文摘
背景。有几个循环生物标志物参与预测皮肤黑色素瘤的临床结果。血清/血浆维生素D状态的标记集中研究这种类型的皮肤癌症。验证的结合血清生物标志物(如LDH)与新生物标记物,如引发血管生成因子,和维生素D的研究仍在黎明。因此,我们的目标是建立炎症指标的预测能力,如引发和代谢,如维生素d这些候选标志物是一个旨在帮助古典生物标记,如LDH、皮肤黑色素瘤的预后。方法。在黑色素瘤患者血清维生素D和引发量化和匹配的健康对照组。结果。平均血清维生素D浓度显著降低()在黑色素瘤患者与健康对照组相比,在大约65%的患者调查已经证明严重循环缺乏这种维生素。引发被发现增加(在黑色素瘤患者相比控制。结论。Upregulation proangiogenic因素与维生素D缺乏未来可以被证明是有效的生物标志物的候选人,加强古典LDH的预测能力。
1。介绍
大量的科学信息已经收集关于“维生素D /癌症假说”(1]。太阳辐射是一个环境因素,可以触发皮肤黑色素瘤的一方面,而阳光照射诱发skin-mediated合成维生素D3,另一方面。有丰富的赞成和回顾性流行病学研究表明,人体内25 -羟维生素D3低血清(25 (OH) D)浓度可能与大肠癌相关(2)、肺(3),和乳房4癌症和各种其他类型的癌症5]。本协会相关有显著增加患最严重的疾病的发展和整体预后不良(6]。除了这些研究,也有一些报告显示高血清25 (OH) D协会癌症发病率较低(7]。
考虑所有的收集信息关于皮肤黑色素瘤的发展,我们已经开始着手研究基础血清25 (OH) D水平患者诊断为皮肤的黑色素瘤。知道没有完美的多功能生物标志物,“我们一直在研究血清25 (OH) D水平与经典关联验证的LDH和更新的候选人,比如proangiogenic细胞因子引发。
选择未来的生物标志物。有几个原因,我们选择了参数在黑色素瘤患者和突出显示的原因。
Interleukin-8(引发),描述了近20年前,是免疫细胞产生的细胞因子(单核细胞、巨噬细胞)以及多发地细胞(内皮细胞,角质细胞,黑色素细胞和软骨细胞)和肿瘤细胞8]。引发特别激活中性粒细胞有很强的能力,诱导细胞内钙升高,活性氧生成、趋化性、粘附分子表达的增强。角化细胞应对tnf的行动引发合成增加。引发分泌与其他趋化因子的分泌增加MCP-1和IP-10通过NFkappaB激活(9]。
引发是由一些肿瘤细胞,因此其功能包括调节肿瘤血管生成和免疫反应。引发,连同其他趋化因子,如CXCL-1产生的黑色素瘤,有很强的影响主要肿瘤进展(10),能够显著刺激培养的角质细胞角蛋白8表达式(11]。
过度引发的肿瘤细胞似乎是由肿瘤产生的缺氧。引发过度增加CXCR1 CXCR2表达于肿瘤细胞,内皮细胞,免疫相关细胞(中性粒细胞和巨噬细胞)的居民在肿瘤组织12]。
早期的研究表明,在黑素瘤细胞系,1α,25-Dihydroxyvitamin D3(骨化三醇)压抑引发诱导的启动子活性肿瘤坏死因子-α(tnf)。这种效果是符合一个由tnf引发释放和引发的mRNA水平。然而,这些早期的研究表明,维生素D3代谢物,它能够transactivate古典响应元素,维生素D有能力抑制引发剂激活。这一发现表明,镇压介导通过维生素D受体(VDR) [13]。
进一步,它已经表明,20-hydroxyvitamin D (2) [20 (OH) D(2)]抑制DNA合成在表皮角化细胞和黑色素瘤细胞。使黑色素细胞比正常的黑色素细胞更敏感。noncalcemic模拟的维生素D, 20 (OH) D(2),证明了程控抗增殖和prodifferentiation活动通过激活VDR的依赖,没有可检测有毒calcemic活动(14]。随后的研究表明,实际上黑色素瘤细胞表达VDR和新见解背后的分子机制1、25 (OH) D(2)(3)灵敏的黑色素瘤细胞被出版。黑色素瘤细胞反应1,25 (OH)(2)(3)对应于VDR mRNA的表达水平,进而可能受VDR小分子核糖核酸或表观遗传调节药物(15]。最近,在一个大型德国患者队列诊断为皮肤黑素瘤,这是强调减少25 (OH) D水平增加肿瘤厚度和先进的肿瘤阶段(16]。
乳酸脱氢酶(LDH)是一个验证血清生物标志物评估(风险转移17- - - - - -20.),它实际上评估组织泄漏引起肿瘤的生长和转移。的协会组织LDH泄漏引起的皮肤损伤mRNA报道引发水平的增加(21]。
根据更新后的信息,为了提高生物标志物的面板可以诊断和预测皮肤黑色素瘤的结果,我们有调查,25 (OH) D治疗黑色素瘤患者的血清浓度与经典关联血清生物标志物LDH和可能的新的生物标志物,如引发。
2。材料和方法
2.1。病人
88例(57岁女性和31岁男性)诊断为皮肤黑色素瘤根据与[22]监控了2年。后的结果提出诊断和治疗没有安装。诊断后得到应用与标准。注册病人如下:克拉克II(19.3%)、克拉克III(37.5%)、克拉克静脉(25%)、和克拉克V (18.2%)。女性和男性的患病率被我们之前强调23)连续登记的黑色素瘤患者显示平均75%的女性在整个注册组相比,80%的女性在这个研究。这个数据显示,欧盟还皮肤黑色素瘤的发病率女性(24]。
2.2。健康受试者
健康受试者包括同等数量的受试者(55岁女性和33岁的男性)和选择从同一地理区域的患者(Bucureşti、ArgeşDimbovița,朱尔朱,Călăraşi, Constanța, Prahova, Ialomița,和Teleorman)。
患者和健康者提供了他们的书面知情同意。研究同意过程涉及医院的伦理委员会批准。所有指定的专门机构伦理委员会批准了这项研究(肾脏学医院的伦理委员会”博士。卡罗尔·戴维拉“布加勒斯特,罗马尼亚;SKINMED诊所,布加勒斯特,罗马尼亚;“维克多美女”的病理学研究所的传染病和热带疾病。”维克多Babeş”)。
提出了研究的纳入和排除标准中描述表1。
2.3。生物样本
从病人和健康受试者血液和血清分离标准条件(25]。
血清的量化25-OH维生素D。量化进行ELISA使用Euroimmun工具包(26]。这项技术有一个1.6 ng / mL敏感性25-OH维生素D2和D3和没有交叉反应24日25 (OH)2维生素D3、维生素D2(钙化醇),维生素D3(维生素D3)。短暂,anti-25-OH维生素D3抗体检测25-OH维生素D3表示由过氧化物酶活动的存在,测量衬底OD在450海里。结果表示为ng / mL或nmol / L,在以下公式:25-OH维生素D3 (ng / mL)×2.5 = 25-OH维生素D3 (nmol / L)。
2.4。血清量化的引发
量化进行了使用恩佐生命科学设备,与ELISA检测极限为0.64 pg / mL [27]。
2.5。血清乳酸脱氢酶
使用标准的光度(LDH)量化方法(人工诊断)和U L表达的结果−1。
2.6。标准实验室评估
血液学和一般生物化学进行评估在自动生化分析仪。
2.7。统计数据
SPSS程序被用于数据分析;比较了使用学生的以及对。几个比较,方差分析multiparametric测试使用。建立了相关使用线性回归和皮尔逊相关性。结果提出了均值与标准差和流行,正常人的比例/患者特定的参数。
3所示。结果
提出了总体调查患者的生化参数表2。看到,脂质之间没有显著差异,甘油三酸酯,胆红素、钙血症,phosphatemia,碱性磷酸酶,iPTH, CRP, calciuria患者相比,控制。
而标准的生化参数没有改变黑素瘤组,血清LDH、引发和维生素D3在统计上是显著不同(数字1和2)。
控制引发血清值匹配我们先前发表的报告(23),而病人值升高相比我们的以前的报告。这些差异驻留在不同的患者群体人口在不同的使用方法,其次ELISA和多路复用技术。病人的血清引发值匹配的整体范围先前发表在使用ELISA检测方法(28]。
血清LDH统计增加患者组相比,控制。一般接受参考血清LDH水平是在135 - 450 U L−1。63.63%调查情况下,注册参考电平值,而其他36.37%的情况下高于参考水平。控制,97.73%证明血清LDH值参考域。
关于血清引发浓度,84.1%调查情况下高值,而只有15.9%的人在参考域值。在控制,99%的捐助者低于15.0 pg毫升−1引发的血清浓度。
25-OH维生素D3的血清水平深受年龄、性别、饮食、个人的地理位置,阳光照射,等等。仍没有共识关于所谓正常价值范围血清25-OH维生素D3。我们选择健康个体从不同地理区域在罗马尼亚,南部地区和山区低。健康的捐赠者选择匹配相同的geo /人口和饮食生活方式的病人。因此,正常的价值观,我们现在所最优正常成熟女性价值观的调查患者组18 - 45岁范围内,没有声称这是罗马尼亚总人口的最佳射程。
见图2和表3,患者有明确缺乏维生素D3控制相比,平均比健康人减少近50%。超过50%的正常捐助者25-OH维生素D3水平低(小于30 ng毫升−1、表3)。
从收集的数据和表3我们已经生成的数据3,4,5描述子组显示低、中、正常,高血清浓度的维生素D3。缺乏维生素D3在黑色素瘤患者有更高的患病率;只有8.0%显示一个最佳水平(ng范围30 - 50毫升−1),而92.0%的血清水平较低(图3)。
确定缺陷与修改在黑色素瘤患者血清LDH和引发的。因此,之间存在着负相关血清25-OH维生素D3和引发(,)和LDH (,)。在控制,没有确认这些参数之间的相关性。临床上,血清25-OH维生素D3赤字与高血清LDH和引发表示调查患者(数据转移的风险4和5)。
当评估统计数据和使用线性回归,我们获得一个清晰的血清LDH之间正相关(唯一验证血清生物标志物在皮肤黑色素瘤)和循环水平的引发,protumoral proangiogenic因子(表4)。之间的负相关得到血清维生素D3和引发和/或LDH(表4)。
黑色素瘤研究在生物标志物发现比比皆是,有一个不断需要新的血清生物标志物精确预测黑色素瘤进展(29日]。我们的研究强调了LDH,作为一个标志批准,不能点复杂的疾病的发展。结合这个古典生物标志物与维生素D3和引发可以增加生物标志物的预测能力,并提供后续有效理由和各种治疗选择。
4所示。讨论
寻找新的预测生物标记物在皮肤的黑色素瘤,早期发现,预言家仍是一个未满足的需求。我们在此表明,黑色素瘤进展与降低血清水平的25-OH维生素D3。有明显的赤字控制相比,这种维生素的病人,这缺乏是负相关与传统的生物标记物,如LDH。当从水平到垂直过渡增长开始在皮肤的黑色素瘤,触发和转移过程开始时,有一个激烈的降低血清25-OH维生素D3,而LDH(组织破坏)和引发血管生成增加。
减少25-OH维生素D3血清水平代表了一个糟糕的黑色素瘤的临床结果。这些结果加入确认研究转达了对维生素D3参与肿瘤发生,入侵和转移。
仍存在矛盾与维生素D3和黑色素瘤的发展。虽然一些研究显示积极的饮食摄入维生素D3和黑色素瘤发病率之间的联系(30.),其他标记一个负相关7)或缺乏相关(31日]。
知道紫外线辐射是一个皮肤黑素瘤的环境风险因素,但一个触发器维生素D的合成,我们已经登记患者从地理区域和控制更高和更低的太阳辐射,紫外线指数保持相同。环境暴露,我们并没有发现任何关联之间的地理区域和血清维生素D水平。
我们报告的循环水平的维生素D在德国人口控制与之前报道范围。本文提供病人的维生素D数据低于公布的德国黑色素瘤患者。在德国人口,先前的报道表明,降低血清维生素D水平与肿瘤厚度和先进的肿瘤阶段增加有关(16]。在最近的研究,引发一场激烈的研究proangiogenic因素,据报道是由黑色素瘤细胞分泌的细胞因子之一,因此角质细胞的分化模式和影响因子,介导细胞间相互作用在黑色素瘤(32]。此外,结果表明,升高引发分泌和改变CXCR表达增强黑色素瘤恶性肿瘤(33]。结果表现在几个固体癌症显示血清引发表明在黑色素瘤肿瘤负荷和预后[34]。在我们的研究中,除了与黑色素瘤肿瘤的存在相关性,升高血清引发统计与一个增强LDH和降低循环维生素D。
我们可以推测一个错综复杂的调节机制描述这些生物标志物。因此,知道维生素D代谢产物的影响引发启动子的激活(13)我们可以确定,低水平的维生素D可以关闭维生素D受体(VDR)刺激,降低引发基因镇压,因此增加了促炎引发的表情。炎性环境作为证明在许多类型的癌症(这里由引发)伴随一个活跃的肿瘤细胞新陈代谢,由高水平的LDH (35]。其他炎症标志物c反应蛋白和galectin-3之前在黑素瘤相关LDH的增加(36和循环标记如S100和米娅37]。最近演示了在正常的黑色素细胞,引起细胞凋亡,因此LDH释放,引发等促炎细胞因子的基因编码,也激活(38]。
的结果,我们可以得出一个初步的生物标志物模式增强患黑色素瘤的转移阶段的风险对病人缺乏维生素D,增加循环引发和LDH翻了一番。
5。结论
直接阳光照射和黑素细胞恶性转化之间的关系是复杂的。经阳光照射,黑素瘤的风险增加,尤其是在晒伤的情况下,炎症发生时(39]。如果维生素D3水平下降,平衡代谢紊乱可导致进一步的不受控制的肿瘤发生。在国家层面上,没有大型群体筛查维生素D3水平;因此我们在面对信息的缺乏正常的价值观和人口赤字。
治疗,使用维生素D3或其类似物可以引起毒性反应(免疫低下,血钙过多,多个器官衰竭,死亡),但最近开发了新的类似物的毒性和减少证明antitumoral效应在体外研究[40]。低水平的循环维生素D3更频繁的黑色素瘤患者比对照组(分别为92%和53%);这些水平可能表明一个高风险病人亚群,使用新的可能性治疗纠正这一缺陷,协助黑色素瘤患者的管理。
虽然在dermatooncology[成像新技术发展41),寻找新的生物标记和/或扩大监视黑色素瘤患者的生物标记面板参数作为维生素D和引发可以帮助疾病的预后和可以识别高危组。
伦理批准
作者认为他们获得适当的机构审查委员会批准和遵循赫尔辛基宣言中概述的原则为所有人类实验调查。此外,对于我们所有的调查,从涉及的参与者取得知情同意。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
承认
作者Amalia-Elena Anghel和Corina-Daniela烯获得金融支持通过“CERO-CAREER简介:罗马尼亚研究者”,合同编号。HRD / 159/1.5 / S / 135760资金从欧洲社会基金通过分类操作项目人力资源开发2007 - 2013。通过UEFISCDI莫妮卡Neagu收到资金支持研究项目pn - ii - pcca - 2013 - 4 - 1407(缩写词MELTAG,批准号190/2014)。