文摘
pDC和干扰素的角色α没有定义良好的IgA肾病(IgAN)。在这项研究中,我们调查了大量的髓样和干扰素-α在IgAN患者外周血单核细胞的反应(PBMCs)刺激后pDC-preferred TLR9识别配位体CpG2216。干扰素-的影响α在浆细胞分化和白细胞游走也被调查。在这里,我们发现,pDCs增加的百分比PBMCs IgAN的病人,比健康对照组。干扰素-等离子体水平α蛋白质和大量浆细胞高IgAN患者比健康的捐赠者。等离子体干扰素-α水平积极与蛋白尿有关,肾IgM沉积,肾小管萎缩、间质纤维化年级IgAN病人。体外激活TLR9识别pDCs导致增加干扰素-α生产和增强IgAN患者血浆细胞分化与健康的捐赠者。干扰素-α治疗导致增加浆细胞分化在体外。干扰素-α也显著提升趋化因子的表达IP-10 MCP-1人类系膜细胞,随后促进人类CD4的transendothelial迁移+和CD14+细胞。总之,pDC及其分泌细胞因子干扰素-α可能扮演了一个重要的角色在IgA肾病的病理变化。
1。介绍
IgA肾病(IgAN)是最常见的原发性肾小球肾炎在世界范围内,广泛接受,基因之间的相互作用,实现协同表观遗传和环境因素可能导致IgAN[的发病机制1- - - - - -4]。的处理行业因素之一,感染的病原体,也承认了IgAN的发病机理;IgAN约30%的病人患有疾病发病和/或上呼吸道感染或胃肠道感染后进展(5,6]。(如细菌和病毒抗原金黄色葡萄球菌,嗜血杆菌56,巴尔病毒和逆转录病毒)已发现在IgAN患者的肾标本(6- - - - - -8]。在这些外国病原体防御,toll样受体通常家庭成员通过触发强大至关重要在宿主天然免疫与适应性免疫(9]。在承认其为分子模式,通常招募适配器分子如MyD88和TRIF启动下游信号事件导致炎性细胞因子的分泌,I型干扰素,趋化因子,等等,随后引起连环的炎症反应,包括招募中性粒细胞,巨噬细胞的激活,成熟的树突细胞,诱导表达的连续剧IFN-stimulated杀死被感染的病原体的基因(10,11]。虽然通常是非常有效的对抗病原体,它们也可能作为一个双刀剑自持久激活通常会导致控制炎症反应和组织损伤(12- - - - - -14]。除了识别外源性配体,通常也可以识别内源性配体包括自体蛋白和内源性核酸然后引起自身免疫性疾病如类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮15]。TLR4的重要角色和TLR9识别IgAN已经研究了好几组,指出他们的表达与疾病严重程度甚至IgAN[的发病机制16- - - - - -20.),但通常是如何导致的潜在机制IgA肾病的发病机制尚未完全阐明。
血浆树突细胞(髓)是相对较新的一类免疫细胞的类型,在1999年第一次完全的特点。鉴于pDCs非常少见,占0.3 -0.5%的人类外周血细胞,髓的生物学和功能在疾病是不完全理解21]。immunophenotype标记血液中的髓已报告在一些研究和描述为林(CD3/14/56/19/20/16)−CD123高CD11c−HLA-DR+(22- - - - - -25]。此外,特定标记BDCA-2和BDCA-4也只表达了pDCs驻留在血液和骨髓26]。主髓的和独特的功能是I型干扰素(干扰素的分泌α/β)为了应对病毒和/或virus-derived核酸和/或凋亡细胞衍生核酸(27- - - - - -29日]。研究表明,通常表达模式在pDCs仅限于TLR7和TLR9识别(30.)和干扰素-他们的激活导致大规模生产α(21]。的endosome-located TLR7 TLR9识别,分别负责传感单链RNA和unmethylated 5-cytosine-phosphate-guanine-3(CpG)的DNA图案,后来引发的生产大量的干扰素-α在髓可高达1000倍的其他细胞类型31日]。事实上,干扰素-α在应对生产细菌CpG主题的挑战在活的有机体内是完全由pDCs,通过TLR9识别/ MyD88 IRF7信号通路(32,33]。有三种类型的CpG DNA (CpG-A、CpG-B CpG-C)针对不同的细胞群,导致不同的下游事件。CpG-A类型是非常有效的在引发I型干扰素生产pDCs但很弱在刺激B细胞反应,虽然增强了IRF7的表达和干扰素-提供了一个积极的反馈回路α通过IFNAR生产(34- - - - - -36]。CpG-B优越的B细胞刺激,而CpG-C CpG-B结合B细胞激活的属性和干扰素-α诱导CpG-A的属性(36,37]。
在这里,我们调查了pDCs IgAN通过研究其可能的角色丰富,分泌的干扰素-α,刺激B细胞的活化和分化的能力。我们发现髓和浆细胞更丰富PBMCs IgAN患者比健康对照组;与此同时,等离子体干扰素-α水平高出16倍IgAN患者比健康对照组。当激活时pDC-preferred TLR9识别配位体CpG2216(类型CpG-A)体外,PBMCs IgAN患者分泌干扰素-α比对照组,以及增强浆细胞分化。一致,干扰素-α可以刺激浆细胞的分化,但不是B细胞的扩散在体外。此外,我们发现干扰素-α促进了生产的趋化因子MCP-1 IP-10从人类系膜细胞,导致增加transendothelial人类CD4细胞的迁移+和CD14+细胞。本研究揭示了新的髓和干扰素-病理作用α在IgAN,表明这种复杂疾病的新治疗靶点。
2。材料和方法
2.1。学习小组
活检证实,主要IgAN患者参加中山大学第一附属医院学习。健康的捐赠者和狼疮肾炎患者作为对照组。招募了捐赠者都是中国汉族人口。所有健康的参与者-血尿和蛋白尿,与正常肾和肝功能,没有过去的肾脏疾病的历史。没有感染的症状中观察到所有参与者4天前和后3天血液样本集合。没有一个病人接受类固醇和/或在一年内免疫抑制药物。诊断为终末期肾病患者被排除在本研究中。所有与会者都符合书面知情同意。本研究获得的伦理审查委员会的批准中山大学第一附属医院、广州,中国。本研究按照指南进行提出了《赫尔辛基宣言》。 All adults gave their written informed consent.
IgAN患者的肾组织病理学分类根据牛津分类(38]。从所有患者肾组织病理学被2肾脏病理学家蒙蔽得分4病理的临床数据变量:系膜内的(M0≤0.5或M1≥0.5)的节段性肾小球硬化症(S0缺席或S1),该endocapillary肾小球内(E0缺席或E1),和肾小管萎缩、间质纤维化(T0≤25%;T1 26 - 50%;T2 > 50%) (39,40]。
2.2。试剂
逆转录工具包(豆类,DRR037A)和实时掌握工具包(DRR014A)从豆类购买生物Inc .(大津,日本);试剂盒试剂(15596018)和DNaseI (AM2235)从热费希尔科学公司(美国沃尔瑟姆,MA)。CD抗体标记(CD3, CD4, CD14、CD19 CD16、CD56、CD20, CD123, HLA-DR, CD11c,和CD38)从eBioscience购买公司(美国圣地亚哥,CA)。干扰素-α酶联免疫试剂盒(3425 - 1 h - 6)是由Mabtech提供公司(美国俄亥俄州辛辛那提)和重组人干扰素-α和肿瘤坏死因子-α买来PeproTech Inc .(西湖村、钙、美国)。CpG2216寡核苷酸合成了热费希尔科学公司(美国沃尔瑟姆,MA)。Ig子集IgA1抗体,IgA2,免疫球蛋白ELISA买来Abcam Inc .(英国剑桥),寿命生物科学公司(美国西雅图,华盛顿州)和DAKO Inc .(美国加利福尼亚州圣克拉拉)。Anti-IFN -α和anti-TLR9抗体免疫荧光染色是购自热费希尔科学Inc .(美国沃尔瑟姆,MA)和圣克鲁斯生物技术有限公司(圣克鲁斯、钙、美国),分别。
2.3。分析的浆细胞和髓PBMCs流式细胞术
PBMCs与抗凝静脉血EDTA-K2被Ficoll-paque密度离心浓缩(800 g×20分钟)。细胞被洗了四次磷酸盐(PBS) 2毫米EDTA。pDC分析,人类PBMCs林在fluorochrome-conjugated抗体的组合彩色标记(CD3-FITC、CD14-FITC CD19-FITC, CD20-FITC, CD16-FITC,和CD56-FITC), CD11c-APC, CD123-PE, HLA-DR-PE Cy7在4°C 30分钟。洗后用PBS / 3% EDTA的边后卫/ 2毫米,使用Moflo细胞用流式细胞术分析仪器(美国贝克曼库尔特,沥青,CA)。pDC的人口特点是林的表面标记−CD123高HLADR+CD11c−。新鲜PBMCs浆细胞分析,收集细胞,染色结合fluorochrome-conjugated抗体(CD19-PE、CD20-FITC CD38-PE Cy7)在4°C 30分钟,然后用流式细胞术分析。
2.4。干扰素-α和IgA1测量与酶联免疫吸附试验(ELISA)
干扰素-的水平α血浆样品中,用ELISA试剂盒检测细胞培养上清液根据制造商的指示探测范围为2 - 1000 pg / ml。Ig测量、样品或标准添加到96 - Ig子集微型板块涂以捕获抗体;随后,二次反Ig抗体作为检测抗体添加的。板块在37°C孵化3 h,其次是peroxidase-conjugated链霉亲和素在37°C与PBS 60分钟后清洗。的颜色是3,3 ,5、5-tetramethylbenzidine(三甲)和反应是通过添加100年停止μl 2 N HCl的5分钟后添加三甲。光密度测量的标(光谱马克斯M5、分子设备)在450 nm波长。结果统计分析与临床参数和肾组织病理学研究干扰素-之间可能的关系α和疾病严重程度。
2.5。扁桃体的免疫荧光染色样本IgAN病人
IgAN患有扁桃体炎和接收扁桃腺切除术的患者参与了这个研究。4%的石蜡包埋部分扁桃体样品(4μ米厚度)deparaffinized二甲苯和患者通过分级乙醇系列。在染色之前,幻灯片Triton X-100/3% preincubated 1 h和PBS / 0.3%牛血清白蛋白。部分是沾anti-IFN -α并为4 h anti-TLR9抗体。荧光信号放大与fluorochrome-conjugated二级抗体,紧随其后的是随后DAPI染色和广泛的洗涤与PBS。部分观察蔡司LSM 510元两人共焦显微镜。
2.6。体外刺激的PBMCs CpG2216寡核苷酸
PBMCs隔绝IgAN患者和健康的捐赠者分离聚蔗糖梯度离心和resuspended RPMI 1640所描述的完全培养基(41]。细胞被镀在96 -文化板块的密度2.5×105/好,培养在37°C公司5%2调湿孵化器。细胞被刺激和5μg / ml CpG2216 (5GGgggacgatcgtcgGGGGG3 ,大写字母表示phosphorothioate骨干)。细胞的上清液是收获后24 h CpG2216刺激和ELISA对干扰素α测量。浮在表面的收获在13天在刺激搞笑与ELISA分析。在7天收集细胞后CpG2216刺激和沾fluorochrome-conjugated抗体(anti-CD19-APC、anti-CD20-APC-Cy7 anti-CD38-PE Cy7)为浆细胞用流式细胞术分析。
2.7。干扰素的作用α在浆细胞分化和IgA1合成
PBMCs隔绝健康捐献者在RPMI 1640完全培养基培养有或没有重组干扰素-α治疗(2000国际单位/毫升)。六天后干扰素-α刺激,细胞浆细胞分化如上所述的收集和分析;与此同时,文化上层清液收集IgA1测量。
2.8。干扰素-的影响α人类系膜细胞的基因表达
人类永生的系膜细胞线(HMC)请提供了f . x黄(中山大学、广州、中国)42),生长在RPMI 1640补充10% (v/v胎牛血清在37°C公司5%2调湿孵化器。相同数量的系膜细胞培养,直到80 - 90%融合和血清饥饿在治疗前4 - 6小时。重组干扰素-α(4000国际单位/毫升)添加到细胞培养基和培养不同时期的细胞。细胞为RNA提取和收集后进行基因表达分析。
样品的细胞总RNA的提取使用试剂盒试剂后,制造商的指示。样品使用逆转录酶RNA的互补脱氧核糖核酸合成装备根据制造商的手册。实时PCR进行测量基因表达水平的TGF -βVEGFA咆哮,ICAM-1, il - 6, IFNAR1, IP-10,进气阀打开,TNF -α,il - 1β,MCP-1 PDGF-BB MCP3、VCAM-1 MIP-1b, CCL17 ABI 7900 ht仪器(美国应用生物系统公司、南旧金山,CA) 40周期(95°C 30秒,30秒58°C,和72°C为每个周期为30秒)。数据表示为褶皱变化使用ΔΔCt方法(43)与GAPDH作为内部控制。
2.9。Transendothelial CD14的迁移(TEM)+和CD4+由细胞条件培养基从HMC与干扰素治疗α
2.9.1。CD14的准备+和CD4+细胞
PBMCs从健康的捐赠者获得分离与聚蔗糖梯度离心如上所述。CD14+和CD4+细胞从收获PBMCs排序Moflo仪器在细胞被贴上fluorochrome-conjugated抗体CD14或CD4标记。CD14+单核细胞/巨噬细胞的密度resuspended 1×106细胞/毫升RPMI 1640/0.5%的边后卫的媒介。CD4+与anti-CD3抗体(5 T细胞被刺激μg / ml)一夜之间和resuspended 1×107细胞/毫升RPMI 1640/0.5%FBS媒介。
2.9.2。从人类的系膜细胞条件培养基的制备与干扰素治疗α
人类系膜细胞RPMI 1640/10%的边后卫服用干扰素-α在4000国际单位/毫升6 h。与普通培养基细胞被洗一次,恢复文化是新鲜RPMI 1640 0.5%胎牛血清16 h。条件培养基被离心收集在1600 rpm 6分钟4°C。整除储存在−20°C,以供将来使用。
人类脐带血管内皮细胞由(通过传代形成细胞的胶原酶治疗脐带如前所述[44]。镀在通过三个主要内皮细胞密度的2×104细胞/好到gelatin-coated transwells (5μ孔隙大小,猫。3421年,康宁,纽约,美国)和培养,直到100%在ECM媒介融合20%的边后卫,紧随其后的是一夜的刺激10 ng / ml TNF -α。HUVECs洗一次,然后就平衡了至少1小时RPMI 1640/0.5%的边后卫在37°C。条件培养基从HMC室的底部添加了transwell(0.6毫升/)。CD14+和CD4+细胞,分别加入井1×10的密度5细胞/ 100μl和1×106细胞/ 100μl。transwell板中孵化有限公司2孵化器在37°C,允许细胞迁移6 - 12 h。细胞迁移到井底部与胰蛋白酶和离心收获,其次是赫斯特染色。迁移CD14+或CD4+细胞进行荧光显微镜(莱卡)。
2.10。统计分析
数据被表示为平均值±标准价值和对待学生的错误t以及。所涉及的三个和多组数据,我们进行了单向方差分析和进一步的事后测试时 。相关测试与皮尔森相关系数和散点图。用SPSS 18.0软件进行统计分析。统计评估都是双面使用意义的价值小于0.05。
3所示。结果
3.1。血浆树突细胞及其细胞因子IFN -签名α更丰富的外周血IgAN病人
我们调查了大量的pDCs PBMCs IgAN患者和健康对照组,多个CD标记标签(林(CD3/14/19/20/16/56)−CD123高HLA-DR+CD11c−)被用来描述这种细胞群(图1(一))。髓的百分比在PBMCs IgAN患者被发现显著高于健康对照组(分别为0.51%和0.37%, )(图1 (b))。干扰素-α对pDC是最显著的细胞因子,我们发现,等离子体干扰素-α水平显著调节IgAN患者(56.9±20.2 pg / ml)比健康的捐助者(3.4±1.0 pg / ml)。干扰素-等离子体水平α在IgAN患者低于在狼疮肾炎患者(143.7±57.8 pg / ml)(图2(一个))。此外,我们研究了干扰素的表达α和TLR9识别扁桃体IgAN患有扁桃体炎患者的样本。我们发现干扰素-α显然是IgAN患者的扁桃体细胞表达;与此同时,TLR9识别在干扰素-丰富的表达α阳性细胞(图2 (b))。
(一)
(b)
(一)
(b)
IgAN患者的人口统计学和临床资料和控制表中列出1。当研究等离子体干扰素-之间的相关性α浓度和临床特征,等离子体干扰素-α与24小时蛋白尿水平表现出显著的和积极的协会( , )和B anti-Dnase效价( , IgAN患者(表中)2)。关于肾组织病理学,我们发现pDC百分比呈正相关肾IgM沉积IgAN患者( , )。同时,等离子体干扰素-α浓度有显著相关的管状萎缩/间质纤维化等级( , ),以及肾IgM沉积( , (表)IgAN病人2)。
3.2。pDC-Preferred CpG刺激诱导干扰素-α分泌和浆细胞分化PBMCs IgAN病人
CpG2216是TLR9识别的有效活化剂表达了pDCs,我们使用它来研究PBMCs文化IgAN患者的反应。首先,我们确认干扰素-α主要是由pDCs但不被其他细胞分泌后从PBMCs CpG2216刺激(补充图吗1)。此外,如补充图所示2ODN CpG ODN 2216年,但不是控制,能够激起的合成干扰素-α;与此同时,两个抑制ODNs报道[45- - - - - -47TLR9识别的抑制CpG2216-mediated干扰素-α分泌不足50%(补充图2)。
当受到CpG2216刺激,PBMCs IgAN患者分泌干扰素-α蛋白质(4338±1374 pg / ml)到上层清液比健康对照组(1600±508 pg / ml)(图3(一个))。此外,免疫球蛋白抗体的分泌PBMCs IgAN患者明显强于从健康对照组(3425±525和1788±251 ng / ml)(图3 (c))。IgA2抗体分泌也得到了相似的结果(593±133和155±36 ng / ml)(图3 (d)(图),但不是IgA1抗体3 (b))。
(一)
(b)
(c)
(d)
我们进一步研究了浆细胞分化的调节TLR9识别激活PBMCs IgAN病人的文化。CD19 CpG2216刺激后6天+B细胞在PBMCs成为激活和分化成浆细胞标记为CD19+CD20低CD38高(图4(一))。CpG2216-treated组相比,vehicle-treated组显示非常低水平的浆细胞分化(补充图3)。此外,CpG2216并未显著提高CD19+细胞增殖在PBMCs文化IgAN患者与健康对照组相比(12.37±1.1%和10.44±0.74%, )。然而,我们发现,在指导CD19 CpG2216刺激表现出优越的能力+B细胞分化为浆细胞PBMCs IgAN病人的文化,导致增加50%的浆细胞一代比健康对照组(4.56±0.6%和3.06±0.37%, )(图4 (b))。这些数据表明,激活TLR9识别pDCs IgAN患者更有效的促进浆细胞的分化,与健康对照组相比。
(一)
(b)
(c)
我们还研究了在活的有机体内丰富的CD19+IgAN患者细胞和浆细胞。与体外结果一致,CD19的百分比+细胞并不新鲜孤立PBMCs IgAN患者显著高于健康对照组(8.16±0.79%和10.10±0.99%, ),但浆细胞的百分比在新鲜分离PBMCs IgAN患者约56%高于健康对照组(0.39±0.04%和0.25±0.05%, )(图4 (c))。
3.3。干扰素-α治疗导致更多的浆细胞B细胞的分化和IgA1生产健康的捐赠者
测试是否干扰素-α浆细胞分化是非常重要的,健康的捐赠者PBMCs有或没有治疗干扰素-α(2000国际单位/毫升)6天。如图5干扰素-,增殖的影响α在CD19+细胞增殖只有7捐助者(图中观察到35(一个)),而干扰素的增殖的影响α在浆细胞一代都观察到7的7捐助者(图5 (b))。我们还发现IgA1合成增加在所有捐助者(图75 (c))。这一结果表明,干扰素-α对等离子体产生了积极的影响细胞分化和IgA1生产,但不是CD19+细胞增殖。
(一)
(b)
(c)
3.4。干扰素-α促进炎症基因表达在人类的系膜细胞和增强Transendothelial人类CD4细胞的迁移+细胞CD14+细胞
测试是否干扰素-α对生长因子的表达,挑衅影响促炎因子,趋化因子,在人类血管系膜细胞和生物活性分子,我们分析了IFNAR1的表达,TGF -βICAM 1 VEGFA PDGF-BB,咆哮,IP-10, MCP-1,进气阀打开,il - 6、il - 1β和肿瘤坏死因子-α干扰素-后α治疗。如图6干扰素-α受体是丰富的表达在人类血管系膜细胞和干扰素-后显著调节α治疗。干扰素-α也增强il - 6的表达、IP-10 MCP-1在人类的系膜细胞2 h和6 h后的治疗。干扰素-α施加一定影响的表达VEGFA和伊诺而不影响TGF -的表达β1、咆哮、ICAM TNF -α,il - 1β,PDGF-BB。基线的mRNA水平的趋化因子MCP3、VCAM-1 MIP-1β在hmc, CCL17非常低的检测到实时rt - pcr,不管有或没有干扰素-α治疗(数据未显示)。
趋化因子的表达水平MCP-1和IP-10增加在人类血管系膜细胞干扰素-α治疗;因此,我们调查的能力吸引白细胞迁移虽然内皮细胞。作为显示在图7、人类CD14+细胞和CD4+细胞从4人类捐助者迁移效率较高的响应人类血管系膜细胞条件培养基使用干扰素-α。对CD4+T细胞迁移,细胞迁移的数量4捐助者干扰素-所吸引α浮在表面的预处理,分别为1.77,2.52,2.63,和1.62倍的对无条件浮在表面的迁移。在CD14的情况下+单核细胞/巨噬细胞的迁移细胞干扰素-所吸引α浮在表面的预处理是1.40,1.75,1.65,和1.87倍的对无条件浮在表面的迁移。
(一)
(b)
4所示。讨论
pDC及其细胞因子分泌干扰素-α在系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病和牛皮癣已经解决了他们的角色在诱发炎症反应和组织损伤48- - - - - -50]。高水平的干扰素-α被发现在狼疮患者血清,和大量的髓样皮肤的红斑狼疮患者中发现了(51- - - - - -53]。此外,全球PBMCs从狼疮患者的基因表达分析显示大量的干扰素-α响应基因异常表达(54]。在下游,干扰素-α导致增强的成熟的树突细胞,autoreactive T细胞发炎,减少调节性T细胞活性,增强反应的B细胞(55,56]。然而,pDC和干扰素的状态αIgAN的发病机制还没有得到很好的研究。据我们所知,这是第一个研究报告,pDC及其分泌干扰素-αTLR9识别激活增强等离子体引起的细胞分化,进一步促进单核细胞/巨噬细胞和T淋巴细胞浸润在IgAN跨内皮细胞单层。TLR9识别是丰富表达了pDCs,其激活通过CpG-A主要提高了I型干扰素的合成和促进pDC成熟,而TLR9识别激活B细胞通过CpG-B诱导B细胞成熟和搞笑的合成57,58]。ddY小鼠模型的IgA肾病、治疗与CpG-B CpG-A但不导致增加血清水平IgA-IgG2a免疫复合物及其肾小球口供,以及扩展的系膜增生性病变19]。TLR9识别在生发中心B细胞活化诱导合成4月,导致IgA分泌IgAN [59]。我们发现pDCs更丰富IgAN病人和TLR9识别激活通过CpG-A导致更多干扰素-α生产体外促进浆细胞分化。这个结果进一步支持的证据表明,浆细胞更丰富的新鲜收集IgAN患者外周血细胞。以前的证据从孤立的扁桃体细胞表明TLR9识别在CD19表示+B细胞和BDCA2+pDCs IgAN患者的扁桃体(20.]。尽管BDCA2 pDC的特定标记免疫染色,据报道,BDCA2 TLR9-mediated IFN -是一个抑制信号α合成髓(60)和BDCA2+pDC产生很低的干扰素-α在淋巴结61年]。从我们的结果,发现扁桃体IgAN患者样本,TLR9识别在干扰素-丰富的彩色α阳性细胞,这表明TLR9识别与干扰素-密切相关α在IgAN生产。结合所有这些数据,它表明TLR9识别的一个关键因素是调解的异常干扰素-α分泌,B细胞分化,在IgAN Ig合成。有一点值得提到的是,干扰素-α也观察到一些扁桃体细胞为阴性TLR9识别表达式在我们的研究中。众所周知,TLR7表达髓样细胞或TLR3表达mdc或其他居民的介质为IFN -α生产(28,58,62年]。这些TLR分子是否有助于增强干扰素-α生产IgAN需要进一步探索。
virus-defending细胞因子、干扰素-α自身免疫性疾病中发挥惊人的影响系统性红斑狼疮通过激活树突状细胞成熟,抗体生产、免疫球蛋白类开关,T细胞分化[子集62年]。我们发现干扰素的平均血浆浓度-αIgAN患者约为16倍,在健康的捐赠者。此外,体外激活PBMCs更干扰素- IgAN患者的结果α直接合成,促进浆细胞的分化体外。附和着,西奥达尼et al。发现干扰素-α促进了两天真的B细胞浆细胞分化和记忆B细胞在TLR9识别刺激(63年]。底层机制,他们发现干扰素-后il - 6表达增加α治疗是非常重要的B细胞分化[63年- - - - - -65年]。此外,干扰素,α能够促进CD69的表达、CD86,和B细胞CD25分子,以及抑制Fas-mediated B细胞凋亡,从而导致B细胞低阈值感应和快速抗体反应(66年,67年]。所有这些数据支持了这样的观点,即干扰素-α有利于扩大B细胞生存和IgAN患者血浆细胞分化。我们的结果是有利于解释骨marrow-resident IgA-producing IgAN患者B细胞是调节(68年),因为这些增强骨髓浆细胞可以迁移回或发炎组织,成为长寿的浆细胞,导致自身免疫疾病的自体抗体生产肾表现(69年- - - - - -71年]。我们还发现干扰素-α呈正相关,24小时IgAN患者的蛋白尿。在狼疮小鼠模型中,在活的有机体内持续的表达干扰素-α引起严重的蛋白尿,免疫复合物沉积,自身抗体生产和致命的肾小球肾炎(72年- - - - - -74年]。非常低剂量的外源性干扰素-α在循环(< 12.5 pg / ml)可能引起蛋白尿lupus-prone老鼠(73年),强烈表示干扰素-α非常有效的诱导蛋白尿。考虑到这些事实,人们很容易推测更高干扰素-α水平参与了IgA肾病蛋白尿和肾小球肾炎发展与狼疮。
,有趣的是,IgA1合成CpG-stimulated PBMCs IgAN患者并没有增加,而干扰素-α能促进IgA1合成在体外。一个解释是,除了干扰素-α可以,还有其他细胞因子il - 6、il - 12,四月,和引起pDC的金属,它们会影响抗体的合成和浆细胞分化[子集75年- - - - - -79年]。然而,这些细胞因子是如何影响pDC IgAN患者还不清楚,需要进一步的调查。另一方面,生产的免疫球蛋白和抗体IgA2增强在PBMCs IgAN病人CpG2216刺激体外。据报道,pDC结合CpG诱导B细胞和免疫球蛋白合成检测IgM抗体呈阳性反应,和干扰素-α可以进一步放大CpG的强度(63年,80年]。我们研究的另一个有趣的发现是,肾IgM沉积呈正相关,pDC和干扰素-α丰富IgAN患者。据报道,肾IgM沉积与疾病进展或肾小球荒废IgAN肾病(81年,82年]。此外,我们发现肾IgM沉积IgAN患者的蛋白尿呈正相关(数据没有显示)。虽然在pDC TLR9识别激活有关IgM合成如上所述,连接pDC-IFN——底层机制α轴与肾IgM沉积IgAN仍然是未知的。
IgA肾病与肾脏炎症伴有白细胞浸润为特征83年,84年]。T细胞和单核细胞/巨噬细胞被报道的主要在肾间质浸润的白细胞IgAN病人,这是与组织学损伤和肾功能障碍显著相关(85年- - - - - -87年]。同时,增加MCP-1 IgAN病人的表达在肾组织中被发现(88年]。在这里,我们发现干扰素-α强烈诱导mRNA水平IP-10 (CXCL10)和MCP-1系膜细胞在体外并与干扰素-条件HMC上层清液α预处理沉淀CD14的transendothelial迁移+和CD4+细胞。考虑到IP-10 MCP-1能够促进外周血单核细胞和T细胞的趋化性89年- - - - - -92年),增强合成IP-10和MCP-1系膜细胞是关键在促进IgAN白细胞通过内皮细胞的迁移。除此之外,干扰素-α刺激IFNAR1自身受体的表达,这非常有可能产生一个积极的反馈回路的干扰素-α信号。最近的一项研究报道,内皮细胞损伤与蛋白尿、血尿、肾病理鼠IgAN模型(93年),这表明内皮细胞完整性是肾脏功能的一个关键因素。结合我们的发现,这些数据支持的假设hyperactivated pDC-IFN -α轴施加力量促进趋化因子的表达,调节通过内皮细胞白细胞游走肾组织,并导致IgA肾病蛋白尿。
总之,我们的结果表明pDC-IFN -α轴在病人hyperactivated IgAN,进一步促进了浆细胞的分化和诱导趋化因子的协助通过内皮细胞迁移的T细胞和单核细胞。我们的数据说明,至少在某种程度上,机制如何pDC和干扰素-α参与IgAN的发病机理。在狼疮,大量的干扰素-高α和pDC导致BCR响应,B细胞增殖,抗体生产和后续蛋白尿红斑狼疮(48,94年- - - - - -96年]。很可能干扰素-α在IgAN病人和狼疮患者中扮演类似的角色。考虑到pDC-IFN -α疗法包括anti-IFN——封锁α抗体,anti-IFNAR、pDC抑制剂和TLR9识别拮抗剂与承诺导致狼疮临床试验(97年,98年),控制pDC-IFN -α轴也可以治疗IgA肾病产生有益的影响。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
确认
这个项目是由中国国家自然科学基金资助(31200664),中山大学的年轻研究人员的基础,中国(14 ykpy17),和操作的资金为广东省重点实验室(2014030301023)。作者的帮助非常感激志强黄博士从阿拉巴马大学(阿拉巴马州伯明翰市;美国)在手稿准备。
补充材料
补充1。补充图1:pDCs应对CpG2216刺激和分泌大量的干扰素-α在PBMCs。新孤立PBMCs捐助者( )沾CD304-APC CD123-FITC抗体,进行细胞分类。双阳性细胞被确定为pDC和其他细胞被确认为PBMCs没有pDC (A),分泌的干扰素α蛋白质在文化上层清液由ELISA检测CpG2216刺激后24小时(B)。
补充2。补充图2:合成干扰素-α由不同类型的oligodeoxynucleotides PBMCs (ODN)。新孤立PBMCs捐助者( )处理不同ODN如下。ODN Ctrl: 5GGGggagcatgctgCGGGGG3 ;ODN 2216: 5GGGggacgatcgtcGGGGGG3 ;抑制ODN 1: 5TCCTGGAGGGGTTGT3 ;抑制ODN 2: 5TTTAGGGTTAGGGTTAGGGTTAGG G3 。(核苷酸上字母对应于phosphorothioate骨干)。干扰素-文化浮在表面的检测α24小时后,ELISA。
补充3。补充图3:浆细胞分化PBMCs CpG2216引起的。新孤立PBMCs捐助者( )受到车辆或CpG2216治疗6天,紧随其后的是表面制造商标记和流式细胞术分析。(一)CD19+细胞分化成浆细胞(CD19+CD38嗨CD20罗)车辆或CpG2216刺激后6天。(B)的比较2216 -治疗浆细胞分化在车辆或CpG PBMCs捐助者。