文摘

背景和目的。白细胞游走到肺泡空间中扮演着一个关键的角色在肺部炎症导致肺损伤。急性乙醇(EtOH)曝光发挥抗炎作用。的临床使用EtOH由于其副作用是至关重要的。这里,我们相比EtOH和丙酮酸乙酯(EtP)中性粒细胞粘附和激活的肺泡上皮细胞培养(A549)。实验方法。课程时间和剂量依赖性释放白介素- 6 (IL)和引发A549测定预处理后A549的EtP(2.5 -10毫米),丙酮酸钠(打盹,10毫米),或EtOH(85 - 170毫米),后续的脂多糖或IL-1beta刺激。中性粒细胞粘附和预处理刺激A549单层膜和表面CD54表达测定。关键的结果。治疗A549 EtOH或EtP大幅减少引发的细胞因子释放和il - 6。EtOH和EtP(但不打盹)减少中性粒细胞的粘附层剂量和时间的方式。CD54表达对A549 EtOH IL-1beta刺激前或EtP治疗后下降。结论和启示。EtP减少分泌,胶粘剂的肺上皮细胞在炎症条件下的潜力。这些发现表明EtP作为一个潜在的治疗选择,模拟EtOH抗炎作用的早期肺部的炎症反应。

1。介绍

酒精(乙醇),描述了免疫调节药物,产生不良影响和不一致的急性或慢性炎症反应不同的使用剂量。酒精消费的发病机制是一个重要的风险因素数-临床结果。它一直伴随着每年三分之一的所有创伤死亡(1,2]。陶醉外伤病人获得感染性并发症风险较高,在临床过程如肺炎、败血症和多器官功能衰竭(MOF) (3- - - - - -9]。因此,外伤或烧伤后的复苏是长时间(10]。相比之下,其他的研究报告的结果显示,急性酒精中毒不影响结果,甚至与创伤后24小时死亡率下降相比,慢性肝损伤患者(11]。慢性饮酒与增加促炎细胞因子反应(12),而急性或低剂量饮酒发挥抗炎作用13,14]。损害宿主防御的酒精和随后对感染的易感性与多形核中性粒细胞(中性粒细胞)减少迁移以及坚持内皮细胞分泌的减少促炎白介素8 (IL) (15]。另一方面,适度饮酒与降低心血管疾病的风险事件,如心肌梗死或中风的发病率降低入学严重创伤性脑损伤患者的凝血病(16- - - - - -18]。所有这些发现表明酒精的剂量和时间影响宿主免疫力还在急性炎症条件下其强大的治疗潜力。然而,它的实际应用由于其进入中枢神经系统是有限的在临床的设置。

丙酮酸乙酯(EtP),由丙酮酸和乙醇,是一个稳定、良好的复合,产生类似的抗氧化和抗炎作用,丙酮酸(19,20.]。丙酮酸乙酯被发现防止脂多糖(LPS)诱导发展中老鼠大脑的白质损伤(21有限合伙人灌注后],减少炎症反应在活的有机体内(22),防止ventilation-induced嗜中性粒细胞浸润和氧化应激23,减毒动物肝损伤严重程度与严重急性胰腺炎(24]。此外,EtP直到治疗脓毒症的发病后24 h授予有益的影响在活的有机体内(25]。由于其稳定性好,没有副作用,治疗窗宽,使用显然没有中毒的迹象,EtP可能是临床上用于治疗急性炎症条件。

因此,我们暴露了永生的人类肺泡上皮细胞A549 EtOH或EtP和行之有效的促炎代理有限合伙人或IL-1beta刺激细胞。我们评估是否EtP带来有利影响类似EtOH在时间和剂量依赖性的方式“发炎”肺文化。

2。材料和方法

2.1。细胞培养

人肺腺癌A549细胞行购买从细胞系服务(德国海德堡)。细胞培养在37°C下5%的股份有限公司₂rpmi - 1640年媒介(Seromed,柏林,德国)补充heat-inactivated 10%胎牛血清(FCS)、青霉素100单位/毫升和100年μg / mL链霉素(Gibco,卡尔斯鲁厄,德国)和20毫米消息灵通的缓冲区(σ,Steinheim,德国)。文化媒体改变了每2或3天。细胞生存能力评估与各种物质刺激后测量的细胞质酶乳酸脱氢酶(LDH、细胞毒性检测设备,罗氏,潘茨堡,德国)如下所述。

隔离的血液中性粒细胞(中性粒细胞)健康志愿者是符合赫尔辛基宣言和歌德大学机构伦理委员会的批准。所有登记对象给知情同意自己符合道德标准。中性粒细胞通过密度梯度离心分离(Polymorphprep,奈科明,奥斯陆,挪威)根据制造商的指示和先前报道26]。隔离之后,中性粒细胞在rpmi - 1640培养基培养如上所述,他们的数量以及他们的生存能力是由台盼蓝排斥试验确定的。只有细胞培养的纯度> 95%是用于实验使用。

2.2。细胞刺激

EtOH的浓度,EtP,午睡IL-1beta和有限合伙人是基于以前的别人的和自己的工作,允许更好的比较数据。EtOH曾在85和170毫米(0.5对应1卷卷⁻¹百分比,对应于4 - 7.9毫克EtOH毫升⁻¹)如前所述15,27,28]。同样,EtP的浓度(2.5和10毫米)和午睡(10毫米)选择从以前的工作15,29日]。EtP,细胞被刺激与EtOH或午睡1,24,72 h研究急性大致和/或慢性酒精暴露的影响。主要的实验设计实验的示意图时间表后剂量和时间进程确定如图4。

的时间和剂量依赖性A549细胞的分泌能力是由刺激与重组IL-1beta(0.1、1或10 ng / mL,研发系统、威斯巴登,德国)或有限合伙人大肠杆菌0127:B8(0.01, 0.1, 1或10μg / mL,σ)4、8、12、24小时。由于分泌il - 6的浓度,引发,及我们使用IL-1beta 1 ng / mL的剂量和有限合伙人1μg / mL和刺激A549细胞24小时研究EtOH和EtP的影响。

2.3。细胞生存能力

A549细胞生存能力由细胞质LDH的测量来评估。在质膜受损细胞LDH释放到细胞培养上清液。从细胞LDH的活性在上层清液收集处理EtOH, EtP,打盹,IL-1beta,有限合伙人决心保持酶的剂量和时间的方式根据制造商的指令(细胞毒性检测设备(LDH),罗氏)。A549可行性> 95%的时间和剂量选择治疗的细胞。此外,没有分离的细胞是由微观检测评估的细胞层。

台盼蓝排斥试验是用来确定中性粒细胞的可行性。短暂,分离中性粒细胞沾0.4%台盼蓝和大约100个细胞被计算为每个孤立。可行性的平均比例> 99%。

2.4。量化细胞因子的生产

A549细胞孵化与不同剂量的IL-1beta和有限合伙人在时间进程。在每个时间点文化上层的收获和细胞因子il - 6的浓度,引发,及由Quantikine化验(研发系统)根据制造商的指示。ELISA进行使用M200无限标(Tecan、Mannedorf、瑞士)。

确定EtOH的影响,EtP,小睡在细胞因子的生产,A549细胞preincubated EtOH, EtP,或午睡1,24日或之前72 h 24小时的刺激与IL-1beta或有限合伙人。然后,il - 6和引发以文化上层的如上所述。发现在这些实验中,不同的细胞因子释放的细胞因子水平百分比相对于刺激控制表达。

2.5。核糖核酸(RNA)隔离,定量Reverse-Transcription-Polymerase连锁反应(rt - pcr)

与EtOH预培养后,EtP,或者小睡,24日或72 h和刺激与IL-1beta或有限合伙人24 h,总RNA A549的孤立使用RNeasy-system(试剂盒、希尔登,德国)根据制造商的指示。剩下的残留大量的DNA被使用RNase-Free DNase根据制造商的指令集(试剂盒、希尔登,德国)。RNA在−立即存储80°C。质量和数量的RNA测定光度计的使用NanoDrop nd - 1000设备(NanoDrop技术,威明顿、德、美国)。

RNA随后用于存在。简而言之,相反100 ng的总RNA转录使用亲和力脚本QPCR-cDNA合成装备(美国Stratagene拉霍亚,CA)后,制造商的指示。确定的mRNA表达Hsp70,进行中存在一个Stratagene MX3005p QPCR系统(Stratagene)使用gene-specific引物对人类HSPA4 (NM_002154 UniGene号码:Hs.90093 Rn.9873,猫数量:PPH01188C)从SABiosciences购买(SuperArray,弗雷德里克,医学博士,美国)。参考基因的表达GAPDH与人类GAPDH (002046 NM, UniGene号码:Hs.592355,猫数量:PPH00150E;SABiosciences SuperArray,弗雷德里克,医学博士,美国)测量。这些引物序列。成立1×RT PCR反应²SYBR绿/火箭qPCR大师混合(SABiosciences) 25μL体积根据制造商的指示。两步放大协议组成的初始变性在95°C 10分钟紧随其后40周期15变性在95°C和60年代退火选择/扩展60°C。熔化曲线分析应用于控制放大产品的特异性。

相对目标mRNA的表达在每个样本计算比较threshold-cycle (CT)方法(ΔCT方法)。简而言之,目标mRNA的数量在每个样本归一化的GAPDH信使rna,给ΔCT然后校准器组成的样品如果但A549细胞预处理获得的。相对目标基因的mRNA表达呈现变化百分比,如果控制计算每个如果样本归一化后的关系GAPDH。

2.6。表面CD54表达

与EtOH预处理后,EtP,午睡和刺激IL-1beta和有限合伙人,A549细胞被洗在PBS(0.5%牛血清albumine, BSA)然后孵化与fluorescein-conjugated鼠单克隆抗体针对ICAM-1 / CD54 (BBIG-I1;研发系统,德国威斯巴登)60分钟在4°C。CD54表达通过流式细胞术使用流式细胞仪测定石中剑(BD生物科学、海德堡、德国,1×10⁴细胞每扫描)和表达为荧光单位(MFU)。一只老鼠IgG1荧光素抗体(11711;研发系统)是用作控制同形像。

2.7。单层附着力试验

分析中性粒细胞粘附A549预处理,A549被转移到24-well多平台(猎鹰Primaria;正欲,德国海德堡)完成rpmi - 1640中。confluency ~ 80%达到时,A549细胞preincubated EtOH, EtP,或者小睡1 h和刺激与IL-1beta或有限合伙人24 h。然后刚分离中性粒细胞(5×10⁴细胞/)精心添加到A549单层或一个空的塑料表面60分钟。随后,不依从中性粒细胞被冲洗掉3 x使用加热(37°C)完成rpmi - 1640中。剩下的中性粒细胞和1%戊二醛固定。附着的中性粒细胞数在五个不同的字段定义的大小(5×0.25毫米²)使用相差显微镜(×20目的)和平均细胞粘附率计算。

2.8。统计分析

所有实验进行3 - 6次。组由Wilcoxon-Mann-Whitney之间的区别U以及。一个P值小于0.05被认为是显著的。数据给出平均值±标准平均误差(s.e.m)。所有统计分析采用GraphPad棱镜5 (GraphPad软件公司,圣地亚哥,CA)。

3所示。结果

3.1。测量的分泌A549细胞的潜力

为了揭示分泌潜能以及时间和剂量反应A549细胞的促炎介质,A549释放引发及护,il - 6 IL-1beta或LPS刺激后评估。

3.1.1。引发释放

IL-1beta和LPS诱导剂量和时间释放引发(图1)。IL-1beta在所有使用浓度(0.1,1和10 ng / mL)增强引发释放不断增加孵化时间(图1(一))。剂量反应曲线峰值的24小时孵化与1 ng / mL IL-1beta刺激剂量来ng / mL引发(,图1(一))。有限合伙人略有增强引发释放取决于剂量,但24小时后刺激与1μ克/毫升剂量反应达到高峰相比ng / mL引发如果样品后24小时(,图1 (b))。

3.1.2。及发布

IL-1beta和LPS诱导剂量和时间释放及(图2)。在每个浓度(0.1、1和10 ng / mL) IL-1beta增强及释放显著峰值后24 h(图2(一个))。最高的反应是观察后24 h与1 ng / mL IL-1beta增加刺激在如果ctrl键来pg / mL及(,图2(一个))。有限合伙人增强及释放在每个时间点在最高剂量(10μg / mL)与一个强大的峰后24小时(pg / mL及人物2 (b))。低剂量LPS的增加及24小时的潜伏期后才发布,达到显著的峰pg / mL及相比,如果ctrl刺激后1μg / mL有限合伙人(,图2 (b))。

3.1.3。释放il - 6

孵化后A549细胞IL-1beta显著白介素10 ng / mL IL-1beta剂量反应在每一个潜伏期相比,如果控件(,图3)。这个剂量反应不是观察到的在较低剂量的IL-1beta后4、8日或12 h孵化。与低剂量的IL-1beta 24小时孵化后,增强il - 6相比,释放所有刺激样本中,检测出控制(图3)。LPS刺激不明显alterate A549细胞释放il - 6在本实验设定(数据未显示)。

3.2。EtOH或EtP治疗后细胞因子的生产

此前有报道称短潜伏期与EtP减少释放引发刺激人类内皮和上皮细胞(15,30.]。这里,我们评估了影响促炎细胞因子的分泌潜能引发和il - 6与EtOH A549细胞预处理后,EtP,或午睡1,24日或72 h和随后的刺激与IL-1beta或有限合伙人24 h(图4)。

3.2.1之上。引发释放

在A549细胞,IL-1beta (1 ng / mL)或有限合伙人(1μg / mL)导致显著增加引发释放24 h后如图1。治疗EtOH 1或24 h不改变引发的释放,而治疗EtOH 72 h显著减少引发释放以低剂量(85毫米)48%和40%相比,在高剂量(170毫米)EtOH IL-1beta-unstimulated样本(,数据5(一)-5(c))。引发释放LPS-stimulated A549细胞已经被两个剂量的减少EtOH 1 h治疗后比治疗LPS-stimulated ctrl(分别为34%和100%,,图5(a))。24 h后只有低剂量EtOH减少引发释放显著(34%,图5(b))。72 h EtOH治疗显著降低引发释放在低剂量减少EtOH但这是重要的只有高剂量EtOH治疗后。

治疗与剂量的EtP显著减少IL-1beta诱导引发释放引起的刺激治疗相比ctrl只有24和72 h后(24小时:2.5毫米EtP, 69%引发释放,10毫米EtP, 66%引发释放;72 h: 2.5毫米EtP, 25%和10毫米EtP, 20%引发释放,分别,数据5(一)-5(c))。LPS-stimulation之后,EtP 1 h在治疗剂量并没有带来重大变化引发释放(图5(d))。EtP 24 h治疗剂量依赖性降低引发释放到52%和36%,分别为(,图5(e))。72 h后,只有10毫米EtP治疗显著减少引发释放到62% (,图5(f))。午睡减少LPS-stimulated引发释放72 h治疗后显著(数字5(d) -5(f))。

3.2.2。释放il - 6

il - 1β诱导释放il - 6的增加显著降低由EtOH剂量为72%(85毫米)和76%(170毫米),分别在1 h治疗比未经处理的刺激ctrl (,图6(a))。24 h和72 h EtOH治疗没有明显改变释放il - 6(数字6(b)和6(c))。治疗85毫米EtOH LPS刺激之前没有改变释放il - 6在潜伏期。高剂量EtOH(170毫米)显著降低il - 6释放77% 1 h和72 h后78%前预处理LPS刺激比未经处理的刺激ctrl (,数据6(d)和6(f))。在24小时预孵化EtOH没有授予任何释放il - 6(图的变化6(e))。

EtP显著和剂量依赖性抑制IL-1beta-stimulated释放il - 6至18%,61%,和23%低剂量(2.5毫米),18%,45%,和5%在1后高剂量(10毫米),24日和72 h预处理,分别为(,数据6(d) -6(f))。治疗2.5和10毫米EtP大大减少il - 6版本(1 h)到54%和32%,18%和2%(24小时),和11%和8% (72 h),分别治疗相比,刺激ctrl (,数据6(d) -6(f))。此外,午睡授予显著减少LPS-induced释放il - 6在任何潜伏期(,数据6(d) -6(f))。

3.3。Hsp70基因表达

实时PCR显示显著增加IL-1beta和LPS刺激后Hsp70表达相比,如果细胞收集在每个时间点1 h(146%和115%)、24小时(125%和131%),和72 h(176%和210%,分别地。而如果细胞,图7)。A549细胞接受85毫米或180毫米EtOH 1 h,然后刺激IL-1beta Hsp70表达大大减少(99%和109%,分别地;,图7(a))。低剂量EtOH预处理(85毫米)24小时小时没有造成Hsp70基因表达的变化,而高剂量EtOH(170毫米)显著降低基因表达而刺激了未经处理的细胞(,图7(b))。两EtOH剂量明显减少Hsp70表达72 h预处理后133%(85毫米EtOH)和100%(170毫米EtOH)相比,未经处理的刺激ctrl (,图7(c))。在LPS刺激A549细胞,EtOH显著降低24小时预处理后Hsp70表达高剂量(170毫米)和83%剂量(85毫米)的173%和110%(170毫米)72 h后预处理相比,刺激治疗ctrl (,数据7(e)和7(f))。

治疗与剂量的EtP造成IL-1beta刺激细胞Hsp70的表达显著减少1 h后预处理(2.5毫米:121%和10 mM: 103%, resp)相比,未经治疗的刺激ctrl (146%,,图7(a))。IL-1beta诱导Hsp70表达增加是在细胞接受低剂量减少到85% EtP(2.5毫米,),而高剂量EtP(10毫米)授予任何更改(图7(b))。72 h后只有预处理高剂量EtP Hsp70的表达明显减少到112% (,图7(c))。在LPS刺激A549细胞,高剂量EtP(10毫米)1 h和低剂量EtP 24 h和72 h强烈Hsp70表达下降89%,89%,和152%,分别比相应的未经处理的刺激ctrl (,数据7(d)和7(e))。高剂量EtP(10毫米)24小时或72 h Hsp70表达显著增加至167%和263%,分别比相应的未经处理的刺激ctrl (,数据7(e)和7(f))。午睡减少了Hsp70表达明显只在1 h预处理(96%,,图7)IL-1beta刺激A549细胞。

3.4。CD54粘附蛋白表达

IL-1beta刺激诱导A549细胞显著增加表面CD54蛋白表达相比,如果ctrl (,数据8(一)-8(c))。治疗EtOH 1 h, 24小时,或72 h都强烈CD54蛋白表达减少,低(85毫米),高剂量(170毫米)22和24 (1 h), 29日和31日(24小时),或27 MFU (, 72 h)相比,刺激治疗ctrl(41, 44岁,33 MFU,分别地。,数据8(一)-8(c))。LPS刺激并没有改变CD54的表达明显对A549细胞。然而,170毫米EtOH治疗减少CD54表达1 h,后24小时,或72 h预处理10 MFU比未经处理的刺激ctrl (,,数据8(d)和8(e))。CD54在IL-1beta刺激A549细胞蛋白表达减少低和高剂量的EtP 1 h和24 h后预处理相比,未经处理的IL-1beta刺激ctrl(23岁和22岁和41 MFU,以及29每个与44 MFU;,数据8(一)和8(b))。72 h后EtP并未改变CD54的表达。在LPS刺激A549细胞,EtP CD54的表达减少到10 MFU两剂量使用时1 h比未经处理的LPS刺激ctrl (,图8(a))。24 h后只有高剂量EtP显著减少从14 - 10 MFU CD54的表达(,图8(b))。其他孵化时间小睡EtP以及治疗没有显示显著变化(数据8(d) -8(f))。

3.5。中性粒细胞粘附

中性粒细胞的粘附能力A549单层显著增强IL-1beta刺激后从30%到86%,从33%到71% LPS刺激后A549细胞(,数据9(一个)和9 (b))。治疗A549层EtOH(85毫米和170毫米)1 h显著降低中性粒细胞粘附到70%和49%相比,中性粒细胞坚持治疗IL-1beta刺激A549细胞(,图9(一个))。在LPS刺激A549细胞,中性粒细胞减少观察坚持只在样品使用高剂量EtOH (46%,,图9 (b))。EtP预处理IL-beta刺激细胞显著减少中性粒细胞粘附到64%(85毫米EtOH)和66%(170毫米EtOH),分别为(,图9(一个))。在LPS刺激的样品,只有高剂量EtP(10毫米)1 h显著降低中性粒细胞的粘附到59% (,图9 (b))。治疗A549层打盹没有改变中性粒细胞粘附(图9)。

4所示。讨论

在目前的研究中,我们评估的影响急性和长期使用酒精和丙酮酸乙酯在人肺上皮细胞的促炎反应IL-1beta和LPS刺激(图4)。接触EtOH或EtP抑制这些反应IL-1beta或LPS刺激。两种物质剂量和时间的方式抑制IL-1beta以及LPS-induced引发和释放il - 6。这些影响是伴随着修改诱导Hsp70在回应刺激展示一个相当减少Hsp70感应EtOH或EtP IL-1beta刺激后在整个时间进程。然而,在LPS刺激EtOH交付类似的结果的IL-1beta刺激样本,而EtP在低剂量减少hsp70感应时明显倾向于增加在长期大剂量应用孵化模式。抑制细胞因子释放EtOH或EtP以及hsp70表达,伴随着CD54的表达抑制表面特别是急性孵化条件。中性粒细胞的依从性进行预处理和IL-1beta LPS刺激肺上皮细胞被EtOH和EtP下降。

先前的研究已经证明了免疫调节EtOH消费的潜力在不同型号的炎症。虽然慢性饮酒的影响增加促炎细胞因子反应和这些影响出现不利,其温和或急性摄入有几个有利的和抗炎作用12- - - - - -14,31日- - - - - -33]。被称为内毒素脂多糖(LPS)和促炎细胞因子,如IL-1beta, il - 6,和引发,已经被确认为重要贡献者器官损伤的发病机制包括肺损伤的急性炎症模型(34- - - - - -37]。急性酒精摄入减少LPS-induced从巨噬细胞il - 6生产时间和剂量依赖性的方式(38]。此外,约翰逊et al。15)报道,急性治疗人类脐静脉细胞(HUVEC)酒精剂量使用在我们的研究和随后的刺激细胞与有限合伙人或IL-1beta导致减少释放引发和粒细胞集落刺激因子(g - csf),分别为(15]。引发本研究和il - 6从刺激肺上皮细胞释放证明,酒精的影响取决于所使用的不同刺激,IL-1beta或有限合伙人(数字5和6)。在IL-1beta刺激细胞,酒精剂量有抗炎作用有关引发释放只有当用于长期(72 h)潜伏期,而类似的效果有关释放il - 6只观察急性孵蛋的条件下(1 h)。LPS-induced引发和il - 6版本主要由高剂量酒精预防急性和长期激励模型。考虑到这些发现,很可能高剂量酒精施加强有力的抗炎作用,而不是低剂量酒精。其他研究已经证实人类内皮细胞的生存能力与高剂量的预处理后95%以上酒精(170毫米)用于我们的研究也和随后的刺激与IL-1beta 24小时(15,27]。老鼠接受酒精,然后挑战与不致病的腹腔内大肠杆菌了抑制大多数促炎细胞因子的生产(39]。在这项研究中,作者证明酒精治疗在不同细胞因子有不同程度的抑制作用,可能是由于他们不同的受体感应像通常39]。嗜中性粒细胞和上皮细胞在炎症条件下代表的第一道防线。肺上皮细胞发挥决定性的作用在肺部先天免疫反应(40,41]。然而,中性粒细胞需要宿主防御,但在一个大的研究已经证明,他们的抑制炎症部位增强器官的完整性。以前,我们已经表明,急性酒精肝CD54的表达减少了应用程序与减少肝脏嗜中性粒细胞浸润在急性炎症模型32]。符合这些发现,琼森和Palmblad27]证明增加CD54表达对HUVEC IL-1beta或LPS刺激后和增强中性粒细胞粘性这些细胞(27]。在相同的研究中,酒精抑制中性粒细胞的粘附LPS-induced刺激HUVEC,但并不影响CD54的表达(27]。这里,酒精适度抑制CD54的表达在每个潜伏期展示强大的影响在高剂量使用时(图8)。肺上皮细胞的急性酒精暴露在刺激与IL-1beta或有限合伙人与中性粒细胞粘附能力下降(图9)。的分析hsp70基因表达来揭示细胞应力状态进行预处理和刺激肺上皮细胞显示主要是减少hsp70在高剂量酒精(图7)。hsp70的诱导反应压力被认为是防止细胞毒性和细胞死亡42]。低浓度的酒精增加肠细胞hsp70表达(43]。在慢性酒精使用immunoproteasome dysformation和功能障碍是平行的hsp70假设增加补偿/对接的错误折叠蛋白质的蛋白酶体(44]。有趣的是,柯林斯et al。45)报道,hsp70在老鼠大脑的重要海拔文化观察6天后温和的乙醇暴露但不是4天(45]。我们的结果可以解释为文化周期短;然而,在这需要进一步的实验。其他和我们的研究证实的剂量和时间影响酒精对宿主免疫在急性炎症条件下可以是有益的。然而,由于其进入中枢神经系统在临床的实际应用作为潜在的治疗是不合适的。此外,没有随机的前瞻性临床试验评估酒精影响剂量和时间的方式。甚至对其适度使用成瘾的风险。因此,即使急性和低剂量酒精治疗应用似乎并不令人鼓舞。对于许多其他原因,其他治疗方法类似的效果,但缺乏不良事件将是有益的。丙酮酸乙酯被发现是安全的,同时,并承诺作为抗炎药(19]。在我们的研究中,酒精的直接比较EtP显示更高的潜在的EtP即使中使用低剂量的促炎细胞因子释放减少肺上皮细胞刺激后独立于潜伏期(数字5和6)。我们的发现与先前公布的数据由约翰逊和Palmblad [30.]确认EtP的抗炎作用[30.]。在这里,我们表明,EtP的应用导致有益的影响独立于潜伏期,这些影响是比那些酒精引起的。尽管如此,这些发现有很大的不同,影响preincubated CD54表达和中性粒细胞粘附能力和刺激肺上皮细胞之间,而类似的EtP和酒精。EtP减少CD54的表达主要在早期的潜伏期酒精(图8)。同样,酒精和EtP减少中性粒细胞粘附率肺上皮细胞(图9)。正如我们前面描述的,酒精hsp70表达减少。EtP施加类似的效果除了治疗延长潜伏期与EtP在LPS刺激(图7)。这里,我们甚至观察到显著增加hsp70指示正在进行早期的细胞保护机制。因此,由于更一致的抗炎EtP的潜力相比,酒精刺激的独立使用,EtP可能代表一个有用的治疗工具,必须进行进一步的研究。

对丙酮酸钠治疗,我们没有获得一致的结果。午睡时在一定程度上减少引发和il - 6从肺上皮细胞,释放与EtP相比这种效果相当薄弱。另一方面,午睡有关CD54的表达几乎没有任何影响,中性粒细胞粘附和hsp70的表达(数字8和9)。这些发现表明,两分子的丙酮酸一半是一样重要的细胞因子的释放,而乙EtP的一部分或酒精分子似乎必不可少的粘附机制等功能。这些结果表明EtP是最有效的抗炎药在我们实验设置。然而,研究发现由预处理条件显然是有限的。

综上所述,我们演示了减少促炎细胞因子释放的刺激肺上皮细胞由酒精和丙酮酸乙酯。此外,减少表面粘附分子表达以及中性粒细胞的粘附能力下降了酒精和丙酮酸乙酯。由于其稳定性好,宽显然治疗窗口中,丙酮酸乙酯应该进行治疗后的实验和临床设置。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者感谢Kerstin Kontradowitz亚历山大·Schaible凯特琳Jurida,和卡拉姆反对Eldesoqi杰出的技术援助。本研究在一定程度上支持DFG PE 908/3-1 + 3304/5-1。