文摘

白介素- 18 (IL)类胰蛋白酶以前报道与哮喘,但这两个强有力的促炎的分子之间的相关性在哮喘和他们的角色在肥大细胞积累仍被知晓。使用流仪分析技术和卵清蛋白(OVA)致敏小鼠模型,发现地震的等离子体和类胰蛋白酶水平高架中度和重度哮喘,他们彼此相关。类胰蛋白酶和兴奋剂肽蛋白酶激活受体- (PAR) 2诱导的大数量的地震释放。地震和类胰蛋白酶引起肥大细胞积累的腹膜OVA-sensitized老鼠。OVA-sensitization地震-受体(R)数量的增加+肥大细胞。地震和类胰蛋白酶诱导IL-18R急剧增加+肥大细胞和平均荧光强度(MFI) IL-18R肥大细胞。此外,虽然地震感应杆的增加+肥大细胞在nonsensitized老鼠,地震和类胰蛋白酶激起了il - 4和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP) OVA-sensitized腹膜的老鼠。总之,地震之间的关系和类胰蛋白酶在哮喘患者血浆表明之间的紧密互动,应考虑anti-IL-18和antitryptase疗法的发展。之间的相互作用的地震和类胰蛋白酶可能导致哮喘的肥大细胞招聘。

1。介绍

近年来,地震-正在成为一个有吸引力的参与者参与肺部炎性疾病的发病机理1]。地震是一种促炎细胞因子,最初是作为一个发现干扰素-γ诱导因素。据报道促进生产的T辅助(h) 2细胞因子(如il - 4, IL-5 IL-9, IL-13) T细胞、NK细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞和Th2细胞发展作为代数余子式和IgE生产(1),这表明它可能参与了过敏性炎症的发病机制。此外,它是观察到地震-蛋白质和IL-18R强烈表达了致命的肺部哮喘(2),血清的地震水平显著高于在儿童哮喘3),地震-变异与哮喘严重程度显著相关4),暗示,地震可能导致哮喘的发展。然而,地震之间的相关性和等离子体的类胰蛋白酶哮喘病人没有被调查。

据报道,链格孢属提取物诱导快速释放的地震从培养正常的人类支气管上皮细胞和直接启动Th2天真的CD4细胞的分化+T细胞通过一个独特的NF -κB依赖途径(5)和il - 1的家人IL-33和地震与感应IL-13生产由肥大细胞和嗜碱粒细胞(6]。这些表明,过敏原通过地震可能引起过敏反应。此外,地震已经观察到能够诱导干扰素-的释放γ、IL-13 eotaxin ovalbumin-sensitized肺的和质疑转基因老鼠IL-13生产CD4的增加+T细胞和(气道高反应7]。然而,对地震-其他Th2细胞因子释放的影响。

肥大细胞一直是公认的主要效应细胞过敏,和积累的肥大细胞在炎症区域过敏的关键事件。据报道,IL-29能够诱导肥大细胞积累在老鼠的腹膜8]。然后我们预期的地震可能在肥大细胞积累也扮演了一定的角色。

类胰蛋白酶已经被公认为一个特定的标志肥大细胞激活和促炎介质的过敏性炎症。例如,它可以诱发炎症细胞积累(9和血管渗漏10]在活的有机体内并引发IL-13释放P815细胞(11)和肿瘤坏死因子-α、il - 6和il - 1β从外周单核细胞12]。这是发现血清中类胰蛋白酶水平(13)和支气管肺泡灌洗液(14过敏性哮喘患者的高。APC 366年,肥大细胞类胰蛋白酶的选择性抑制剂,被发现显著减少的大小antigen-induced晚过敏反应(政治)在过敏性哮喘患者短期重复管理,支持肥大细胞类胰蛋白酶的作用在病理生理学的守护神15]。这些观测结果强烈表明,类胰蛋白酶可能是一个关键的促炎介质参与过敏性哮喘的发病机制。

为了进一步理解类胰蛋白酶过敏性哮喘的贡献我们调查的影响地震释放类胰蛋白酶和活动在当前的研究中。当前研究的目的是调查地震的相关性在过敏性哮喘、类胰蛋白酶的作用的地震和肥大细胞类胰蛋白酶积累和Th2细胞因子释放,和地震之间的交互和类胰蛋白酶。

2。材料和方法

2.1。试剂

下列化合物从Sigma-Aldrich购买(圣路易斯,密苏里州,美国):亮抑酶肽,抑肽酶,咆哮,卵巢(ⅴ)和台盼蓝。鼠标il - 4和TSLP酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒,FITC共轭anti-mouse CCR3, Alexa萤石®647共轭anti-mouse CCR3,和PE-Cy7共轭anti-mouse HLA-DR抗体由BioLegend(美国圣地亚哥);FITC共轭anti-mouse杆抗体来自圣克鲁兹(圣克鲁斯,美国)。重组人类肺β类胰蛋白酶是从Promega(美国威斯康辛州)。氢氧化铝(Al (OH)3)凝胶辅助是从Brenntag Biosector (Frederikssund、丹麦)。人工地震,鼠标地震- ELISA试剂盒,APC共轭anti-mouse IL-18R,重组鼠标的地震和购买从研发系统(明尼阿波利斯,美国)。Cytofix / Cytoperm™固定/透化作用板得到BD Pharmingen生物科技公司(美国贝德福德,MA)。人类类胰蛋白酶酶联免疫试剂盒是Cloud-Clone(美国休斯顿)。过敏原皮肤戳破测试由ALK-Abello, Inc .(丹麦)。活跃的序列和反向肽蛋白酶激活受体- 2 trans-cinnamoyl-Leu-Ile-Gly-Arg-Leu-Orn-amide (tc-LIGRLO-NH (PAR)2)和trans-cinnamoyl-Orn-Leu-Arg-Gly-Ile-Leu-amide (tc-OLRGIL-NH2),Ser-Leu-Ile-Gly-Arg-Leu-NH2(SLIGRL-NH2),Leu-Arg-Gly-Ile-Leu-Ser-NH2(LRGILS-NH2);杆拮抗剂肽Phe-Ser-Leu-Leu-Arg-Tyr-NH2(FSLLRY-NH2)合成了CL Bio-Scientific Inc .(西安,中国)。大部分的通用化学品如盐和缓冲组件均为分析纯。

2.2。主题和动物

共有63名过敏性哮喘和22个健康控制(HC)研究中受试者招募。表1总结了一般特征的补充。网上(见补充材料http://dx.doi.org/10.1155/2016/4743176过敏性哮喘的诊断标准符合哮喘的全球倡议[16]。所有轻度哮喘病人被要求去制止antiallergy药物治疗前至少2周参加这项研究(那些无法阻止antiallergy药物被排除在外)。招募病人呼吸道感染没有任何超过一个月。从每个主题得到书面知情同意。伦理委员会批准的实验过程是在辽宁医科大学和沈阳军区总医院。

雄性BALB / c小鼠从至关重要的河(在18到22岁的g)得到实验动物科技有限公司有限公司(中国,北京)(证书号11400700056942/11400700056944/11400700056945/11400700056947)。动物繁殖和饲养在严格的伦理条件下根据国际建议。他们被安置在动物实验中心辽宁医科大学第一附属医院在一个特定的无菌环境中免费获取标准啮齿动物食物和水,在一个恒定的温度23-28°C和60 - 75%的相对湿度。动物实验过程是在辽宁医科大学动物保健委员会批准。

2.3。血液采集

入院后立即(急性恶化阶段),某些病人的血液被收集。血液从HC主题收集门诊。从每个个体,10毫升的外周血被带进一个包含管EDTA在450 g离心之前10分钟。等离子体是收集和冻结在−80°C到使用。

2.4。小鼠腹腔注射

这个过程主要是采用从前面描述的他et al。9]。简单地说,类胰蛋白酶或不亮抑酶肽和抑肽酶,地震在IL-18BP的存在与否,不同浓度的咆哮,tc-LIGRLO-NH2,tc-OLRGIL-NH2,SLIGRL-NH2,LRGILS-NH2,FSLLRY-NH2或生理盐水(NS)成交在0.5毫升注射到老鼠的腹膜2或4 h。老鼠然后牺牲他们的腹膜灌洗是收集和处理。细胞resuspended流仪分析肥大细胞,和上层清液储存在−80°C到使用。

2.5。小鼠致敏和挑战

小鼠致敏天0、7、14、21的皮下多点注射50μg卵子和1.5毫克的Al (OH)3悬浮在NS总量的0.5毫升。Nonsensitized控制动物只有同等体积(0.5毫升)的NS在相同的日子。25天,致敏小鼠腹腔内注射的挑战0.5毫升的不同浓度的地震有或没有IL-18BP和类胰蛋白酶或没有FSLLRY-NH2。在2或4 h后注入,动物被杀,他们收集腹膜灌洗进行分析。

2.6。流仪分析IL-18R和杆肥大细胞表达

探测IL-18R和杆表情肥大细胞在小鼠的腹腔灌洗,腹膜细胞被固定用Cytofix / Cytoperm装备根据制造商的指示。APC共轭anti-mouse IL-18R, FITC共轭anti-mouse CCR3,和PE-Cy7共轭anti-mouse HLA-DR或FITC共轭anti-mouse杆,Alexa萤石647共轭anti-mouse CCR3,和PE-Cy7共轭anti-mouse HLA-DR添加了抗体,分别在4°C 30分钟。洗后,细胞在fluorescence-activated resuspended细胞排序——(流式细胞仪)流解决方案和分析FACSVerse流式细胞分析仪(BD生物科学,圣何塞,CA)。50000事件对每个样本进行了分析。数据分析与CellQuest软件(美国BD Immunocytometry系统)。

2.7。确定水平的细胞因子和类胰蛋白酶

水平的人工地震和类胰蛋白酶,鼠标的地震,il - 4, TSLP用ELISA试剂盒测定根据制造商的指示。

2.8。统计数据

统计分析采用SPSS软件(版本17.0,IBM公司)。数据显示箱线图,这表明中值,四分位范围,最高和最低值的实验表明。血清水平的地震或类胰蛋白酶的散点图。而克鲁斯卡尔-沃利斯表示组间显著差异分析,预先计划的比较感兴趣的,Mann-Whitney配对 测试工作。对所有分析, 被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。高浓度的地震和哮喘类胰蛋白酶等离子体

观察之前,地震-蛋白质和地震-受体强烈表达了致命的肺部哮喘(2),但还没有调查地震之间的关系和类胰蛋白酶。使用ELISA试剂盒,我们观察到的地震水平在中度和重度的等离子体而不是轻微的哮喘与HC受试者相比升高(图1(一))。同样,中度和重度哮喘的等离子体的类胰蛋白酶水平是高于HC(图1 (b))。这是明显注意到地震与哮喘类胰蛋白酶(表1和2)。

表1
等级相关(斯皮尔曼相关系数)之间的等离子体水平的地震和类胰蛋白酶的中度哮喘。
表2
等级相关(斯皮尔曼相关系数)等离子体水平的地震和类胰蛋白酶之间严重的哮喘。
(一)
(一)
(b)
(b)
图1
散点图的水平(a)的地震和(b)等离子体类胰蛋白酶的哮喘。每个符号代表的值从1主题。中位数的值表示一条水平线。
3.2。诱导地震释放类胰蛋白酶和杆兴奋剂肽腹膜的老鼠

高浓度的等离子体的地震类胰蛋白酶和地震之间的显著相关类胰蛋白酶在哮喘可能有某些地震之间的关系和类胰蛋白酶。由于类胰蛋白酶是专门从肥大细胞脱粒和肥大细胞释放的主要效应细胞过敏,我们预期的地震水平升高可能是由于类胰蛋白酶。使用鼠标腹膜模型,我们发现类胰蛋白酶为1.0μg / mL和受体激动剂杆tc-LIGRLO-NH2在50和500μM和SLIGRL-NH2在50和500μM诱发地震释放的大数量的小鼠腹膜4 h后注入(图2(一个))。类胰蛋白酶诱发地震释放被亮抑酶肽抑制,抑肽酶,杆拮抗剂肽FSLLRY-NH2(图2(一个)),暗示类胰蛋白酶的作用可能依赖和杆介导的酶活性。相反的肽tc-OLRGIL-NH2和LRGILS-NH2在测试浓度没有影响的地震释放(数据未显示)。结果表明,类胰蛋白酶敏感没有显著影响诱导地震-分泌2和4 h后注入(图2 (b))。

(一)
(一)
(b)
(b)
图2
诱导的小鼠腹膜地震释放的类胰蛋白酶(Tryp,μg / mL)和杆的受体激动剂。(一)Nonsensitized老鼠对待Tryp有或没有其抑制剂抑肽酶(μg / mL)和亮抑酶肽(μtc-LIGRLO-NH g / mL)2(μ米),tc-OLRGIL-NH2(μ米),SLIGRL-NH2(μ米),LRGILS-NH2(μ米),或者FSLLRY-NH2(目前,μ为4 h M);(b) OVA-sensitized和nonsensitized老鼠对待Tryp有或没有目前2或4 h。 与相应的生理盐水(NS)组。 与相应的刺激组。
3.3。诱导的肥大细胞积累的小鼠腹膜的地震和类胰蛋白酶

水平的提高类胰蛋白酶与肥大细胞的数量可能会增加哮喘。因此我们对地震的影响和对肥大细胞类胰蛋白酶积累在老鼠身上。结果表明,肥大细胞的数量的腹膜OVA-sensitized老鼠是97和106%高于nonsensitized老鼠(数字3(一个)和3 (b))。它观察到地震- 10 ng / mL诱导增加约1.6——1.5倍的肥大细胞数量的腹膜OVA-sensitized nonsensitized小鼠,分别为(数字3(一个)和3 (b))。同样,类胰蛋白酶感应到1.5 - 1.4倍OVA-sensitized肥大细胞数量的增加和nonsensitized老鼠2 h和1.7 - 2.4倍OVA-sensitized肥大细胞数量的增加和nonsensitized小鼠4 h后注入,分别为(数字3 (c)和3 (d))。FSLLRY-NH2抑制诱导肥大细胞类胰蛋白酶积累的时候同时注射类胰蛋白酶为2和4 h。

(一)
(一)
(b)
(b)
(c)
(c)
(d)
(d)
图3
流仪分析地震(ng / mL)和类胰蛋白酶(Tryp,μg / mL)诱导肥大细胞(CCR3+HLA-DR−细胞)积累的腹膜OVA-sensitized或nonsensitized老鼠。((a)和(c))代表地震和Tryp诱导肥大细胞积累的图;(b)的变化总腹膜细胞的肥大细胞的百分比由地震引发的存在与否IL-18BP (ng / mL);(d)肥大细胞的百分比变化引起的Tryp FSLLRY-NH的存在与否2(目前,μ米)。 与相应的nonsensitized老鼠。 与相应的生理盐水(NS)组。 与相应的刺激组。
3.4。诱导小鼠肥大细胞的调节表达IL-18R地震

了解地震的潜在机制诱导肥大细胞积累,我们检查了IL-18R和杆表达地震引起的肥大细胞。结果表明,OVA-sensitization IL-18R的数量明显增加+肥大细胞在小鼠腹膜2和4 h后注入。地震- 1.0和10 ng / mL诱导IL-18R增长45.5和63.6%+肥大细胞分别在nonsensitized小鼠腹膜2 h后注入。地震- 10 ng / mL IL-18R的数量几乎没有影响+肥大细胞在4 h后注入(数字4(一)和4 (b))。然而,地震(10 ng / mL)引起显著增强的平均荧光强度(MFI) IL-18R OVA-sensitized肥大细胞的小鼠在注射后2和4 h。1.0分,10 ng / mL,地震对肥大细胞增强的MFI IL-18R nonsensitized老鼠了21.1和39.1%,分别在2 h后注入(数字4 (c)和4 (d))。IL-18BP能够抑制地震IL-18R在肥大细胞的诱导表达。

(一)
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(b)
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(c)
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(d)
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图4
流仪分析地震(ng / mL)诱导表达地震-受体(IL-18R肥大细胞(CCR3)+HLA-DR−细胞)腹膜OVA-sensitized或nonsensitized老鼠。((a)和(c))代表图IL-18R的比例+肥大细胞和平均荧光强度(MFI) IL-18R肥大细胞,分别;(b) IL-18R的百分比的变化+总腹腔肥大细胞的肥大细胞的存在与否由地震引发IL-18BP (ng / mL);(d)的MFI变化IL-18R在肥大细胞由地震引发的。 与相应的nonsensitized老鼠。 与相应的生理盐水(NS)组。 与相应的刺激组。
3.5。诱导调节IL-18R表情小鼠肥大细胞类胰蛋白酶

证明之前,类胰蛋白酶能激活肥大细胞通过杆依赖机制(17]。因此,我们预期在肥大细胞类胰蛋白酶也可能影响IL-18R表达式。使用鼠标腹膜模型,我们表明,类胰蛋白酶在0.1和1.0μg / mL IL-18R激起增加+肥大细胞在nonsensitized但不是OVA-sensitized小鼠腹膜2和4 h后注入(数字5(一个)和5 (b))。在肥大细胞类胰蛋白酶引起也增强了MFI IL-18R从nonsensitized老鼠2 h和致敏小鼠4 h后注入(数字5 (c)和5 (d))。自从FSLLRY-NH2抑制类胰蛋白酶的诱导upregulation IL-18R表达式(数字5 (b),5 (c),5 (d)),类胰蛋白酶的作用似乎依赖于杆的。

(一)
(一)
(b)
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(c)
(c)
(d)
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图5
流仪分析类胰蛋白酶(Trypμg / mL)诱导表达地震-受体(IL-18R肥大细胞(CCR3)+HLA-DR−细胞)腹膜OVA-sensitized或nonsensitized老鼠。((a)和(c))代表图IL-18R的比例+肥大细胞和平均荧光强度(MFI) IL-18R肥大细胞,分别;(b) IL-18R的百分比的变化+总腹腔肥大细胞的肥大细胞引发的Tryp FSLLRY-NH的存在与否2(目前,μ米);(d)的MFI变化IL-18R Tryp肥大细胞引起。 与相应的nonsensitized老鼠。 与相应的生理盐水(NS)组。 与相应的刺激组。
3.6。诱导改变杆表情鼠标由地震-肥大细胞

进一步了解地震的行为在肥大细胞,我们调查的影响地震杆表达小鼠肥大细胞。虽然敏感对杆的数量几乎没有影响+肥大细胞(图6(一)和6 (b)),它明显调节杆表达式的MFI肥大细胞在2 h后注入(数字6 (c)和6 (d))。地震- 10 ng / mL诱导增加杆+肥大细胞nonsensitized小鼠4 h后注入(数字6(一)和6 (b))。

(一)
(一)
(b)
(b)
(c)
(c)
(d)
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图6
流仪分析地震(ng / mL)诱导表达蛋白酶激活受体- 2 (PAR)肥大细胞(CCR3+HLA-DR−细胞)腹膜OVA-sensitized或nonsensitized老鼠。((a)和(c))代表图杆的比例+肥大细胞和平均荧光强度(MFI)的杆柱状细胞,分别;(b)杆的百分比的变化+总腹腔肥大细胞的肥大细胞的存在与否由地震引发IL-18BP (ng / mL);(d) MFI变化的杆柱状细胞由地震引发的。 与相应的nonsensitized老鼠。 与相应的生理盐水(NS)组。 与相应的刺激组。
3.7。诱导改变杆表情小鼠肥大细胞类胰蛋白酶

类胰蛋白酶为0.1和1.0μg / mL似乎减少杆的表达式从OVA-sensitized但不是nonsensitized小鼠肥大细胞在2 h后注入(数字7(一)和7 (b))。然而,FSLLRY-NH2几乎没有对杆的表情肥大细胞的影响。

(一)
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(b)
(b)
图7
流仪分析类胰蛋白酶(Trypμg / mL)诱导表达蛋白酶激活受体- 2 (PAR)肥大细胞(CCR3+HLA-DR−细胞)腹膜OVA-sensitized或nonsensitized老鼠。(一)代表图的平均荧光强度(MFI)的杆柱状细胞;(b)杆的MFI变化Tryp肥大细胞。 与相应的nonsensitized老鼠。 与相应的生理盐水(NS)组。
3.8。诱导的小鼠腹膜Th2细胞因子释放的地震和类胰蛋白酶

据报道之前,Th2细胞因子参与肥大细胞迁移。因此,il - 4被确认为肥大细胞chemotaxin [18)和il - 10强烈降低RANTES-induced肥大细胞迁移和完全抑制肥大细胞迁移反应肿瘤坏死因子(19]。TSLP是促进Th2细胞相关炎症诱导的肥大细胞的增殖和分化的骨髓祖细胞(20.]。因为地震,引起肥大细胞类胰蛋白酶积累可能导致增加Th2细胞因子的影响我们对地震和Th2细胞因子释放类胰蛋白酶腹膜的老鼠。结果表明,il - 4水平的腹膜nonsensitized老鼠几乎可检测不管注入的地震,类胰蛋白酶或NS。然而,OVA-sensitization显著增强il - 4版本(103.3倍)腹膜的老鼠。地震- 10 ng / mL诱导释放il - 4的大约192%和42.2增长的腹膜OVA-sensitized小鼠在注射后2和4 h。相比之下,类胰蛋白酶为1.0μg / mL引发的3.7 - 2.8倍增加il - 4的腹膜OVA-sensitized老鼠在2和4 h后注入(图8(一个))。

(一)
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(b)
(b)
图8
地震和类胰蛋白酶(Tryp)诱导il - 4 (a)和胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP) (b)释放的腹膜OVA-sensitized或nonsensitized老鼠。老鼠的地震处理(ng / mL)的存在与否IL-18BP (ng / mL), Tryp (μ有或没有FSLLRY-NH g / mL)2(目前,μ米)为2和4 h ELISA分析腹膜灌洗之前被收集。数据显示箱线图,这表明中值,最大的和最小的四分位范围以外的值异常值(胡须)。每一块的数据代表一组6 - 7的动物。 与相应的nonsensitized老鼠。 与相应的生理盐水(NS)组。 与相应的刺激组。

同样,地震诱发TSLP释放增加到大约2.3倍的腹膜OVA-sensitized小鼠在注射后2和4 h。在平行实验中,类胰蛋白酶惹了大约1.8倍的增加TSLP在OVA-sensitized小鼠腹膜2和4 h后注入(图8 (b))。此外,地震-但不是类胰蛋白酶诱导TSLP水平增加到1.8倍nonsensitized老鼠2 h后注入(图8 (b))。注意到地震诱发和tryptase-provoked细胞因子释放被IL-18BP和FSLLRY-NH抑制2分别时coinjected腹膜的老鼠。

4所示。讨论

我们已经证明了等离子体水平的地震,促炎细胞因子,类胰蛋白酶,一个独特的肥大细胞脱颗粒标记,高架在录取阶段,中度和重度成人过敏性哮喘,确认这两个强有力的促炎的分子可能会导致过敏性哮喘的进展。因为地震(4和类胰蛋白酶21)就已经观察到在哮喘和等离子体水平上发挥了关键作用在哮喘相关性好,必须有一些密切的相互作用。的确,我们目前发现的地震引起肥大细胞积累,调节IL-18R和杆肥大细胞的表达,小鼠腹膜和Th2细胞因子释放的类胰蛋白酶能引发地震释放,肥大细胞积累,调节表达IL-18R, Th2细胞因子释放强烈建议的地震之间的交互和类胰蛋白酶在过敏性哮喘可能发挥关键作用。更重要的是,我们目前的工作可能会提供一个示例,细胞因子和炎症介质之间的相互作用可以比个人更重要的细胞因子或中介独自在过敏性炎症的发病机制包括过敏性哮喘。

首次发现,类胰蛋白酶能引发地震释放在小鼠腹膜,表明这个肥大细胞通过地震-丝氨酸蛋白酶可能导致过敏性炎症。因为许多细胞类型包括角质细胞、皮肤巨噬细胞和树突状细胞能够产生的地震(22),我们不追求资源的地震被释放在目前的研究。然而,引发的类胰蛋白酶的感应能力和MCP-1释放内皮细胞(23[],IL-13释放P815细胞11),肿瘤坏死因子-α、il - 6和il - 1β从外周单核细胞12,引发从肥大细胞释放24可能支持我们的观察,类胰蛋白酶能释放引起的地震。而直接证据类胰蛋白酶促进地震-缺乏行动,报告说,人类肥大细胞chymase,柱状细胞丝氨酸蛋白酶,迅速裂解重组pro-IL-18 56-phenylalanine和生产生物活性的地震片段(25)也可以帮助理解地震-类胰蛋白酶的作用。看来对类胰蛋白酶诱发地震释放OVA-sensitization几乎没有影响,这表明事件并不是老鼠的过敏原相关的挑战。

诱导的肥大细胞积累的地震是一个重要的发现肥大细胞是过敏的主要区细胞(26),大数量的细胞类型需要启动涉及组织的病理损害。细胞因子诱导肥大细胞积累或迁移包括eotaxin的交互,咆哮,MCP-1 CCR3肥大细胞负责招聘的这些细胞(27];il - 6 (28)和肿瘤坏死因子(29日)刺激肥大细胞的迁移层粘连蛋白和自洽场本身能够诱导肥大细胞的迁移通过其受体c - kit (30.]。这些报告可能支持我们目前发现肥大细胞积累可以由地震引发的。报告,IL-18-dependent提示肥大细胞增多症和肥大细胞激活是重要的寄生虫驱逐(31日)也可以支持目前的发现。OVA-sensitization似乎增强肥大细胞积累地震的存在与否无关。诱导的肥大细胞积累OVA-sensitization报道之前(32],它可能支持我们当前的观测。

类胰蛋白酶似乎引起肥大细胞积累。肥大细胞类胰蛋白酶是一个独特的产品以来,诱导肥大细胞类胰蛋白酶可能代表一个self-amplification积累机制,肥大细胞释放类胰蛋白酶和类胰蛋白酶释放积累其他的肥大细胞。尽管类胰蛋白酶的作用至少部分通过激活的杆,很明显,需要进一步研究来证实这种self-amplification机制。产品报告,肥大细胞组胺诱发小鼠肥大细胞的趋化作用组胺H4受体(33拥堵的),已被确认为一种强有力的化学引诱物的肥大细胞(34]可能支持我们当前的观测。

地震-诱导肥大细胞积累似乎通过上调表达的能力IL-18R肥大细胞上的地震能够提高表达IL-18R肥大细胞和IL-18BP能够阻止地震-诱导肥大细胞积累。尽管缺乏直接证据IL-18R介导肥大细胞迁移,地震的报道吸引了血浆树突细胞(dc2)通过IL-18R表达式[35),地震诱发自身受体表达和增强IL-18R / Nox1绑定和平滑肌细胞迁移36)可能有助于我们理解IL-18R肥大细胞介导的积累。OVA-sensitization似乎增强IL-18R +肥大细胞的数量,但几乎没有影响的MFI IL-18R地震引起的肥大细胞或类胰蛋白酶,表明IL-18R在肥大细胞的密度不是被OVA-sensitization改变。

此外,地震诱发upregulation杆的表情肥大细胞可能通过杆强化诱导肥大细胞类胰蛋白酶积累。直接证据在杆柱状细胞介导的积累不可用,肥大细胞类胰蛋白酶引起嗜酸性粒细胞招募的观察老鼠的胸膜腔通过杆(37),杆诱导胰腺癌细胞的迁移38]可能支持我们当前的发现。与肥大细胞IL-18R表情相反,OVA-sensitization似乎对杆的数量几乎没有影响+肥大细胞但增强的MFI杆肥大细胞,表明杆的密度OVA-sensitization肥大细胞可以被更改。

诱导il - 4和TSLP释放的地震在老鼠的腹膜牵连到的地震不仅直接诱导肥大细胞积累,但也间接引起肥大细胞招聘引发il - 4和TSLP释放il - 4报道诱导人类脐带血液同型的聚合肥大细胞的自洽场和il - 6 (39,TSLP发现与结膜上皮细胞的肥大细胞的数量比边缘角膜结膜炎患者(40]。

对于地震,诱导il - 4释放类胰蛋白酶通过杆介导机制这类胰蛋白酶可能也间接诱导肥大细胞积累诱发释放il - 4。il - 4的发布的报告关于归纳法和调节杆的P815肥大细胞的表达gm - csf (41)可能会支持我们的观点。自从TSLP能够诱导肥大细胞的增殖和分化的骨髓祖细胞(20.),影响柱状细胞生长、生存和中介发布(42),我们预计这个Th2细胞因子应该有能力提高腹膜肥大细胞数量的老鼠。

总之,地震之间的关系和类胰蛋白酶的等离子体过敏性哮喘患者建议它们之间潜在的联系。鼠标在活的有机体内模型中使用目前的研究证实,肥大细胞可能发挥关键作用之间的相互影响的地震和类胰蛋白酶。更重要的是,我们目前的工作可能会提供一个示例,细胞因子和炎症介质之间的相互作用可以比个人更重要的细胞因子或中介独自在过敏性炎症的发病机制包括过敏性哮喘,这可能有助于解释为什么有些特定anticytokine或antimediator化合物不是有效的治疗哮喘。

相互竞争的利益

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

王为骨干和Huiyun张同样研究作出贡献。

确认

这个项目由拨款赞助的“十二五”国家科技支撑计划(2014 bai07b02),中国国家自然科学基金(号。81172836,81471592,81472016),重大科技平台,辽宁省高等教育机构(2014168),国家自然科学基金委辽宁省(2014022027),辽宁高校创新研究团队项目(LNIRT LT2013017),攀登学者辽宁省高等教育项目(2013222)、过敏性疾病转化医学研究中心辽宁省(201341),辽宁省级工程研究中心的诊断和治疗炎症性疾病(20141093),辽宁省医院临床能力建设项目(lnccc - a06 - 2014)和“十二五”公益行业特殊的科研项目(2015 sq00136)。

补充材料

共有63名过敏性哮喘和22个健康控制(HC)研究中受试者招募。他们的一般特征表S1中总结。

  1. 补充材料