文摘

黄酮类化合物,从黄芩(中国无边便帽)和金合欢儿茶(黑儿茶),产生不同的治疗效果,包括抗炎、抗病毒、抗菌、抗癌活性。Flavocoxid混合提取含有黄芩苷和儿茶素,它作为一个双平衡抑制剂cyclooxygenase-1 (COX-1)和cox - 2过氧化物酶酶活性的显著抑制5-lipoxygenase (5-LOX)酶活性在体外。Flavocoxid会使基因或蛋白质的表达一些炎症标记物和施加在几个实验模型还强大的抗氧化活性。控制临床试验和上市后的一项研究已经证明,flavocoxid一样有效的萘普生在管理骨关节炎的症状和体征的膝盖和更好的上消化道,肾,呼吸比萘普生的安全性。Flavocoxid可能因此提供一个潜在的治疗慢性炎症性疾病的治疗方法。

1。介绍

炎症被认为是人体的主要反应诱发处理伤害和其特点包括肿胀、发红、疼痛,发烧1]。几个介质调节急性炎症的事件,影响血管的变化,并引发炎症细胞招聘(1- - - - - -3]。炎症反应是一个复杂的自限性过程正是监管,防止广泛的主机损坏。当这种保护机制监管不当的自我限制的性质,这是慢性炎症状态转换为不利。几个与慢性炎症相关疾病,包括骨关节炎、动脉粥样硬化、糖尿病、肥胖、克罗恩氏病和癌症(1- - - - - -3]。虽然今天使用甾体抗炎药(说)和非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药)有效地管理急性炎症反应,在慢性炎症状态的长期治疗是紧随其后的是严重的负面影响。这证明寻找创新的和安全的抗炎剂。有吸引力的候选人植物成分的研究。最近,有兴趣的潜在的类黄酮调节慢性炎症反应。黄酮类化合物主要成分的水果、蔬菜和饮料,如酒、茶、可可、和果汁。黄酮类化合物具有类似的结构组成的两个芳香环(a和B),由三个碳原子结合在一起,形成一个含氧杂环(环C;图1)。根据化学结构的变化,黄酮类化合物分为七类:黄酮醇、黄酮、黄烷酮类,采用,黄烷醇,花青素,异黄酮4]。黄烷醇,也称为flavan-3-ols主要出现在绿茶和红茶、红酒、巧克力和水果如苹果、葡萄、草莓。典型的饮食黄烷醇包括儿茶素、表儿茶素、儿茶素(EGC)和儿茶素(EGCG)。如芹黄素和毛地黄黄酮,黄酮是欧芹,细香葱,洋蓟和芹菜。饮食黄烷酮类包括柚苷配基,hesperetin、花旗松素被发现主要在柑橘类水果和番茄。最后,异黄酮染料木素和大豆苷等黄酮类化合物家族的一个子类中发现大豆和豆制品。他们有一个大的结构变化和超过600异黄酮已确定日期和分类根据氧化水平中央吡喃环(图1)。金合欢儿茶,也叫做黑儿茶,是传统的药用植物常用在印度次大陆和东南亚,退热剂、止泻的,那些和王亚南活动(5,6]。的主要化学成分金合欢儿茶提取儿茶素和epicatechin-3-O-gallate。儿茶素减少炎症和阻碍促炎细胞因子的生产,如(il - 1)及肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α),在大鼠实验性关节炎患者(7]。黄芩传统的中草药,也称为中国无边便帽,已被用于治疗呼吸道炎症性疾病(8- - - - - -12),病毒感染(13- - - - - -15),心血管疾病(16- - - - - -18),和癌症(19,20.]。黄芩苷提取,黄芩,抑制环氧酶COX-1 cox - 2过氧化物酶和5-lipoxygenase (5-LOX)酶活性,减少促炎类花生酸的生产,并在一个变弱水肿在活的有机体内炎症模型(21]。黄芩苷的抗炎活动也被关联到一个绑定抑制趋化因子,如巨噬细胞炎性蛋白(MIP) 1βprotein-2单核细胞的趋化作用(MCP-2),造成能力降低的趋化因子诱导细胞迁移(21]。类黄酮素、黄芩苷和儿茶素,调节花生四烯酸的活动代谢酶参与这个途径,伊诺(没有生产酶)。Flavocoxid是类黄酮分子儿茶素的混合物,金合欢儿茶、和黄芩苷提取黄芩,集中纯度大于90%(图2)。由于其组件flavocoxid,除了消炎,也可能作为一种抗氧化剂,减少活性氧包括氢氧自由基,超氧化物阴离子自由基和过氧化氢。2类黄酮的综合效应大于孤立分子,最近的一篇论文中所示(22]。由于NF -κB调制,flavocoxid降低cox - 2、5-LOX伊诺和肿瘤坏死因子α生产,它还会钝化cox - 2的形成,5-LOX,伊诺代谢物,PGE2、LTB4,硝酸盐(22- - - - - -24]。这些影响提供一个理由使用双重抑制剂在急性和慢性炎症条件。Flavocoxid,销售Limbrel在美国,是USFDA-regulated处方,它预计将有显著的治疗效果在慢性炎症的管理。本文将专注于临床前药理学,毒理学,临床药理学新化合物的吸引力。

2。制备Flavocoxid

Flavocoxid准备的根源黄芩和金合欢儿茶(美国专利号7514469)。的根源黄芩与70%乙醇提取,然后用乙醇/水溶剂(再结晶23]。的黄芩提取物中含有黄芩苷的主要组件和额外的小free-B-ring类黄酮。的根金合欢儿茶(+)儿茶素是主要的组件在80%的内容。小数量的对映体表儿茶素和其他存在少量的黄烷(23]。提取物分别进行分析通过高效液相色谱二极管阵列检测器(HPLC / PDA)和液体相色谱分析-质谱法(LC / MS)和显示的主要化合物,黄芩苷,从黄芩提取和(+)儿茶素金合欢儿茶提取与已知的标准相比。然后这些化合物的存在证实了碳核磁共振(¹³理化性质)和质子核磁共振(¹氢谱)分析,分别。最后flavocoxid配方(图2)> 90%的混合物纯化黄芩苷和儿茶素与其余被赋形剂(5 - 6%)和水(3%)。确认可以获得总类黄酮含量的高效液相色谱分析。黄酮类化合物都是使用紫外检测器检测到275海里,根据保留时间与已知的类黄酮相比标准(23]。这些成分被普遍认为是安全的(肝)。为一种成分被认为是肝由美国食品和药物管理局(FDA),它需要无毒性和安全技术示范,通用识别通过广泛使用的安全,和协议的安全由该领域的专家。

3所示。Flavocoxid对花生四烯酸的形成和代谢的影响

一系列的在体外和在活的有机体内实验进行了以解剖flavocoxid的确切的作用机制。首先,flavocoxid测试在腹膜巨噬细胞(MΦ)刺激与脂多糖(LPS)调查可能影响磷脂酶₂(中国人民解放军₂)活动24]。Flavocoxid没有明显在200年和500年修改细胞生存能力μ克/毫升,但它明显抑制人民解放军₂活动(集成电路₅₀= 60μ50 g / mL)的剂量,100,200,500μ克/毫升(24]。这一发现表明,flavocoxid调节AA的一代膜磷脂在慢性炎症引起的组织损伤。flavocoxid COX-1和cox - 2酶活性的影响也在专门的调查在体外酶化验(24]。考克斯蛋白质有两个不同的酶半个AA新陈代谢:环氧合酶(CO)和过氧化物酶(PO)之一。公司活动转换PGG AA₂和阿宝活动转换PGG PGH₂。最后,细胞合成酶和异构酶PGH转换₂凝血恶烷(TXB)、前列腺素(PG)和环前列腺素(PGI)。实验进行了调查特定抑制剂flavocoxid对公司的影响和阿宝酶的半个COX-1或cox - 2。复合无显著首次cox - 2活动50μ克/毫升。此外,flavocoxid显示COX-1 IC₅₀25μg / mL,吲哚美辛有限公司COX-1 IC₅₀0.012μg / mL,从而表明flavocoxid没有首次活动对考克斯酶相比,著名的抗炎剂。失衡cox - 2与COX-1抑制造成选择性cox - 2导致生产的几个AA代谢物负责水肿的风险提高,高血压,心肌梗塞(25]。Flavocoxid产生一个平衡的抑制COX-1和cox - 2的阿宝活动,与集成电路₅₀12.3和11.3的μ分别g / mL。这清楚地表明,flavocoxid施加其活动通过调制的阿宝这些酶的活性。当前可用非甾体抗炎药和cox - 2抑制剂不影响5-LOX通路,因此不阻止危险的生产白细胞三烯(LTs)引起血管收缩和白细胞吸引和积累。此外COX-1和cox - 2封锁非甾体抗炎药或选择性cox - 2抑制剂引起的分流AA向5-LOX代谢通路,从而导致这些脂肪酸的生产过剩介质可引起多器官损伤(26]。提高水平的LTs也以各种病理条件如哮喘、胃溃疡,肾功能不全,和心血管并发症27,28]。Flavocoxid孵化以及纯化5-LOX酶在氧气传感chromagen的存在在体外研究的形成不稳定hydroperoxyeicosatetraenoic酸中间体合成的LTs (HPETEs)。Flavocoxid抑制5-LOX酶显示一个集成电路₅₀110年μ克/毫升。著名5-LOX Phenidone抑制剂作为一个积极的控制这些化验,有一个集成电路₅₀1.3μ克/毫升。没有其他非甾体抗炎药或选择性cox - 2抑制剂,包括万络,valdecoxib,双氯芬酸,meloxicam,阿司匹林,显示一个anti-5-LOX活动。所有这些发现,综上所述,表明flavocoxid也减少了生产的LTBs 5-LOX,避免可能造成的有害积累这些脂质介质NSAIDs-induced 5-LOX分流。非酶的脂质过氧化作用的另一个重要途径是AA的新陈代谢。活性氧(ROS)可能与夸张的AA反应水平导致生产F2-isoprostanes和4-hydroxynonenal (HNE)一起增强丙二醛水平。所有这些标记在慢性炎症的氧化压力升高,导致病理级联导致器官损伤和功能障碍。因此,有关抗炎剂具有抗氧化作用。实验进行了分析这个问题,和在体外flavocoxid抗氧化活性的评估使用氧自由基吸收能力(ORAC)过程,并与已知的抗氧化剂如维生素C和维生素e . ORAC分析提供了一个衡量抗氧化剂对过氧化氢自由基的清除能力。水溶性维生素E模拟Trolox,用作校准标准,结果表示为μmolTE / g干重。的flavocoxid (3719μmolTE / g)明显比维生素C (2000μmolTE / g)或维生素E (1100μmolTE / g)。Flavocoxid也显示高值铁减少/抗氧化电源(收紧),过氧亚硝基彻底避免容量(NORAC)和Trolox等效抗氧化能力(问题),因此清楚地表明这种化合物产生很强的抗氧化活性(24]。

4所示。Flavocoxid对促炎基因表达的影响

flavocoxid在基因和蛋白质表达的影响在大鼠腹膜巨噬细胞刺激炎症标记物进行了研究肠炎沙门氏菌有限合伙人(29日]。实际上它值得感兴趣的识别为抗炎剂的作用机制在炎症基因和蛋白质表达水平。腹膜巨噬细胞的组成型表达COX-1和有限合伙人没有修改它。相比之下LPS刺激腹膜巨噬细胞导致显著增加cox - 2和5-LOX表达式(29日]。Flavocoxid减毒,以浓度依赖方式,cox - 2的增加和5-LOX表达(29日]。一起LPS-induced cox - 2和5-LOX激活,代铂族元素₂和LTB₄明显增强。Flavocoxid显著降低铂族元素的增加₂和LTB₄。此外,LPS-primed巨噬细胞有一个增强的mRNA表达对伊诺和增强硝酸内容;flavocoxid明显减弱,以浓度依赖的方式,增加伊诺和硝酸生产。这些结果(22,24,29日]表明flavocoxid抑制cox - 2、5-LOX和伊诺基因激活和废除相关炎症介质的生物合成。在这些介质所扮演的重要角色是TNF -α、多向性的促炎细胞因子(30.),明显诱导与LPS刺激腹膜巨噬细胞。Flavocoxid引起显著减少和浓度依赖的肿瘤坏死因子的水平α信使rna和成熟蛋白的形成。核因子kappa-B (NF -κB)在炎症级联中起着重要作用[31日];这是一个重要的转录因子复杂的调节多个基因的表达参与免疫和炎症反应在慢性人类疾病(32,33]。如果细胞,NF -κB是既定的局部细胞溶质的异质二聚体物理协会抑制蛋白,叫我κBα。激活后,NF -κB异质二聚体迅速转移到细胞核,激活靶基因的转录,包括促炎细胞因子的基因编码,粘附分子,趋化因子,诱导酶(如cox - 2、5-LOX和间接宾语)。Flavocoxid减少我κBα损失从细胞质和钝NF -κB结合DNA LPS-stimulated巨噬细胞(29日]。因此flavocoxid,行为通过NF -基因和蛋白质表达水平κB活动抑制,阻止auto-amplifying循环中炎症反应。

5。炎症Flavocoxid对实验模型的影响

Flavocoxid研究在动物实验模型炎症旨在测试其有效性。在第一个实验中,胶原诱导的关节炎(CIA)诱导小鼠在DBA / 1的皮内注射乳剂含有牛II型胶原蛋白完全弗氏佐剂。中央情报局的动物被随机分配接受车辆或flavocoxid(20毫克/公斤)和治疗持续了45天(图3数据文件)。Flavocoxid减少铂族元素₂和LTB₄水平,显著改善关节炎的临床症状,改善了组织学损伤,减少软骨的循环水平表达和一些严重疾病的标记包括TNF -α、il - 6高机动组盒1 (HMBG-1),还导致一个增强抗炎细胞因子il - 10的表达。有趣的是,flavocoxid积极调节受体激活核因子之间的平衡κB配体(RANKL)和osteoprotegerin(功能),参与骨骼和软骨细胞因子系统重构。集体这些实验结果证明flavocoxid代理是一种有价值的治疗治疗炎症条件,包括关节炎和骨关节炎。

双重抑制剂也检测在急性炎症性疾病,如急性胰腺炎、autodigestive炎性疾病,导致腺泡的细胞损伤,最后的高潮在胰腺的出血性坏死,最终多器官功能衰竭(34]。大量的证据表明,upregulation炎症介质,包括cox - 2, 5-LOX,细胞因子,趋化因子,协调这个病理过程(35]。急性胰腺炎可以诱导大鼠注射cerulein,促分泌素剂。Flavocoxid追究它的影响在cerulein-induced胰腺炎(36)的剂量20毫克/公斤;它抑制cox - 2和5-LOX表达和降低血清脂肪酶和淀粉酶和胰腺水肿的程度。flavocoxid也使政府增加胰腺肿瘤坏死因子-α血清LTB mRNA的表达₄和铂族元素₂水平,防止组织损伤的液泡化和白细胞浸润。这些有趣的发现可能会提供一个潜在的治疗方法治疗高危患者开发这种危及生命的条件。

Flavocoxid也测试了退行性慢性疾病,杜氏肌萎缩症(DMD),渐进式肌肉疾病导致死亡,通常在成年早期37]。疾病源于缺乏肌营养不良蛋白的蛋白质,这是一个重要组成部分dystrophin-glycoprotein复杂,保持膜完整性的肌肉纤维细胞骨架与细胞外基质。肌肉变性肌肉萎缩症加剧了内生炎症反应和氧化应激增加,和NF -κB在策划中起着关键作用这个炎症级联(38,39]。flavocoxid的影响进行了研究与比较研究甲基强的松龙,黄金标准治疗DMD患者,使用mdx老鼠、DMD的小鼠模型37]。有没有mdx小鼠治疗5周flavocoxid,甲基强的松龙或车辆。Flavocoxid比甲基强的松龙在更有效的改善功能性质在活的有机体内和在体外;在降低血清肌酸激酶(CK)、肌肉坏死的标志;在削弱氧化应激标记和炎症介质的表达。此外更有效率比甲强龙,flavocoxid抑制NF -κB和增殖蛋白激酶(MAPKs)信号通路,减少肌肉坏死,增强肌肉再生(37]。这个实验表明flavocoxid抵消慢性炎性级联,导致肌肉坏死和变性DMD显示一定程度的活动高于甲基强的松龙。自甲强龙也拥有重要的副作用,flavocoxid与更好的safety-efficacy概要文件可能代表一个有价值的替代治疗DMD。然而这一假设值得在临床证实。

在另一个实验模型的慢性炎症,良性前列腺增生(BPH),我们测试的影响flavocoxid因为考克斯和5-LOX明显升高在疯狂生长的前列腺40]。因此“双重抑制剂”的考克斯和5-LOX酶可能在这种疾病中受益。老鼠治疗,每日,丙酸睾酮(3毫克/公斤/ sc)或其车辆为14天。睾丸激素注射动物被随机分配接受车辆(1毫升/公斤,ip)或flavocoxid(20毫克/公斤,ip) 14天。Flavocoxid减少前列腺重量和增生,迟钝的增强表达cox - 2和5-LOX以及铂族元素的增加产量₂和LTB₄,提高了proapoptotic伯灵顿和caspase-9,减少凋亡bcl - 2 mRNA。Flavocoxid也减少表皮生长因子(EGF)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达。从这项研究中获得的数据表明,“双重抑制剂”的考克斯和5-LOX酶,如flavocoxid,可能代表一个基本原理的治疗方法减少良性前列腺增长(40]。

6。Flavocoxid毒性研究

毒理学测试的相对纯组合黄芩苷和(+)儿茶素已被执行在体外在实验动物(41,42]。THP-1细胞,人类单核细胞永生化细胞系,被用来评估在LDH测定细胞毒性。当细胞生长汇合的单层然后暴露于几个非甾体类抗炎药浓度增加,塞来昔布,和黄芩苷/(+)儿茶素组合,只有消炎痛和塞来昔布有明显细胞毒性高于50μ克/毫升。Flavocoxid显示低细胞毒性测试浓度(100年最高μg / mL) (41]。急性(2000毫克/公斤/天连续14天)和subchronic(50, 250,和500毫克/公斤/天)小鼠的毒性研究显示没有异常毒性终点检查包括动物体重、总值器官和组织病理组织学、血液化学或血清学(42]。Flavocoxid也管理费舍尔344只老鼠,非甾体抗炎药胃毒性模型,没有迹象显示溃疡(41]。黄芩苷/(+)儿茶素组合测试10μM集中在肝微粒体试验与内质网使用光谱光度测量的分数量子化7-benzyloxy-4——(trifluoromethyl)香豆素的衬底CYP450剖析。Flavocoxid显示只有适度抑制CYP1A2 10 (23%)μM和低浓度抑制其他CYP亚型(11/16%)。合并后的提取也显示没有诱变在艾姆斯测试(41]。额外的90天口服毒性研究是进行Hsd: SD大鼠,以确定潜在的黄芩苷/(+)儿茶素组合产生胃毒性(42]。Flavocoxid管理在250年的剂量水平,500和1000毫克/公斤/天。没有flavocoxid-related不良事件,包括死亡率、体重和食品消费的变化,影响神经系统(由功能评估观察电池和电动机活动),器官重量的变化,或组织病理学改变。此外flavocoxid没有造成精子数量的变化和可比发情老化(42]。这项研究发现了一种剂量为1000毫克/公斤/天/ no-observed-adverse-effect水平(科学)。这个有前途的临床前安全性flavocoxid鼓励使用的人类。

7所示。临床证据支持Flavocoxid疗效和安全性

设计比较研究的有效性和安全性flavocoxid萘普生在主题与中度到重度骨关节炎(OA)的膝盖43,44]。这是一个随机、多中心,双盲研究涉及220例OA的膝盖被随机分配接受flavocoxid(500毫克每日两次)或萘普生(500毫克每日两次12周)。主要结果的措施包括西安大略和麦克马斯特大学骨关节炎指数(WOMAC)和分量表和时间走路。超过90%的受试者在两组显著减少OA的症状和体征。flavocoxid之间没有统计显著差异疗效观察和萘普生(43,44]。Flavocoxid治疗也显著减少了患者上消化道,肾,呼吸系统不良事件(AEs)。这些结果表明,与萘普生flavocoxid是有效管理OA的膝盖比萘普生,显示了更好的安全性。一个额外的研究在健康的志愿者发现flavocoxid并不影响的主要或外在途径止血,不抑制阿司匹林的抗凝效果,可能在心血管患者慢性炎症(45]。非盲,上市后研究(目标:评估骨关节炎(OA)和污水)来确定执行的总体疗效和胃肠道耐受性flavocoxid [46]。共有1067名患者在41风湿病学实践登记和规定flavocoxid 500毫克b.i.d. 60天。医生全球疾病评估(PGAD)视觉模拟量表(血管)作为全球测量评估OA的症状和体征,包括关节不适,功能性刚度、功能性移动性和生活质量。此外整体耐受性和上消化道耐受性是评估个人问题得分五部分李克特规模。医生也要求监视任何中断或停止使用flavocoxid由于胃肠道症状以及改变gastroprotective药物的使用。密切监测不良事件(AEs)也进行了。在1005名患者完成了所有的后续访问脉管得分有显著改善。最重要的改进是中度到重度的患者中观察到OA和在这些学科历史nonresponders非甾体抗炎药。o AEs的发生率低也被观察到具有良好的整体和胃肠道耐受性。除了使用flavocoxid导致> 30%的减少或停止gastroprotective药物包括质子泵抑制剂或histamine-2受体拮抗剂(46]。整体研究,即使是开放标签和严格控制,表明flavocoxid具有显著功效OA的管理和良好的安全性(46]。

8。结论

甾体抗炎药和非甾体类抗炎药物是有效管理的急性炎症反应,但他们不成功影响慢性炎症状态和具有严重的负面影响。Flavocoxid是黄酮类化合物分子的混合物儿茶素,金合欢儿茶、和黄芩苷提取黄芩集中,纯度大于90%。Flavocoxid后人民解放军₂导致平衡抑制COX-1和cox - 2的过氧化物酶,减少半个从5-LOX LTBs的生成,避免造成的有害积累这些脂质介质NSAIDs-induced 5-LOX分流。它还强大的抗氧化活性,通过NF -κB活性抑制块放大循环炎症反应和行为的基因和蛋白质表达水平(图4)。它在几个炎症实验模型施加有益的影响。在体外和急性毒性测试和subchronic毒性动物研究表明flavocoxid最佳临床前安全性。最后,临床试验和上市后的一项研究表明,flavocoxid有显著功效OA的管理和良好的整体和胃肠道耐受性。Flavocoxid可能因此提供一个潜在的治疗方法治疗急性和慢性炎症条件。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。