注射30μ在300毫升PBS和光)l anti-asialo-GM1 (kouichi耗尽NK细胞在活的有机体内。和光)适当控制老鼠收到正常兔免疫球蛋白(kouichi。注射前三天进行衣原体感染和重复维护消耗每3天。NK细胞(95%)的损耗仪结果证实了这种治疗流。

2.9。统计分析

统计分析的数据进行表示使用未配对的学生 - - - - - -测试或单向方差分析(GraphPad棱镜软件;版本5)的值 被认为是重要的。

3所示。结果

3.1。CD27高呼吸道感染后NK细胞扩张尼泊尔共产党

测试是否NK细胞响应尼泊尔共产党感染、比例和NK细胞的绝对数量分析流式细胞术呼吸道后在不同的时间点尼泊尔共产党曝光。NK细胞被确定为NK1.1 + CD3e -细胞。如(图所示1(一)和1 (b),有一个适度增加的百分比NK1.1-expressing细胞在脾脏后第一天尼泊尔共产党感染在第三天达到顶峰。在第五天,NK细胞的比例开始下降。类似的动力学改变NK细胞也观察到肺(图S1A和B)。在脾脏NK细胞的绝对数量也增加在第一天,在第三天(图达到峰值1 (c))。的总数在脾脏NK细胞扩大约2.5倍(图1 (c)),在肺(图4倍就是S1C在第三天的峰值水平。

据报道,小鼠NK细胞可以被分为4基于表面CD11b子集和CD27表达(10,11]。探讨NK子集是否受到影响尼泊尔共产党感染,NK子集的模式研究。如图1 (d)和1 (e),尼泊尔共产党感染导致显著增加CD27的比例高NK细胞与未感染的老鼠。两个CD11b的频率低CD27高和CD11b高CD27高NK细胞在第七天皮几乎翻了一番。CD27的增加高NK细胞是伴随着减少CD11b高CD27低NK子集。在一起,结果表明尼泊尔共产党NK细胞的感染诱发快速扩张,尤其是CD27高子集。

3.2。NK细胞被激活并产生干扰素-γ后尼泊尔共产党感染

确定是否一个激活NK细胞表型的回应尼泊尔共产党感染,我们测量两个早期激活标记的表达,对NK细胞CD69、CD25动能的方式。我们发现尼泊尔共产党感染迅速增加NK细胞CD69表达早在第一天,在第三天达到高峰,脾脏NK细胞(数字为45%2(一个)和2 (b))表达这个标记。脾NK细胞CD25的水平(数字2 (c)和2 (d)在第一天)也显著升高,峰值在第三天皮。CD69、CD25逐渐从峰值下降但仍高达9天实验时终止。此外,细胞内细胞因子染色进行确定干扰素-γ生产后NK细胞尼泊尔共产党感染。我们发现干扰素-的百分比γ第NK细胞开始增加早在第一天皮。,约有25%的NK细胞染色阳性干扰素-γ在第五天皮。(图2 (e))。大约5%的NK细胞产生干扰素-γ在感染控制老鼠。干扰素-高γNK细胞仍然期间生产的研究。结果表明,NK细胞被激活并产生干扰素-γ为了应对尼泊尔共产党感染。

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图1
尼泊尔共产党肺部感染诱发的扩张NK细胞数量和NK子集的分布变化。老鼠感染 尼泊尔共产党在指定的时间点鼻内和杀害。脾细胞被染色NK1.1 CD3e。(a)的NK细胞比例(NK1.1 + CD3e -)在生活中淋巴细胞根据向前边撒是封闭的。代表点图所示。(b)动力学NK细胞的百分比。(c)动力学每只老鼠脾脏NK细胞的绝对数量。(d)基于CD11b CD27染色,NK细胞亚群分析浇注后NK1.1 + CD3e -细胞。代表斑马情节CD11b CD27-expressing NK细胞之前和之后尼泊尔共产党感染被显示。(e)动力学表示NK细胞的平均百分比子集是策划。数据表示为 并代表三个独立的实验。 。
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图2
NK细胞成为激活并产生干扰素-γ为了应对尼泊尔共产党感染。鼻内感染后尼泊尔共产党,老鼠被打死在不同天,和脾细胞染色NK1.1, CD3e, CD25和CD69。(a)代表直方图在NK细胞活化标记CD69表达天0,1,3 p。:同形像控制Ab染色(灰度直方图)和受感染的老鼠(实线)。(b)动力学NK细胞CD69的表达。(c)代表图NK细胞的活化标志物的表达CD25后感染:同形像控制Ab染色(灰度直方图)和受感染的老鼠(实线)。(d)动力学CD25的NK细胞的表达。(e)代表染色细胞干扰素-γ之前和之后尼泊尔共产党感染。干扰素-γ生产由脾NK细胞是由细胞内细胞因子染色在封闭的化验NK1.1 + CD3e -人口。数据代表一个至少有三个独立的实验,如所示 四只老鼠在结束时间点。
3.3。NK细胞耗竭导致易感性增加尼泊尔共产党肺部感染

为了进一步证实NK细胞在宿主防御的作用尼泊尔共产党肺部感染在免疫小鼠,我们使用anti-asialo-GM1耗尽体内NK细胞治疗和检查它对主机易感性的影响尼泊尔共产党感染。我们发现NK-depleted老鼠(图显示更大的体重损失3(一个)),明显高于细菌性肺部负担与控制antibody-treated老鼠(图3 (b))。在脾脏NK细胞的损耗和流式细胞仪等(图证实了肺S2)。结果表明,NK细胞在宿主防御中扮演了一个重要的保护作用尼泊尔共产党肺部感染。

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图3
更严重的疾病在NK-depleted老鼠尼泊尔共产党肺部感染。C57BL / 6小鼠anti-asialo-GM1处理或控制期间兔免疫球蛋白尼泊尔共产党肺部感染中描述的材料和方法。(一)小鼠的体重变化每天监测。每个时间点代表了 三个老鼠。(b)老鼠牺牲,肺部进行检测尼泊尔共产党加载在第七天皮。的均值log10-transformed IFUs /肺。 。
3.4。iNKT不足导致扩张改变NK细胞的子集

解决iNKT细胞对NK细胞的扩张的影响尼泊尔共产党感染,我们首先测量了WT的NK细胞数量和iNKT KO (Jα18 - / -)小鼠。我们发现没有显著差异在NK细胞数量这两个鼠标前后菌株尼泊尔共产党感染(图S3)。然后,我们分析NK子集的分布根据CD27和CD11b表达在WT iNKT KO小鼠之前和之后尼泊尔共产党感染。在稳态感染,NK子集的分布类似于iNKT KO和WT控制老鼠。后尼泊尔共产党感染,NK子集的模式显著改变在WT在第七天皮老鼠。,显示CD11b的显著增加低CD27高和CD11b高CD27高NK子集(图4)。值得注意的是,CD27的增加高iNKT KO小鼠NK细胞被发现在第五天皮。所示,早于WT老鼠。因此,CD11b的频率高CD27低NK子集显示早期减少iNKT KO小鼠比WT控制。因此,缺iNKT似乎促进CD27的增加高在动力学NK子集。

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图4
从J NK细胞α18 - / -小鼠NK子集的分布改变尼泊尔共产党感染。老鼠被杀死在鼻内感染后不同的日子尼泊尔共产党EBs ( ),和脾细胞流式细胞术的准备。(a)的相对分布CD11b——CD27-expressing NK细胞稳态和指定天后WT感染小鼠和Jα18 - / -小鼠。斑马情节显示从至少三个独立的实验。(b)条总结的相对分布在第五天皮脾NK子集。显示为 四只老鼠。 。
3.5。iNKT不足导致妥协NK活性和降低干扰素-γ生产后NK细胞尼泊尔共产党感染

据报道,小鼠CD27高NK细胞表现出强大的响应能力和增强细胞因子生产,而CD11b高CD27低有更高的子集激活阈值(11]。因此,CD27的频率增加高NK细胞在Jα18 - / -小鼠可能表明一个增强NK函数在这些老鼠。为了测试这个可能性,我们比较激活状态和NK细胞的细胞因子的生产尼泊尔共产党来华的WT iNKT KO小鼠。令人惊讶的是,我们发现iNKT KO小鼠的NK细胞显示CD69的表达(数字低很多5(一)和5(b))和CD25(数字5(c)和5(d))比WT老鼠在第一天和第三天皮。进一步分析表明CD69水平(图5(e)和CD25(图)5(f))表达在所有iNKT KO小鼠的NK子集低于WT老鼠。数据不支持的概念iNKT KO小鼠NK活性高于WT老鼠虽然CD27的百分比高在iNKT KO小鼠NK细胞是更高。


图5
从J NK细胞α18 - / -小鼠显示CD69、CD25表达反应低尼泊尔共产党感染。WT和Jα18 - / -小鼠鼻内感染尼泊尔共产党( )并分析了天1和3 p。脾细胞准备流式细胞术分析。(a) CD69表达对NK细胞(NK1.1 + CD3e)分析了天1和3 p。代表直方图显示。充满了灰色:同形像控制Ab染色;黑线:anti-CD69 Ab染色。(b)的比例(上)和MFI NK细胞CD69的(低)。(c)代表对NK细胞CD25表达的直方图显示。充满了灰色:同形像控制Ab染色;黑线:anti-CD25 Ab染色。(d)的总结(上)和MFI比例(低)的CD25 NK细胞。(e)分析了CD69的频率在指定的NK细胞基于CD11b子集,并在第三天皮CD27染色。(f) CD25的频率进行了分析,指出基于CD11b NK细胞亚群,并在第三天皮CD27染色。结果显示为 每组三只老鼠,代表三个独立的实验。 和 。

我们进一步研究了干扰素iNKT细胞——的影响γ生产NK细胞通过细胞内细胞因子染色。如数据所示6(一)和6 (b),在iNKT KO小鼠的NK细胞显著减少染色干扰素-γ在第五天尼泊尔共产党感染,相比之下,那些在WT老鼠。干扰素-的百分比γ第iNKT KO小鼠NK细胞是不到一半的WT老鼠。干扰素-γ生产的NK细胞部分取决于iNKT细胞。此外,我们测试了胞内干扰素-的水平γ表达式的每个子集来确定个体的功能变化NK子集。我们发现干扰素-减少γ生产的三大NK(图子集6 (c)),这表明iNKT的调制效应细胞干扰素-γ生产NK细胞并不局限于特定的NK子集。在一起,数据表明iNKT细胞能促进激活和干扰素-γ生产后NK细胞尼泊尔共产党感染。

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图6
降低干扰素-γNK细胞生产的Jα18 - / -小鼠尼泊尔共产党肺部感染。小鼠鼻内感染尼泊尔共产党( IFU)。在第五天皮。,splenocytes from WT and Jα18 - / -小鼠染色NK1.1, CD3e CD11b CD27和干扰素-γ并通过流式细胞术分析。(一)代表点块IFN -γ生产在WT NK细胞和Jα18 - / -小鼠。(b)的百分比干扰素-γ第NK细胞进行了总结。(c)干扰素-的频率γ分析了生产指定的NK细胞基于CD11b和CD27染色子集。数据显示为 ( )。一个有代表性的实验显示了三个独立的实验。 。
3.6。iNKT-Deficient老鼠DCs显示减少诱发NK细胞的激活和干扰素-的能力γ生产

DC可以休息' NK细胞在小鼠(4,32,33和人类的34]。先前的研究已经证明了一个关键的角色在干扰素的诱导——DC-derived il - 12γ第NK细胞(35]。DC成熟水平的影响程度的NK激活(33,36]。因此,很可能减少NK细胞活化和干扰素-γ生产iNKT-deficient老鼠改变直流函数的结果。直接测试这个,DCs隔绝尼泊尔共产党来华的WT iNKT KO小鼠和cocultured未感染的WT小鼠的NK细胞24小时。的表达CD69、CD25和干扰素-生产γNK细胞流式细胞仪进行测试。如图7WT-DC和KO-DC诱导增强NK细胞CD69、CD25表达表面。然而,KO-DC-induced CD69(数字7(一)和7 (b))和CD25(数字7 (c)和7 (d))NK细胞的表达明显低于WT-DC引起的。更重要的是,NK细胞cocultured KO-DC产生干扰素的含量明显降低γ比cocultured WT-DC(数字7 (e)和7 (f))。与此同时,干扰素,γ水平文化上层清液也显著降低KO-DC-NK coculture比WT-DC-NK coculture(图7 (g))。单独控制,直流和NK产生可检测干扰素-γ。进一步测试的角色DCs iNKT-mediated体内NK回应,我们用直流隔离过继转移进行实验尼泊尔共产党来华iNKT KO和WT老鼠。激活标记表达式和干扰素-γNK细胞生产的检查后在第三天尼泊尔共产党挑战。如图8,显著降低CD69、CD25表达和干扰素-γ生产NK细胞中观察到比WT-DC KO-DCs收件人的收件人。数据显示,DCs扮演至关重要的角色iNKT-mediated NK激活和干扰素-γ生产期间尼泊尔共产党感染。

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图7
DCs的能力降低尼泊尔共产党来华iNKT KO小鼠诱导激活和干扰素-γ天真的NK细胞的生产。DCs是隔绝iNKT KO小鼠的脾脏(KO-DC)和WT老鼠(WT-DC)在第五天皮。脾脏NK细胞丰富的天真的老鼠。NK细胞( )与直流cocultured ( )细胞在96圆的底板。48小时后,细胞和上层清液收集CD69、CD25、和干扰素-γ染色的细胞,ELISA测定干扰素-γ分别在上层清液。代表直方图和点阴谋CD69 (a)和CD25和干扰素- (b)表达式γ生产NK细胞(e)的描述。CD69 + (b)的比例,CD25 + (d),干扰素-γ+ (f)总结了NK细胞。(g)干扰素-的浓度γ在上层清液由ELISA检测。数据代表三种类似的实验,如所示 。 , 。
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图8
过继转移的KO-DC诱发更少的激活和干扰素-γNK细胞的生产。天真的受体小鼠(C57BL / 6)交付DCs孤立的脾脏尼泊尔共产党来华iNKT KO小鼠(KO-DC)和WT老鼠(WT-DC)。收件人老鼠牺牲后第三天尼泊尔共产党挑战。脾细胞收集测量CD69、CD25表达和干扰素-γ生产的NK细胞用流式细胞术。CD69 + (a)的比例,CD25 + (b),干扰素-γ+ (c)总结了NK细胞。数据代表三种类似的实验,如所示 。 。

4所示。讨论

我们的数据显示出显著的调节效应iNKT细胞对NK细胞激活和干扰素-γ生产的肺尼泊尔共产党感染。此外,我们发现DCs中扮演重要角色的iNKT-mediated调制NK细胞的功能。具体来说,我们表明,呼吸道尼泊尔共产党感染诱导NK细胞活化和干扰素-γ生产动态变化的NK子集。进一步比较iNKT KO和WT小鼠NK细胞的反应显示促进iNKT细胞NK细胞功能的作用,证明了降低活化标志物的表达,减少生产干扰素-γ,改变iNKT KO小鼠的NK子集。激活和干扰素-γ生产的NK细胞在很大程度上是受iNKT细胞的影响尼泊尔共产党感染虽然不是完全依靠iNKT细胞,表明iNKT细胞对NK细胞功能的促进作用。更有趣的是,我们发现在DC-NK coculture系统DCs隔绝尼泊尔共产党来华iNKT KO小鼠诱导激活标记表达式的减少和干扰素-下降γ生产比与WT小鼠NK细胞,表明DCs在NK iNKT-mediated调制函数的关键作用。我们还展示了在目前的研究中NK细胞在宿主防御起着重要的保护作用尼泊尔共产党感染。符合这一点,我们还发现,过继转移的DCs iNKT KO小鼠产生干扰素-少γ生产的NK细胞比DCs WT老鼠体内。我们以前的研究集中于iNKT对直流调节T细胞功能的影响(1)尽管目前的数据显示一个iNKT对DCs的影响,随后调节NK细胞的功能。我们以前报道,iNKT可以显著影响DC表型,细胞因子的生产、子集,在脾和肺功能(衣原体感染1,27,28,31日]。合并后的数据从先前的报告和当前的研究提供一个机械的解释之前报道的调制效应iNKT NK函数(24)通过展示这个调节过程中DCs的至关重要的作用。考虑到我们以前的报告在DCs NK的调制效应(27),结果也显示相应的直流和NK细胞衣原体感染的影响。

这项研究提供了新数据的动态变化,NK细胞反应肺尼泊尔共产党感染,显示与调节NK细胞迅速扩大CD69、CD25表达和增强干扰素-γ生产。更有趣的是,体内NK的证据提供的数据子集开关响应尼泊尔共产党感染。不同的函数基于CD27和NK子集CD11b表达式报道[12,37,38]。我们观察到,尼泊尔共产党感染CD11b的比例增加低CD27高和CD11b高CD27高NK子集因此减少CD11b的比例高CD27低NK子集。据报道,CD27高NK细胞活化较低阈值以及产生更多的IFN -γ相比之下,CD27低(子集11]。在我们的感染模型,CD27高NK细胞干扰素-的主要生产商γ在整个人口在NK尼泊尔共产党感染(数据未显示)。CD27比例的增加高NK细胞可能导致高水平的干扰素-γ生产后NK细胞尼泊尔共产党感染。虽然确切的机制占CD27高NK细胞扩张仍不清楚,可能涉及以下可能性:(1)CD27扩散高NK细胞原位,(2)不成熟的NK细胞从骨髓迁移,和(3)细胞死亡或CD11b降级高CD27低NK子集。

在NK iNKT子集的影响是特别有趣的。发现iNKT KO小鼠显示更高的CD27扩张高比WT后小鼠NK子集尼泊尔共产党感染。考虑到低阈值的子集激活,有人可能会认为KO小鼠NK更好功能尤其是干扰素-γ生产。然而,我们发现所有的NK细胞包括CD27子集高子集iNKT KO小鼠显示降低CD69、CD25表达和干扰素-γ生产与相应的子集WT老鼠。表面标记的结果表明,无视NK细胞的功能子集可能不是绝对的。尽管CD27表达式通常表明更高的激活和干扰素-γ生产、CD27高NK细胞,在iNKT不足的情况,实际上表达了低水平的激活标记和干扰素-γ比WT老鼠。因此,细胞子集的分析需要有一个表面标记和细胞因子的组合模式。此外,由于这三个iNKT KO小鼠NK子集显示低表达的活化标记和干扰素-生产γ,调制iNKT细胞对NK细胞的影响并不局限于一个特定的NK细胞的子集。

结果NK-DC coculture研究提供新的机械数据调制iNKT对NK细胞的影响通过展示在这一过程中DCs的至关重要的作用。值得注意的是,我们和其他人显示iNKT的调制效果和NK细胞对直流功能(1,27,28]。特别是,我们发现iNKT以及NK细胞可以调节脾和肺DCs的功能在促进CD4和CD8 T细胞反应(27,28]。目前发现在DCs的促进作用iNKT完整WT小鼠NK细胞干扰素的生产γ表明一个循环的正反馈在放大iNKT的促进作用1型T细胞反应除了对NK效应函数直接促进作用。这一发现进一步支持多种类型的之间的相互作用的重要性,先天和适应性免疫细胞的扩张与限制尺度免疫内稳态的炎症反应。

我们的数据表明,免疫小鼠NK损耗导致增加尼泊尔共产党负担在肺(图3),这表明NK细胞功能参与保护尼泊尔共产党肺部感染。这个观察可能被认为不符合研究使用小鼠T细胞和B cell-deficient [29日,30.]。事实上,一份报告显示,RAG-1- / -/γcR- / -和RAG-1- / -小鼠显示出类似的易感性尼泊尔共产党肺部感染,表明NK细胞的作用可以忽略不计尼泊尔共产党感染(30.]。另一份报告显示尼泊尔共产党负载RAG-1肺的- / -老鼠没有改变后消除NK细胞使用中和Abs [29日]。然而,我们认为我们的数据不一定是矛盾与以前的报告。观察到的差异可能是由于不同的老鼠用于研究:T / B细胞缺陷(29日,30.]与小鼠T / B方法在目前的研究。当我们当前的研究被认为是与之前报道的29日,30.),它可能表明,NK细胞发挥其保护作用虽然促进其他免疫细胞的功能,尤其是T细胞和B细胞,而不是直接控制尼泊尔共产党肺部感染效应。RAG-1 T细胞和B细胞的缺乏- / -老鼠可能掩盖这促进NK细胞功能Th1反应虽然干扰素-γ生产所示我们之前研究[27]。

5。结论

总之,我们的数据显示显著的调节效应iNKT细胞对NK细胞激活和干扰素-γ生产呼吸尼泊尔共产党感染。此外,结果提供了一个机械的解释iNKT-mediated NK细胞功能的调制显示DCs的重要作用。这一研究成果在理解蜂窝网络的复杂性在呼吸道衣原体感染,应考虑在设计预防和治疗方法。

数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

的利益冲突

作者证实不存在利益冲突。

确认

我们感谢博士学者谷口过敏和免疫学研究中心(日本)为他的慷慨礼物的Jα18基因敲除(Jα18 - / -)小鼠。这项工作是共同资助的赠款支持加拿大卫生研究院的研究(CIHR) X.Y. (CCI 92213和拖把- 130423)和中国国家自然科学基金(国家自然科学基金委)L.Z.(81501761)和W.Z. (30811120425)。X.Y.加拿大研究主席在感染和免疫。

补充材料

图S1:肺尼共肺部感染后NK细胞扩大。图S2:脾脏NK细胞耗竭和肺。图S3:绝对WT的NK细胞数量和iNKT KO小鼠尼共感染前后相似。(补充材料)