文摘

背景。这项研究的目的是评估血清neopterin之间的关系(NPT), 2-microglobulin ( 展览水平,临床状态和endomyocardial扩张型心肌病(DCM)患者的活检结果。方法。血清不扩散核武器条约》和 2 M在172年决定nonischaemic DCM患者右心室endomyocardial活检和30名健康受试者(ELISA测试)。低温恒温器活检标本进行评估使用组织学,免疫组织学和免疫化学方法(HLA ABC, HLA DR表达CD3 +淋巴细胞和巨噬细胞数量)。结果。HLA的强劲增长ABC或HLA DR表达中发现27.2%的病人是低72.8%病人小组b Neopterin水平增加患者与健康对照组相比,A组为8.11(4.50 - -12.57)和4.99 (2.66 - -8.28)nmol / L ( )。 2微球蛋白水平更高的DCM组(2.60(1.71 - -3.58))和B(2.52(1.51 - -3.72))比对照组1.75 mg / L (1.28 - -1.96), 。Neopterin积极与相关巨噬细胞在活检标本的数量( )急性期蛋白质:c反应蛋白( );纤维蛋白原( );和NYHA功能类( )和消极与左心室射血分数( )。结论。Neopterin但不 2微球蛋白浓度反映了免疫反应在活检标本。Neopterin与急性期蛋白质和心脏衰竭阶段,可能表明免疫和炎症激活心脏衰竭。

1。介绍

炎症扩张型心肌病的结果引起的心肌炎传染病和非传染性的触发器。大部分的证据表明,心肌炎和炎症性心肌病是自身免疫性疾病来自动物模型(1,2]。巨噬细胞和T淋巴细胞被发现是直接从事细胞介导免疫机制在实验性自身免疫性心肌炎(像)3- - - - - -5]。Endomyocardial活检(EMB)被认为是心肌炎诊断“金标准”,上面提到的两个细胞可能在它(评估6,7]。增加循证医学诊断敏感性免疫组织化学可以用于识别的炎症浸润和检测HLA-DR upregulation [8]。进展心肌炎和扩张型心肌病(DCM)患者似乎主要发生在组织学证实持久(慢性)炎症9]。除了细胞介导细胞损伤,各种细胞因子包括interleukin-1β(il - 1β)、白介素- 2(2)、白介素白介素(il - 6)、干扰素-γ(IFN -γ)和肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α)有多种生物活性和调节免疫反应10,11]。

Neopterin不扩散核武器条约》(NPT)起源于三磷酸鸟苷(三磷酸鸟苷)主要是通过激活巨噬细胞分泌。干扰素-γ和肿瘤坏死因子-α被发现是最常见的诱导物的合成(12]。国家结核控制规划水平升高在传染病、同种异体移植物排斥、障碍与潜在的自身免疫发病机制,和动脉粥样硬化(13- - - - - -15]。尽管NPT当地生产、血清水平的不扩散核武器条约》反映了疾病的程度和活动。β2微球蛋白(β2米)是HLA的轻链类我及其血清浓度升高表明细胞表面HLA的表情。水平的增加β2 m被报道在病毒感染和慢性炎症和淋巴组织障碍(16,17]。

因此,本研究的目的是评估的有效性不扩散核武器条约》β2 m血清浓度的潜在生物标志物可能反映了upregulation DCM患者的免疫系统。

2。研究小组和方法

2.1。病人

我们招募了172名病人住院治疗扩张型心肌病和诊断根据世卫组织标准(18接受endomyocardial活检。慢性心力衰竭是承认如果呼吸困难或疲劳静止或运动协会的射血分数(EF)≤45%。所有患者临床稳定并得到了最优传统心力衰竭治疗包括血管紧张素转换酶抑制剂,β阻滞剂、洋地黄、利尿剂至少6个月。患者被排除在研究如果他们至少有一个如下:任何变化在评估冠状动脉造影冠状血管,瓣膜病二尖瓣返流除了相对,结缔组织疾病、内分泌疾病、肾功能不全的饮食(估计肾小球滤过率使用修改肾Disease-MDRD公式< 60毫升/分钟/ 1.73米2)、传染性疾病、恶性肿瘤、中度或重度高血压,和酗酒。

2.2。临床评估

非侵入性的临床评估包括以下:体格检查、心电图、超声心动图。超声心动图图像在标准视图获得超声心动图委员会推荐的美国社会。左心室舒张末期容积(类别)和收缩末期容积(ESV)从顶端获得4 -辛普森和2-chamber意见修改的方法。左心室射血分数(EF)以标准的方式计算如下: 评估心室收缩功能。纽约心脏协会(NYHA)分类是用来评估功能的能力。排除冠状动脉疾病患者接受冠状动脉造影。

2.3。生物化学方法

从患者获得血液样本进行实验室评估的时间切片。血清被离心分离在10分钟,被冻结在1500克−70°C和保护。Neopterin和β2微球蛋白浓度测定的血清ELISA方法使用由IBL商用设备制造、汉堡(德国)。neopterin的检测极限是0.7 nmol / L。内部和interassay变异系数< 5.5%,< 10.3%。血清的β2微球蛋白测定稀释的比例1:50。的最小检测浓度β2微球蛋白为0.1 mg / L。内部和interassay变异系数< 11.6%,< 15.5%。此外,我们还确定血清肌酐、纤维蛋白原和hs-CRP浓度使用常规技术。

2.4。Endomyocardial活组织检查

在endomyocardial活检过程至少四个标本是获得的右侧心室中隔。immunohistological标本常规分布式的组织学,免疫组织化学研究。组织病理学检查是由光学显微镜根据达拉斯分类(6和immunohistologically如前面所描述的19]。免疫组织化学,冰冻切片与小鼠单克隆抗体反人类的孵化:anti-HLA二类(DR抗原),α链(克隆TAL.1B5) anti-HLA一级(ABC抗原,克隆W6/32), T淋巴细胞(克隆T3-4B5) anti-CD3, antimacrophages(克隆EBM11)。绑定使用设想主要抗体检测方法(DAKO想象装备/ DAKO A / S)。每个标本定量和定性评价CD 3淋巴细胞和巨噬细胞计数和半定量的下面HLA在前面定义的表达式和免疫反应性评分系统红外:0缺乏焦点在内皮细胞和间质细胞染色,1 +焦内皮和其他间质细胞染色,2 +多病灶的染色局限于间质细胞,3 +扩散内皮和伴随的焦心脏肌细胞染色,4 +扩散内皮细胞和肌细胞染色(8]。

红外≥3 +评估作为主要组织相容性复合体的积极。本研究为目的的患者分为两组。A组患者积极红外≥3 + HLA ABC或HLA DR,视为有强烈的免疫介导的炎症。B组患者弱免疫反应性,染色的HLA的复杂红外0 - 2 +。C组是neopterin和对照组β2微球蛋白测定健康志愿者组成的医院工作人员(8男22岁女,39.03岁 9.86年)。当地伦理委员会批准。

2.5。统计分析

正态分布数据是描述为均值和SD,但非正态的分布数据中位数和四分位范围。分类变量的频率比较用卡方检验耶茨校正(χ2)。使用学生的连续变量组间比较t以及使用Mann-Whitney但非正态的分布数据进行比较U测试。一个非参数克鲁斯卡尔-沃利斯H测试是neopterin和用于分析的差异β2微球蛋白浓度在检查病人和事后Mann-Whitney组U测试应用。斯皮尔曼等级相关系数(r)计算评估之间的相互关联的生化、活组织检查和临床结果。

3所示。结果

强烈的表达HLA ABC或HLA DR (IR≥3 +)中检测出46个病人,低表达(IR 1或2 +至少一个HLA类)表示,分别在123年病人小组B,以及缺乏表达(HLA ABC和HLA DR IR = 0)中检测出3个患者被排除在分析之外。扩张型心肌病患者的临床特征和组表展示了A和B1。

表1
所有的扩张型心肌病(DCM)患者的临床资料和对比组A和B。

更强的患者HLA表达式,淋巴细胞CD3和巨噬细胞明显更多的渗透在活检标本。在A组26.1%(12/46)患者诊断为心肌炎活跃根据达拉斯标准相比,6.5%(8/123)患者B组( )。表示,患者更强的HLA表达了更糟糕的功能能力评估NYHA类( ),但其他的临床和超声心动图参数没有差别。

血清细胞免疫激活和炎症标记物的浓度如表所示2和3。

表2
血清免疫激活和炎症标记物的浓度在所有DCM患者,A组、B组,和控制,中位数(25 th - 75百分位数)。
表3
血清浓度的免疫激活和炎症标记物在DCM患者有或没有心肌炎根据达拉斯标准和控制,中位数(25 th - 75百分位数)。

Neopterin浓度增加强烈的HLA分子激活患者与对照组相比, 。浓度的差异neopterin DCM组A和B之间并没有显著(表2)。另一方面,根据达拉斯标准组间,neopterin水平较高的MCI患者(结合边缘和活动)的病人比没有MCI和控制数据具有统计上的显著差异(表3)。

β2微球蛋白浓度明显高于比控制在DCM组,分别为:A组 和B组 。另外β2微球蛋白水平是无意义的高架活动心肌炎患者根据达拉斯标准比DCM患者没有心肌炎。

更高的血清neopterin水平观察患者的功能类NYHA III和IV比I和II NYHA功能类(图1)。


图1
Neopterin和β2微球蛋白浓度NYHA类患者,II, III, IV,中位数(25% - -75%)。

斯皮尔曼秩相关性在《不扩散核武器条约》和β2 M水平和急性期蛋白质和超声心动图参数在所有DCM主题展示在表4。

表4
斯皮尔曼等级相关系数( 和 neopterin值),β2微球蛋白和其他参数。

只有neopterin浓度显著相关巨噬细胞的计数endomyocardial活检标本(图2)。显著相关的左心室射血分数和neopterin NYHA类( )和无意义的趋势的意义β2微球蛋白与射血分数( )观察。血清浓度之间有正相关的细胞免疫标记和急性期蛋白(数字3,4,5)。


图2
血清neopterin浓度之间的相关性和巨噬细胞在活组织检查 ; 。

图3
血清neopterin之间的相关性和左心室射血分数 ; 。

图4
血清neopterin和c反应蛋白浓度之间的相关性 ; 。

图5
血清neopterin和之间的相关性β2微球蛋白浓度 ; 。

4所示。讨论

由于扩张型心肌病心力衰竭患者,尤其是传统的治疗是无效的,需要进一步诊断过程包括endomyocardial活检。免疫介导性心肌炎可能发现在大约三分之一的DCM患者尤其是年轻人和在免疫激活的情况下不存在病毒的免疫抑制疗法可以使用[20.]。到目前为止没有公认为可用的血清标记物有助于诊断决策和选择最好的治疗方案(21]。我们决定评估血清不扩散核武器条约》和β2 M DCM患者诊断过程可能是有用的,因为这些参数是有价值的工具,用于检测、过渡和监测其他疾病(13,22,23]。此外,《不扩散核武器条约》和β2米是稳定的生物标记的细胞免疫激活,容易衡量的,而且不贵。一些最近的分析表明,升高血清水平的不扩散核武器条约》也在冠状动脉疾病患者颈动脉和外周动脉疾病。这个分子的浓度可能预测不良心血管事件患者的冠状动脉和颈动脉疾病。此外,《不扩散核武器条约》的水平与心力衰竭的发展(24,25]。当地和系统性炎症在动脉粥样硬化的发展起着重要的作用,负责的不稳定冠状动脉疾病。因此,我们旨在调查非缺血型心肌病的集团排除影响动脉粥样硬化的炎症标志物。应该强调,活检手术治疗在慢性和临床稳定的心力衰竭患者最佳治疗至少6个月,没有完全恢复。它是根据当前临床实践指南(相对较晚26),在一定程度上解释了低比例的活跃心肌炎。浓度的增加不扩散核武器条约》在扩张型心肌病组与强烈的免疫activation-HLA表达endomyocardium控制相比,但群弱免疫激活的差异不显著。NPT浓度升高对心力衰竭患者由于特发性或炎性DCM前面描述的,尤其是在活跃的心肌炎患者评估根据达拉斯标准(27- - - - - -29日]。在我们的病人活跃心肌炎诊断只有二十个病人和NPT浓度增加MCI组包括积极和边缘相比,控制。Caforio等人并没有发现任何差异在中值或频率的异常结果特发性心肌病的《不扩散核武器条约》,缺血性心肌病患者,和控制,但根据达拉斯标准心肌炎患者被排除在研究[30.]。

数据有关β在扩张型心肌病2 M浓度是不同的。符合我们的结果Klappacher等人发现升高β2 M等离子体水平关联与刺激肾素-血管紧张素系统的参数和DCM患者的T细胞高反应性(31日]。Caforio等人观察到更高的平均水平和异常结果的比例β2 M在缺血性而不是在特发性心肌病(30.]。

在我们的研究中我们发现血清不扩散核武器条约》之间的关联或失败β2 M水平和HLA表达式或淋巴细胞CD3 endomyocardial标本数;只有相关的条约与巨噬细胞被发现的渗透。同样,血清之间的相关性不扩散核武器条约》β2 M水平和HLA I和II类和ICAM-1表达特发性非炎症性心肌病患者不存在(30.]。缺乏的浓度之间的相关性β2米,光不变类主要组织相容性分子链,我表达HLA immunohistological染色endomyocardium可能令人惊讶。迄今为止的获得的一些数据表明,没有简单的相关性在HLA我复杂表面的细胞,其可溶性形式,它的部分β2微球蛋白在血清32,33]。大部分的HLA类我表面的分子细胞与T淋巴细胞与抗原呈现在交互。一些分子不连接,因此他们可能进入血液。血清不扩散核武器条约》和β2 M浓度取决于他们生产的T淋巴细胞刺激和肾消去。之前的研究表明,血清组与肌酐清除率的核不扩散条约> 60毫升/分钟相当健康控制和在集团与肌酐清除率明显高于60毫升/分钟(34]。β肾小球滤过率(GFR)的2 M是一个指标,但有些nonrenal因素被发现肾脏功能独立的预测因子的浓度在健康老年人(例如,c反应蛋白水平和白细胞计数)(35]。心力衰竭患者肾小球滤过可能会减少,所以我们排除患者表皮生长因子受体< 60毫升/分钟/ 1.73米2。

我们发现增加NPT NYHA类较高的浓度有关。类似的观察不扩散核武器条约》和/或升高β2 M浓度在扩张型心肌病之前注意到29日- - - - - -31日]。在我们DCM组血清不扩散核武器条约》和像在以前的数据都比较高β2 M低浓度与左心室射血分数(30.,31日]。炎症和免疫反应参与心力衰竭的发病机制在临床和实验研究证实。肿瘤坏死因子-的浓度α和正γ据报道在心力衰竭患者(36,37]。都是已知的刺激器不扩散核武器条约》的合成、HLA表情,和营业额β2 M分泌进入血液(38,39]。neopterin浓度和TNF -之间的相关性α或正γ在心力衰竭被发现40]。免疫激活的机制和细胞因子的地方,《不扩散核武器条约》β2米一代并不精确。增加细胞因子的浓度可能与免疫反应有关心脏组织在病毒感染和炎症阶段或心脏的过度负荷(41]。

旁边的心,他们的来源可能是其他器官例如,肠。扰动造成循环不足,如缺氧或堵塞可能导致炎症通过自由基反应和细菌穿透肠壁,因此在一些报道充血性心力衰竭是一种慢性低度炎症状态。neopterin之间的正相关和急性期蛋白浓度显示在我们的研究可能会确认这些数据。另一方面,实验数据表明,《不扩散核武器条约》可能是一个致病因素发展的心脏功能障碍的慢性疾病状态neopterin高水平二次激活免疫系统的(42]。

HLA的upregulation心脏组织和他们的破坏是一个标准,可以识别活跃慢性心肌炎。尽管各种数据,有关免疫抑制治疗的有效性,我们可以提供这种治疗慢性心肌炎患者与HLA表达式作为一个有效的方法来改善左心室的收缩功能(19]。值得注意的是,一个活跃的炎症和强烈的免疫反应被发现在某些情况下的相对持久的扩张型心肌病。

也许应该考虑活检在扩张型心肌病患者免疫和炎症标记物特别是neopterin浓度升高。

5。结论

血清浓度的增加neopterin反映强烈的inflammatory-immunological反应endomyocardium扩张型心肌病患者。β2微球蛋白浓度升高的独立DCM患者心肌的免疫激活。

之间的相关性高于标记细胞免疫激活与急性期蛋白质水平和左心室射血分数表明低度炎症状态参与心力衰竭的病理生理学相关潜在其严重性。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。