文摘
自体脂肪干细胞的临床结果(ASC)治疗多发性硬化(MS)患者的调查后一年的观察。方法。的临床和MRI结果16名RRMS患者ASC-treated spm报告后一年的随访期。结果。在18个月的随访中,一些患者显示“诱人”一些探索性的改进效果的措施,尽管受益没有观察到任何的一个重大措施在整个集团。残疾的进展和复发在任何情况下被观察到。在4名患者中,我们找到了新的钆+ (Gd +)病变MRI。我们的研究结果表明,ASC治疗是安全的,不会产生任何实质性的副作用。疾病无进展生存(PFS)的18个月的所有名RRMS患者和spm。在这些患者中,eds分数高于基准分数没有进展。Gd-enhancing病变观察与名RRMS两种情况,但这些患者没有表现出eds评分的变化。结论。鞘内对asc治疗是治疗的一个有吸引力的形式但女士应该留给患者有积极的疾病进展的情况下,对案件仍在炎症阶段,和恶性形式。
1。介绍
多发性硬化(MS)是中枢神经系统的紊乱,影响超过500000个欧洲人。患者诊断通常是在20多岁或30多岁。障碍会影响女性患者是男性的三倍,更普遍在欧洲北部1]。相关的社会成本由于其长时间,高女士的早期损失生产力,需要援助活动的日常生活,和使用免疫调节治疗。纵向以人群为基础的研究发现,50%的病人需要帮助与步行15年后女士,超过80%的患者达到一定程度的严重和永久性残疾30年后2]。女士是由自体免疫反应对自主中枢神经系统髓鞘抗原。由于免疫女士所独有的放松管制,轴突是不可逆转的损坏,导致临床症状的病人。临床上,神经系统残疾的疾病表现为复发导致功能障碍的领域中,髓鞘损伤发生。可以导致严重的女士和永久性残疾由于轴突损伤和不可逆的神经退化3]。虽然女士的原因仍然未知,目前还没有治愈,在过去的20年里,许多治疗方法被开发出来,减少复发和疾病的进展缓慢4]。然而,需要新的治疗选择。我们理解的进步的根本病机女士将有助于确定新的治疗方法可能有前途的途径的研究具有独特的作用机制。自体间充质干细胞(msc)已被证明诱导免疫调节和neuroregenerative效果和慢性的神经保护作用在动物模型实验性自身免疫性脑脊髓炎(运算单元)5,6]。
在动物身上的研究表明msc,在合适的条件下,成长为myelin-producing细胞计数器髓疾病模型[女士损失7- - - - - -10]。脂肪干细胞(对asc)是成人脂肪间充质干细胞(msc),驻留在。他们可以通过酶消化分离,已广泛应用于临床试验涉及自体和同种异体的模型:超过400个临床试验,包括MSC移植过程目前注册(https://clinicaltrials.gov/)。尽管干细胞疗法的条件之前已经测试了良好的安全业绩,很少用于MS患者报告的是可用的。本研究的目的是评估对asc的鞘内自体移植的安全性和耐受性在相对较短的一年的观察。第二端点复发率和残疾的进展评估随机化后18个月。这项研究的目的是实现局部免疫调节患者的免疫系统对asc自体移植的。
2。材料和方法
研究过程后机构审查委员会批准的20名患者复发缓和(RR)女士(13例)和次要进步(SP)女士(7例),两组患者的复发都参加了这项研究。研究了病人被诊断为复发缓和女士2013年按照麦当劳的标准。病人被诊断为次要进步女士如果他们实现阶跃恢复二极管(阶跃恢复二极管:持续减少残疾;阶跃恢复二极管定义:≥1点eds(规模扩大残疾状态)评分下降超过6个月患者eds分数≥2.0)干细胞手术前的6个月期间,没有经历复发。
ASC移植过程进行从2014年2月到2016年2月。主要包含标准增加了一点eds得分ASC植入前的一年里,有或没有新的或更大的钆- (Gd)增强MRI病灶。
除了端点安全,研究人员跟踪几个功效的结果,包括改变eds和女士功能量表得分,复发,MRI病灶的负担。
这些患者的基线临床特点总结表1。临床和神经功能评价进行了ASC过程前(基线),3个月后随机化,然后每三个月以下18个月。
神经系统评估完成当症状的病人抱怨或暗示复发迹象。神经系统评估是由相同的2神经学家。患者eds成绩稳定在24个月没有复发被认为是反应者。过程被定义为增加eds 1或更多的分。
2.1。集合包含对asc和隔离SVF
从病人的腹部脂肪组织收集并股地区使用科尔曼的技术(9),立即运送到干细胞实验室。脂肪组织是与缓冲生理盐溶液混合(PBS) 2: 1卷/期比和大力动摇了。脂肪相分离后,红色cell-containing PBS丢弃,洗“胖”过程重复3 x。随后,0.075%胶原酶在PBS添加到脂肪组织(1:2卷/卷),混合是孵化为1.5 h在37°C。每15分钟,胶原酶/脂肪混合物被摇晃混合为15秒。潜伏期后,白蛋白(20%溶液,2%最终浓度)补充说,混合物是离心机(400×g, 10分钟)。液体脂肪和盐间期被丢弃的,由此产生的细胞悬液(3毫升)过滤是一个100年μ米尼龙筛网过滤器3 x。细胞悬液洗3 x与PBS,最后细胞悬液在5毫升生理盐(临床级)补充白蛋白为2%。控制测试包括细胞数量和生存能力,不育控制和流式细胞术细胞表面标记的特征。
干细胞和组织中的所有程序进行了银行,这是认证对asc的处理和存储用于临床。
ASC-containing SVF鞘内注射(12×106细胞/剂量)招生的时候,注射是重复使用低温贮藏对asc 3和6个月。12至16个月的随访观察时间变化,和有效性参数(eds和功能量表得分,女士复发事件,MRI病灶负担,和整个大脑灰质萎缩率)是监控整个12 - 16个月的时期。
2.2。核磁共振成像
核磁共振分析包括累积新的T2病灶出现在治疗后的第一年,以及出现的时候第一个新MRI T2病灶。MRI检查在参与中心与核磁共振扫描仪操作3 T使用一个标准化的协议。对比agent-enhanced t1影像静脉注射后所有患者均获得0.1更易/公斤体重Gd-based对比剂。磁共振成像的大脑在筛选获得,在基线,后12个月。
执行的测试是符合赫尔辛基宣言,和研究协议是军事医学研究所的生命伦理委员会批准在华沙。
3所示。结果
从2014年到2015年,20个患者。所有的病人完成12和18个月的跟进,和他们中的一些人也完成了24个月的随访。中招募病人,13在RR阶段(我),而7与复发疾病的SP阶段(第二组)。病人的平均年龄为37.4岁(范围:27-58)之间的群名RRMS患者和40.6(范围:34-51)spm的患者群。
基线eds分数范围从3到6.5(平均4.6)在第一组,从3.5到9(平均5.6)在第二组。
疾病持续时间平均为9.5年,第一组和第二组的15.6。所有病人临床恶化在前一年的研究中,至少增加1点eds得分。所有的包括患者此前曾失败的治疗一线药物治疗(醋酸glatiramer interferon-b)或二、三线治疗(fingolimod, natalizumab、咪唑硫嘌呤和甲氨蝶呤)在不同的组合。
自体msc当时从脂肪组织中提取的登记,然后患者每3个月观察和检查。msc的数量从单个集合中提取的脂肪组织超过12×10的目标6细胞。细胞悬浊液的冷冻保护剂被分成部分4×106细胞/剂量和低温贮藏在干细胞银行−170°C到移植。患者接受部分细胞鞘内的3 - 6个月跟进。大多数病人收到目标剂量。
临床结果、残疾和复发。对20包括病人临床数据是可用的。
在前12个月,18例没有展览eds分数的变化,没有复发。两名RRMS组复发的患者没有改变eds分数;这些患者的MRI扫描显示新的Gd +病变(一个病人的病变是在大脑中,而在第二个病人,脑桥和延髓病变观察之一)。
在为期18个月的随访,eds分数没有改变在任何从两组的病人。在18个月的随访中,3名RRMS组复发的患者没有表现出发展残疾的基线,和7个病人显示“诱人”改进的一些探索性有效性措施,尽管没有治疗的重要好处eds观察成绩在整个集团。所有这些患者的7显示很小的进步而言,所有分数和某些其他有效性措施。总的来说,没有明显变化的这些措施,尽管这些患者中观察到持续改进贯穿整个观察期。4名患者为24个月,观察和临床状态没有改变在此期间。在ASC移植后18个月,eds分数的两个病人的spm组略低于基线值,但不是1点。
不良事件后,政府对asc没有观察到任何的患者在12 - 18岁和24个月的跟进(表1)。
4所示。讨论
有一个关键的未满足的需要开发MS患者的治疗,使修复。使用模型小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎临床前研究表明,鞘内自体造血干细胞移植(AHCT)改善神经功能,这种效应是与局部炎症反应的抑制和提供营养支持在病变部位受损细胞。结果,新的治疗策略的特点是强烈的免疫抑制女士随后AHCT提出了近年来(11]。
AHCT后发生炎症的抑制可能发挥有益的作用,减缓疾病进展,可能引起长期容忍自体抗原(12]。
近年来,全世界超过800例女士已报告的注册中心欧洲组血液和骨髓移植(EBMT)收到这种治疗过程。许多患者治疗I / II期研究,和良好的结果报告(13]。有益的免疫抑制治疗的化疗和AHCT咄咄逼人的女士,是对标准疗法是几年前。之后,主要抑制影响疾病活动指出基于大脑核磁共振成像,和过程与死亡率3%11]。在接下来的几年里,研究AHCT被用作救援治疗恶性形式的报道[女士14]。最令人印象深刻的结果患者的恶性形式AHCT对待女士都观察到核磁共振(15]。虽然这种方法的治疗似乎是非常有效的,特别是对女士选择病人,只有一个前瞻性研究与常规治疗相比AHCT[发表13]。在这项研究中,出去是优于MTX显著减少疾病进展在MRI和年度复发率(ARR):患者严重病例AHCT女士的手臂经验少79%新的T2病灶和较低的ARR患者相比MTX的手臂。
另一项研究中,间充质干细胞cell-neural祖细胞的自体骨骨髓来源的细胞群与再生潜能,鞘内注射还显示,这个治疗是安全的和MS患者的耐受性良好,没有不良事件发生(16]。
尽管观测时间短,但我们的研究结果表明,ASC鞘内治疗是安全的用于女士和减缓疾病进展。作为一个强大的抗炎和免疫抑制治疗,这种方法可能受益患者迅速进步对asc女士是一个有吸引力的候选人细胞疗法旨在阻止和逆转失去髓鞘的女士,这是最终负责进步残疾中观察到随着时间的推移,大部分的病人。然而,这项研究没有足够的力量来检测显著的临床效益,可能由于观察时间短。我们希望观察更大的下一个时期的观察治疗后的好处。尽管如此,仍有许多未知的关于如何最好地提供细胞疗法在女士,比如最好的给药途径,对体外操作的需要,和所需的剂量水平和间隔。出于这个原因,我们不认为这是一个问题,这些早期的研究并没有显示出显著的临床受益。
体内动物实验和临床观察表明,ASC治疗没有造成不利影响(10,13]这些细胞,然而,不应该移植到癌症患者因为MSC诱导血管的形成和分泌细胞因子可能刺激现有肿瘤,尽管他们不转化为癌细胞。出于这个原因,SM的招募患者必须排除这些癌症疾病共存。
我们的经验与自体间充质干细胞移植在女士对可接受的安全之间的平衡提出了疑问,功效,方便患者未来这些疗法的重要性将女士反映相关的益处和风险之间的权衡。对asc在我们看来,是一个有吸引力的候选人细胞疗法旨在阻止和逆转髓损失女士,这是最终负责大多数患者中观察到的进步的障碍。在我们看来,ASC治疗所有患者不推荐,应该留给女士积极的情况下,疾病的情况下仍然在炎症阶段,和恶性形式。
总之,没有发现18个月的eds得分差异变化之间的RR和SP MS患者组。没有任何进展发生在年底从两组患者随访,观察18个月。女士对asc的密切关注片面的前瞻性试验表明,治疗是安全的,表明它可能帮助一些病人。没有任何严重的或严重的治疗相关的不良影响。没有其他治疗相关副作用被观察到在病人鞘内注入自体对asc,并研究了安全端点。疾病无进展生存(PFS)是大多数患者18个月,没有根据不同疾病类型、性别、调节、eds得分在移植。
相互竞争的利益
作者宣称没有利益冲突。
确认
这项工作是支持的军事医学研究所,中央临床医院的国防部在华沙,Szaserow 128 Str, 04 - 141,波兰,法定批准号328年。