文摘
花旗松素的影响在cisplatin-induced氧化肺损伤的生化特性研究和组织病理学在男性白化Wistar鼠。有四组,每组有六个动物:50毫克/公斤的紫杉叶素+顺铂(TC)集团2.5毫克/公斤,2.5毫克/公斤的顺铂(CIS)组,50毫克/公斤的紫杉叶素(TG)组,和健康对照组(HG)。实验过程而言,动物在TC和TG集团首次通过口服填喂法治疗。独联体和HG组收到蒸馏水为溶剂,分别。一个小时之后,TC和独联体团体接受顺铂剂量为2.5毫克/公斤(腹腔内注射)。花旗松素、顺铂和蒸馏水是管理显示剂量和体积,使用相同的方法每天14 d。年底这段时间,动物被杀与高剂量的硫喷妥钠麻醉(50毫克/公斤)。血液和肺组织样本被生化(丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)、总谷胱甘肽(tGSH)和8-hydroxy-2脱氧鸟苷(8-OHdG))分析和组织病理学检查。生化和组织病理学结果TC和HG组与CIS的组。顺铂MDA的含量增加,髓过氧物酶和8-OHdG,标记的DNA氧化损伤,减少了tGSH的肺部组织。 Moreover, severe alveolar damage, including oedema and extensive alveolar septal fibrosis, in addition to infiltration of polymorphic nuclear leucocytes and haemorrhagic foci, was observed in the CIS group. These histopathological findings demonstrate that taxifolin provides protection against pulmonary oxidative stress by preventing increases in oxidant parameters and decreases in antioxidants.
1。介绍
顺铂(cis-dichlorodiammine铂II)是一种铂化合物和抗肿瘤药,广谱活动对各种固体癌症(1,2]。按照剂量顺铂的抗癌活性增加,但增加剂量顺铂引起严重的副作用(3]。报告的副作用包括氧化应激,影响肺部和其他各种组织和器官4]。间质炎症、纤维化、肺结构损伤和其他严重的并发症也被报道在顺铂化疗(5]。这些副作用cisplatin-induced肺损伤归因于增加氧自由基引起的脂质过氧化和抗氧化剂的减少参数(6]。先前的研究表明,增加顺铂的丙二醛(MDA)在动物肺、酶和非酶的抗氧化水平降低,造成了严重的DNA损伤(7]。在另一项研究中,作者报道氧化DNA损伤的肺组织cisplatin-treated集团(8]。在这一组,总氧化剂的水平高,而抗氧化剂较低(8]。
基于文学、氧化应激和DNA损伤似乎是顺铂的发病机制中重要组织和器官的毒性。因此,药物没有诱导氧化应激并表现出会减少cisplatin-related肺毒性抗癌活性。花旗松素(3 3 ,4 ,5,7-pentahydroxiflavanon)中发现的黄烷酮洋葱、牛奶蓟,法国海事和道格拉斯冷杉树皮,有一个已知的抗氧化活性9,10]。此外,以往的研究表明,花旗松素是有效预防多种癌症11,12]。因此,文献表明花旗松素可能减少肺毒性没有抑制顺铂的抗癌效应,可能更容易其抗癌活性。没有先前的研究调查了花旗松素对cisplatin-induced肺毒性的影响。因此,本研究的目的是考察花旗松素的保护作用与cisplatin-induced氧化肺损伤大鼠通过生化和组织病理学分析。
2。材料和方法
2.1。动物
实验动物是来自土耳其大学医学实验应用和研究中心。总共18男白化Wistar鼠(重量:255 - 265 g)被用于实验。之前的实验中,动物们被安置在组在正常的实验室环境中(22°C)。动物实验被依法执行国家实验动物的使用和护理指导方针并被批准的当地动物伦理委员会(AUHADYEK),阿塔土尔克大学的埃尔祖鲁姆、土耳其(决定日期:27.04.2018;不。119)。
2.2。化学物质
硫喷妥钠用于实验是由IE Ulagay(土耳其)、顺铂(Ebewa)是由仙女镇李坝社区(土耳其)和花旗松素是由Evalar,(俄罗斯)。
2.3。实验小组
动物们被分成四组,每组六个动物:50毫克/公斤的紫杉叶素+ 2.5毫克/公斤顺铂(TC)组,2.5毫克/公斤只顺铂(CIS)组,50毫克/公斤的紫杉叶素(TG)组,和健康对照组(HG)。
2.4。实验的程序
50毫克/公斤剂量的花旗松素是通过口头填喂法进行TC和TG组。蒸馏水为溶剂是独联体和HG组管理。根据先前的研究,研究了对顺铂药物毒性的保护作用[13),1 h花旗松素的应用和蒸馏水后,顺铂剂量为2.5毫克/公斤在TC和独联体组腹腔注射。花旗松素、顺铂和显示剂量和体积的蒸馏水管理每日14 d使用相同的方法。
14 d期结束时,血液样本取自动物的尾巴静脉。动物被杀害与高剂量的硫喷妥钠麻醉(50毫克/公斤),和肺组织被移除。丙二醛(MDA)、髓过氧化酶(MPO),和总谷胱甘肽(tGSH)水平测定血液和肺组织样本。此外,8-hydroxy-2脱氧鸟苷(8-OHdG),一个标记的DNA氧化损伤肺组织,测量,进行组织病理学检查。生化和组织病理学结果TC, TG, HG组与CIS组比较。
2.5。生化分析
2.5.1。样品制备
尾静脉的血液样本被收集在凝胶真空采血管分离血清管。血液样本在室温下15分钟,孵化和血清被离心分离1500 g×15分钟。血清样本存储在-80°C到用于生化分析。在肺解剖之前,组织与磷酸盐冲洗。肺组织均质在冰冷的磷酸缓冲(50毫米,pH值7.4)合适的测量参数。组织匀浆在5000转离心20分钟在4°C,和上层清液中提取分析tGSH, MDA, MPO水平和蛋白质浓度。上层清液的蛋白质浓度测定用布拉德福德所表达的方法和分克的蛋白质(14]。
2.5.2。血清中MDA含量和组织样本
MDA的测量的方法是基于Ohkawa et al。15),用分光测量吸光度的pink-coloured复杂的由硫代巴比土酸和MDA。血清/组织匀浆样品(0.1毫升)添加到解决方案包含0.2毫升的80 g / l的钠十二烷基硫酸盐,1.5米的200 g / l的醋酸,1.5毫升的8 g / l 2-thiobarbiturate, 0.3毫升蒸馏水。的混合然后在95°C的环境1 h。冷却后,5毫升的正丁醇:吡啶(15:1)补充道。混合物是涡1分钟和30分钟的离心4000 rpm。上层清液的吸光度测量在532海里。标准曲线得到使用1,1,3,3-tetramethoxypropane [15]。
2.5.3。MPO活性在血清和组织样本
布拉德利的方法等。16)是用来确定血清MPO活动和组织匀浆。过氧化氢(H2O2)磷酸盐缓冲剂(50毫米,pH值6)作为衬底。血清/组织匀浆(20μl)被添加到280μl分析缓冲区(7.0毫克盐酸O-dianisidine和5毫升的0.0005% H2O2在40毫升的磷酸盐缓冲剂)。MPO活性为5分钟(活动以460海里16]。
2.5.4。血清和组织样本tGSH水平
Sedlak和林赛的方法(17)是用来衡量tGSH。鸡尾酒的解决方案(5.85米的100毫米磷酸钠缓冲区,2.8 5 1毫米,5 - - - - - -dithiobis (2- - - - - -对硝基苯甲酸)(DTNB), 3.75毫升的1毫米NADPH, 80μl 625 U / l谷胱甘肽还原酶)的准备。DTNB二硫化物是显色培养基。减少含巯基的团体,产生一个黄色的颜色,由分光光度法测量412海里。tGSH测量之前,0.1毫升的偏磷酸添加到0.1毫升的血清/组织匀浆、离心除蛋白在2000 rpm为2分钟。这种鸡尾酒解决方案(0.15毫升)被添加到50μ上层清液的l。一个标准曲线得到使用GSSG [17]。
2.6。DNA氧化分析
8-OHdG和脱氧鸟苷(dG)以预定义的系统在不同的波长与HPLC-UV使用高效液相色谱法,测定电化学检测器。在高效液相色谱分析之前,水解DNA样本重新溶解与高效液相色谱洗脱液生产的最终体积1毫升20毫升最终水解物的组成。测定(HP, HP 1049 ECD检测器,安捷伦惠普1049 a ECD检测器1100模块化系统,德国)反相C18柱( μ托兰斯,m, Phenomenex CA)和磷酸钾0.05米( )卫生棉条中乙腈(97:3, ),1毫升每分钟流速作为流动相。dG浓度在245 nm量化通过测量吸光度,并观察8-OHdG电化学读数(600 mV)。dG的数量和8-OHdG被确定使用dG和8-OHdG标准(σ,圣路易斯,密苏里州)。8-OHdG / 105被用作标记的DNA损伤。
2.7。组织病理学检查
解剖组织固定在10%福尔马林溶液24 h。4μ米厚的部分得到从石蜡块后常规组织监控和苏木精和伊红染色())。光学显微镜下的部分进行评估(奥林巴斯BX 52个;日本东京)一位病理学家盲治疗协议。
2.8。统计分析
数据分析使用Microsoft Excel和MedCal(比利时奥斯坦德)。描述性统计是为每组生成。离群值分析是使用图基执行测试。组间差异比较单向方差分析。
3所示。结果
3.1。血清和肺组织MDA、MPO和tGSH水平
如图1、MDA的含量和血清MPO的顺铂(CIS)组相比显著增加与HG, TG, TC组( )。MDA和MPO值之间的差异在HG, TG, TC组在统计学上并不显著( )。血液中血清样本的CIS集团tGSH水平显著下降而HG, TG, TC组( )。tGSH的水平之间的差异在TG, TC, HG组在统计学上并不显著( )。
独联体组肺组织的MDA和MPO水平显著增加( ),而那些tGSH显著下降( )作为与HG的水平相比,TG, TC组。肺组织MDA、MPO和tGSH水平非常接近在HG, TG, TC(图组2)。
3.2。肺组织的8-OHdG水平
独联体组肺组织水平的8-OHdG增加与HG相比,TG, TC(图组3)。独联体8-OHdG水平之间的差异,HG, TG, TC团体是统计学意义( )。相比之下,在HG 8-OHdG水平之间的差异,TG, TC组在统计学上并不显著( )。
3.3。组织病理学研究
如图4,没有组织病理学观察肺损伤的证据TC集团,除了轻微的肺部水肿和充血。然而,大量肺泡水肿和严重的肺泡损伤观察肺组织的CIS(图组5),广泛的肺泡间隔纤维,多形核白细胞浸润,出血热疫源地观察(图6)。胸膜间皮、肺小动脉结构的细支气管和肺泡结构HG(图都是健康的7)。在显微镜下观察,组织学结构的肺组织肺泡渠道的HG也正常(图7)。TG,肺组织拥堵和微观组织病理学发现缺席(图8)。
4所示。讨论
在这项研究中,花旗松素的影响在cisplatin-induced肺损伤大鼠的生化特性研究和组织病理学。生化测试的结果显示显著增加的MDA水平,MPO、和8-OHdG tGSH水平显著降低肺组织的CIS集团与HG相比,TG, TC组。
先前的研究表明,各种参数,包括MDA、MPO、和8-OHdG,可以用来确定氧化应激(18]。氧自由基产生氧化应激,氧化细胞膜脂质。这些然后形成有毒的产品(例如MDA)进一步提高细胞损伤(19]。次氯酸(HOCl),一种有毒的氧化剂/氧自由基是由MPO和导致脂质过氧化20.]。MPO氧化氢2O2氯离子和导致HOCl[的形成19]。HOCl反应与蛋白质、氨基酸、脂类和核酸,造成组织损伤(21]。释放来自PNLs HOCl调节受损组织。活性氧与DNA和导致氧化DNA损伤反应。由于自由基反应,阳离子交换在核酸和DNA链断裂发生。如果这些变化不能修复,DNA突变。8-hydroxyguanine被认为是一种诱变的DNA (22]。
治疗使用顺铂引起氧化应激和非癌变组织中的DNA损伤(如肾、肝、睾丸、脑和肺)(4]。根据先前的研究,组织损伤可能与降低抗氧化防御机制在cisplatin-induced氧化损伤的发病机制6]。在目前的研究中,肺组织水平的tGSH,内源性的抗氧化分子,显著降低了CIS组与HG和TG组。这些发现符合那些Afsar et al。7)报道,MDA和H2O2水平增加cisplatin-induced肺损伤的存在,而谷胱甘肽和其他酶抗氧化剂的水平显著下降。
花旗松素是一种黄烷酮和一种强大的抗氧化剂代理(23]。黄酮类化合物表现出他们的抗氧化活性不同的机制,例如,通过清除自由基(24]。这些诱导脂质过氧化自由基和脂质过氧化作用是通过金属离子结合并抑制酶促反应自由基的形成(负责24]。在先前的研究中,花旗松素抑制氧化应激的发展cisplatin-treated动物的肺组织。研究也报道称,花旗松素抑制PC12细胞系(MDA生产25),并提供保护inflammatory-induced损伤肺组织在一个实验研究通过抑制MPO活性(26]。没有先前的研究调查的影响紫杉叶素tGSH在肺组织或其对DNA氧化损伤的影响。一项研究报道,谷胱甘肽对ethanol-induced保护肝组织氧化损伤,防止其减少(27]。本研究的结果显示,花旗松素保护DNA免受氧化损伤。
顺铂组在当前的研究中,有高水平的氧化剂和低水平的抗氧化剂,具有广泛的肺泡水肿,肺泡间隔纤维化肺泡损伤严重,多形核白细胞浸润,肺组织出血病灶。TG组肺组织的组织病理学观察HG组类似。只有轻微的水肿和充血的肺组织中TC集团表示,生化结果与组织病理学结果重叠。利奥等人也报告说,顺铂化疗诱导肺损伤结构与间质炎症、纤维化和闭塞性细支气管炎5]。
已报告在诊所,细胞毒性药物引起肺部炎症和纤维化(28]。抗氧化剂用于治疗各种肺部疾病。先前的研究报道,草药antioxidant-based产品增加抗癌药物的有效性,他们可以减少这些药物的有害影响29日,30.]。Impellizzeri等人通过实验证明,花旗松素抑制肺部炎症和纤维化诱导抗炎活动(26]。
总之,顺铂引起的肺部氧化应激通过提高水平的氧化剂和促炎的标记和降低抗氧化水平。顺铂也引发了广泛的肺泡间隔纤维化。如图所示的生化和组织病理学发现,氧化TC组的肺损伤缺席。生化和氧化损伤的组织病理学表现没有观察到血液和肺组织的TG集团。这些发现表明,花旗松素保护肺组织的毒性作用顺铂。花旗松素可能是临床上有效对抗cisplatin-associated肺毒性。
数据可用性
没有数据被用来支持本研究。
的利益冲突
作者报告没有利益冲突的工作。
确认
我们要感谢阿塔土尔克大学医学实验应用和研究中心。