文摘

本研究的目的是评估抗胆碱酯酶剂的影响,溴吡斯的明(Pyrido)在小鼠实验性慢性恰加斯心脏病。为此,雄性C57BL / 6 j小鼠未感染(控制:Con)或慢性感染(5个月)鲁兹锥体(chagasic: Chg)治疗与否与Pyrido (NT)一个月。在这段时期结束时,心电图(ECG);心脏自主神经功能;心组织病理学;血清细胞因子;血液和组织的存在寄生虫通过免疫组织化学和PCR进行评估。在NT-Chg老鼠,心电图描记的显著变化,自主,心脏组织病理学观察资料证实慢性炎症反应。治疗Pyrido Chagasic小鼠显著降低心肌炎性浸润,引起的纤维化和肥大,伴随着血清干扰素水平下降γil - 10水平没有变化,认为转变对一种抗炎免疫反应的概要文件。低nondifferent寄生虫DNA拷贝,观察治疗和参与chagasic老鼠。总之,我们的研究结果证实了标记neuroimmunomodulatory副交感神经作用的进化的自主神经系统炎症免疫反应t . cruzi在实验小鼠慢性恰加斯心脏病。

1。介绍

恰加斯病,也被称为美洲锥虫病的流行有鞭毛的原生动物引起的寄生虫病(鲁兹锥体整个拉丁美洲),非常普遍。其主要临床表现是慢性chagasic心肌病(CCC),影响慢性感染患者的1/3,可能存在严重的症状和体征,如充血性心力衰竭、血栓栓塞现象,心律失常和猝死1- - - - - -4]。在心脏病理过程包括单核炎症浸润、焦心肌炎,epicarditis, neuroganglionitis,与变量局灶性纤维化和寄生虫的缺乏,这是缺乏与心肌炎性浸润[2,4]。

CCC的发病机制包括寄生虫侵袭性之间的平衡和宿主的免疫反应,特别是Th1 / Th2平衡,从而影响电阻/易感性t . cruzi感染(5- - - - - -7]。即使一个不平衡,过度生产Th1促炎细胞因子的控制至关重要寄生虫在血液和组织水平8),这种类型的反应也可以有能力摧毁功能性心肌细胞(8和心脏自主神经2,4,9]。这种自主神经支配,主要涉及交感神经节后神经元造成明显心脏自主神经功能障碍(2,4,9- - - - - -11),这可能是参与发起危及生命的心律失常和猝死2,4]。奇怪的是,这个迷走神经交感自主功能障碍密切相关炎症浸润和免疫激活不仅在恰加斯心脏病,还在其他类型的心脏病(12- - - - - -15]。

尽管这些数据支持免疫系统的直接作用在调节心脏和自主神经失调,最近的数据表明,自主神经系统的变化也会影响免疫反应和炎症的模式在心脏和非心血管疾病几个州(15- - - - - -17),包括南美锥虫病(18]。两个自主神经系统的交感和副交感神经分支可以施加实质性的调节对免疫反应的影响,主要是通过抑制Th1反应概要文件(17,19- - - - - -21]。这一新的证据也表明心脏交感神经,特别是自主去神经/副交感神经功能障碍也可能导致增加炎症反应和可能增强寄生虫消灭(22]。收集的数据来自我们的实验室小鼠在急性恰加斯病的背景下最近证实心脏自主神经支配/功能障碍可能导致增加炎症(18]。

考虑上述概念,新疗法基于操作的心脏迷走神经neuroimmunomodulation可能有利于治疗心脏疾病、特别是慢性chagasic心肌病(17,23]。例如,治疗方法提高心脏迷走神经功能,从而更容易或刺激迷走神经的抗炎反应,可能有一个积极的影响慢性chagasic心肌病。事实上,对于其他心脏病,这些策略,在一个实验和临床背景下,包括慢性电刺激迷走神经的(24]或药理增强作用[25),已经成功地改善心脏的结果。

溴吡斯的明,anticholinesterasic代理,多年来一直用于治疗重症肌无力短期执政期间,展品保护心血管作用导致减少心血管风险标志物和自主功能障碍的改善26,26,27,27- - - - - -29日]。由其余迷走神经的副交感神经功能,这种化合物被认为引起窦性心动过缓,减少节点传导和动作电位的不应期和增加心脏兴奋阈,等直接影响心脏。也相信溴吡斯的明,通过增强胆碱能抗炎通路,使减少心肌炎症和纤维化与改善心脏肥大和重构有关。然而,没有报告关于溴吡斯的明的影响的慢性阶段恰加斯心脏病。

因此,本研究的主要目的是评价影响的胆碱能增强作用与抗胆碱酯酶剂溴吡斯的明electrocardiographical,心脏自主,组织学(炎症浸润和纤维化),免疫和寄生虫学的参数在C57BL / 6 j小鼠感染的Romildo应变鲁兹锥体在慢性阶段恰加斯病的心脏病。

2。方法

所有实验进行野生型C57BL / 6 j小鼠获得的动物设施Triangulo米内罗联邦大学生理学系Uberaba毫克。所有的动物都是雄性,重达20 - 30克,动物设施的维护Triangulo米内罗联邦大学生理学系啮齿动物饮食(Nuvilab CR1、Nuvital营养Ltda,库里提巴,公关,巴西),给出了水随意直到实验协议的开始。所有的实验根据“实验动物保健原则”由国家医学研究学会制定,英格兰,“指导的护理和使用实验动物”发表的美国国立卫生研究院(NIH出版数量85 - 23,1996年修订)。所有程序也提交给伦理委员会批准的使用动物研究Triangulo米内罗联邦大学。

2.1。寄生虫接种

诱导实验恰加斯病,小鼠腹腔接种15000 trypomastigote Romildo应变的形式t . cruzi。额外的动物与性别和体重收到车辆的腹腔内注射,和这些被指定为控制未感染组。接种后,所有的动物观察至少两次日常监控他们的一般状态和评估在急性期死亡率。在接种后12天,寄生虫血症水平测量的外围microhematocrit方法尾巴所有接种动物的血,根据布兰诺的技术(30.),以确认感染。所有后续手术和实验5和6个月的协议进行感染,感染在慢性阶段,特点是光组织入侵和低死亡率。

2.2。实验小组

实验组划分根据恰加斯病的存在和溴吡斯的明政府在5到6月的观察(慢性阶段),如下所述。每组中使用的动物数量是显示在结果部分。以下组调查:

集团I-Con-NT:野生型C57BL / 6 j小鼠注射车辆作为一个控制”(体质)、“不治疗(NT)与溴吡斯的明和评价六个月后在观察期结束;

集团II-Con-Pyrido:野生型C57BL / 6 j注入车辆作为一个控制(Con)和30毫克/公斤处理溴吡斯的明(Pyrido),抗胆碱酯酶剂,溶解在自来水,30天的结果是5世纪到6月的观察;

集团III-Chg-NT:野生型C57BL / 6 j小鼠接种15000 trypomastigote Romildo应变的形式t . cruzi(Chg),而不是(NT)和溴吡斯的明和评估治疗后6个月的观察期;

集团IV-Chg-Pyrido:野生型C57BL / 6 j小鼠接种15000 trypomastigote Romildo应变的形式t . cruzi(Chg)和30毫克/公斤处理溴吡斯的明(Pyrido),抗胆碱酯酶剂,溶解在自来水,30天的结果是5世纪到6月的观察。

喝体积的解决方案是每天监测,溴吡斯的明浓度(大约0.084毫克/毫升)调整每日根据喝体积保持每天平均摄入剂量30毫克/公斤。

2.3。常规心电图(ECG)监测麻醉老鼠

立即接种(ECG1)之前,在第五届(ECG2立即溴吡斯的明治疗前)和6个月的观测(ECG3,实验协议,年底前手术),所有的动物都提交给常规心电图研究下三溴乙醇(250毫克/公斤,i.p)麻醉。电极针被放置在皮肤记录常规双肢(I, II, III),单极肢领导(aVR的aVL,动静脉)和单极心窝的(胸部)领导(弗吉尼亚州:针被立即向右的胸骨第四肋间隙;VB:针被左边的胸骨第四肋间隙;风险投资;针是定位在第五肋间隙腋中线)。为了避免错误的定位引导,同一个人始终把电极放在动物。心电图记录使用心电放大器(型号8811 a,惠普(hewlett - packard)地中海。本月,沃尔瑟姆,妈,美国)耦合到一个12位analogue-to-digital接口(di - 720 usb Dataq仪器,Inc .,阿克伦,哦,美国)在3 KHz的采样率的IBM个人电脑分析由Windaq-Pro +软件(Dataq仪器公司,阿克伦,哦,美国)。2分钟的心电图记录。间隔和波长(ms)使用定制的软件自动计算后波识别和光标位置。的心电图轮廓都分析了同一个人,谁是盲法研究协议。 The following ECG parameters were examined: (1) RR interval (RRi), (2) P wave duration (Pd), (3) PR interval (PR), (4) QRS duration (QRSd), (5) QT interval (QT), and (6) corrected QT interval (cQT, defined as the QT interval corrected for heart rate using Bazett’s equation, where the corrected QTc was equal to QT (in s)/RR (in s)^1/2)。与人类相比,T波在小型啮齿动物不是特征和出现的肩膀QRS波群。因此,测量QT间隔,我们使用T波的顶点,可以确定精度高。从每个领导和心电图参数测定平均。此外,心律失常和房室或脑室封锁,其他变化,分析了视觉检查心电图轮廓的蒙蔽心电图专家。

2.4。长期在自由移动的小鼠心电图描记的录音

第三个心电图记录后,在6月的观察,这些动物reanesthetized与三溴乙醇(250毫克/公斤,i.p。),和一双不锈钢电极植入皮下组织内收集慢性常规双肢心电图铅二世的录音。动物也和聚乙烯管放在颈静脉插管药品监督管理局。手术后,恢复在单独的笼子里的动物们离开至少48 - 72 h。

48 - 72 h的手术恢复后,在没有麻醉的情况下,电极连接到一个心电放大器(8811 a,惠普,沃尔瑟姆,妈,美国),和基线心电图采样持续30分钟(3 KHz)一段与个人电脑(IBM / PC)配备了12位analogue-to-digital接口(di - 720 usb Dataq仪器,Inc .,阿克伦,哦,美国)。记录所有的动物都是上午8点到下午5点在一个安静的条件和自由移动的状态。RR间隔的时间序列来自这些慢性心电图记录被用来研究心率变异性的心脏自主神经调制。

2.5。心率变异性分析

从基线慢性心电图记录(30分钟),RR间隔时间序列是派生的自动的检测R波的峰值使用定制的线性分析软件,请提供的Alberto门博士(米兰大学、意大利)。RR间隔的时间序列分为连续300次重叠的部分(韦尔奇协议)的一半。计算均值和方差进行细分后,基于模型的自回归谱分析,描述了在其他地方(31日,32]。短暂,振荡的模型组件的固定段出现在beat-to-beat RR间隔的时间序列计算基于Levinson-Durbin递归,和模型选择的顺序根据Akaike标准(32]。这个过程允许自动量化每个相关的中心频率和功率振荡分量时间序列。振动组件被标记为非常低的频率(甚低频),低频(LF),或高频(HF)当中央频率在0.01 - -0.10赫兹的乐队,0.10 - -1.00赫兹,分别为-5.00或1.00赫兹(18]。的低频和高频分量的心率变异性也表示归一化单位,计算得到的低频和高频变异的百分比的总功率减去后的力量甚低频组件(频率赫兹)。正常化过程趋向于最小化总功率的影响变化的绝对值(低频和高频的可变性31日,32]。

2.6。药理自主封锁

基线慢性心电图记录30分钟后,一半的动物被给予静脉注射硫酸阿托品(1毫克/公斤,注射)。紧随其后的是注射心得安(1毫克/公斤,增长值)15分钟后,而另一半在相反的顺序注射(普萘洛尔硫酸阿托品紧随其后)。这个过程允许量化的心脏副交感神经和交感神经自主影响,前者和后者,分别测量心率(HR)之间的差异后,阿托品和基线人力资源(副交感效应)或心得安和基线后人力资源人力资源之间的差异(交感效应),以及内在的起搏器的测量心率(《国际卫生条例》),量化后的心率双封锁与硫酸阿托品后跟普萘洛尔或心得安硫酸阿托品紧随其后。

2.7。组织病理学检查

最后实验协议,所有的动物安乐死有过多剂量的硫喷妥钠(100毫克/公斤,分别地。,i.p。),然后打开胸腔移除心脏进行组织病理学分析。评估炎性浸润的程度,组织损伤,纤维化和寄生虫的巢穴,切除的心从所有的动物在0.9%生理盐水清洗和固定在磷酸盐10%福尔马林溶液48 h。

在石蜡中嵌入的样品后,5 - 7μ米厚的纵向(four-chamber)部分心被沾hematoxylin-eosin和分析使用一个直立的光学显微镜(Axiolab,德国卡尔蔡司Inc .)。所有地区的心被两个盲观察员检查。炎性浸润和寄生虫的巢穴都使用半定量的方法和特征描述的评分系统Chapadeiro et al。33]。全球心肌炎症评分被定义为每个动物成绩之和从不同地区的心脏。

量化心肌纤维化的区域,相邻纵向的心被沾Picrosirius红色,结合胶原组织矩阵中,和幻灯片进行了分析偏振光显微镜使用KS300软件(德国卡尔蔡司,Inc .)。

提高可视化的寄生虫巢或心脏组织抗原,免疫组织化学技术检测的基础上diaminobenzidine (DAB)派生色原体。色原是由二次抗体与过氧化物酶标记,生成另一种主要的抗体t . cruzi抗原。抗体标记后,过氧化物酶反应,并与苏木精costaining,幻灯片和一个正直的光学显微镜分析(Axiolab,德国卡尔蔡司Inc .)。

2.8。量化的血清细胞因子水平

最后实验协议,每个动物血清样本收集通过心脏穿刺进行细胞因子分析(IFN -γ肿瘤坏死因子-α2、il - 4 IL-5和il - 10)通过ELISA或仪珠阵列(CBA)技术。

酶联免疫分析(ELISA)。血清浓度的干扰素-γ和il - 10是衡量使用成对的单克隆抗体ELISA按照制造商的规格(BD Pharmingen)。简而言之,高亲和性96 -孔板(Nunc、鲁开德、丹麦)与cytokine-specific单克隆抗体致敏后通过阻断PBS包含2% BSA(σ)。血清和重组细胞因子被添加,盘子被孵化4 h在室温下。盘子都洗和孵化1μg / mL生物素化的anticytokine单克隆抗体在37°C 2 h与碱性洗涤和孵化phosphatase-conjugated链霉亲和素在37°C 2 h。反应了使用disodium-p-nitrophenyl磷酸(σ)二乙醇胺缓冲。吸光度测量在405 nm标仪(美国Bio-Rad 2550读者环评,CA)。细胞因子浓度计算使用的吸光度值的线性回归分析获得的重组细胞因子,并表示为pg / mL。测试的灵敏度范围从2到20 pg / mL。

2.8.1发布。流式细胞仪使用仪珠阵列(CBA)

测量细胞因子TNF -α(Th1细胞因子)和il - 4 - 2和IL-5 (Th2细胞因子)的血清样本进行使用仪珠阵列(CBA)工具包(美国BD生物科学)根据制造商的指示。简单地说,50μL的珠子数量与离散的荧光强度和涂有cytokine-specific捕获抗体被添加到50μ小鼠血清和50 LμL (phycoerythrin-conjugated anti-mouse Th1 / Th2细胞因子抗体。同时,标准为每一个细胞因子(0 - 5000 pg / mL)与细胞因子混合捕获珠子和phycoerythrin-conjugated试剂。涡混合物被孵化3 h。珠子被清洗和分析使用流式细胞仪(美国BD生物科学FACSCalibur)。每个细胞因子的数量(pg / mL)计算使用CellQuest软件(美国BD生物科学)。标准曲线是由细胞因子标准提供的工具包。检测下限的范围从1到2.1 pg / mL为不同的细胞因子。

2.9。寄生虫DNA检测在血液和心脏与常规PCR

血液中的疟原虫DNA隔离,老鼠总血液样本中收集管包含6 M盐酸胍为0.2 M EDTA (pH值8)(V / V)。DNA提取使用phenol-chloroform-isoamyl酒精方法根据马赛et al。34]。

寄生虫DNA隔离的心,一半的心脏切除的实验协议均质,和DNA被碱裂解法提取。

PCR特有的t . cruzi根据执行Wincker et al。35)使用以下引物扩增片段的330个基点:121 (5′aaa TAA TGT ACG GG (G / T)呕吐ATG猫GA-3′)和122年(5′GGT TCG ATT GGG GTT GGT GTA ATA TA-3′)从一个不变区域的DNA minicircles动基体t . cruzi。循环条件如下:95°C 5分钟之后35周期在95°C 1分钟,1分钟65°C。反应的产品被发现在6.0%的聚丙烯酰胺凝胶电泳和硝酸银染色,这是用数码相机拍摄的。

2.10。统计分析

所有数值数据表示为手段(±S.E.M.),而从组织学检查半定量的数据表示为中位数和第25和第75百分位数。根据正常和方差同质性的分布,参数统计,如双向方差分析其次是图基的多重比较检验,或非参数检验,如Mann-Whitney测试,执行。分类变量使用Fisher精确检验进行了分析。所有统计计算进行使用SigmaStat 2.0.3软件(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。的差异被认为是重要的时候。

3所示。结果

寄生虫在外围尾巴血样检测microhematocrit技术表现在感染后12天是积极的t . cruzi -所有控制未感染小鼠接种动物和消极。

Electrocardiographical参数测量的心电图记录(ECG1)在实验之前协议的开始t . cruzi接种和治疗没有任何明显的差异在所有实验团体,如预期。然而,经过五个月的感染和溴吡斯的明治疗之前,chagasic动物(从Chg-NT和Chg-Pyrido组)提出了Pd的重要延伸,QRSd, QT, cQT(表1),表明全球心脏功能障碍。

有趣的是,如表所示2之后,一个月的溴吡斯的明治疗和6个月的感染,Chg-Pyrido小鼠呈现显著减少Pd(一个心房参数)和cQT(心室参数),表明心脏电功能的改善。相比之下,在Chg-NT老鼠,大部分的心电图参数Con-NT老鼠相比明显不同。值得注意的是,Con-Pyrido组显著增加公关观察,正如所料,因为溴吡斯的明可能增加迷走神经的神经传输在房室结,由此降低动作电位的传导速度。这些结果表明,溴吡斯的明治疗可以有效改善电紊乱引起的慢性chagasic心肌病。

心率变异性分析的结果在时间-(方差)和频域(光谱)参数如表所示3。显著减少总变化的绝对值(方差)和光谱组件甚低频,低频和高频观察Chg-NT老鼠Con-NT和Con-Pyrido老鼠相比。归一化单位表达的低频和高频分量和低频/高频比率没有不同于Con-NT老鼠。相比之下,chagasic小鼠治疗溴吡斯的明(Chg-Pyrido组)提出值方差和甚低频和高频频谱成分明显高于Chg-NT老鼠相比,建议改善一些自主参数改变在慢性chagasic心肌病(表3)。

自主功能障碍中观察到的心率变异性分析Chg-NT小鼠及其改善Chg-Pyrido老鼠证实了药理自主封锁与硫酸阿托品或心得安。这些自主阻滞剂的使用表明,迷走神经的副交感神经作用就会大大降低交感神经作用不改变Chg-NT小鼠相比Con-NT老鼠(图1)。Chagasic小鼠治疗溴吡斯的明显示值的迷走神经副交感神经的影响显著高于相比Chg-NT老鼠和类似Con-NT老鼠(图中找到1)。此外,未感染控制小鼠治疗溴吡斯的明显示迷走神经交感效应显著增加没有任何同情的变化影响而Con-NT老鼠(图1)。没有内在的起搏器心率的变化(《国际卫生条例》)被发现在任何实验团体后六个月观察期。

相对Chg-NT小鼠心脏重量显著高于其他组(图中观察到2),表明心脏肥大引起恰加斯病在小鼠和溴吡斯的明治疗可以逆转或损害心脏肥大的发展chagasic老鼠。

半定量的检查心脏炎症浸润表示离散的轻度弥漫性心肌炎(平均炎症分数等于0.5,,,对Con-NT),观察心房(数字3(g)和3(h))、心室(数字3(e)和3(f))和神经节(图3(g)) CHG-NT老鼠相比正常CON-NT老鼠(数字3(一),3(b),3(c)3(d)),它提出了没有炎性浸润(平均炎症分数等于0.0,和)。Chg-Pyrido老鼠,减少炎性浸润,分为非常离散离散(平均炎症分数等于0.125,,,对Chg-NT),观察心房,心室(数字3(我),3(j),3(k)3(左)),神经神经节。如预期在这个慢性恰加斯病的小鼠模型,没有发现无鞭毛体巢在心肌Chg-NT或Chg-Pyrido老鼠。

在心脏的不同部分彩色Picrosirius红、纤维化显示明显的形态测量学和弥漫性纤维化面积增加绝对(μ米²)和相对(%)值Chg-NT组相比Chg-NT老鼠(图4)。有趣的是,Chg-Pyrido小鼠呈现显著降低纤维化地区所有心脏室(图4Chg-NT老鼠相比)。尽管有这些值减少,纤维化区域仍大于那些Con-NT老鼠(图4)。

的血清细胞因子- 2、il - 4、IL-5, TNF -α与CBA技术测量,并没有透露任何变化的实验小组。事实上,的血清水平和il - 4 - 2检测不到,值接近0 pg / mL。然而,使用ELISA技术,血清干扰素-γ明显高于在Chg-NT老鼠相比Chg-Pyrido老鼠()。没有干扰素-γ中检测出Con-NT老鼠。血清il - 10的水平,用ELISA技术测量,明显高于Chg-NT和Chg-Pyrido老鼠相比Con-NT老鼠()。没有发现差异之间的血清il - 10水平Chg-NT和Chg-Pyrido老鼠(图5)。

使用过氧化物酶标记免疫组织化学技术t . cruzi寄生虫巢或抗原显示一个完整的没有寄生虫控制未感染小鼠,而t . cruzi标签是积极Chg-NT的62.50%和81.81%的Chg-Pyrido老鼠(使用Fisher精确检验不显著)。这种寄生虫抗原被广泛地分布在整个心脏组织(图6)。

使用常规PCR方法检测寄生虫DNA在血液和心脏在慢性阶段恰加斯病的老鼠,一个完整的未感染控制老鼠缺乏寄生虫DNA的观察,而t . cruziDNA被发现在16.67%和42.9% ()的血Chg-NT Chg-Pyrido小鼠,分别在72.73%和86.67% ()的心脏Chg-NT样本和Chg-Pyrido小鼠,分别。

4所示。讨论

据我们所知,目前的研究首次分析了影响胆碱能深思熟虑的增强作用的信号使用溴吡斯的明,抗胆碱酯酶剂,在慢性阶段实验恰加斯病的老鼠。此外,本研究评价溴吡斯的明治疗心电图的影响,自主,组织病理学,immunoinflammatory,恰加斯病的寄生虫学的参数。

目前的研究,据我们所知,第一个展示自主神经功能失调引起的慢性恰加斯病在实验小鼠模型。这个障碍是明显降低心率变异性、降低方差(时域参数)和甚低频,低频,和高频组件(心率变异性频域参数),以及减少并发心脏迷走神经的作用,交感神经的影响没有明显的变化,以慢性控制chagasic动物的药理封锁。只有形态报告描述神经节和神经病变chagasic老鼠已发表在文献[36]。这个发现之前,我们以前的报告类似的自主功能障碍的小鼠急性恰加斯病(18]。这种自主功能障碍伴有心电图改变与轻度弥漫性炎性浸润的单核细胞、纤维化和心房和心室心肌肥大和干扰素-的高程γ野生型和血清il - 10和未经处理的chagasic C57BL / 6 j小鼠,这证实慢性心肌炎的存在感染后6个月t . cruzi。增加血清中干扰素-水平γ和小鼠il - 10在慢性chagasic比赛类似先前的报道在人类37- - - - - -39]。此外,寄生虫抗原的免疫组织化学标记和DNA检测PCR的心脏和血液和心脏,分别加强寄生虫所扮演的角色在诱导和/或维持慢性感染。因为我们的研究结果与先前的观察是一致的仓鼠,兔子,狗和人类在慢性阶段恰加斯病的10,40),这里使用的小鼠模型似乎代表了一个合适的工具未来实验研究恰加斯心脏病。

在慢性阶段恰加斯病的心脏疾病,这份报告显示显著增加心脏迷走神经的副交感神经自主调制与炎性浸润的显著减少受感染小鼠的心肌治疗溴吡斯的明在上个月为期6个月的观察期。

因为溴吡斯的明是一个anticholinesterasic代理,在突触静脉曲张增加乙酰胆碱的生物利用度,增加心脏迷走神经的副交感神经自主功能,证明了心率变异性和心脏迷走神经的效应越高,预期,治疗后验证。迷走神经刺激效应的溴吡斯的明证实了先前的报道在其他实验环境(41]。

溴吡斯的明与的抗炎效果明显减少心肌纤维化和肥大。血清水平的干扰素-γ也减少了,而TNA -α趋于减少,这两个是Th1促炎细胞因子,增强血清il - 10水平没有任何变化。

综合分析这些结果表明溴吡斯的明可能作用于心脏,至少在一定程度上增加迷走神经的副交感神经活动,通过心肌中乙酰胆碱的积累。证实了这种积累改善心率变异性和迷走神经的副交感神经作用,而作用于免疫细胞,可能起到免疫调节作用,从而将免疫反应对一种抗炎反应的优势。

这些新发现的慢性恰加斯病的背景下加强亲密的免疫之间的相互作用和自主神经系统和副交感神经刺激治疗的潜在使用chagasic心肌炎(18,23]。此外,改善心脏炎症、纤维化和肥大吡斯的明bromide-treated慢性chagasic动物表明迷走神经的自主功能的降低由于神经节的神经损伤和神经支配,而出现早熟地在急性期,可能发挥着重要的免疫调节作用增加Th1免疫反应和炎症浸润,验证在慢性阶段的疾病。

虽然我们的研究结果支持胆碱能迷走神经免疫调节作用的副交感神经系统的心脏,我们不能排除可能的角色溴吡斯的明增加当地通过从nonneural释放乙酰胆碱水平结构,如内皮细胞、胆碱能淋巴细胞和心肌细胞(42]。事实上,这些nonneural乙酰胆碱的来源,会使溴吡斯的明治疗,可以解释实质性改善心电图异常,炎症、纤维化和心脏的心室肥大观察到,这是不受迷走神经支配副交感神经纤维。

数据的免疫组织化学标记t . cruzi抗原和t . cruziDNA PCR的检测表明,寄生虫存在的心脏组织和血液chagasic小鼠感染后六个月,证实了先前的报道(38,43]。动物寄生虫抗原阳性的数量或DNA bromide-treated吡斯的明没有差异和参与chagasic动物。寄生虫的持久性在慢性阶段,即使在很低的水平,似乎发挥重要作用在慢性恰加斯病的发病机理,因为低寄生负载可能不断刺激免疫反应(38,43]。虽然抗原或DNAt . cruzi被发现在目前的研究中,没有观察到寄生虫假性囊肿或无鞭毛体形式的心脏组织处理或参与chagasic老鼠。缺乏完整的寄生虫的心脏病变显示远程利基的寄生虫的可能性,如平滑肌细胞、脂肪细胞、骨骼肌细胞(43]。

总之,我们的研究结果支持了这样的观点,即自主功能障碍的主要原因赞成/抗炎失衡在炎性疾病,有利于转变的免疫反应的优势促炎反应,从而导致这些疾病的发病机制、特别是恰加斯心脏病。此外,我们的研究结果显示anticholinesterasic代理的潜在好处,特别是溴吡斯的明,增加心脏自主调制和减少炎症反应到心脏。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

Marilia Beatriz de古巴和马库斯·保罗里贝罗Machado同样导致了这项研究。

确认

本研究支持的Ministero戴尔'Istruzione,意大利“e德拉Ricerca Scientifica普林斯顿2007年格兰特尼古拉Montano和研究奖学金授予(Proc. 308016/2009-2)慰问Nacional de Desenvolvimento Cientifico e Technologico (CNPq)——巴西Valdo何塞·迪亚斯·达席尔瓦。