文摘
过量的饱和脂肪酸饮食与肥胖有关,导致系统性胰岛素信号中断,葡萄糖耐受不良和炎症。澳洲坚果油管理可以改善人类的血脂。我们评估了澳洲坚果油补充对胰岛素敏感性的影响,炎症,血脂,高脂肪饮食中脂肪细胞大小(高频)诱导肥胖老鼠。C57BL / 6雄性小鼠(8周)被分为四组:(a)控制饮食(CD), (b)高频,(c) CD填喂法补充了澳洲坚果油的2 g /公斤的体重,每周3次,12周(CD + MO), (d)高频饮食补充了澳洲坚果油(HF +莫)。CD和高频老鼠补充水。高频老鼠高胆固醇血症和胰岛素敏感性下降之前也显示。高频感应炎症在脂肪组织和腹膜巨噬细胞,以及脂肪细胞肥大。澳洲坚果油补充减毒肥大的脂肪细胞和脂肪组织炎症和巨噬细胞。
1。介绍
饮食的角色有较高含量的不饱和脂肪酸,在地方或伴随的饮食脂肪含量高,被任命为一个有效的策略来控制代谢紊乱(1]。饮食中富含单不饱和脂肪酸(MUFA)据报道,降低血浆总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇和增加脂蛋白胆固醇水平(2- - - - - -5]。此外,当饮食中饱和脂肪酸被MUFA取代的肥胖女性,炎症标志物水平下降,血清中il - 6和visfatin [6]。澳大利亚坚果油富含单不饱和脂肪酸,其中包含大约65%的油酸(C18:1)和18% 9 -十六碳烯酸(C16:1)脂肪酸总含量的(7]。澳洲坚果油的主要来源在人类饮食9 -十六碳烯酸。一些研究表明,富含坚果的饮食可以改善血脂(2,8- - - - - -10),但到目前为止没有补充的澳洲坚果油的影响研究脂肪细胞肥大和炎症。
2008年,曹和他的同事们(11)表明,小鼠缺乏脂质陪伴aP2和mal1血清的9 -十六碳烯酸含量增加。高浓度的循环9 -十六碳烯酸恢复肝脏和骨骼肌的胰岛素敏感性,hepatosteatosis,高血糖,由高脂肪饮食。,作者名叫这脂肪酸lipokine,自从9 -十六碳烯酸hormonal-like效应(11]。
高脂肪饮食的政府C57BL6小鼠诱发代谢扰动所观察到的类似。事实上,消费水平高的饱和脂肪酸与超重有关,内脏肥胖、炎症、血脂异常、胰岛素抵抗、骨骼肌、肝脏和脂肪组织(12- - - - - -17]。饱和FFA促进炎症通过交互toll样受体4 (TLR4),激活NFB、物和AP-1通路(18,19]。
建立了低品位炎症与血浆il - 6的水平,增加il - 1β下降,TNF-α前列腺素和瘦素和脂联素的生产和分泌,il - 10、il - 4 (20.,21]。局部炎症的增加会使脂肪组织的招募巨噬细胞极化的M2巨噬细胞(巨噬细胞类型2)M1巨噬细胞(巨噬细胞类型1)(16,22,23]。
我们的研究的目的是评估的影响澳洲石油补充富含MUFA(9 -十六碳烯和十八烯酸),脂肪组织和腹膜巨噬细胞炎症在均衡饮食的老鼠或高脂肪的饮食富含饱和脂肪酸。我们测量葡萄糖吸收(2 - 6脱氧葡萄糖吸收)和信使rna蛋白质含量(GLUT-4;比目鱼肌IRS-1)参与胰岛素信号。TNF-α,il - 10的内容,il - 6和il - 1β在腹膜巨噬细胞和脂肪组织也确定。脂肪细胞大小也被评估。
2。材料和方法
2.1。动物
根据协议的所有实验动物保健和使用委员会批准的生物医学科学研究所,圣保罗大学。C57BL / 6雄性小鼠(8周)被用于这项研究。动物被安置12-12 h和温度的光暗周期°C。动物被分为四组:(a)控制饮食(CD), (b)高脂肪饮食(HFD), (c)控制饮食补充与澳大利亚坚果油(重要的灵魂,Uchoa、SP、巴西)(CD + MO)和(d)高脂肪饮食补充了澳洲坚果油(HF +莫)。对照组与此同时运行。石油组成如表所示1。在第一次前4周HFD肥胖的感应,所有组随意美联储控制饮食(76%的碳水化合物,9%的脂肪和蛋白质15%)。类似的协议被用于我们的先前的研究24,25]。CD +莫和HF +莫辅以口服填喂法在2 g每公斤体重,每周3次,在12周。这个石油用量选择基于以前的研究使用不同的油从我们组没有肝毒性的迹象(24]。CD和高频饮食收到水在同一剂量。
2.2。血清参数分析
血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、脂蛋白胆固醇测定比色分析(Labtest诊断,小湖圣诞、MG、巴西)。血清葡萄糖和胰岛素测定使用LABTEST比色测定和放射免疫检定法(美国Billerica的微孔,MA),分别作为描述马西et al。(2012)24]。HOMA指数由计算空腹血清胰岛素(μU /毫升)×空腹血糖(更易与L−1)/ 22.5。瘦素和脂联素测定使用制造研发系统的协议。
2.3。GTT和ITT公司
葡萄糖耐量试验(GTT)和胰岛素耐量试验(ITT)是在所有组进行6 h后禁食的第10和11周的治疗,分别。
GTT和ITT公司使用的方法类似于被马西et al。(2012)24]。
2.4。比目鱼肌孵化的胰岛素反应
动物安乐死在有限公司2室和比目鱼肌的肌肉迅速和仔细地孤立和体重(8 - 10毫克)。这个协议被描述在24,25]。
2.5。苏木精和伊红染色
脂肪样本在福尔马林固定,石蜡包埋。部分准备(5μ使用徕卡M) EG1150H机器。苏木精和伊红染色())是使用徕卡Autostainer XL和徕卡CV5030进行的。部分安装使用DPX媒体(费舍尔科学、爱尔兰)和分析使用尼康80我透射光显微镜。
2.6。提取脂肪酸的腓肠肌肌肉及气相色谱分析
腓肠肌肌肉片段(100毫克)受到脂质提取。为此,0.5毫升氯仿/甲醇(2:1;v / v)被添加到100毫克的腓肠肌样本,well-vortexed和孵化在室温下为5分钟。额外的1.25毫升氯仿和1.25毫升去离子的H2啊,然后补充说,最后,激烈的同质化3分钟后,样本在1200 g离心5分钟,在室温下获得两个阶段:水相在顶部和底部包含有机相。有机相收集,干,悬浮在异丙醇。甘油三酸酯含量是决定在匀浆。这之后,对脂肪酸组成测定、腓肠肌脂质提取干使用大气N2溶剂的蒸发没有脂肪酸氧化。中性的分数和极性脂质这些用柱层析法提取分离。极地(磷脂)和中性(甘油三酯)分数甲基化(甲基酯的形成),用乙酰氯和甲醇。分析了甲基酯在气体色析法耦合的火焰电离剂检测器(FID)(瓦里安GC 3900)。脂肪酸组成是由使用标准脂肪酸的混合物与已知的保留时间(37岁的Supelco组件)。
脂肪酸的分析程序色谱法是使用下面描述的特征。阅读开始在170°C的温度1分钟,然后坡道2.5°C /分钟来达到220°C的最终温度,保持了5分钟。注入器和检测器都维持在250°C。我们使用了CP蜡52 CB列,厚度0.25毫米,内部直径0.25毫米,长和30毫米,以氢气为载气。
2.7。炎症参数分析
2.7.1。发病含量测量
小鼠安乐死在有限公司2室和腹膜后脂肪组织迅速收集。大约100毫克的腹膜后脂肪组织用于TNF-α的决心,il - 6和il - 10含量。脂肪组织中均质里帕缓冲区(0.625%诺乃清洁剂p 40, 0.625%钠脱氧胆酸盐,6.25毫米磷酸钠,在pH值7.4)、乙二胺四乙酸1毫米,包含10 g / mL的蛋白酶抑制剂鸡尾酒(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)。匀浆在12.000 g离心10分钟在4°C,上层的收集,和蛋白质浓度测定用布拉德福德化验(Bio-Rad、大力神、钙、美国)。牛血清白蛋白作为蛋白质标准。
来自体内的脂肪组织文化。腹膜后脂肪组织外植体(约100毫克)在DMEM培养无菌培养基(Gibco),包含10%的边后卫,2毫米谷氨酰胺,24 h和青霉素,链霉素,37°C和5%的公司2,湿润的空气环境。此后,媒介文化是收集并用于测定il - 1β和il - 10,用ELISA检测(DuoSet包、研发系统)。
2.7.2。腹膜巨噬细胞隔离和文化
细胞因子和一氧化氮(NO)生产进行评估在腹腔巨噬细胞通过洗6毫升RPMI培养基(Gibco),含10%谷氨酰胺的边后卫和4毫米。Macrophage-rich文化F4/80(超过90%的细胞+)是通过孵化腹膜细胞24-well聚苯乙烯文化板块在37°C 2 h有限公司5%2,湿润的空气环境。与RPMI不依从细胞被洗。贴壁细胞培养与2.5μ克/毫升的有限合伙人(大肠杆菌0111年,血清型:B4,σ化学公司,为24小时(美国)26]。中收集的il - 6、il - 10 IL-1B格里斯,ELISA TNF-α亚硝酸盐含量的方法(27]。
2.8。定量rt - pcr
总RNA的腓肠肌肌肉与试剂盒提取试剂(英杰公司生活技术,大岛,纽约,美国),描述的方法由Chomczynski和萨基28]。反向转录cDNA都使用了高容量cDNA工具包(美国应用生物系统公司,福斯特,CA)。基因表达进行了实时PCR (29日),利用转子基因(试剂盒)和绿色(生命表达载体技术)SYBR荧光染料。引物序列见表2。量化的基因表达进行了使用RPL-19基因作为内部控制,如前所述[30.]。
2.9。统计分析
结果提出了均值±。所有组比较采用双向方差分析Bonferroni期末测验。显著性水平是设定在。
3所示。结果
3.1。实验模型的描述
3.1.1。身体成分
高脂肪饮食的老鼠显示身体体重增加,高胆固醇血症和胰岛素抵抗。这些修改都是在我们所观察到的类似以前的研究(24,25]。动物喂养高脂肪饮食(高频,高频+ MO)进行为期八周显示增加(2倍)身体体重增加和内脏肥胖指数与CD, CD +帽(表3)。肝脏的重量和褐色脂肪组织仓库没有改变饮食或补充(表3)。虽然高脂肪饮食的老鼠的内脏肥胖指数(高频,高频+ MO)大于动物收到控制饮食(CD, CD + MO),高频组增加(1,62倍)的脂肪细胞大小相比,控制饮食(数字1(一)和1 (b)),统计差异不体现在高频+钼组。没有区别是由饮食或补充证明在低密度NEFA,甘油(数据未显示)。此外,基底血糖和增加两组接受高脂肪饮食(数据没有显示)。Homa-IR指数增加心衰组(三倍)和其他组织包括高频+莫(图2(一个))。这个结果表明有益的澳洲坚果油补充胰岛素响应高频组。
(一)
(b)
(一)
(b)
(c)
外周胰岛素抵抗在孵化证实了葡萄糖摄取比目鱼肌肌肉(数据未显示),也显示之前(24,25]。此外,两组接受高脂肪饮食显示减少GLUT-4 mRNA表达(图2 (b))。IRS-1, PGC-1 CPT-1 Perilipin 5 mRNA表达没有调制治疗。高频组腓肠肌肌三酰甘油含量的增加,但这种影响是削弱了在高频+帽(图2 (c))。中性或极性脂质脂肪酸组成分数不变的饮食补充,莫在网上补充材料(见表1http://dx.doi.org/10.1155/2014/870634)。
3.2。澳洲坚果油补充变弱高脂肪饮食诱导炎症
抗炎细胞因子il - 10的内容增加高频+钼组(大约4,09-fold)(图3(一个)),而IL-1b中等浓度的脂肪组织外植体增加心衰组(图3 (b))。
(一)
(b)
当与LPS刺激时,所有组巨噬细胞显示增加il - 6生产(2.97倍)(图4 (d)),而il - 10和没有升高细胞生产高频和CT +钼组(2.39——4.08倍与基线相比,resp。)(数据4(一)和4 (e))。没有影响观察TNF-α生产LPS刺激的巨噬细胞组(图4 (c))。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
此外,高频组巨噬细胞显示增加(2,41-fold) il - 1β生产相比,如果细胞而莫废除这一高度(图的补充4 (d))。没有生产也发现类似的结果。莫减弱硝酸生产由高频LPS刺激巨噬细胞组(图4(一))。il - 10的生产是降低CT组相比,CT +莫和高频组(1 88倍)(图4 (e))。TNF-α和il - 6生产饮食或补充(数据保持不变4 (c)和4 (d))。
没有发现显著差异在12周的治疗后血清脂联素水平(数据没有显示)。正如所料,瘦素浓度增加(5.69倍)组喂高脂肪饮食(数据没有显示)。CD +莫之间的显著差异和CD + CT组表明,莫能增强循环瘦素。
4所示。讨论
我们这里显示,12周的澳洲坚果油补充减弱的增加炎症和脂肪细胞的肥大的高脂肪饮食的老鼠表现出代谢综合征。
高消耗的脂肪、蔗糖和工业化食品与久坐不动的生活方式是主要因素肥胖及其相关并发症,包括血脂异常、胰岛素抵抗,和心血管疾病;证据已经积累,低品位炎症在肥胖引起的并发症中发挥着关键作用11,31日- - - - - -37]。
增加脂肪细胞的大小是由澳洲坚果油减毒治疗。脂肪细胞直径的增加与细胞内稳态扰动,如胰岛素抵抗、炎症、缺氧(38]。大型组织的患病率增加瘦素生产和分泌,观察到在我们的研究(39]。瘦素与海拔的增加在低品位炎症。瘦素是已知的在淋巴细胞刺激促炎细胞因子的产生40- - - - - -42),单核细胞(43),和巨噬细胞44]。
老鼠的HFD 8周展出腹膜后脂肪组织il - 10含量增加。这个结果可能与过氧物酶体扩散国的增加激活受体(PPAR -γ活动。这个核受体增加小型脂肪细胞的数量,提高了il - 10 (45,46]。脂肪组织il - 10含量的增加会导致巨噬细胞极化(2型)对重构和组织修复很重要47,48]。此外,脂肪细胞il - 10含量的增加与胰岛素敏感性增加脂肪组织(49,50]。
il - 1β强烈诱导炎症反应在先天免疫细胞(51),通过物和NFB通路(52]。il - 1β也是一个强有力的电感的胰岛素抵抗。这通过ERK激活细胞因子刺激葡萄糖摄取减少53]。患者循环il - 1的高水平β与2型糖尿病的开发更大的风险(54]。脂肪组织和腹膜巨噬细胞il - 1的两个来源β,澳洲坚果油补充是有效降低生产的细胞因子。然而,出乎意料的,清洁发展机制显示il - 1增加β生产在LPS刺激后腹膜巨噬细胞。
没有生产增加LPS-stimulated巨噬细胞在高脂饮食的老鼠更明显(24]。我们在此证明同样的模式和补充与澳洲坚果油防止生产由高频小鼠腹腔巨噬细胞。其他生物活性的化合物,如儿茶素和白藜芦醇55),减少生产通过MAP激酶,巨噬细胞抑制物和NFB信号(56]。
总之,澳洲坚果油补充减毒炎症和肥胖小鼠脂肪细胞肥大。
利益冲突
作者宣称他们没有利益冲突的数据。
确认
作者感谢教授瑞Curi论文的修订和不断的支持和鼓励。这项工作是支持由Fundacao德帕罗尽管做Estado de圣保罗(FAPESP)必须占州政府和慰问Nacional de Desenvolvimento Cientifico e学府(CNPQ)。
补充材料
脂肪酸成分在中性或极性脂质分数持平在腓肠肌肌肉,无论饮食和澳洲坚果油补充。