文摘

客观的。这项研究的目的是评估的影响全身冷冻疗法(WBC)在心血管疾病的风险因素在强直性脊柱炎(AS)患者。材料和方法。我们调查的影响白细胞与后续运动疗法在炎症标记物,氧化应激,血脂,动脉粥样硬化斑块在男性患者(白细胞组)。评估疾病活动,BASDAI BASFI也计算。白细胞组的结果与运动疗法的结果(KT)组。结果。结果表明,白细胞组血浆hsCRP水平降低il - 6水平没有变化。ICAM-1水平表现出降低的趋势。CER的浓度,以及BASDAI BASFI,在两组降低,但疾病活动指数变化的高白细胞比KT的病人。此外,白细胞组中,我们观察到氧化应激标记,减少某些抗氧化酶的活性的变化和非酶的抗氧化参数。在两组中,总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇,甘油三酯,sCD40L, PAPP-A和PLGF水平下降,但参数变化高白细胞组。结论。WBC似乎是一个有用的方法,预防动脉粥样硬化的病人。

1。介绍

强直性脊柱炎(AS)患者有更高的心血管发病率和死亡率的风险与一般人群相比,这可能与疾病的活动,功能和移动限制,结构损伤和炎症1,2]。即使病人没有伴随传统心血管危险因素,但在一个活跃的阶段的疾病,特点是提高水平的氧化应激,炎症状态,高血清浓度的可溶性CD40配体(sCD40L)和颈动脉内膜中层厚度(IMT)增加相比。这些因素可能会加速动脉粥样硬化在这组患者(3,4]。

幸运的是,在过去的几年中,治疗的革命的发生通过引入生物学和疾病修饰治疗风湿病的药物(DMARDs)。尽管取得了这些进步,运动和物理疗法仍然起着非常重要的角色5,6]。

一个相对较新的理疗的方法用于风湿性疾病治疗全身冷冻疗法(WBC),基于整个人体的治疗风险非常低的温度(−100°C以下)120 - 180秒(7]。

最近的研究证实了抗炎、antianalgesic和抗氧化剂极低温度的影响在运动员8]。WBC过程也产生了有益的影响在健康受试者血脂水平(9),在肥胖的人10]。

此外,对精神状态明显积极作用[11)和抗氧化状态的多发性硬化症患者(12和血清反应阳性的类风湿性关节炎13)曾被观察到在低温应用到整个身体。

白细胞的作用还知之甚少的管理病人。到目前为止,研究表明,白细胞程序因为病人不影响射血分数,心室晚电位、QT离散。然而,他们确实有一个有益影响植物神经系统的自适应过程的病人没有显著病理循环系统(14]。

它也证明了病人,白细胞过程与后续运动疗法可以改善BASDAI(浴强直性脊柱炎疾病活动指数)和BASFI(浴强直性脊柱炎函数索引)和一些脊髓流动参数和帮助减少痛苦15,16]。

在我们的初步研究[17),我们表明,白细胞也可能对一些特定的有益影响炎症参数病人。

根据上述调查结果,这项研究的主要目的是评估白细胞对心血管风险的影响因素作为活跃阶段,患者没有任何伴随的古典心血管疾病的风险因素。

2。材料和方法

2.1。参与者

研究协议已经被生命伦理委员会审查和批准的西里西亚医科大学卡托维兹(许可数量:nn - 6501 - 93 /我/ 07),和所有分析患者了解书面同意列入提供的试验和研究。所有临床调查根据表达的原则进行了赫尔辛基宣言(1964年)。

这项研究涉及共有32个不吸烟的男性强直性脊柱炎患者由医生随机分为两组,分配比例1:1。第一组包括16因为患者全身接触冷冻疗法过程与后续运动疗法(白细胞组,平均年龄为46.63±1.5年)。第二组由16个病人接触只有运动疗法过程(KT组,平均年龄为45.94±1.24年)。在平均年龄没有显著差异,BMI,颈动脉IMT, BASDAI, BASFI和共病障碍和分配这些团体之间的传统心血管危险因素。

计算机生成的随机数在按顺序编号的信封密封,和组分配是独立于时间和的人提供治疗。医生(主要协调员)分配病人组32个信封,每个都包含一张纸上标有两组白细胞或KT。医生选择并打开每个信封的理疗师的象征,将直接受到相应的组。

男性患者成功参加的研究有一个明确的诊断,没有遭受任何其他疾病,没有相关的病态,和有一个主治医生不适用疾病修饰治疗风湿病的药物(DMARDs),生物制剂,或类固醇。AS患者治疗剂量的非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药),这并没有改变在一个月前开始学习和在它。所有的患者纳入试验完成修改后的纽约明确的诊断标准,作为研究的基础/欧拉建议(18]。最后选择研究只包括HLA B27-positive病人,展出II和III放射线等级的骶髂关节疾病和参加了咨询单位的疗养胜地段沉降的急性临床症状,为了符合疗养院治疗(理疗)。受试者的人口数据表所示1。

从两组病人被要求放弃酒精,药物和免疫调制剂,immunostimulators、激素、维生素、矿物质,或其他物质具有抗氧化特性的生化研究前4周。所有的病人也被要求避免咖啡因的消费12小时前实验室分析。病人的饮食没有修改。

在这项研究之前,每个病人被医生检查排除任何禁忌症共存疾病以及白细胞程序。在这项研究之前,对所有患者静息心电图进行,在每个会话的冷冻疗法之前,每个病人的血压测量。

2.2。全身冷冻疗法和运动疗法过程

根据集团,作为患者白细胞的周期过程持续3分钟一天与后续运动疗法或60分钟60分钟会议会话的运动疗法,连续10天不包括周末。

白细胞程序进行与冷cryochamber保留和合成液态空气冷却(由Metrum Cryoflex,波兰),由两个隔间:前厅和适当的房间,由门连接。试验中,温度在前厅−60°C,而在适当的室,达到−120°C。30秒后适应过程在前厅,患者暴露于低温下在适当的室3分钟。在白细胞的过程中,所有的患者都穿着泳衣,棉袜子和手套,木鞋和被口罩保护他们的嘴巴和鼻子和耳朵,耳朵保护者。所有的首饰,眼镜,隐形眼镜进入室之前被移除。在白细胞的过程中,患者行走轮商会不碰对方。

后立即离开冷冻室内换上运动服和运动鞋,为患者进行运动疗法持续一个小时。运动疗法的程序在两组中的所有病人都是一样的。运动疗法过程包括脊柱和主要关节的关节活动度训练(包括脚踝、膝盖、臀部、手腕、肘、肩)。胸部扩张和呼吸练习也包括在内。除了运动的活动范围,患者接受强化训练的主要关节的肌肉(包括脚踝、膝盖、臀部、手腕、肘、肩、胸腰椎脊柱和颈椎)以及有氧运动(包括骑自行车和快走)。所有的练习都是物理治疗师的监督下进行。

所有患者完成了研究和无并发症或副作用观察白细胞相关程序。

2.3。血液样本集合

所有受试者的血液样本采集前的早晨的第一餐。全血样品(5毫升)来自每个主题,然后收集到的贵要静脉管含乙二胺四乙酸(Sarstedt, S-Monovette EDTA-K 1.6毫克/毫升₃),成管状血栓活化剂(Sarstedt S-Monovette)。血液样本离心机(10分钟,900年在4°C),然后立即血浆和血清分离和储存在−75°C的温度,直到可以进行生化分析。反过来,红细胞保留删除的EDTA等离子体和等渗盐溶液冲洗,然后10%的hemolysates准备进一步分析。血红蛋白浓度hemolysates由标准cyanmethemoglobin方法决定。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为1.1%和2.4%,分别。

2.4。生化分析

2.4.1。炎症状态参数的确定

在血清高敏c反应蛋白浓度(hs-CRP)是由乳胶immunoturbidimetric方法(生物系统公司、西班牙),表示在mg / l。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为2.3%和5.5%,分别。

血清血浆铜蓝蛋白(CER)氧化酶活性测定使用由Richterich p-phenylenediamine动力学方法(19]和mg / dl表达与纯校准后血浆铜蓝蛋白与健康的捐赠者血清池。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为3.1%和6.1%,分别。

血浆白介素6 (il - 6)和可溶性细胞间粘附molecule-1 (sICAM-1)浓度测定使用ELISA方法从研发系统(美国)。表达的il - 6的浓度和sICAM-1 pg / ml和ng / ml。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为5.1%和8.8%,分别为il - 6和4.8%和9.1%,分别为sICAM-1。

2.4.2。氧化应激指标分析

(1)脂质过氧化反应产品的决心,总氧化状态和氧化应激指标。脂质过氧化反应的强度在血浆和红细胞测定spectrofluorimetrically为硫代巴比土acid-reactive物质(TBARS)根据Ohkawa et al。20.]。TBARS浓度被表示为丙二醛(MDA)的等价物μmol / l在等离子体或在红细胞nmol /迷奸。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为2.1%和8.3%,分别。

血清浓度的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)和抗体ox-LDL (ab-ox-LDL)测量使用ELISA试剂盒(基于、波兰)。表达的ox-LDL和ab-ox-LDL浓度ng / ml和μ/ ml,分别。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV) ox-LDL分别为5.8%和9.4%,分别和ab-ox-LDL−4.1%和8.7%,分别。

血清总氧化剂状态(TOS)决心Erel[描述的方法21),表示μmol / l。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为2.2%和6.4%,分别。

氧化应激指标(OSI),氧化应激的程度的指标,表示为的比率总氧化剂状态(TOS)总抗氧化能力(收紧)任意单位(22]。

(2)测定抗氧化酶的活性。血浆和红细胞超氧化物歧化酶(SOD - E.C.1.15.1.1)活动是由Oyanagui方法(23]。酶活性表达的是亚硝酸盐单元(ν)每毫克的血红蛋白(Hb)或毫升血浆。一个亚硝酸盐单元(1ν)意味着50%的抑制亚硝酸盐离子生产SOD在这个方法中。SOD同功酶(SOD-Mn和SOD-ZnCu)测量使用氰化钾的抑制剂SOD-ZnCu同工酶。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为2.8%和5.4%,分别。

过氧化氢酶(CAT - E.C.1.11.1.6。)活动中测量了红细胞Aebi [24]在IU / mgHb动力学方法和表达。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为2.6%和6.1%,分别。

红细胞谷胱甘肽过氧化物酶(GPx - E.C.1.11.1.9)。活动由屋化验,情人节动力学方法(25),与叔丁基过氧化作为衬底,并表示微摩尔每分钟NADPH氧化和规范化一克血红蛋白(IU /奸)。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为3.4%和7.5%,分别。

红细胞谷胱甘肽还原酶的活性(GR - E.C.1.6.4.2)被Richterich化验的动力学方法(19),表示为微摩尔NADPH利用每分钟和规范化一克血红蛋白(IU /奸)。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为2.1%和5.8%,分别。

(3)非酶的测定抗氧化状态。等离子体的总抗氧化能力测定血浆的ferric-reducing能力(收紧)根据Benzie和应变26)和校准使用Trolox和表达(μmol / l)。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为1.1%和3.8%,分别。

血清浓度的蛋白质巯基(PSH)是由科斯特的方法(27),使用dithionitrobenzoic酸(DTNB)和表达(μmol / l)。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为2.6%和5.4%,分别。

血清尿酸(UA)的浓度取决于uricase-peroxidase方法(28)Cobas Integra 400 +分析仪和表示为(mg / dl)。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为1.4%和4.4%,分别。

2.4.3。测定血脂

总,高密度脂蛋白,低密度脂蛋白胆固醇(T-Chol, HDL-Chol, LDL-Chol resp)和甘油三酯(TG)血清中浓度估计使用常规技术(Cobas Integra 400 +分析仪,罗氏诊断,曼海姆,德国)。表达的浓度(mg / dl)。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为2.8%和5.4%,分别为T-Chol;分别为3.2%和5.4%,HDL-Chol;分别为2.6%和6.5%,LDL-Chol;对TG和2.5%和7.6%,分别。甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇(TG / HDL)比率计算。

2.4.4。动脉粥样硬化斑块不稳定性测定标记和动脉粥样硬化斑块标记

乳素血清血浆蛋白质a (PAPP-A),可溶性CD40配体(sCD40L)和胎盘生长因子(PLGF)浓度被ELISA方法按化验仪器GmbH(德国)。表达的PAPP-A和sCD40L浓度ng / ml和PLGF浓度pg / ml。的国际米兰,intra-assay系数变化(CV)分别为6.8%和10.2%,分别为PAPPA-A;分别为5.1%和9.4%,sCD40L;PLGF,分别为6.2%和12.1%。

2.5。分析强直性脊柱炎的活动

强直性脊柱炎的活动是衡量浴强直性脊柱炎疾病活动指数(BASDAI)和浴强直性脊柱炎函数索引(BASFI)。

BASDAI有六个问题相关的疲劳,背痛,周围疼痛,肿胀,外围当地温柔,早上刚度(程度和长度)。以外的其他相关问题早上刚度,所有问题都得分从0(没有)到10(非常严重)使用视觉模拟量表(血管)。总和计算的意思是两个早上刚度问题,剩下的四个问题29日]。

BASFI是十个问题解决的平均评分功能限制和身体活动水平在家里工作,评估血管尺度(0 =容易,10 =不可能)(30.]。

2.6。内中膜厚度的测定

高分辨率多普勒超声表现与Logic-5设备是高频线性探针(11 MHz, 15 MHz)。超声波检验师是一个angiologist谁不知道主题的临床状态。测量内膜中层厚度(IMT)进行左、右颈总动脉,和2测量的平均值计算。IMT用毫米表示。

2.7。统计分析

统计分析的统计软件包进行使用Statistica 10 Pl软件。对于每个参数,确定指标的描述性统计(平均值和标准偏差(SD))。数据分布的正常使用Shapiro-Wilk测试检查,而方差的同质性被应用列文的测试检查。为了比较组之间的差异,一个独立样本的学生t以及Mann-Whitney或者使用U测试。在依赖于样本的情况下,学生t以及使用或者Wilcoxon测试。特定的参数之间的相关性统计验证通过枪兵的非参数相关测试。差异的显著性水平 被视为具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。炎症状态参数,BASDAI, BASFI

白细胞组的患者,接受白细胞的ten-day-long循环过程和随后的运动疗法,它是发现,治疗完成后,CER hsCRP明显减少的水平。之前hsCRP而言,治疗后白细胞中的值组相比明显高于那些KT组患者。白细胞组,sICAM-1水平显示一个下降的趋势。此外,白细胞周期完成后,水平sICAM-1 KT组相比显著降低。但il - 6的水平没有显著改变白细胞组与后续运动疗法治疗完成后。

治疗完成后,只有CER的水平显著降低从炎症参数估计病人的KT集团经历了一个周期的运动疗法,没有之前的白细胞程序。hsCRP和sICAM-1 KT组没有明显变化。白细胞组,也没有统计上的显著水平的il - 6的变化观察KT组。

反过来,BASDAI BASFI两组显著降低,但在白细胞组与随后的运动疗法治疗完成后,这些参数的减小明显高于KT组相比。此外,只有在白细胞组完成后的治疗,BASDAI和BASFI的价值低于4(不活跃的阶段的疾病)(表2)。

3.2。氧化应激

我们观察到病人的白细胞组,治疗完成后,红细胞MDA水平显著降低,血清anti-ox-LDL ab血清TOS, OSI值与初始值。更重要的是,这些参数的差异之前,治疗后白细胞中的值组明显高于相比KT组。血浆MDA的水平和血清ox-LDL白细胞组没有明显变化。反过来,KT组无显著变化的血浆和红细胞MDA水平,血清ox-LDL,血清anti-ox-LDL ab血清TOS和OSI完成后观察治疗,相比,运动疗法周期开始前的初始值(表3)。

白细胞组的患者中,我们观察到显著降低红细胞GPx活性的循环完成后冷冻疗法过程与后续运动疗法。然而,血浆和红细胞SOD的活性,等离子SOD-Mn等离子SOD-CuZn,红细胞猫,GR在白细胞组治疗后没有明显变化。但在白细胞组,等离子体的活性SOD-Mn治疗后明显高于相比KT组。反过来,KT组红细胞的活动总SOD、GPx,和GR白细胞组相比,在治疗后显著降低。此外,等离子体的活性SOD-CuZn显示KT组下降趋势。同样在白细胞组病人,血浆总SOD的活性和红细胞的猫在KT组治疗后没有明显变化(表4)。

更重要的是,白细胞组的参数非酶的抗氧化剂,收紧值和UA浓度在治疗后显著增加。这些参数的水平明显高于白细胞组相比,KT组完成后治疗。PSH水平治疗后白细胞组没有明显变化。反过来,KT组,收紧的价值观和PSH水平显著降低,但UA水平治疗后没有明显变化(表5)。

3.3。标记的血脂、动脉粥样硬化斑块和动脉粥样硬化斑块的不稳定

T-Chol水平的低密度脂蛋白,TG, sCD40L, PLGF,和PAPP-A两组在治疗后显著降低,但差异之前治疗后白细胞中的值组明显高于KT组相比,除了T-Chol。但TG的区别之前组治疗后白细胞中的值相比,KT组。HDL-Chol水平在两组没有明显变化。TG / HDL比率显示下降趋势在白细胞组相比,KT组(表6)。

3.4。重要的估计参数之间的关系作为病人的白细胞程序

治疗后,我们注意到重大的变化之间的关系白细胞组血清hsCRP浓度和红细胞MDA浓度( )。同时,血清hsCRP之间的正相关变化和等离子收紧活动变化( )被观察到。此外,血清hsCRP浓度之间的负相关和等离子SOD-CuZn活动被发现( )。在血清oxLDL-ab分析的情况下,我们观察到一个负相关,猫和红细胞SOD活动(r系数:0.51−−0.53,职责)。此外,TG / HDL的比例呈正相关,PLGF血清浓度后WBC过程( )。我们还观察到一个等离子sICAM-1和MDA浓度之间的正相关关系( 治疗后白细胞组)。在红细胞GPx活性与随后的运动疗法,病人的白细胞程序与等离子PSH(正相关 )是可见的和一个负相关与血浆MDA浓度被发现。所有上面提到的相关性显著( )。

4所示。讨论

在我们的研究中,我们观察到,完成治疗后,病人的白细胞组WBC的ten-day-long循环过程与后续运动疗法明显降低水平的hsCRP CER。的水平sICAM-1白细胞组呈下降趋势。但il - 6的水平没有明显变化。

炎症参数在这个研究的结果符合我们之前的初步研究[17),病人的白细胞程序观察CRP下降,纤维蛋白原,粘蛋白,和描述的水平。

然而,在另一项研究[31日],作者观察到降低TNF -α在网球运动员和il - 6的增加5天暴露在白细胞一天两次。

班菲et al。32)也证实,sICAM-1水平引起的白细胞减少治疗和抗炎反应有关。在另一篇论文,Pournot et al。33)发现,白细胞降低il - 1 (−110°C)β和CRP水平和剧烈运动后增加IL-1ra水平。但肿瘤坏死因子的水平α、il - 10、il - 6保持不变。同样,在我们的研究中,我们没有观察到任何血清il - 6的变化在病人的白细胞。

在目前的研究中,我们也看到明显降低BASDAI和BASFI完成后WBC治疗与冷cryochamber保留。也观察到类似的结果一个封闭cryochamber称为“Wrocławski”的一种,由液态氮冷却(15]。在这两项研究,组成的一个循环完成后每天十3-minute-long WBC过程与后续运动疗法(−120°C,周末休息),下面的BASDAI和BASFI减少4。这表明,疾病治疗完成后进入了一个不活跃的阶段。我们的结果也符合一项研究[16),因为患者每天接受8 WBC程序(−110°C, 3分钟)。

现在没有很多报道对白细胞的影响prooxidant-antioxidant平衡。已经注意到白细胞程序可能有益影响抗氧化状态。在这项研究中由Dugue et al。34),显著增加了助教的健康男性的价值一个周期结束时45 WBC手续(−110°C, 2分钟,冷却液液氮)每周进行三次。在另一项研究中,米勒et al。12)已经注意到总抗氧化状态的增加,SOD活性和血浆尿酸水平的治疗多发性硬化病人的白细胞(−110°温度,每日10程序,周末休息,冷却剂中液氮)。更重要的是,白细胞是主张可能提高抗氧化能力,因此,抵消运动性活性氧的生产(12]。

然而,在不同的研究(13)患者血清反应阳性的类风湿性被作者观察到的只是一个短期的增长陷阱在第一疗程的白细胞(−110°C,每天三次连续7天)和寒冷的治疗没有造成任何明显的氧化应激或适应。

在我们的研究中,我们观察到显著降低氧化应激,这也可能与降低全身炎症的治疗病人的白细胞。治疗后白细胞组中,我们观察到等离子体之间的正相关性sICAM-1和MDA含量以及血清hsCRP红细胞MDA浓度。此外,血清hsCRP浓度之间的负相关性和等离子SOD-CuZn活动被发现。

此外,我们观察到类似的结果在健康受试者接受白细胞程序执行与冷cryochamber保留(35]。

各种研究结果的差异可能与正在使用的cryochamber类型和冷却介质,除了暴露在低温下的时间。

只有少数论文估计白细胞对血脂的影响。大鼠暴露于白细胞5或10天,高密度脂蛋白和低密度脂蛋白胆固醇比例和总胆固醇水平降低动物受到−60°C会议10天保持不变。作者还观察到动物的血清中甘油三酯的增加受到cryostimulation相比控制。高密度脂蛋白胆固醇下降后,老鼠cryostimulation可以用这一事实来解释高密度脂蛋白是主要的部分运输胆固醇在老鼠身上,而在人类,大部分胆固醇存在于低密度脂蛋白(36]。

在另一项研究[9],作者观察到减少T-Chol LDL-Chol, TG和增加HDL-Chol后20次的白细胞在健康男性,但在10会话的白细胞,只LDL-Chol减少,而同时HDL-Chol增加在健康男性(低温温度−130°C)。

在另一项研究,这些作者(14),明显降低LDL-Chol和TG水平的观察,有轻微增加高密度脂蛋白浓度后白细胞治疗,包括两个cryostimulation治疗20日常会话在第二个和最后一个月的干预,没有改变饮食习惯在肥胖受试者。

在我们的研究中,我们还观察到一个明显降低在T-Chol LDL-Chol和TG。但HDL-Chol水平并没有改变在完成白细胞程序的病人。更重要的是,在我们的研究中,我们观察到sCD40水平明显降低,PAPP-A, PLGF。此外,在目前的研究中,TG / HDL的比例呈正相关,PLGF血清浓度后WBC程序。白细胞的影响在这些标记在患者首次被估计。

血脂明显降低,动脉粥样硬化斑块和氧化应激和炎症参数,以及减少的比例TG胆固醇HDL胆固醇(TG / HDL比率),似乎有益的足够考虑WBC治疗作为一个有用的方法预防动脉粥样硬化的病人。

本研究有一定的局限性。首先,这项研究并没有提供长期随访(至少3个月),因此,我们不知道多久的有益作用的白细胞与后续运动疗法将维护完成后WBC周期。第二,白细胞与后续的循环运动疗法包括只有10程序。更多的过程(例如,20 - 30)可能会增加治疗效果。第三,这项研究应该包括更多的病人。

5。一般的结论

全身冷冻疗法与随后的运动疗法有助于减少氧化应激,血脂,动脉粥样硬化斑块及其不稳定,以及炎症参数,似乎是一个有用的方法预防动脉粥样硬化的病人。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是医科大学的赠款支持西里西亚(认识- 1 - 045 / K / 7 / K和认识- 640 - 2 - 1 - 376/17)。