文摘

IL-33调节先天和适应性免疫反应组织网站包括肺癌和炎症性肺部疾病中扮演关键的角色。尽管IL-33表达式可以改变nf -κB激活后,我们检查监管,制瘤素M, gp130细胞因子家族成员,在小鼠的肺部组织。反应评估在BALB / c小鼠肺第七天的瞬态过度使用气管内注射腺病毒编码OSM (AdOSM)或空向量(AdDel70)。整个肺提取显示诱导IL-33 mRNA(> 20倍)和蛋白质(10倍增加免疫印迹)相对于AdDel70 AdOSM。免疫组织化学IL-33表示显著诱导的肺泡上皮细胞的核染色在活的有机体内。制瘤素M刺激IL-33 mRNA和IL-33全长蛋白10大鼠2型肺泡上皮细胞在文化在时间和剂量依赖性的方式,而il - 6,制药业,IL-31, il - 4,或IL-13没有,TGFβ压抑的IL-33。STAT3 IL-33感应与激活有关,药物抑制STAT3改善IL-33水平。这些结果表明制瘤素M的强有力的诱导物IL-33在小鼠肺上皮细胞和表明,OSM / IL-33轴可能参与先天免疫和炎症条件肺。

1。介绍

最近的证据支持的重要功能细胞因子IL-33先天和适应性免疫反应。IL-33首次被描述为一个核因子从小型内皮小静脉(1,2施密茨),后来由et al。3作为ST2细胞外配体,进而曾被描述为一个孤儿受体(4]。IL-33显示能力诱导2 T辅助细胞因子和后续工作进一步IL-33生物学特征和角色在体内平衡和疾病包括细菌和蠕虫感染,过敏和肺部的慢性炎症,关节,皮肤、中枢神经系统和心血管组织(审查由其他人(5- - - - - -8])。IL-33与受体相互作用的细胞外可溶性形式组成的复杂ST2和IL-1RAP9)和诱发nf -κB和MAP激酶细胞信号通路(3]。IL-33通常不是由活细胞分泌的,主要是局部细胞核,但它被释放在细胞死亡/坏死类似于其他alarmins HMGB1和il - 1等α(5,6]。显著影响可溶性IL-33过剩的老鼠是由致命的炎症和自身免疫在转基因小鼠与高水平的可溶性IL-33生物利用度(10]。是不为人熟知的角色IL-33细胞核内;然而,细胞IL-33与异染色质(11),可以调节nf -κB信号(12]。

高浓度的IL-33过敏性气道疾病的小鼠模型中发现,在人类肺部疾病包括严重哮喘(慢性5- - - - - -8]。在过敏反应IL-33 Th2-skewed影响免疫功能,参与IL-33受体复合物的Th2细胞增强Th2反应。IL-33引起嗜酸性粒细胞激活,加剧了OVA-induced气道炎症模型(13),需要最大的效应模型HDM-induced气道炎症(14]。然而,IL-33也是先天免疫反应的关键,如LPS-induced系统性炎症反应和dextran-induced结肠炎和T cell-independent上皮损伤(15]。此外,研究Luzina et al。16]表明表达升高IL-33组织从特发性肺纤维化(IPF)的病人,和其他研究涉及IL-33肺纤维化小鼠模型。外生IL-33 bleomycin-induced肺纤维化严重程度增加(17),而抑制IL-33途径减少肺纤维化,作为评估anti-IL-33治疗在博来霉素模型或ST2 KO小鼠对博来霉素的反应(18]。

人类IL-33最初描述的内皮淋巴结(2)和随后的工作显示内皮细胞表达在很多网站包括慢性炎症组织。本构IL-33基因表达明显内皮和上皮细胞的细胞核11,19)和鼠标角化细胞(20.]。髓细胞也可以表达IL-33感应,有限合伙人/ nf -κB激活(21]。在肺组织细胞检查,气道平滑肌细胞(17,22)和2型肺泡上皮细胞显示IL-33表达式(7,14]。出版监管IL-33的细胞因子和生长因子的研究表明,肿瘤坏死因子,il - 1,或者刺激因子可以引起IL-33 [14),而IFN-gamma似乎抑制IL-33水平取决于细胞类型(23]。IL-33表达可能在体内平衡调节和疾病的其他生长因子和细胞因子。虽然gp130细胞因子的作用(包括il - 6、制药业、制瘤素M (OSM) IL-11,和IL-31)在调节肺细胞的IL-33表达不清楚,我们和其他人曾表明gp130 OSM稳态和促炎细胞因子活动和可以修改细胞外基质(ECM) (24- - - - - -27]。鉴于OSM的功能激活基质细胞和海拔的IPF和严重的哮喘(OSM水平28,29日),假定监管IL-33可能先天免疫调制的重要性,在肺部疾病的慢性炎症和组织修复。在这项研究中,我们审查的功能制瘤素M在小鼠肺调制IL-33表达式在活的有机体内上皮细胞和老鼠在体外。OSM显示突出IL-33 mRNA和完整的监管IL-33蛋白质在活的有机体内和诱导细胞表达全长IL-33在小鼠肺上皮细胞在体外这是与抑制STAT3压抑。结果支持新发现OSM-IL-33轴在肺组织细胞和建议涉及IL-33的额外途径在先天免疫反应。

2。材料和方法

2.1。细胞系和细胞因子

细胞系是在标准条件下培养介质中含10%胎牛血清补充谷酰胺青霉素和链霉素为1%和1%。的C10 2型肺泡上皮细胞系培养在RPMI正如前面指出[31日](礼物从克里斯博士阶段,蒙大拿大学)。LA-4从写明ATCC购买、培养细胞在DMEM / F12媒体。鼠标重组细胞因子包括OSM, il - 6,制药业,IL-31, TNFα,TGFβ、il - 4、IL-13 IL-17A和成熟IL-33购自研发系统(明尼苏达州。、锰、美国)。药理抑制剂之前被添加在下面的最终浓度OSM刺激:STAT3抑制剂Stattic在5μ米(30分钟前)(Abcam生化,多伦多,加拿大),p38抑制剂SB203580在5μ(1小时前)(Calbiochem,圣地亚哥,CA)、ERK抑制剂PD98059 25μ(2小时前)(Calbiochem)和AKT抑制剂AKTX 5μ(1小时前)(Calbiochem)。

2.2。Adenoviral向量在活的有机体内实验

腺病毒编码的鼠标OSM (AdOSM)或空病毒(AdDel70)先前描述和暂时被用来表达病毒编码的基因在肺气管内政府先前表示[30.,31日]。后第七天向量,每个5×10⁷空斑形成单位与每次治疗的老鼠,老鼠扑杀,支气管肺泡灌洗完成后,肺和右叶提取和snap-frozen。部分后来被处理对蛋白质或RNA分析分析如前所述[32]。左肺叶切除,膨胀/用甲醛固定,随后组织学和免疫组织化学处理。

2.3。免疫组织化学(包含IHC)和量化

包含IHC IL-33是完成类似,如前所述14)和如下:石蜡包埋的左肺的老鼠接受广告向量表示deparaffinized,水化与绝对顺序,95%,3%和70%的酒精,然后洗了过氧化氢(阻断内源性过氧化物),然后在TBS /渐变/ 0.1%皂素。被阻塞的部分与马血清ImmPRESS系统的一部分(向量实验室)在0.1%皂素,洗皂苷(TBS /渐变/ 0.1%),然后用山羊孵化anti-mouse IL-33主要抗体(猫# AF3626、研发系统)在不同浓度(2.5μ1.2 g / mL,μ0.6 g / mL,μ1小时的g / mL)。洗后,ImmPRESS二级Ab(马抗体免疫球蛋白)添加了30分钟,然后洗和民建联抗原检测试剂(Dako)。prosurfactant蛋白C (SPC),方法如前所述[14)使用1:2000 anti-SPC多克隆Ab(微孔)和想象+兔(Dako)。CD31染色,抗原检索使用前(Dako目标检索)鼠anti-mouse CD31(1: 50稀释,隔夜rt)和生物素化的兔子anti-rat吸收(鼠标)1:100实验室(向量),然后显示与Envision-plus-rabbit-TRU (Dako K4003)。梅耶尔的苏木精复染色。幻灯片处理手续没有任何染色主要抗体呈阴性。量化,IL-33⁺细胞被枚举每大功率领域(400 x)和5个字段计算每从至少3分离小鼠左肺广告载体治疗。

2.4。分析蛋白(免疫印迹或ELISA)和RNA水平

15 - 20μ克蛋白质被加载到10%或12% sds - page凝胶和分离后蛋白质被转移到硝酸纤维素标准方法(31日)和堵塞一小时在室温下使用LI-COR奥德赛阻断缓冲区(Mandel)。BLUeye分子量蛋白质梯(FroggaBio,多伦多,加拿大)是运行在所有蛋白质凝胶。屁股被探测使用以下抗体在一夜之间4°C:肌动蛋白I-19和phospho-p38(圣克鲁斯生物技术),稀释1:2000;鼠标IL-33(研发系统),稀释1:1000;磷酸化STAT3(细胞信号技术),稀释1:2000;总STAT3(细胞信号技术),稀释1:1000;细胞信号转导和SMAD1,稀释1:1000(技术)。Phospho-SMAD1/5/8(1: 1000稀释)购买从微孔。主要抗体被发现使用LI-COR anti-rabbit或抗体IRDye红外二次抗体在1:5000或1:10000稀释,分别使用LI-COR奥德赛红外扫描仪成像。屁股被使用LI-COR NewBlot硝基剥离缓冲区,按照制造商的指示,然后阻塞reprobed不同的蛋白质。 Densitometry analysis of immunoblot band intensity was performed using Image Studio Lite software (LI-COR). IL-33 protein bands were normalized to actin; pSTAT3 was normalized to total STAT3. Cell lysates were compared relative to untreated control samples to quantify fold changes in signal, and lung homogenate samples were compared relative to lung homogenate samples from mice treated with AdDel70. For assessing soluble IL-33 in cell culture supernatants, DuoSet antibody pairs for mouse IL-33 were purchased from R&D Systems Inc. and used as per manufacturer’s protocols. The limit of detection for the assay was 15 pg/mL. In assessing mRNA levels, RNA was prepared following manufacturer’s protocol using PureLink RNA Mini kits and analyzed by real-time quantitative PCR. Predetermined assay reagents (PDAR probes) were purchased for IL-33 and ST2/IL1RL1 (Thermo Fisher).

2.5。统计分析

GraphPad Prism 5.0版本是用于生成图表显示的结果和统计分析。数字代表平均值±标准测量误差(SEM)。单向方差分析(方差分析)测试是用来评估使用图基的统计差异事后多个比较测试0.05的显著性水平。被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

之前我们已经表明,瞬态超表达的OSM使用广告向量表示鼠标OSM (AdOSM)诱发炎症反应,增加细胞外基质在肺的老鼠30.,31日]。确定IL-33表达和/或监管在此系统中,我们检查了蛋白质和老鼠mRNA水平处理控制AdDel70向量或AdOSM向量(图1)。AdDel70向量是没有mOSM cDNA插入,否则它使用相同的骨干和以前一样控制向量表示(30.,31日]。肺总蛋白提取的免疫印迹显示一致的海拔IL-33信号AdOSM这与pSTAT3激活(图1(一))。AdDel70独自没有上调IL-33在第七天,比天真未受感染的老鼠(数据未显示)。量化IL-33(纠正肌动蛋白)和pSTAT3(修正总STAT3)显示重要的感应BALB / c (IL-33水平数据1(一)- - - - - -1 (c))和C57BL / 6(数字1 (b)和1 (c)和补充图1在网上补充材料http://dx.doi.org/10.1155/2016/9858374)肺总提取物。相对应的抗体检测到著名的乐队全长IL-33(约35 kD)迁移,而成熟IL-33信号(重组成熟IL-33迁移在大约18日至19日kD)缺席/低在小鼠肺提取AdDel70——和AdOSM-treated BALB / c小鼠(补充图2)。评估IL-33和IL-33受体的表达链(IL-33R / ST2) mRNA水平,总肺匀浆中存在多普勒超声检查(数字1 (d)和1 (e))。数据显示诱导IL-33 mRNA在BALB / c(> 20倍)和C57BL / 6(> 10倍)鼠标菌株。相比之下,mRNA水平ST2没有改变BALB / c小鼠和最低限度高架C57BL / 6小鼠(2倍)的时间点。

确定哪些细胞肺表达IL-33瞬态OSM过度后,我们检查了肺部分由特定IL-33免疫组织化学。图2(一个)显示一些IL-33染色AdDel70-treated BALB / c小鼠,仅限于在实质IL-33-positive细胞的细胞核。相比之下,AdOSM-treated老鼠显示肺IL-33-stained细胞的数量和强度的增加,局部主要的核细胞与2型肺泡上皮细胞的形态(数字2(一个)和2 (b))。量化的IL-33-nuclear阳性细胞/ 400 x放大如图2 (c)并表示显著增加细胞的数量。我们还为prosurfactant染色蛋白质C (SPC)来确定2型肺泡上皮细胞(图2 (e))。类似IL-33分布和程控染色观察,符合表达的IL-33 2型肺泡上皮细胞,如图所示之前在其他系统中小鼠肺部炎症的14]。因为它已经表明,内皮细胞表达IL-33在其他系统中,我们对小鼠肺部分CD31染色,一个典型的血管内皮细胞标记。CD31染色明显血管腔的表面;然而,这些细胞没有阳性IL-33串行部分(图所示2 (d))。确认AdOSM诱导同样的效果在BALB / c小鼠肺如前所述在这个系统31日),炎症细胞聚集在支气管肺泡灌洗(BAL)流体和肺组织的组织病理学部分补充图4所示。数据表明,小鼠显示预期的高度落下帷幕以及增加细胞的上皮细胞增生,肺泡壁厚,和炎症细胞积聚在组织部分,以应对AdOSM。

由于数据显示2型上皮细胞是AdOSM强烈响应在活的有机体内,我们进一步探讨IL-33的表情在体外。我们首先测试OSM能否直接监管IL-33在小鼠2型肺泡上皮细胞使用的C10细胞系来源于BALB / c [31日]。C10细胞刺激OSM导致时间增加(明显在4和6小时,更加突出在24小时)和剂量依赖性增加(与0.5 ng / mL OSM明显刺激和明显在24小时与5 ng / mL OSM) IL-33信号探测到C10细胞溶解产物的免疫印迹(数字3(一个)和3 (b))。我们不能检测的成熟IL-33(约18日至19日kD乐队,所表示的重组成熟IL-33纳入补充图2)如果或OSM-stimulated C10细胞溶解产物。类似的结果观察使用单克隆抗体anti-IL-33(从Abcam Nessy-1抗体,数据未显示)。图3 (b)显示了一个定量的2倍、4倍和12倍IL-33信号在4小时,6小时,24小时,分别在刺激5 ng / mL OSM(图3 (b))。等gp130细胞因子il - 6、生活或IL-31没有明显刺激IL-33 C10细胞溶解产物相比,OSM数据3(一个)和3 (b))也没有肿瘤坏死因子α。STAT3的激活,评估pSTAT3免疫印迹,在OSM-stimulated细胞溶解产物明显的剂量依赖性的方式,而il - 6,制药业,IL-31或TNF没有提升pSTAT3(数字3(一个)和3 (c))。当上层清液的细胞从任何这些条件被特定的ELISA检测IL-33,没有可检测可溶性IL-33明显(图中未显示)的敏感性的ELISA (15 pg / mL,研发系统)。包含IHC染色的IL-33 C10细胞培养在体外显示,核探测IL-33如果细胞明显增加,核染色在OSM刺激(补充图3)符合IL-33染色在整个肺(图2)。确定OSM监管IL-33或ST2表达式在mRNA水平在体外C10细胞提取物被存在评估和结果显示,大约30倍和40倍增加IL-33 mRNA在6小时或72小时,分别后OSM刺激(图3 (d)),而IL-33受体链ST2 mRNA水平并没有改变(图3 (e))。

自感应IL-33蛋白质含量与STAT3的激活有关在活的有机体内和在体外(数据1和3),然后我们评估是否药物抑制STAT3 IL-33感应C10细胞的影响。在图4(一)(免疫印迹)和图4 (b)(定量测密度术),数据显示,与STAT3抑制剂Stattic预培养的细胞,或p38抑制剂SB203580,减少了信号IL-33车辆相比,独自住在6小时OSM刺激。车辆相比,ERK抑制剂PD908059, Akt抑制剂AKTX,没有调节OSM IL-33信号的感应。Stattic抑制早期OSM-induced pSTAT3水平(20分钟的时间点)的摄入量有关时尚但不影响OSM-induced phospho-p38水平(图4 (c))。缺乏pSTAT3激活与IL-33蛋白质表达水平降低(图4(一))。这支持STAT3的角色激活OSM IL-33监管水平的C10细胞。

然后我们相比OSM诱导IL-33 Th2细胞因子il - 4和IL-13的活动,以及IL-17A Th17细胞因子,在能力调节IL-33 C10细胞培养。图5(一个)表明,OSM和在较小程度上高架IL-33 IL-17A刺激信号,而il - 4, IL-13, TGFβ独自一人没有提升IL-33。结合,il - 4或IL-13没有影响OSM-induced IL-33,而IL-17A和OSM组合导致更高水平的IL-33信号相比,要么单独细胞因子。IL-33已经涉及到恶化的ECM积聚在小鼠肺被他人所示(17,18]。自从OSM, BMP-2, TGFβ是细胞因子,可以诱导ECM在各种系统中,我们测试了每一个的能力调节IL-33老鼠上皮C10细胞(图5 (b))在体外。结果表明,刺激OSM,但不是BMP-2或TGFβ,增加IL-33细胞蛋白质C10细胞溶解产物。BMP-2激活其规范的信号通路的pSMAD1/5/8升高,和TGFβ激活它的规范途径的高架pSMAD2在同一个C10细胞溶解产物。这表明,尽管这些细胞功能受体和信号,既不TGFβ也不是BMP2就可以诱导IL-33表达式。当增加细胞因子结合,TGFβ抑制IL-33感应OSM的C10细胞培养。是否类似OSM反应也明显在第二个鼠标上皮细胞系,我们评估老鼠LA-4在类似的方式。尽管IL-33信号通常是低水平LA-4细胞比10大细胞,图6(一)表明,OSM诱导IL-33蛋白质信号LA-4溶解产物,而TGFβ独自一人没有,TGFβ再次减少IL-33信号时结合OSM补充道。评估的mRNA水平的IL-33 LA-4细胞(图6 (b)显示结果符合蛋白质分析,OSM诱导IL-33 mRNA水平,TGFβ独自一人没有,TGFβ时减少IL-33 mRNA结合OSM补充道。

4所示。讨论

我们的结果表明,瞬时基因表达的OSM肺的老鼠诱发IL-33 mRNA和蛋白水平在整个肺提取在活的有机体内。肺泡2型细胞但不是IL-33血管内皮细胞表达明显升高在活的有机体内,OSM直接诱导IL-33 2型10大鼠肺泡上皮细胞在体外。IL-33感应与STAT3激活有关在活的有机体内和在体外。这是第一个识别OSM的参与者在肺癌和IL-33监管建议额外IL-33监管机制在肺部炎症和病理学。

肺部分包含IHC分析的结果和C10上皮细胞在体外表明2型肺泡细胞突出急救员在IL-33 OSM表达式。其他基质细胞如成纤维细胞、内皮细胞和平滑肌细胞表达IL-33已被证明在其他系统中,还可能导致肺总IL-33水平,虽然在这里,我们专注于肺泡2型细胞由于其强劲的响应在这个系统。其他人也表明IL-33诱导2型细胞肺肺泡炎症模型中包括的HDM模型在BALB / c小鼠过敏性气道炎症14),在肺肺泡papain-induced C57BL / 6小鼠过敏性气道炎症。最近的研究也表明,系统性的老鼠OSM的表达,使用相同的AdOSM向量这里使用但肌内管理,诱导IL-33表达肝脏内皮细胞在活的有机体内(33]。肺组织IL-33表达式是否可以修改系统性OSM海拔还不知道。在目前的工作我们无法检测IL-33 upregulation肺内皮细胞与当地肺OSM超表达(图2)。Pichery et al。20.最近表明,IL-33不是既定的表达小鼠肺内皮(IL-33疣状),但表示在某种程度上简单的立方形的C57BL / 6小鼠肺上皮细胞。我们的研究表明低/不染色的立方上皮细胞包含IHC BALB / c小鼠,这是最低限度改变过度OSM(图2)。这可能反映了技术检测系统使用上的差异或差异BALB / c和C57BL / 6小鼠IL-33的菌株在细胞表达蛋白质。此外,最近工作Sundnes et al。34)还建议重要的物种差异IL-33老鼠和人类细胞/组织之间的表达式。

我们观察到的感应IL-33 OSM蛋白质含量,但不是通过il - 6,生活,或IL-31(图3)在体外这是符合STAT3的相对激活这些细胞因子在同一细胞溶解产物。OSM诱发大量的结缔组织细胞信号通路包括统计1和3,MAPK PI3K,和PKC三角洲,这取决于电池系统检查(26,27]。明显而持久的STAT3激活是OSM的特征反应在体外和在活的有机体内(31日,35]。在这里的系统检查,药物抑制STAT3激活导致压抑IL-33归纳。其他作品表明,OSM可以在成骨细胞细胞培养和提升IL-33可能参与OSM的合成代谢活动在骨形成36]在肌肉骨骼组织;然而,STAT3的参与不了。小鼠IL-33启动子的序列搜索在NCBI核苷酸数据库中显示多个统计结合位点,这表明STAT3激活可以直接调节IL-33基因的转录,尽管确认这种机制需要进一步研究。

在测试Th2细胞因子(il - 4和IL-13)或IL-17A IL-17A增强IL-33加法结合使用时,OSM刺激C10细胞。另一方面,il - 4或IL-13没有可检测活动。在其他类似的效果是否明显肺细胞类型还有待建立,法规OSM和IL-17A肺肺成纤维细胞或平滑肌细胞目前正在调查是否OSM / IL-17A IL-33的监管是一个更一般的效果。相反,TGFβ改善IL-33水平C10以及LA-4肺泡上皮细胞在体外(数据5和6)。尽管TGF的机制β抑制IL-33肺细胞的蛋白质水平尚不清楚(我们没有观察到调制OSM-induced STAT3信号),抑制TGF IL-33表达式可能意味着另一个函数β在免疫调节功能。先前的研究显示TGFβ抑制导致IL-33增加⁺巨噬细胞和提高病理学在结肠癌治疗的DSS老鼠37];然而,基质细胞是否表达IL-33调制的研究没有显示。总的来说,我们的研究结果表明,OSM IL-33行动不是由Th2细胞因子或其他共享gp130细胞因子在小鼠肺上皮细胞。其他表明OSM强反应等趋化因子il - 4和IL-13监管eotaxin-1在其他细胞类型(32]。然而,我们的结果表明,监管IL-33似乎独立的il - 4 / IL-13和STAT6信号在小鼠肺上皮细胞。

IL-33表示为一个完整的蛋白质免疫印迹(迁移约35 kD)可裂解产生较小的亚型。细胞外全长IL-33生物活性的受体复杂成熟的形式由弹性蛋白酶裂解和组织蛋白酶G产量更小、更活跃的成熟IL-33 [38]。IL-33也可以处理在凋亡细胞凋亡蛋白酶3和8产生裂解IL-33;然而,这些亚型没有生物活性39]。免疫印迹IL-33 IL-33使我们同时评估亚型的礼物以及信号分子在细胞/组织提取物。数据表明,在10大细胞溶解产物,在整个治疗组小鼠的肺匀浆在活的有机体内,全长IL-33是高架由于OSM的主要形式。我们不能在肺匀浆或C10细胞样品中检测出IL-33物种通过免疫印迹与重组生物活性的大小成熟18日至19日kD IL-33形式(补充图2)。在长期接触检测的免疫印迹,非常小乐队低于35 kD观察肺总提取物(补充图2);然而,目前还不清楚这些裂解IL-33形式或非特异性蛋白质的物种。这样的乐队在细胞培养中没有明显的溶解产物,并明确完整形式是主要IL-33物种诱导系统。我们不能检测增加支气管肺泡灌洗(BAL)的可溶性IL-33 AdOSM——或者AdDel70-treated BALB / c小鼠或上层清液的C10 2型肺泡上皮细胞以商用ELISA(没有显示)。因此,在这个系统使用BALB / c小鼠在活的有机体内和上皮细胞来源于BALB / c小鼠在体外、成熟IL-33没有检测到。以前的工作由Luzina et al。16)表明,过度成熟的IL-33使用C57BL / 6小鼠肺腺病毒载体介导ST2-dependent嗜酸性粒细胞积累,杯状细胞增加,和更高的il - 4, IL-5,和IL-13水平,而广告向量编码完整IL-33没有(16]。我们之前的结果表明,BALB / c小鼠AdOSM不显示处理水平的提高嗜酸性粒细胞积累或Th2细胞因子(il - 4和IL-13)在落下帷幕31日),符合缺乏可溶性全长或成熟活跃IL-33存在BALB / c小鼠和/或活动在我们的系统。另一方面,我们和其他人证明OSM诱发Th2细胞因子扭曲和C57BL / 6小鼠肺嗜酸细胞增多症29日,31日]。可能这样的C57BL / 6小鼠的影响是介导的高可溶性IL-33 C57BL / 6小鼠品系,但这需要进一步的研究。

除了功能上释放和行动在ST2 / IL-1RAP受体复杂,IL-33曾显示角色作为核转录因子,可以结合染色质和规范NF-kB函数(11,12]。增加核IL-33 OSM刺激可能导致基因调控,和未来的工作使用IL-33缺乏细胞(基因敲除或siRNA击倒)可以评估这个函数。我们的研究结果也让我们建议OSM存在结合坏死细胞死亡/损坏将导致增加细胞外IL-33的释放。其他人已经表明,流感病毒感染小鼠肺导致水平的提高可溶性IL-33 [40]。Kearley et al。41)最近表明,感染小鼠上皮TC1细胞与甲型流感或RSV诱发释放immunodetectable IL-33。在慢性肺部疾病,OSM上升(IPF和严重哮喘等)28,29日],IL-33也是调节[17,22]。我们假定高架OSM IL-33增强细胞池,在结合上皮细胞损伤或死亡导致增加释放可溶性IL-33 alarmin及其后续行动。总的来说,我们的结果显示一个从事OSM-IL-33轴存在基质细胞有助于先天和炎症性疾病的机制。先天免疫功能的增强版本IL-33也可能影响正在进行的和/或随后的适应性免疫反应。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者要感谢简史密斯安和玛丽·乔·史密斯为专家提供技术援助。这项研究是由加拿大健康研究所支持(CIHR # 102565和137013年)。

补充材料