文摘

客观的。CD161已被确认为人类IL-17-producing T细胞的标记与类风湿性关节炎(RA)的发病机理。本研究旨在探讨之间的潜在联系的百分比CD161 + T细胞和RA患者的疾病活动。方法。外周血(PB) 54 RA患者和健康对照组21日被评估。成对的滑液(SF) (n= 17)进行了分析。CD161表达水平对CD4 +、CD8 +、CD4−CD8−T细胞通过流式细胞术进行评估。结果。CD4 + CD161 + T细胞的比例在RA科幻高于RA PB, DAS28呈正相关,,红细胞沉降率(ESR)、c反应蛋白(CRP)。CD4−CD8−CD161 + T细胞比例在RA PB和进一步降低减少RA科幻小说,科幻小说及其水平与DAS28呈负相关,ESR、CRP。然而,CD8 + CD161 + T细胞比例既不改变在RA PB和科幻小说也与疾病活动指数。结论。增加CD4 + CD161 + T细胞比例和CD4−CD8降低−CD161 + T细胞比例存在于RA科幻和与疾病相关联活动,和CD4 + CD161 + T细胞的积累在科幻小说可能导致风湿性关节炎的炎症。

1。介绍

类风湿性关节炎(RA)是一种全身性炎性疾病,其特征是关节滑膜炎症组织最终导致关节损伤和功能障碍。多个先天和适应性的效应细胞,包括巨噬细胞、中性粒细胞,成纤维细胞,B细胞和T细胞,RA的发病机制中起着重要作用[1]。T helper-type 17 Th17细胞,不同子集的Th细胞产生白介素- 17 (IL)在人类,可能参与自身免疫性和慢性炎性疾病的发病机制,包括类风湿性关节炎(2,3]。许多临床研究包括我们的数据表明,Th17细胞在RA患者的比例升高,呈正相关的局部和全身性疾病活动程度(4- - - - - -6]。此外,IL-17 Th17细胞的细胞因子特征,还涉嫌参与了RA的发病机制(7]。IL-17A是滑膜的促炎细胞因子表达文化的RA患者(8),滑膜组织IL-17关节损伤与快速发展的协同作用与肿瘤坏死因子(TNF),α(9]。增强表达IL-17也被观察到在RA患者的滑液(8,10],IL-17已成为一个新的鼠标RA治疗目标模型和人类风湿性关节炎(11]。

CD161是相当于人类小鼠NK细胞受体P1A构成II型跨膜糖蛋白和特征的c型凝集素超家族12]。CD161是最调节基因在人类Th17细胞相比,Th1、Th2细胞及其表达式是由RAR-related孤儿受体C (RORC), Th17家族转录因子(13,14]。此外,人类Th17细胞完全源自CD4 + CD161 +幼稚T细胞的祖细胞,和CD161小说对Th17细胞表面标记(13,14]。此外,美极等人提供的证据表明,CD161是人类所有的标记IL-17-producing T细胞亚群,包括CD3 + CD4 + CD8−, CD3 + CD4−CD8 +, CD3 + CD4−CD8−细胞(14]。据报道,循环CD4 + CD161 + T细胞增加血清反应阳性的关节痛患者但减少新诊断RA患者(15]。此外,这项研究表明,CD4 + CD161 + T细胞在滑液浓缩(SF),而CD8 + CD161 + T细胞并没有积累在科幻的RA患者(15]。事实上,我们曾表明RA患者似乎更高比例的循环CD161 +比健康对照组细胞CD4 + T细胞,但是差异没有达到统计学意义(16]。然而,人们知之甚少的百分比CD161表达T细胞亚群(CD3 + CD4 +、CD3 + CD8 +,和CD3 + CD4−CD8细胞−)在血液和炎症的本地站点RA病人和他们的潜在的疾病活动链接。

因此,我们探索的百分比CD161表达PB和科幻的RA患者T细胞亚群和评估疾病活动程度的相关性。

2。材料和方法

2.1。病人

外周血样本(PB)获得54 RA患者和21岁-和sex-matched健康控制。和滑液(SF)样本来自17个活跃的RA患者的膝关节。所有患者实现1987年修订标准的美国风湿病学院17]。疾病活动由28-joint评估疾病活动得分(DAS28)在样本收集。红细胞沉降率(ESR)、c反应蛋白(CRP)测定在临床实验室的样本集合。这项研究符合《赫尔辛基宣言》的建议。Xijing医院的伦理委员会批准的这项研究中,和所有受试者的知情同意。

2.2。单核细胞的制备

科幻样本处理20µg / mL透明质酸酶(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)为30分钟37°C,然后细胞被洗两次磷酸盐。科幻单核细胞(SFMCs)和PB单核细胞(PBMCs)隔绝肝素化全血钠和科幻细胞悬液样本使用Ficoll-Paque密度梯度离心法(美国通用电气医疗集团,匹兹堡,PA)标准程序。

2.3。流仪分析T细胞表面标记

淋巴细胞的表型在PB和科幻使用流式细胞仪测定。短暂,PBMCs SFMCs与下面的荧光染料染色结合单克隆抗体:异硫氰酸荧光素(FITC)——共轭CD3 (SK7) peridinin叶绿素蛋白质——(PerCP)共轭CD4 (SK3) allophycocyanin——(APC)共轭CD8 (SK1),藻红蛋白——(PE)共轭CD161 (DX12)和isotype-matched控制免疫球蛋白抗体(都来自BD生物科学,圣地亚哥、钙、美国)在室温下30分钟,根据制造商的指示。染色细胞进行了分析使用FACSCalibur流式细胞分析仪(BD生物科学)和数据分析与细胞追求软件(BD生物科学)。

2.4。统计分析

组之间的差异决定使用非参数Mann-Whitney测试。配对样本相比使用Wilcoxon配对符号秩和检验。非参数相关性进行评估的斯皮尔曼相关分析。数据分析使用GraphPad Prism 5.0版本(GraphPad软件、圣地亚哥、钙、美国)。对于所有的测试,一个双面的P值小于0.05被认为是显著的。

3所示。结果

3.1。主题的基本特征

RA患者和健康对照组的临床特点见表1。54个RA患者和健康对照组21 (HC)招募,和滑液(SF)样本来自17个活跃的RA患者。没有显著差异在三组之间的年龄和性别。此外,疾病持续时间,积极的射频和anti-CCP抗体,和之前使用药物治疗的病人的比例是比较总组之间的RA患者,这些患者的组织收集了科幻小说。此外,ESR水平倾向于增加RA患者收集科幻(P= 0.052),c反应蛋白和DAS28水平显著高于在RA患者收集科幻总RA患者(P= 0.032,P= 0.017,职责)。

表1
特征的类风湿性关节炎(RA)患者和健康对照组(HC)。
3.2。的循环CD161 + T细胞比例在RA患者和健康对照组

首先,我们评估循环CD3 + T细胞表达IL-17子集产生细胞标记CD161在RA患者和HC,和代表的例子流仪dot-plots图所示1(一)。循环的百分比CD4 + CD161 +(22.19, 18.41, -29.44%)(中位数、四分位范围)和CD8 + CD161 +细胞(19.90,16.26,-29.74%)在RA患者并不不同于HC(20.34、18.35 - -22.58%和19.27,17.19 -24.27%;P= 0.122,P= 0.675,职责。)(数据1 (b)和1 (c)),而CD4−CD8的百分比−CD161 +细胞显著低于RA患者(65.22,53.92,-72.81%)比在HC (77.54, 73.92 -82.14%;P< 0.001)(图1 (d))。

(一)
(一)
(b)
(b)
(c)
(c)
(d)
(d)
图1
存在CD161 + T细胞在RA患者和HC子集。(一)流仪dot-plots显示控制策略:CD3 + T细胞被封闭的使用侧散射轮廓和CD3的表达;然后CD4 +、CD8 +、CD4−CD8−T细胞CD4和CD8的封闭的基于他们的表达,和CD161表达水平在这些从代表HC外周血T细胞亚群进行了分析(PB), RA PB, RA滑膜液(SF)。百分比的CD4 + CD161 + (b), CD8 + CD161 + (c)和CD4−CD8−CD161 + T细胞(d)在HC PB, RA PB和RA科幻。水平线表示中位数。P值被Mann-Whitney评估U测试。
3.3。CD161 + T细胞比例在风湿性关节炎的炎症

CD161可能函数作为粘附分子和参与transendothelial迁移18,19]。然后,CD161 T细胞表达的相对百分比在科幻RA患者评估。CD4 + CD161 +细胞的比例在RA科幻显著增加(36.71,34.99,-43.18%)相比HC PB (P< 0.001),总RA PB (P< 0.001),配对RA PB (25.43, 20.33 -30.04%;P< 0.001)(数据1 (b)和2(一个)),而CD4−CD8的比例显著降低−CD161 +细胞在RA科幻(35.50,31.49,-40.45%)比在HC PB (P< 0.001),总RA PB (P< 0.001),配对PB (65.41, 53.91 -71.36%;P< 0.001)(数据1 (d)和2 (c))。然而,没有明显差异的百分比CD161 + CD8 + T细胞在HC铅、总RA PB, RA科幻(17.75,14.06 -23.27%)和配对PB(18.12, 15.96, -33.80%)(所有 )(数据1 (c)和2 (b))。

(一)
(一)
(b)
(b)
(c)
(c)
图2
CD4 + CD161 + (a)的百分比,CD8 + CD161 + (b)和CD4−CD8−CD161 + T细胞(c)配对RA PB和科幻样本所示。P值评估Wilcoxon配对符号秩和检验。
3.4。相关性CD161 + T细胞与RA患者的疾病活动

然后,我们评估如果存在CD161 + T细胞在科幻与系统性疾病活动(表的标志2)。CD4 + CD161 +细胞的比例在科幻DAS28呈正相关,(r= 0.689,P= 0.002),ESR (r= 0.569,P= 0.017)和c反应蛋白水平(r= 0.679,P= 0.003)。相比之下,CD4−CD8的百分比−CD161 +细胞在科幻与DAS28负相关(r=−0.671,P= 0.003),ESR (r=−0.632,P= 0.007)和c反应蛋白水平(r=−0.663,P= 0.004)。然而,之间没有相关性在场的CD8 + CD161 +细胞的百分比在科幻和DAS28 (r= 0.137,P= 0.599),ESR (r=−0.199,P= 0.445)和c反应蛋白水平(r= 0.074,P= 0.779)。此外,没有系统性的标记之间的相关性疾病活动和CD161 + T细胞在PB(所有P>(表0.05)2)。

表2
CD161 + T细胞比例子集之间的相关性在RA滑膜液(SF)和外周血(PB)和DAS28、ESR、CRP。

4所示。讨论

充足的先前的研究已经表明,Th17细胞和IL-17严重导致RA的发病机制(2- - - - - -11]。此外,不仅CD4 +细胞CD8 +及CD4−CD8−T细胞产生IL-17表达CD161表面,CD161因此被认为是一个标记的所有IL-17-producing T细胞(14]。此外,据报道,CD161的表达是维护人类的生命周期IL-17-producing T细胞(13,14,18]。因此,CD161表达式可能代表一种检测IL-17-producing T细胞祖先在循环和组织浸润T细胞。

我们假设CD161表达T细胞代表IL-17-producing T细胞作用于RA的发病机制,和CD161的水平表达T细胞在流通或炎性地点可能监管之前或之后炎性关节炎的发展。因此,我们评估的比例循环CD161 HC和RA患者的T细胞表达。我们的研究结果表明,循环CD4 + CD161 +细胞的比例并不不同于HC,正如我们之前报道(16]。然而,冲突的数据已报告在最近的一项研究表明,新诊断RA患者CD4 + CD161 +细胞的水平降低20.]。这些变化可能是由于研究队列。前面研究招募新诊断RA患者(平均前的症状持续时间10.2个月),而我们组的疾病持续时间中值为66个月,因此可能更符合建立疾病患者。此外,这种变异可能是由于治疗效果,大多数患者在我们的研究中治疗DMARDs(表1),而以前的研究首次治疗的患者(20.]。

CD161可能函数作为粘附分子,从而促进外渗和组织定位(18,19]。和最近的一项研究报道,CD161受体表达在不同的T细胞亚群和可能参与特定疾病的发病机理21]。因此,我们调查的性能CD161表达T细胞类风湿性关节炎患者滑液的代表细胞的RA炎症。事实上,滑液从活跃的RA患者被发现丰富CD4 + CD161 + T细胞,这是在协议与数据的最近的一项研究[20.]。此外,CD4 + CD161 +细胞的比例呈正相关,DAS28、ESR、CRP水平的科幻类风湿性关节炎患者。这些发现表明,外渗和迁移的CD4 + CD161 + T细胞可以促进关节CD161介导粘附[19),表明CD4 + CD161 + T细胞,如Th17细胞前体,可能发挥致病作用在RA炎症的本地站点。此外,CD4 + CD161 + T细胞比例的科幻可能反映RA患者的疾病活动程度。因此,我们认为,还需要进一步的研究来评估是否CD4 + CD161 +人口发展与关节损伤,如软骨损伤和骨侵蚀。

同时,CD8 + CD161 +细胞和CD4−CD8−CD161 PB +细胞和科幻小说也检查了在这个研究。类似于之前的研究(22),我们的数据表明,CD8 + CD161 + T细胞的比例在RA患者没有不同于HC。此外,之间没有差异观察RA科幻和RA PB配对或总RA PB CD8 + CD161 + T细胞。此外,之间没有相关性CD8 + CD161 + T细胞比例和疾病活动科幻或RA的铅。这可能是由于相对有限的患者数量,而是一种内在的现象是可能的。

在文献中报道,在激活的T细胞受体,少量的CD3 + T细胞CD4和CD8双重否定有能力生产IL-17 [23]。此外,IL-17-producing细胞只有在CD161 +细胞的CD4−CD8−细胞和CD4−CD8 T细胞−mRNA的表达最高RORC和IL-23R相比,CD4 +和CD8 + T细胞(14]。此外,IL-17-producing CD4−CD8−T细胞是扩大和参与肾脏损伤的发病机制和唾液腺损伤患者系统性红斑狼疮、干燥综合征(24,25]。然而,我们证明了循环的百分比CD4−CD8−CD161 +细胞,代表IL-17-producing CD4−CD8−T细胞祖先细胞,显著减少了RA患者相比,HC。令我们吃惊的是,没有相关性循环CD4−CD8−CD161 +细胞百分比和风湿性关节炎的疾病活动指数。此外,CD4−CD8−CD161 +细胞百分比在RA科幻进一步减少配对RA PB和总RA PB相比,这减少了科幻与DAS28负相关,ESR、CRP水平在RA患者。这些发现表明,RA的发病机制可能不同于其他风湿性疾病,和需要进一步调查确定的机制减少CD4−CD8−CD161 IL-17-producing CD4 +细胞百分比和性能−CD8−RA患者的T细胞。此外,这些结果表明,CD4 + CD4−CD161 +和CD8−CD161 + T细胞在关节液可能被视为本地参数关节炎症,而c反应蛋白和ESR水平被认为是炎症的系统参数。更重要的是,这些数据指向一个潜在的重要作用对CD4 + CD4−CD161 +和CD8−CD161 + T细胞作为监管机构的关节炎症和RA发病机理。

5。结论

总之,我们的结果表明,CD4 + CD161 + T细胞比例的增加和减少的百分比CD4−CD8−CD161 + T细胞存在于科幻的RA患者和相关疾病活动指数,因此,可能会参与到当地的炎症和RA的临床结果。这些数据表明,CD4 + CD4−CD161 +和CD8−CD161科幻+ T细胞水平可能反映程度的RA患者的疾病活动和关节炎症。的致病的作用还需要进一步的研究来阐明CD4 + CD4−CD161 +和CD8−CD161 + T细胞和RA调查机制的变化。

信息披露

吉林苗,亏张、冯秋和婷婷李共同第一作者。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项工作是关键项目的赠款支持中国国家自然科学基金(没有。81030058)和中国国家自然科学基金(没有。81401338)。这项研究是通过道德标准委员会Xijing医院。