文摘
在慢性炎症疾病,如牙周病、促炎细胞因子移行细胞(干扰素γ)和肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子α)改变骨重塑。阐明潜在的分子机制,我们研究了干扰素的效果γ和肿瘤坏死因子α在克隆MC3T3-E1鼠成骨细胞的增殖和生存。我们发现,尽管干扰素γ或肿瘤坏死因子α仅有小幅仅影响细胞的生长和生存,聚集有关协同抑制细胞生长和减少细胞的可行性。细胞生存能力下降是由于细胞凋亡,表明通过TUNEL染色,增加高半胱天冬酶3、8和9的活动。免疫印迹还显示,与干扰素聚集有关γ和肿瘤坏死因子α引起细胞色素c释放和表达下调B细胞淋巴瘤2 (bcl - 2)表达在不影响Bcl-2-associated X(伯灵顿)蛋白表达。此外,稳定的bcl - 2超表达显著减轻细胞死亡后聚集有关。总的来说,这些结果表明,干扰素γ和肿瘤坏死因子α引起成骨细胞通过细胞色素细胞凋亡c从受损的线粒体释放。差别bcl - 2半胱天冬酶的激活,对这些
1。介绍
通过平衡生理骨重塑实现由破骨细胞骨吸收和骨形成成骨细胞(1- - - - - -4]。因此,骨退化,这是经常会出现在牙周疾病,发生在炎性细胞因子在骨微环境改变这种平衡通过激活破骨细胞但抑制成骨细胞增殖、分化和诱导成骨细胞凋亡5- - - - - -8]。特别是,肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子α)和移行细胞(干扰素γ)被认为促进牙周病骨退化,因为牙周炎患者牙周组织由CD4渗透+和CD8+T细胞,产生这些细胞因子(9- - - - - -14]。
肿瘤坏死因子α主要是由巨噬细胞和T细胞但在许多细胞类型产生不同的影响15,16]。例如,肿瘤坏死因子α抑制骨形成通过多种机制,包括抑制成骨细胞分化和矿化和抑制的I型胶原合成和碱性磷酸酶活性(14,17- - - - - -19]。肿瘤坏死因子α也分化为破骨细胞前体细胞和促进炎症性骨吸收20.]。另一方面,干扰素γ是由辅助1 (Th1)细胞,促进细胞免疫(21,22]。另外,干扰素γ抑制成骨细胞碱性磷酸酶活动,会使骨头杯子蛋白质(23,24),和促进间充质干细胞向成骨细胞的分化25]。与肿瘤坏死因子α和interleukin-1干扰素γ直接抑制破骨细胞分化通过干扰受体激活核因子-κB配体(RANKL)信号(26,27),但间接刺激破骨细胞形成和促进骨吸收通过生产RANKL和肿瘤坏死因子α通过刺激T细胞激活(28]。
尽管肿瘤坏死因子α和干扰素γ单独影响成骨细胞活动和生存能力略微19,29日聚集有关,与诱导一氧化氮(NO)的生产,而抑制成骨细胞分化,促进细胞凋亡(29日- - - - - -35]。然而,分子机制推动这些事件并不完全理解。因此,在这项研究中,我们调查了在老鼠MC3T3-E1成骨细胞细胞因子诱导的细胞死亡,发现与肿瘤坏死因子聚集有关α和干扰素γ诱导细胞色素c从线粒体释放、激活还存在和表达下调B细胞淋巴瘤2 (bcl - 2)表达式。
2。材料和方法
2.1。试剂
鼠标重组干扰素γ和小鼠肿瘤坏死因子α从Chemicon获得国际(美国泰梅库拉,CA)和研发系统(明尼阿波利斯,美国),分别。嘌呤霉素、洋地黄皂苷和蛋白酶抑制剂鸡尾酒买来Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国)。
2.2。细胞培养
MC3T3-E1细胞,成骨细胞来自老鼠头顶(36- - - - - -38),被播种在10厘米塑料细胞培养板(美国新泽西州,正欲富兰克林湖)为1.5×105细胞每板α最小基本介质(αmem;表达载体、大岛屿,美国纽约)含10%胎牛血清灭活(的边后卫;美国佛罗里达州西部生物、迈阿密、)和1%硫酸青霉素G-streptomycin(表达载体)。在37°C细胞孵化有限公司5%2并通过每3天。首先,细胞用磷酸盐(PBS),然后洗净与含有0.02% EDTA的PBS,分解成单个细胞用0.1% actinase E (Kaken制药、东京、日本),并稀释至所需的密度。
2.3。细胞增殖
细胞被播种在3厘米文化板块(Becton Dickinson) 5×104每板和细胞培养24 h在37°C和5%的公司2在αmem的边后卫为10%,其次是与干扰素治疗γ和肿瘤坏死因子α对于不同的持续时间。然后细胞脱离细胞培养板使用0.1% actinase E和指望血细胞计数器(Erma、东京、日本)。
2.4。细胞生存能力
使用细胞计数细胞生存能力测量工具(Dojindo、熊本、日本)的基础上形成的水溶性甲瓒WST-8四唑盐(2 - 3 - [4-nitrophenyl] [2-methoxy-4-nitrophenyl] 5 - (2, 4-disulfophenyl) 2H四唑、味精盐)[39]。简单地说,细胞被播种1.5×103细胞每在96孔酶标(正),培养24 h在37°C和5%的公司2在αmem是1%的边后卫,用干扰素治疗γ和肿瘤坏死因子α对于不同的持续时间。细胞被沾染了10μ为2 h l WST-8试剂37°C和5%的股份有限公司2在450纳米和化验标(Multiskan Bichromatic;芬兰赫尔辛基Labsystems诊断)。细胞生存能力规范化,如果细胞,被设定为100%。细胞毒性是细胞生存能力的比率的计算如果cytokine-treated细胞的细胞。细胞生存能力和细胞毒性也以同样的方式在MC3T3-E1细胞precultured 5天汇合的单层。
2.5。DNA片段的末端转移酶的dUTP缺口末端标记(TUNEL)测定
Apo警报DNA碎片分析工具包(美国BD生物科学,圣何塞,CA)是用于TUNEL检测(40]。简单,细胞被播种在每个Lab-Tek室的幻灯片(Nalge Nunc国际,罗切斯特,纽约,美国)6×104每口井的细胞,培养了72 h形成单层,并与干扰素治疗γ和肿瘤坏死因子α对于不同的持续时间。细胞与PBS随后被清洗,使用醋酸5%乙醇固定,与PBS再次清洗,处理0.2% Triton x - 100为5分钟。洗后,细胞平衡在室温下10分钟的50μl平衡缓冲提供的工具包,紧随其后的是染色在37°C 1 h和45μl平衡缓冲,5μl混合核苷酸,1μl TdT)酶,它包含FITC-labeled dUTPs到3终端羟基的DNA片段。细胞核被复染色与propidium碘(π)和TUNEL-stained(凋亡)细胞被枚举使用激光共焦显微镜(卡尔蔡司、从德国)的激发波长494 nm和发射波长518 nm)。凋亡细胞的数量是规范化的总数PI-stained细胞。
2.6。半胱天冬酶的活动
半胱天冬酶活性测定使用APOPCYTO半胱天冬酶比色测定试剂盒(医学和生物实验室,名古屋,日本)。简单地说,细胞被播种在10厘米组织培养板5×105每板细胞,培养72 h 37°C和5%的公司2在α与10%的边后卫mem形成单层,暴露于干扰素γ和肿瘤坏死因子α对于不同的持续时间。细胞随后用PBS,收获细胞刮刀(美国纽约合演,康宁公司),转移到1.5毫升离心管冰,并为3分钟1700离心机和4°C。由此产生的颗粒在100年resuspendedμl细胞裂解缓冲,轻轻混合,放在冰10分钟,离心5分钟,享年9000岁和4°C获得细胞提取物。总蛋白的提取是化验布拉德福德的方法(41)使用商用试剂(Bio-Rad、大力神、钙、美国)。稀释后提取到一个统一的浓度的蛋白质,还被化验使用DEVD-pNA 1 h在37°C, IETD-pNA, LEHD-pNA,由半胱天冬酶3,裂解半胱天冬酶8,分别和半胱天冬酶9。解放了的数量p硝基苯胺比色标记,通过测量吸光度在405 nm标(Multiskan Bichromatic;Labsystems诊断)。半胱天冬酶活动基于量化p硝基苯胺标准曲线。如果细胞的酶活性是设置为1时,该酶活性在cytokine-stimulated细胞是标准化的。
2.7。线粒体分离和细胞色素c释放
细胞色素c发布评估根据公布的方法,一些修改(42,43]。描述的细胞培养半胱天冬酶测定,洗了三次用冰冷的PBS,与PBS含有0.02% EDTA清洗一次,分解成单个细胞用0.1% actinase大肠细胞然后由离心3分钟1700颗粒状和4°C;温柔地悬浮在透化作用缓冲(蔗糖甘露醇220毫米,68毫米,80毫米氯化钾,10毫米玫瑰(pH值7.4),2.5毫米EGTA, EDTA 1毫米,1毫米德勤,200μg / ml洋地黄皂苷,1%的蛋白酶抑制剂鸡尾酒);放在冰5分钟;在750年和离心5分钟和4°C。得到的上层清液作为细胞质分数,而颗粒resuspended在50μl细胞裂解缓冲(50毫米Tris-HCl (pH值7.4),150毫米氯化钠,EGTA 2毫米,2毫米EDTA,特里同x - 100 0.2%, 0.3% NP-40,德勤和1毫米)和离心10分钟,享年8500岁和4°C到颗粒细胞核。得到的上层清液作为线粒体分数。蛋白质在布拉德福德的分数都是量化的方法(41)和蛋白质含量调整到统一的使用十二烷基硫酸钠(SDS)样品缓冲(250毫米Tris-HCl (pH值6.8),8% SDS, 2-mercaptoethanol 20%, 40%的甘油,和0.04%溴酚蓝)。
2.8。免疫印迹
蛋白质样品获得所述受到12% SDS-polyacrylamide凝胶电泳(页面)和转移到聚乙二烯二氟化物膜(美国微孔,贝德福德,MA)用半干的传递细胞(Bio-Rad)。膜被阻塞1 h在室温下与Tris-buffered saline-Tween 20 (TBS-T;20毫米Tris-HCl (pH值7.4),137.5毫米氯化钠,和0.1%的渐变20)含5%脱脂牛奶,洗TBS-T三次,和探索在4°C 12 h兔抗体羊细胞色素c(Sigma-Aldrich),人类bcl - 2(1: 500稀释;圣克鲁斯生物技术、达拉斯、TX,美国),和人类Bcl-2-associated X蛋白(伯灵顿;1:500稀释;圣克鲁斯生物技术)或山羊人类抗体β肌动蛋白(1:500稀释;圣克鲁斯生物技术)。随后,TBS-T的膜清洗三次,标记为1 h在室温下用适当的二次抗体结合辣根过氧化物酶(1:2000稀释;美国新泽西Amersham生物科学,皮斯卡塔韦),水洗,沾染了西方Pico化学发光底物(美国皮尔斯,罗克福德,IL), x射线胶片和可视化(柯达以下西拉膜;柯达,罗切斯特,纽约,美国)。
2.9。建立稳定bcl - 2表达的细胞
bcl - 2细胞稳定表达的转化,建立了MC3T3-E1细胞与bcl - 2表达载体(pCMV-Bcl-2)和一个质粒puromycin-resistance基因(pBabePuro)。前(44)是由博士Shie-Liang谢长廷(微生物学和免疫学研究所和部门,国立阳明大学,台北,台湾),而后者是由博士Charles s . Tannenbaum(免疫学,克利夫兰诊所基金会,克利夫兰,哦,美国)。简单,细胞被播种在10厘米组织培养板3×105细胞每板αmem含有10%的边后卫,培养24小时37°C和5%股份有限公司20.1,转染μg pBabePuro PolyFect转染试剂(试剂盒、希尔登,德国)和8μg pCMV-Bcl-2或8μg控制向量(pcDNA3;英杰公司)。24小时后,2μg / ml嘌呤霉素是添加到媒体,每3天刷新。耐抗生素殖民地种植了两周,孤立使用克隆环(磐城、东京、日本),脱离细胞培养板使用0.1% actinase E,和再经过24-well微型板块。二十个殖民地的每个细胞转染pCMV-Bcl-2或pcDNA3收获,证实了和bcl - 2蛋白表达免疫印迹。
2.10。统计分析
学生的以及为成对的数据被用来测试统计上显著的差异使用棱镜5软件(美国GraphPad软件,拉霍亚,CA)。单向方差分析(方差分析)是用于比较多个组。一个 被认为是具有统计学意义。
3所示。结果
3.1。聚集有关与干扰素γ和肿瘤坏死因子α抑制扩散MC3T3-E1老鼠成骨细胞
干扰素γ(图1(一))和肿瘤坏死因子α(图1 (b))仅小幅减少细胞增殖在0.1 ng / ml,生存能力降低,只有~ 20%,即使在10 ng / ml。然而,与不同浓度的干扰素刺激γ在10 ng / ml TNF的存在α显著减少细胞生存能力~ 20% 1 ng / ml和10 ng / ml干扰素γ(图1 (c))。类似的结果在5 ng / ml TNFα(数据没有显示)。这些结果表明,刺激与干扰素γ或肿瘤坏死因子α没有强烈影响MC3T3-E1细胞增殖,但聚集有关,导致协同抑制细胞生长。
(一)
(b)
(c)
(d)
时间进程分析后暴露于干扰素γ和肿瘤坏死因子α(图1 (d))表示轻微抑制MC3T3-E1细胞的生长刺激与干扰素γ或肿瘤坏死因子α孤独,尽管细胞继续增殖,即使72 h。相比之下,聚集有关的细胞因子导致显著抑制细胞生长的72 h。
3.2。干扰素的作用γ和肿瘤坏死因子αMC3T3-E1融合细胞聚集有关
每3天与新媒体提供了防止养分耗竭,MC3T3-E1细胞5天形成汇合的单层生长,表现出成骨细胞的属性(37,45,46]。以WST-8化验(图2这些层与干扰素),刺激γ或肿瘤坏死因子α独自一人没有强烈影响细胞的生存能力,而聚集有关与导致时间损失的细胞生存能力在72 h ~ 20% ~ 25%之间。这些结果表明,干扰素的聚集有关γ和肿瘤坏死因子α是MC3T3-E1单层膜的细胞毒性。
3.3。聚集有关与干扰素γ和肿瘤坏死因子α导致MC3T3-E1 DNA分裂细胞
调查的机制与细胞毒性有关,支流MC3T3-E1单层膜与干扰素刺激γ和肿瘤坏死因子α72 h、固定和TUNEL染色检测DNA碎片,细胞凋亡的特征以及PI染色细胞核和成像激光共焦显微镜(图3(一个))。干扰素的聚集有关γ和肿瘤坏死因子αTUNEL-stained细胞的比例上升到80%在72 h(图3 (b))。此外,核浓缩在细胞与细胞因子治疗如果细胞(图3(一个)中间面板)。这些结果表明干扰素γ- - -肿瘤坏死因子α全身的细胞毒性细胞凋亡的结果。
(一)
(b)
3.4。聚集有关与干扰素γ和肿瘤坏死因子α半胱天冬酶活性增加MC3T3-E1细胞
细胞凋亡是诱导激活后cysteine-aspartic蛋白酶(还),打通各种细胞内分子,包括caspase-activated DNase,片段染色体DNA (47,48]。因此,我们调查是否还存在介导的凋亡效应观察干扰素γ和肿瘤坏死因子α聚集有关。半胱天冬酶3 8和9活动测量随着时间的推移在支流MC3T3-E1细胞对肽底物标记色原体(数字4(一)- - - - - -4 (c))。我们没有观察到细胞凋亡蛋白酶活化与干扰素后第一个12 h内聚集有关γ和肿瘤坏死因子α;然而,还存在3 8和9 24小时后被激活,活动后明显增加36 h ( )。这些结果暗示与干扰素MC3T3-E1细胞的聚集有关γ和肿瘤坏死因子α通过半胱天冬酶活性诱导细胞凋亡。
(一)
(b)
(c)
3.5。聚集有关与干扰素γ和肿瘤坏死因子α增加细胞色素c释放和抑制MC3T3-E1 bcl - 2表达的细胞
各种凋亡信号最终集成在线粒体,然后成为渗透和释放细胞色素c(49- - - - - -56]。因此,胞质和线粒体分数从支流MC3T-E1层costimulated干扰素γ和肿瘤坏死因子α通过sds - page分离,细胞色素的水平吗c通过免疫印迹分析(图5)。细胞色素c细胞质中的显著积累开始在12 h和48 h后聚集有关,而细胞色素c在线粒体水平减少分数。这些结果表明,与干扰素聚集有关γ和肿瘤坏死因子α线粒体膜通透性增加,诱导细胞色素c释放。此外,我们研究bcl - 2、Bax的表达,这两种调节线粒体膜透化作用[56- - - - - -59]。bcl - 2表达稳定后12 h与干扰素聚集有关γ和肿瘤坏死因子α但是刺激后24小时开始下降。相比之下,伯灵顿稳定在整个实验过程。这些结果暗示与干扰素聚集有关γ和肿瘤坏死因子α在线粒体转移bcl - 2、Bax之间的平衡,导致线粒体膜的透化作用。
3.6。增加bcl - 2表达MC3T3-E1减轻细胞损伤由于干扰素γ和肿瘤坏死因子α
因为bcl - 2抑制线粒体膜透化作用通过伯灵顿(56- - - - - -59bcl - 2),我们调查是否过度减轻干扰素的凋亡效应γ和肿瘤坏死因子α。我们改变了MC3T3-E1细胞与bcl - 2表达向量(pCMV-Bcl2)或控制向量(pCDNA3)连同puromycin-resistance质粒(pBabePuro),选择耐药殖民地,免疫印迹和筛选这些殖民地的稳定的bcl - 2表达(图6(一))。克隆强烈bcl - 2表达,以及转换与控制向量,然后costimulated干扰素γ和肿瘤坏死因子α。引人注目的是,在Bcl-2-expressing克隆细胞毒性明显缓解,如图6 (b)。这些结果表明,干扰素诱导细胞凋亡γ和肿瘤坏死因子α聚集有关部分缓解了Bcl-2-mediated抑制线粒体膜透化作用。
(一)
(b)
4所示。讨论
炎性牙周疾病是由于骨质流失不仅增加了破骨细胞的骨吸收,而且还抑制成骨细胞骨形成的(5- - - - - -8]。在这项研究中,我们对炎性细胞因子的影响干扰素γ和肿瘤坏死因子αMC3T3-E1鼠成骨细胞的增殖和生存能力和调查潜在的分子机制。数据显示与干扰素聚集有关γ和肿瘤坏死因子α促进细胞凋亡,表明增加DNA碎片根据TUNEL染色。核凝结,凋亡细胞的另一个标志,也是基于PI染色观察。另外,干扰素γ和肿瘤坏死因子α还存在聚集有关激活,效应器的细胞凋亡,诱导细胞色素c从线粒体释放。此外,bcl - 2的表达,调节线粒体膜透性的蛋白质,干扰素后减弱γ和肿瘤坏死因子α聚集有关。总的来说,这些发现强烈建议干扰素γ和肿瘤坏死因子α诱导细胞凋亡在MC3T3-E1细胞线粒体损伤。
线粒体是细胞凋亡和抑制凋亡诱导蛋白的主监管机构,如细胞色素c和Smac /暗黑破坏神,线粒体外膜和内膜间(49- - - - - -56]。这些蛋白质泄漏到细胞质中当一个凋亡信号permeabilizes线粒体膜。随后,释放细胞色素c结合凋亡protease-activating因子- 1 (Apaf-1)在ATP的存在,从而诱导细胞凋亡还存在通过激活9和3,分别引发剂和还存在凋亡。此外,bcl - 2蛋白控制线粒体膜透性和分为两个主要官能团(56- - - - - -62年]。第一组包括伯灵顿和bcl - 2同源拮抗剂/杀手(Bak1),促进线粒体膜透化作用诱导的结构性变化压敏电阻器在线粒体外膜离子通道。相比之下,bcl - 2周之久伯灵顿抑制膜透化作用。因此,我们调查了动力学的bcl - 2、Bax MC3T3-E1细胞costimulated干扰素γ和肿瘤坏死因子α(图5)。数据显示bcl - 2表达抑制线粒体分数24 h后的刺激,虽然在伯灵顿的表情观察没有重大变化,这意味着与干扰素的聚集有关γ和肿瘤坏死因子α可能会改变bcl - 2之间的平衡和伯灵顿,解放伯灵顿,促进线粒体膜透化作用。相反,bcl - 2超表达显著缓解干扰素引起的细胞死亡γ和肿瘤坏死因子α聚集有关(图6)。这些结果表明,干扰素的凋亡效应γ和肿瘤坏死因子α是依赖bcl - 2、Bax平衡。
有趣的是,细胞色素c释放后观察开始于12 h聚集有关,而bcl - 2表达被抑制在24 h(图5)。半胱天冬酶激活也观察到24 h,恰逢bcl - 2水平下降。这些结果表明,干扰素后启动事件γ和肿瘤坏死因子α聚集有关是细胞色素c从受损的线粒体释放,其次是半胱天冬酶激活和bcl - 2退化42,63年]。最初的线粒体损伤可能是由于没有浓度增加,鉴于干扰素γ和肿瘤坏死因子α聚集有关诱发的表达没有synthase-2 (Nos2)成骨细胞(29日- - - - - -33,35]。内源性活性氧(ROS)也可能导致线粒体损伤(64年),因为干扰素γNADPH oxidase-1诱导表达,产生活性氧,如过氧化物(65年]。的确,初步实验的抗氧化剂N-acetyl-L-cysteine部分减少细胞死亡和细胞凋亡蛋白酶激活干扰素引起的γ和肿瘤坏死因子α聚集有关(数据没有显示)。综上所述,这些观察结果表明,尽管干扰素γ或肿瘤坏死因子α单独仅略有影响成骨细胞的生存能力,聚集有关可能提振和ROS浓度,造成线粒体膜损伤和细胞色素c释放。另外,聚集有关可能抑制细胞内的表达抗氧化剂,如超氧化物歧化酶和过氧化氢酶,从而使活性氧积累,促进线粒体损伤。在任何情况下,观察到线粒体损伤的机制将是未来研究的主题。
重要的是确认与干扰素聚集有关γ和肿瘤坏死因子α导致在其他成骨细胞的细胞系诱导细胞凋亡。虽然很少有研究描述了成骨细胞的肿瘤坏死因子诱导细胞凋亡α和干扰素γ细胞系除了MC3T3-E1聚集有关,先前的研究表明,刺激大鼠成骨细胞细胞系ROS 17/28与TNF的混合物α,干扰素γ和LPS诱导细胞凋亡34]。这种性质的有限的出版物存在的一个原因是因为人类成骨细胞的细胞系,如建立了mg - 63和Saos-2从骨肉瘤,导致的丧失正常的生理属性,和许多肿瘤细胞已被证明收购凋亡通路。相比之下,MC3T3-E1细胞建立了从刚出生的老鼠头顶和已被证明具有正常的成骨细胞的功能。进一步研究使用人类成骨细胞的细胞系具有正常的生理特性将有必要证实成骨细胞的凋亡与干扰素引起的聚集有关γ和肿瘤坏死因子α。
虽然干扰素γ直接抑制osteoclastogenesis通过干扰RANKL-RANK信号通路,诱导细胞凋亡由Fas / Fas配体信号[27,66年),越来越多的证据表明,Th1-derived干扰素γ和肿瘤坏死因子α诱导获得性免疫反应促进净骨质流失在病理条件下,如牙周炎28,67年- - - - - -70年]。小鼠肺泡periodontopathic细菌引起的骨质疏松模型Porphyromonas gingivalis表明,CD4+T细胞衍生干扰素γil - 6和骨质流失的重要效应物与牙周疾病(67年]。外周血单核细胞(PBMCs)慢性牙周炎患者已经被证明产生大量的炎性细胞因子包括干扰素γ和肿瘤坏死因子α和高的分化为破骨细胞吸收活动仅靠RANKL [68年]。小鼠模型的骨质流失的另一项研究表明,干扰素γ促进破骨细胞形成通过刺激antigen-dependent T细胞激活和RANKL和肿瘤坏死因子的分泌α通过T细胞(28]。有趣的是,Th1-derived细胞因子也被卷入矫正牙齿运动,导致牙周组织炎症,通过增加破骨细胞的数量(71年]。除了osteoclastogenesis,增加成骨细胞的凋亡诱导干扰素γ和肿瘤坏死因子α已经证明在牙周炎的小鼠模型69年,70年]。这些证据以及我们的研究表明干扰素γ和肿瘤坏死因子α促进净骨退化通过增加了破骨细胞的骨吸收和骨形成不足由成骨细胞在牙周组织发炎。
5。结论
在这里,我们表明,与炎性细胞因子IFN聚集有关γ和肿瘤坏死因子α诱导细胞凋亡在MC3T3-E1成骨细胞通过细胞色素c从线粒体释放细胞凋亡蛋白酶活化和bcl - 2抑制。这些发现推进我们的理解分子机制推动炎性牙周疾病的骨质流失。
数据可用性
使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。
的利益冲突
没有披露潜在的利益冲突。
确认
作者要感谢Editage (http://www.editage.jp)英语编辑。这项工作是支持的补助金从教育部科学研究,科学和日本的文化。