文摘
免疫损伤是一个条件,通常是在患有唐氏综合症(DS)。调节免疫反应的赞成和抗炎细胞因子的表达可能是受遗传多态性的影响。本研究旨在评估的频率> C -174克、-572克> C和-597 G >白介素6 (il - 6)基因的多态性和-592 C > -1082 > G和-819 C > T, il - 10基因的多态性和血清il - 6和il - 10水平在健康个体,没有DS。作者还旨在探讨白介素含量的基因型的影响。遗传多态性研究200年DS个人和200名对照没有DS。血清il - 6和il - 10进行测量组(54例和54控制)的酶联免疫吸附试验(ELISA)。评估的多态性和单体型频率没有不同的个体之间,没有DS。在DS儿童il - 10浓度较高,但不影响il - 10基因多态性。il - 6基因型对血清il - 6水平没有影响。DS的血清il - 10水平增加了个人,但il - 10多态性不是主要因素影响il - 10表达DS。
1。介绍
免疫损伤是一个患有唐氏综合症的条件通常观察到个人(DS),它提供了一个对细菌和病毒感染的易感性增加,高频率的血液和自身免疫性疾病1- - - - - -3]。免疫反应的调节通过抗炎和促炎细胞因子,调节T细胞分化。监管包括细胞因子白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)和生长因子(4]。
白介素6 (il - 6)是一种促炎细胞因子产生的白细胞,脂肪细胞、内皮细胞、成纤维细胞和细胞。il - 6产生的生产等细胞因子的释放介质TNF和il - 1,哪个驱动器的炎症反应5]。免疫系统使用抗炎机制来防止恶化引起的炎症过程促炎的分子,避免组织损伤和恢复体内平衡6]。il - 10是一个重要的免疫调节和抗炎细胞因子分泌到巨噬细胞,单核细胞,树突状细胞,辅助T 1 (Th1)和Th2淋巴细胞、B淋巴细胞,细胞毒性T细胞,肥大细胞(7]。il - 10刺激活化、增殖和分化的B细胞(6),参与炎症反应的控制(8]。这种不平衡支持和抗炎细胞因子之间避免了足够的免疫系统的功能。在DS,细胞因子水平的改变已经被观察到(9- - - - - -15),它会导致免疫缺陷。
启动子区域内的单核苷酸多态性-597 g > A, -572 g > C和-174 g > C il - 6基因和-1082 g > A, -829 C > T, -592 C >描述的il - 10基因(16- - - - - -18)的调制,可以参与炎症反应和对炎性疾病的易感性17,19- - - - - -23]。
考虑到DS个体的免疫损伤,我们旨在确定-597 G > A多态性的患病率(rs1800797), -572 G > C (rs1800796),和-174 G > C (rs1800795) il - 6基因和-1082年> G (rs1800896), -829 C > T (rs1800871),和-592 C > (rs1800872) il - 10基因和血清il - 6和il - 10水平在这些个人与个人相比没有DS。我们也旨在评估这些多态性和il - 6和il - 10浓度之间的关系。
2。方法
这项研究是研究伦理委员会批准Faculdade药物德圣荷西做里约热内卢Preto (FAMERP)(图427.782)。
2.1。主题
DS的研究包括200名儿童(平均年龄为4.3岁,108男性和95女性)的通用遗传门诊医院de基地,圣荷西,力拓Preto SP,巴西,和200个人没有DS(平均年龄为4.3岁,103男性和97女性)从医院的儿科服务德基de Sao何塞,力拓Preto SP,巴西;所有人参与了这项研究的父母签署知情同意。只有那些没有白血病或急性或慢性感染,在6周内没有收到药物或免疫的血清白介素剂量选择集合。c反应蛋白(CRP)是由电化学发光量化的,并且只样品的浓度≤0.5 mg / dl是包括在分析中。
2.2。多态性分析
从外周血中提取的DNA (24]。-1082年il - 10基因分型> G和-592 c >一个多态性是由聚合酶链反应(PCR)限制片段长度多态性(RFLP)分析。引物序列如下:5-TCTGAAGAAGTCCTGATGTC-3和反向5-CTCTTACCTATCCCTACTTCC-3检测il - 10的-1082 > G多态性和转发5-GGTGAGCACTACCTGACTAGC-3和反向5-CCTAGGTCACAGTGACGTGG-3检测il - 10的-592 c >多态性。PCR产品被限制性内切酶消化MnlI(新英格兰生物学实验室,伊普斯维奇,MA)和RsaI(新英格兰生物学实验室,伊普斯维奇,MA) > G和-592 c >, -1082。的消化产品2.5%琼脂糖凝胶上进行了分析。
基因分型il - 10的-819 C > T, il - 6 -174 g > C, il - 6 -572 g > C和il - 6 -597 g >使用TaqMan SNP基因分型结果进行分析(C_1747362_10, C_1839697_20、C_11326893_10 C_1839695_20,应用生物系统公司,促进城市,CA),遵循制造商的指示。
2.3。血清il - 10、il - 6水平的量化
血清il - 10、il - 6水平的量化表现与DS 54个人组成的小组(三个野生型纯合子,三个杂合的,三为每个多态性变异纯合子)和54个人没有DS(三个野生型纯合子,三个杂合的,三为每个多态性变异纯合子)。白介素浓度也评估根据基因型组合和单体型。il - 6和il - 10进行量化使用Novex酶联免疫试剂盒(生活技术,卡尔斯巴德,CA),分析了制造商的指示后,他们在Multiskan FC微型板块光度计(热科学、沃尔瑟姆,MA)在450海里。
2.4。统计分析
等位基因频率进行评估的哈迪温伯格平衡(HWE)通过卡方检验使用BioEstat软件5.0版本。SNPStats计划(http://bioinfo.iconcologia.net/SNPstats_web),群体间的基因型分布的分析逻辑回归等显性的,显性和隐性的模型。
结果的比值比(或)95%置信区间(95% CI)。单体型分析使用Haploview软件,版本4.2。比较组之间的血清il - 6和il - 10的水平是由Mann-Whitney测试。分析白介素含量与基因型进行了利用克鲁斯卡尔-沃利斯与GraphPad棱镜或Mann-Whitney测试软件版本6.0。接受5%的错误。
3所示。结果
3.1。多态性在DS和对照组
il - 6 -174 g > C的基因型分布(rs1800795)、il - 6 -572 g > C (rs1800796), il - 6 -597 g > A (rs1800797)多态性是依照哈迪温伯格平衡(HWE) DS ( -174 g > C, -572 g > C -597 g > A)和控制( -174 g > C, -572 c > G -597 g > A)组。
il - 10基因型频率的-592 c >多态性并没有不同于那些我们希望下HWE DS ( )和控制( )组。il - 10 -819 c > T多态性是依照HWE只在DS集团( )。在对照组中,基因型频率偏离HWE期望( )。-1082年il - 10基因型频率在DS > G HWE提出偏差( )和控制( )组。
没有显著差异基因型组(表之间的分布1)。单体型分析评估的综合效应进行了多态性。il - 6多态性在强大的连锁不平衡,il - 10的多态性。il - 6和il - 10多态性的等位基因和单体型频率并没有统计上的不同组( )。
3.2。血清il - 6和il - 10水平在DS和对照组
血清il - 10水平显著增加在DS儿童相比没有DS ( ;图1(一))。血清il - 6水平DS和对照组(没有差异 ;图1 (b))。
(一)
(b)
IL-06和il - 10浓度进行评估与遗传多态性;然而,il - 6和il - 10多态性显示没有影响这些血清白介素水平(表2)。il - 6 -572 g > C的多态纯合基因型多态性并没有发现在这群,因此,根据遗传统计分析模型的il - 6没有执行。在这种情况下,统计了野生型基因型和杂合的基因型(DS: GG = 13.77 pg / ml和GC = 10.65 pg / ml ( );控制:GG = 13.67 pg / ml和GC = 16.73 pg / ml ( ))。
4所示。讨论
我们的研究结果显示,增加血清细胞因子il - 10的水平与DS儿童。il - 10是一种抗炎细胞因子(25),参与炎症反应的负面反馈控制(8]。这种细胞因子起着至关重要的作用在炎症和自身免疫性疾病的预防(6]。il - 10抑制其他细胞因子和趋化因子基因表达的转录抑制或减少的mRNA水平(8]。增加il - 10的信号可防止成熟的巨噬细胞和树突细胞、抑制促炎细胞因子的生产(6]。因此,过度的il - 10的生产可以抑制促炎反应一些病原体,导致控制感染和免疫反应不足(6),特征往往在DS。
先天免疫反应的第一阶段包括经典的免疫激活(26,27]以Th1细胞因子如干扰素的招聘γ和其他促炎细胞因子(28,29日]。然而,促炎因子的生产可以逮捕,和巨噬细胞可以产生参与组织修复和伤口愈合的因素,如抗炎细胞因子(29日]。il - 10和TGF -β相关的抑制促炎的活动(29日,30.]。这种替代激活免疫反应过程中提供了一种抗炎平衡促炎的急性反应。激活巨噬细胞是免疫抑制和参与组织修复和重建细胞外基质(28,29日]。然而,修复过程可以提高疾病的纤维化和有助于维护(29日,31日,32]。炎症和再生过程之间的相互关系是建议在神经退化与阿尔茨海默病(AD)的发病机制(33]。
以前曾有报道称在DS(超表达的il - 1034- - - - - -36]。基础水平观察il - 10基因表达的调节在DS儿童(37]。本研究评估免疫相关基因的表达谱在DS个人当前的感染和得出结论,在免疫细胞特异表达多个基因与相关函数在DS (37]。这可以解释对细菌和病毒感染的易感性增加和炎症性疾病在这些人38,39]。
除了增加基底DS的il - 10水平,研究评估DS个体的免疫反应显示il - 10水平上升的病原体或炎症过程34,40]。抗原的免疫反应是由执行防御病原体入侵的促炎细胞因子6]。然而,过度的炎症可以破坏宿主的代谢系统。抗炎系统激活机制被用来避免组织损伤和恢复体内平衡(6]。炎症反应可以增强微生物挑战,或超表达il - 10。il - 10表达的障碍或病原体清除信号可能导致急性感染,还会引起炎症反应加剧,导致免疫病理和组织损伤6]。
微分观察炎症相关基因的表达与DS(健康的孩子41];DS患者il - 10水平较高的广告和DS患者没有临床相关的认知能力下降(36]。在先前的研究中,从DS组il - 10水平没有不同于那些来自对照组;然而,它在DS患者明显低于智力障碍患者(42]。相信可溶性淀粉样前体蛋白和一些形式的β淀粉样肽导致激活先天免疫反应的信号在大脑中(43]。研究表明,一个国家可以减少促炎β淀粉样蛋白积累在小鼠模型44- - - - - -50),高浓度的淀粉样蛋白- il - 10有助于减少β小胶质细胞吞噬作用,淀粉样蛋白-β沉积(51),观察到DS的个人。
白介素6 (il - 6)等离子体水平也更高主题与DS和AD-related症状(36]。之间的负相关发现il - 6水平和认知能力下降36]。研究发现增加的il - 6水平DS (36,52),尽管其他人观察到相反的结果(34]或无显著变化(40]。我们没有观察到差的个体间il - 6浓度与DS和那些没有综合症在这项研究。
il - 6刺激T细胞和B细胞免疫反应在遇到抗原成分,引发急性炎症反应和造血作用5,53]。重要的是要强调,我们评估个人没有感染样本集合的时候;因此,我们评估了基底的il - 6水平。也许,il - 6是更重要的是与这些个体的免疫反应,及其接触抗原后生产发生异常。il - 6浓度明显高于在DS儿童与甲型流感病毒刺激,强化其在免疫反应中的作用[54]。促炎细胞因子的过度表达,如il - 6,可能导致损伤健康组织(55)和overinflammation,导致神经功能障碍和顺向恶化的神经元,观察到在广告发展(56]。
细胞因子的水平可以由基因多态性在白介素基因的启动子区域7,17,57- - - - - -60]。在这项研究中,我们没有发现一个协会之间的浓度与il - 6和il - 10多态性评估这两组白细胞介素DS个人和那些没有疾病。
-1082 > G多态性,-592 c >, 819 c > T似乎il - 10基因调节的il - 10水平不同的疾病,如癌症(21)、肺结核(19,系统性红斑狼疮20.),类风湿性关节炎22),但结果是有争议的。我们所知,没有研究这些基因改变有关il - 10含量DS直到现在。
il - 6 -174 g > C, -572 g > C和-597 g > A多态性研究了水平的细胞因子等炎性疾病systemic-onset幼年型慢性关节炎(17),年龄相关性黄斑变性(61年),2型糖尿病62年),年龄相关性黄斑变性(63年,系统性红斑狼疮20.),认知障碍(63年),和痴呆(64年]。结果根据不同疾病。
这里的il - 10、il - 6多态性评估的频率之间没有差别DS个人和那些没有综合症。据我们所知,这是第一个研究探讨这些基因改变在DS。il - 10基因的多态性与一些免疫相关疾病(54)如哮喘(65年,66年,系统性红斑狼疮67年- - - - - -69年),克罗恩病(70年,71年),类风湿性关节炎22,72年- - - - - -74年)、肺结核(19,75年),2型糖尿病76年),和某些类型的癌症77年- - - - - -80年]。il - 6基因的变化也与炎症相关的变化(17,18,23,81年- - - - - -84年),包括广告(83年,84年]。然而,il - 6 -572 g >在骨关节炎[C与保护85年和狼疮系统性红斑狼疮86年]。正如前面提到的,没有数据在文献中这些多态性在DS的角色。
5。结论
在结论中,il - 10 > -1082 G, il - 10 -592 C >, il - 10 -819 C > T, IL-06 -597 G > A, IL-06 -174 G > C, IL-06 -572 G > C多态性对il - 10、il - 6的浓度没有影响DS个人和个人没有综合症评估在这个研究。il - 10的水平在DS个人增加,但il - 10基因的多态性不是主要因素驱动的超表达il - 10在DS。
数据可用性
所使用的统计数据来支持本研究的结果包括在本文中。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
所有作者都导致提交的草案提交的手稿和批准它。
确认
作者感谢Faculdade药物德圣荷西做里约热内卢(FAMERP)和医院de基地,圣荷西,力拓Preto SP,巴西;慰问Nacional de Desenvolvimento Cientifico e学府(CNPq);Fundacao德帕罗尽管做Estado de圣保罗(FAPESP)必须占州政府;和Fundacao de Apoio尽管e Extensao德圣荷西做里约热内卢Preto (FAPERP)。这项工作被蹂躏的资助支持Nacional de Desenvolvimento Cientifico e学府(CNPq) (308551/2014-1), Fundacao德帕罗尽管做Estado de圣保罗(FAPESP)必须占州政府(2014/26218-5),Fundacao de Apoio尽管e Extensao德圣荷西做里约热内卢Preto (FAPERP)(21/2015),和Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de含量比(披肩)。