文摘

客观的。急性st段抬高心肌梗死(ASTEMI)伴随着增加的炎症和降低抗炎的表情。IL-37被发现参与atherosclerosis-related增加疾病和急性冠脉综合征。然而,IL-37水平患者血浆和白细胞ASTEMI后经皮冠状动脉介入(PCI)没有被探索。方法。我们收集周边静脉血液从答应了病人12 h, 24小时和48小时后PCI和健康志愿者。等离子体IL-37,地震,IL-18-binding蛋白质(BP)、C反应蛋白和高敏感(hs-CRP)量化ELISA和白血球的IL-37 ICAM-1免疫印迹。结果。等离子体IL-37、地震和地震- BP表达下降相比在健康志愿者hs-CRP水平高。两种白细胞的IL-37 ICAM-1最高表达了在12 h点但显著降低48 h点。结论。这些发现表明L-37不扮演重要角色在系统性炎症反应可能参与白细胞的炎症在ASTEMI PCI。

1。介绍

尽管现代再灌注策略被广泛接受世界各地的急性心肌梗死(AMI)仍然是一个全世界范围内导致死亡的主要原因。这表明AMI患者仍然需要更多的了解潜在的病理生理学复发的事件尤其是post-ACS早期治疗。迄今为止,系统性炎症反应AMI后描述和可能发挥重要作用在AMI后的一系列事件。循环炎症标记物,如白介素- 6 (IL)和高敏感的C反应蛋白(hs-CRP),以及循环炎症细胞,包括白细胞和炎症单核细胞,提高AMI后严重事件的时序模式对应于高重复事件的事件率和预测(1]。

抗炎的策略是一个很好的选择改善AMI后治疗的病人。抗炎细胞因子il - 10等参与AMI早期发生的事件。发现地震/ il - 10的比例作为AMI预后的指标(2,3]。IL-37是最近发现抗炎细胞因子il - 1配体的家人和证明作为一个基本的先天免疫抑制剂(4]。IL-37升高一些炎性疾病如炎症性肠病、过敏性皮肤炎、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮(5- - - - - -8),表明IL-37炎性疾病可能有潜在的保护作用。IL-37发现增加患者的急性冠脉综合征(9),但没有调查患者经皮冠状动脉介入(PCI)后。

此外,IL-37通常是在低水平表达在外周血单核细胞(PBMCs),主要是单核细胞,树突状细胞(dc) [9),迅速调节AMI后的炎性环境。IL-37有效地抑制巨噬细胞的激活和DCs (10),因此IL-37可能反过来抑制炎性细胞因子的生产PBMCs AMI后和DCs。鉴于IL-37可能与动脉粥样硬化的发展,有关我们假设IL-37炎症反应可能发挥潜在作用包括等离子体和白细胞在AMI患者PCI。

作为一种新的抗炎细胞因子,所以IL-37可能抑制免疫反应和炎症(11]。AMI后炎症是重要的一步。IL-37表达式的理解有助于我们进一步探索这个角色和影响AMI IL-37的情况。因为它还报道说,一个复杂的IL-37 IL-18-binding蛋白质减少地震活动(12),我们想要探索(1)等离子体的表达和白血球的IL-37 AMI后早期;(2)等离子体IL-37之间可能的关系,地震,和IL-18BP;和(3)的抑制作用IL-37 ICAM-1白细胞。

2。方法

2.1。材料

β肌动蛋白抗体购自圣克鲁斯生物技术(美国德克萨斯州达拉斯),又HRP-conjugated兔子反免疫球蛋白是购自杰克逊ImmunoResearch(美国西树林,PA);ICAM-1和地震-抗体购自Abcam(美国Cambridge, MA)。Liestal IL-37购买从Adipogen AG,瑞士,从MBL的地震,日本,名古屋IL-18BP RayBiotech,共同协助,美国,hs-CRP Elisa生物技术(上海,中国)。

2.2。病人的人口

从2013年10月,2014年4月,总共有112例健康志愿者(56)和患者(56)ASTEMI同意参与这个测试。STEMI被定义为胸痛提示心肌缺血前至少30分钟住院和心电图(ECG)与新的2个或更多的连续st段抬高0.2 mV以上的领导使V2 V3和/或0.1 mV或更多在其他线索。排除标准如下:(1)STEMI患者12小时后出现症状;(2)血管痉挛的患者心绞痛(由st段抬高的解决和缓解症状后静脉硝酸甘油);(3)病人超过75岁;(4)近期(< 1周)全身或局部炎症疾病;(5)器官(肝、肾)功能障碍;(6)心原性休克。

紧急PCI过程必须进行所有的病人在2小时之内。所有患者将接受300毫克阿司匹林和负荷剂量600毫克的氯吡格雷在手术之前。将管理静脉注射未分离肝素丸维持一个激活凝血时间> 250秒的过程。管理糖蛋白IIb / iii a抑制剂将基于医生的自由裁量权。PCI将根据当前国际指南执行。过程的目标是实现最优的PCI相关的动脉血管造影效果,减少手术并发症的风险。全方位的商用指导导管、球囊导管,引导电线将现成的。所有患者中包括这个试验将根据当前美国心脏病学会(ACC) /美国心脏协会(AHA)指导方针poststenting管理、指定治疗至少100毫克的氯吡格雷阿司匹林每日75毫克每天PCI后至少12个月。血管紧张素转换酶抑制剂和β阻断剂将PCI后管理如果没有限制的存在。

2.3。白细胞和血浆隔离

血液收集同意健康志愿者和患者是人类伦理委员会批准的汕头大学医学院第一附属医院。3毫升的近似体积外周静脉血液收集所有的病人在不同的时间点(12小时、24小时和48小时)后PCI过程到procoagulation管和ethylenediaminetetra乙酸(EDTA)分别k2抗凝管。样本收集从早上得到健康的志愿者。等离子体是孤立的从血液样本procoagulation管在每分钟3000转的速度离心后,15分钟。白细胞分离从血液样本EDTA-K2管使用红细胞裂解缓冲(试剂盒、希尔登,德国),然后离心后收集的速度2000 r / min, 10分钟。白细胞的蛋白质免疫印迹储存在−80°C。

2.4。免疫印迹

利用免疫印迹检测白细胞的IL-37 ICAM-1。样本10% SDS-polyacrylamide凝胶分离和转移到硝化纤维膜。膜被封锁在室温下1 h和5%的奶粉图则(PBS含有0.1%渐变20),然后用适当的孵化主要抗体(ICAM-1抗体稀释成1:1000年,IL-37 1: 500年β拦截器1:1000)在一夜之间在4°C。与“洗后,膜被孵化与辣根过氧化物酶(合)与二级抗体(1:5000稀释图则包含5%的奶粉)在室温下1 h。乐队使用ECL开发和暴露在x射线的电影。使用NIH ImageJ软件带密度进行了分析。

2.5。Elisa

等离子hs-CRP,地震、IL-18BP IL-37被ELISA试剂盒量化。等离子体hs-CRP只是发现在12 h点,虽然地震,IL-18BP, IL-37被发现在12 h, 24小时和48小时。重组细胞因子被用来构造标准曲线。吸光度的标准和样品确定spectrophotometrically使用标在450海里(加工制造labsystem wallscan k3,热科学、芬兰)。结果绘制标准曲线。化验是根据制造商提供的协议。

2.6。统计分析

数据表示为均值的平均值±标准误差(SEM)。方差分析(方差分析)进行,差异被认为是重要的时候,验证了费舍尔事后考验。

3所示。结果

3.1。基线特征

基线临床特点的基础上,年龄,性别,和白细胞计数STEMI患者和健康志愿者之间展示在表1。平均年龄、性别障碍,白细胞计数组之间的平衡。大多数病人有2个或更多的心血管危险因素,而很少有患者单一参数(2只有高血压,2只糖尿病,4只高胆固醇血症,和4只吸烟史)。大多数病人有一个或两个病变的动脉,3例有三病的。和大多数病人被阻挡在小伙子或RCA,只有3例在LCX梗塞的。等离子体hs-CRP升高,表明高炎症情况与PCI AMI后。

3.2。等离子体IL-37、地震和IL-18BP减少在早期

我们测试了等离子体IL-37、地震和IL-18BP表达在不同的时间点(12小时、24小时和48 h后PCI)与酶联免疫试剂盒(表STEMI患者2)。IL-37,地震,IL-18BP表达平衡但减少患者在所有时间点如果在健康志愿者(相比)。然后我们测试IL-37和ICAM-1表达在白细胞检查PCI后细胞炎症和抗炎。

3.3。白细胞的IL-37和ICAM-1表达变化

白细胞AMI后是一个重要的细胞参与炎症反应,并表示IL-37炎症(下4]。我们分析了细胞IL-37和ICAM-1蛋白表达与免疫印迹。我们发现细胞IL-37和ICAM-1蛋白质最高表达在12 h点但显著降低(图48 h点1,)。

4所示。讨论

在这项研究中,我们演示了等离子体的表达IL-37和白血球的IL-37 STEMI患者在早期PCI后。我们发现,等离子体IL-37没有增加,白细胞的IL-37下降而等离子hs-CRP高这表明炎症反应后的头两天,PCI。等离子体的地震,发现被IL-37抑制,这种情况下也不会增加。

STEMI通常是与炎症有关,发展成严重的并发症。是证明炎症参与atherosclerostic斑块形成和破裂,冠状动脉血栓形成,心肌梗死后心肌坏死和修复(13- - - - - -15]。抗炎策略可能有利于心肌预后,但一些抗炎细胞因子il - 10等减少在ACS患者中,反映出系统不平衡细胞因子反应在ACS (2,16]。IL-37已经被证明是一种抗炎细胞因子,据报道高架在ACS患者(9),但我们发现,减少患者PCI后在我们的研究中。这可能是因为PCI治疗可以抑制系统IL-37表达式。在此,我们发现系统的等离子体IL-37和白血球的IL-37初期下降。老鼠体内的表达人类IL-37减少本地和系统性炎症ConA-induced肝炎和有限合伙人的挑战17]。因此,IL-37减少可能无法抑制系统的炎症患者PCI后ASTEMI。

不仅hs-CRP还地震已经被证明是很好对患者预后的指标(18- - - - - -20.]。地震是增强在STEMI情况下(21- - - - - -23),和表情变化的地震不是说在PCI后患者。我们发现,地震中减少PCI患者相比,在健康的志愿者。一个复杂的IL-37和IL-18-binding蛋白质减少地震活动(12];但等离子IL-37、地震和IL-18BP ACS患者的增加(9]。我们想测试是否有关系的变化的地震和IL-37 STEMI后PCI。同步减少系统IL-37和地震不能透露IL-37在地震的抑制作用。减少系统的PCI后的地震不是由于增强抗炎反应。地震- / il - 10的比例被发现不良事件的独立预测因子在ACS患者2,3]。减少地震和增加il - 10对ACS患者的恢复(2]。地震的潜在的预测效果比/ IL-37不良事件在未来可以探索。和改变炎症和抗炎之间的不平衡仍然是有意义的。尽管c反应蛋白等炎症标记物预测未来心血管事件在ACS患者中,当所有的炎症介质考虑潜在的风险分析,标志反映抗炎机制可能是更好的预后标记(18]。此外,高水平的等离子IL-37,地震,IL-18BP与冠状动脉狭窄的严重程度无相关性(9),和那些没有水平减少与我们的研究。

白细胞是一个重要的STEMI患者的炎性细胞,参与心肌坏死和修复STEMI后(24]。循环单核细胞可以表达高水平的促炎细胞因子、tnf、il - 6、以及抗炎细胞因子il - 10 (25]。ICAM-1诱发白细胞和内皮细胞之间的交互26),参与了心肌重构。我们分离循环白细胞减少,发现ICAM-1和IL-37在早期,表明炎症和抗炎反应的平衡循环白细胞。我们可以认为,因为IL-37 ICAM-1表达减少,这是更好的被孤立的白细胞证实文化。不同系统的失衡,IL-37的变化和ICAM-1表示对白细胞炎症和抗炎的平衡。白细胞包括几种类型包括中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞,因此我们不能敏锐地告诉亚型只或更多IL-37表达式。我们认为中性粒细胞,大多数的白细胞比例,可能是一个潜在的好目标探索IL-37表达和未来的变化。

在这项研究中,我们的底线是健康的志愿者没有心血管疾病的风险因素,除了年龄和性别。没有报告系统IL-37表达式在健康的志愿者。我们发现它是在STEMI低于健康,这可能是由于抗炎反应是抑制(2,16]。与其他研究相比抗炎细胞因子,我们可以表明,这是由于在ACS抗炎反应的抑制作用。加强抗炎效应STEMI有助于修复心肌损伤(27,28]。如何提高IL-37表达可能是有用的,有趣的是,在未来的研究中进行调查。此外,样本数量不是太多在我们的研究中;我们可以调查表达差异在不同的子群,如果我们有更多的样品。

5。结论

总之,我们的研究首先表明系统IL-37表达降低与PCI STEMI情况和PCI后白细胞下降。这些表明IL-37不扮演重要角色在系统性炎症反应可能参与白细胞的炎症在ASTEMI PCI。应该追究,更多的研究。

缩写

ACS:	急性冠脉综合征
AMI:	急性心肌梗塞
DC:	树突细胞
Hs-CRP:	高敏感的C反应蛋白
ICAM-1:	细胞间粘附molecule-1
IL:	白介素
有限合伙人:	脂多糖
PBMC:	外周血单核细胞
一种总线标准:	Percutance冠状动脉介入。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

吉林李参与实验设计,采集和分析的数据和起草。局域网Chen Xiangna Cai,新王参加了实验和数据的采集和分析。徐Xiangna Cai和Duanmin参与起草。所有作者阅读和批准了期末论文。Xiangna Cai同等重要的作用,本文co-first作者。

确认

这项工作是由中国国家自然科学基金支持部分的81300123和大学生创新与创业培训项目广东省1056013093。