文摘

目标。(1)检查depot-specific铂族元素₂和PGF_2α释放和mRNA表达的酶或受体参与PG合成或信号在人类脂肪组织;(2)确定变化的表达这些成绩单通过preadipocyte分化;脂肪组织之间和(3)检查协会mRNA的表达这些成绩单和肥胖测量。方法。女性脂肪样本获得的手术。铂族元素₂和PGF_2α释放preadipocytes和脂肪组织外植体测量。表达水平的信使rna编码酶或受体参与PG合成信号通过rt - pcr检测。结果。培养preadipocytes外植体和大网膜释放更多的铂族元素₂和PGF_2α比皮下仓库和相应的记录显示一致的仓库的差异。preadipocyte分化后,PLA2G16和PTGER3 mRNA的表达显著增加而COX-1, cox - 2, PTGIS, ptg mRNA大量减少隔间(对于所有)。记录过程中刺激脂肪生成是那些与肥胖相关的最好测量。结论。大网膜细胞间释放更多的铂族元素₂和PGF_2α比皮下仓库。肥胖调节PG-synthesizing酶和PG受体的表达可能通过adipogenesis-induced变化发生在表达这些记录。

1。介绍

脂肪组织的代谢和内分泌功能改变在肥胖1]。过剩nonesterified脂肪酸、免疫细胞浸润和炎性细胞因子的释放已经被提议作为肥胖之间的联系,胰岛素抵抗和2型糖尿病(2,3]。发生在慢性喂食过多的条件下,脂肪组织扩张通过脂肪细胞肥大和preadipocytes的分化成熟,lipid-storing脂肪细胞(增生)4,5]。后者过程包括重要基因表达的变化,如proadipogenic转录因子过氧物酶体proliferator-activated受体(PPAR)和CCAAT / enhancer-binding蛋白(C / ebp) (6,7]。

前列腺素(后卫)脂质介质分泌各种细胞类型的脂肪组织(8,9),他们似乎是参与调节炎症和脂肪细胞功能(10]。动力来自花生四烯酸(AA),解放的磷脂膜通过磷脂酶A2 (PLA2)的活动11]。Jaworski律师事务所等人先前证明AdPLA (PLA2G16)是主要的PLA2酶在小鼠脂肪组织(12]。AA是连续转化成PGG₂和PGH₂行动的两个PGH合成酶(发现),本构环氧酶- (COX) 1,或者诱导COX - 213]。PGH₂是常见的基质合成后卫的特定PG酶合成酶(11]。PGD合成酶(PTGDS)催化PGH的异构化₂在PGD₂,而环前列腺素合成酶(PTGIS)催化PGH的异构化₂对PGI₂(11]。铂族元素的形成₂从PGH₂是由铂族元素合成酶催化(ptg)。三种形式的铂族元素合酶已确定,包括胞质铂族元素合酶(cpg),这是既定的,无所不在地表达(14),两个膜结合铂族元素合成酶(mPGES-1和mPGES-2) (14,15]。藤森等人证明mPGES-1充当主要的铂族元素₂合酶3 t3-l1细胞(16]。PGF_2α合成的酶aldo-keto还原酶(AKRs)家庭通过各种途径(17,18]。哺乳动物中发现第一PGF合成酶是AKR1C3 [19]。然而,我们首次展示了模型中包括人类preadipocytes牛和人类子宫内膜AKR1B家族的酶也显示PGF合酶活性(8,20.- - - - - -22]。具体地说,我们最近在人类脂肪组织建立preadipocytes从大网膜间更多的PGF发布_2α为了应对炎症刺激皮下脂肪相比,在PGF AKR1B1可能有一个主要的角色_2α合成由人类preadipocytes [8]。

考虑,内脏脂肪组织过度积累与改变代谢风险独立的全身脂肪量(23],depot-specific表达PG合成的关键酶参与cyclooxygenase-dependent通路在脂肪组织可能发挥病理生理作用内脏肥胖相关的发展变化。后卫似乎改变脂肪组织功能通过扮演PPAR的调节器函数(10),可能损害负责脂肪堆积在腹部肥胖。在体外研究表明,铂族元素₂和PGF_2α抑制preadipocyte分化的早期阶段通过绑定到特定的受体,EP4受体(24)和FP受体(25- - - - - -28当别人证明PGD),分别₂提高preadipocyte分化(29日,30.]。Quinkler等人先前执行的详细检查depot-specific mRNA表达的酶参与PGD模式₂和PGJ₂在人类网膜的合成和皮下脂肪组织(31日),建议这些酶可能在体内脂肪分布有一个重要的角色。然而,脂肪组织的表达是否PG-synthesizing酶和PG受体的影响在人类肥胖和preadipocyte分化从未明确。

因此,本研究的第一个目的是检查depot-specific铂族元素₂和PGF_2α释放和mRNA表达模式的磷脂酶A2 (PLA2G16和PLA2G4), COX-1, cox - 2, PTGDS, PTGIS, PTGFS (AKR1B1) ptg, PTGES2, PTGES3,前列腺素FP受体(PTGFR)和前列腺素E受体(PTGER1, PTGER2、PTGER3 PTGER4) preadipocytes和整个脂肪组织。第二个目标是识别这些酶表达的变化通过preadipocyte分化。第三个目标是检查整个脂肪组织之间的关联mRNA的表达这些基因编码关键酶或受体参与PG合成信号和措施的肥胖,身体脂肪分布,或脂肪细胞大小。我们测试的假设从大网膜细胞间释放更多的antiadipogenic PGF_2α和铂族元素₂比皮下仓库和相应的记录显示一致的仓库的差异并通过脂肪生成调制。我们还假设,腹部肥胖与脂肪组织的表达改变PG-synthesizing酶和/或PG受体。

2。材料和方法

2.1。参与者

研究样本包括46岁健康妇女(年龄:37.6 - -54.5年)招募的选择性外科手术安排妇科单位楚魁北克的医学中心。女性研究的接受总()或小计()腹部子宫切除,有时还伴有输卵管卵巢切除术()或两个()卵巢。前几周手术和手术,上午详细信息得到药物的使用和生殖,月经,每个病人的病史。女性使用药物影响代谢参数(β-阻断血管紧张素转换酶抑制剂,神经纤维酸衍生物,和他汀类药物)并不包括在本研究。妇女报告使用非甾体类抗炎药物治疗手术前几周也被排除在外。进行分化,外植体和主preadipocyte实验,类似的子样品的女性妇科手术是招募(年龄:37.8 - -57.5年,体重指数:19.6 - -41.1公斤/米²)。主要preadipocytes也获得商业(SC,从一个43岁的女人)(禅宗生物、数控、美国)。这项研究是研究伦理委员会批准楚de魁北克医疗中心(协议c09 - 08 - 086)。我们还包括文化从女性接受减肥手术(胆胰分流或套筒胃切除术)治疗严重肥胖(年龄:26-54年,体重指数:40.0 - -52.7公斤/米²)的研究伦理委员会的批准魁北克心脏病和肺学研究所(协议CER-IUCPQ 21049)。所有科目提供书面知情同意包含之前的研究。

2.2。身体肥胖和体脂肪分布的测量

这些测量进行或前几天上午手术。身体成分是由双能x线吸收仪使用评估Hologic qdr - 4500 a密度计和全身软件身体风扇V8.269:3 (Hologic Inc .)、贝德福德,妈,美国)。测量腹部皮下和内脏脂肪组织在- 5椎骨横截面区域是由计算机断层扫描(如前所述)(32,33]。

2.3。脂肪组织抽样

皮下脂肪组织收集现场的手术切口(下腹部)和网膜脂肪组织收集的远端部分大网膜。脂肪组织样本立即带到实验室。新鲜样品的一部分被用来执行脂肪细胞和preadipocyte隔离和新鲜的一部分脂肪组织(30毫克)切成5 - 10毫克块,199放置在无血清培养基。脂肪组织外植体在37°C下保存在文化有限公司5%₂的气氛。剩下的部分样本立即冻结RNA隔离和表达测量。

2.4。脂肪细胞隔离和脂肪细胞大小的测量

每个新鲜组织样本的一部分与I型胶原酶消化Krebs-Ringer-Henseleit (KRH)显示缓冲区的修改版本Rodbell方法(34]。消化后,细胞悬浮液过滤尼龙网和成熟脂肪细胞被浮选分离stromal-vascular分数。成熟的细胞与KRH缓冲洗3次。细胞大小测量,成熟脂肪细胞悬浮液是可视化使用相差显微镜相机和计算机接口。悬挂的照片拍摄和接穗图像软件(Scion公司,弗雷德里克,妈,美国)是用来测量每个组织样本250脂肪细胞的直径。平均脂肪细胞直径是用于分析。

2.5。Preadipocyte隔离和主要的文化

Preadipocytes隔绝stromal-vascular分数使用范Harmelen方法的修改(35]。脂肪细胞的残余KRH缓冲隔离,包含stromal-vascular分数,是离心机和颗粒被DMEM-F12培养基补充10%的牛血清,2.5μ50 g / mL两性霉素B,μ克/毫升庆大霉素。Stromal-vascular细胞被过滤到140年μ尼龙网去除内皮/间皮的细胞,放置在文化板块和培养在37°C下5%的股份有限公司₂的气氛。媒介是改变每2 - 3天。

2.6。诱导脂肪细胞的分化

Preadipocytes被播种在12-well板块获得完全融合在48 h。分化完全汇合的preadipocyte文化使用标准化的诱导分化培养基和协议主/天(禅宗生物、杜伦、数控、美国)。分化培养基由DMEM-F12 PPAR的补充γ受体激动剂、胰岛素、地塞米松和3-isobutyl-1-methylxanthine。评估的分化程度,我们测量PPAR的mRNA表达γ。分化细胞中脂滴的积累(8天之后)石油红O-staining也评估了。细胞用PBS和福尔马林固定的1 h。他们培养2 h与4.9毫米油红O解决方案并与ddH洗了三次₂o .分化细胞使用相差显微镜拍摄的照片在20 x放大。

2.7。铂族元素₂和PGF_2α测量

铂族元素₂和PGF_2α释放由皮下和网膜的初级preadipocytes测量细胞内孵化24小时37°C DMEM-F12媒介。铂族元素₂和PGF_2α释放由皮下和网膜的主要器官文化也以无血清培养基199孵化24小时37°C的组织样本。建立了培养时间根据实验时间进程。铂族元素₂和PGF_2α释放在网膜的或皮下preadipocyte分化的不同阶段(0,6小时,1天,8天)也以分化培养基。这些测量的基础上,网膜的和皮下铂族元素₂和PGF_2α产量计算。铂族元素₂和PGF_2α内容在媒体上被酶免疫分析法测定,acetylcholinesterase-linked铂族元素₂和PGF_2α示踪剂(美国开曼的化学物质,安阿伯市MI)如前所述[36]。考虑到主要的性质和cultivability preadipocytes和脂肪组织外植体,铂族元素₂和PGF_2α释放的培养主要preadipocytes是表示为pg / mLμg蛋白质24 h和铂族元素₂和PGF_2α释放脂肪组织外植体被表示为pg / mL毫克组织24小时。网膜的和皮下铂族元素₂和PGF_2α产量在分化被表示为pg / mLμg蛋白质小时。

2.8。信使RNA表达的定量实时PCR

总RNA分离皮下和网膜脂肪组织或主要分化和nondifferentiated文化使用RNeasy脂质组织萃取设备和列DNase治疗(试剂盒,希尔登,DE)遵循制造商的建议。RNA质量和浓度进行评估使用安捷伦科技2100生物分析仪(美国安捷伦,圣克拉拉,CA)。六聚体互补DNA使用随机生成的总RNA,低聚糖dT₁₈第三,上标核糖核酸酶H-RT(生命表达载体技术、伯灵顿,加拿大)和纯化QIAquick PCR净化设备(试剂盒,希尔登,DE)。实时cDNA放大了480年重复使用LightCycler(美国罗氏诊断,印第安纳波利斯)和SYBRGreen我主(罗氏诊断,印第安纳波利斯,美国)。PCR反应条件如下:45周期,变性在95°C 10秒,退火60°C 10秒,72°C 14秒伸长,然后阅读在74°C,持续5秒。融化曲线进行评估特异性的信号。计算每个执行记录的拷贝数据Luu-The et al。37)使用Cp的二阶导数法和标准曲线和对数的数量。建立了标准曲线用已知量的纯化PCR产品和480 LightCycler v1.5程序提供的制造商(罗氏诊断、曼海姆德)。验证了PCR扩增效率。目标基因扩增规范化使用管家基因表达水平的ATP合酶亚基(阿ATP5O),整个组织提取物或glucose-6-phosphate脱氢酶(G6PD)preadipocyte分化。表达水平的ATP5O没有不同的网膜的与皮下脂肪组织在我们的研究样本,使用规范化整个组织表达水平。G6PDmRNA表达没有明显调制在preadipocyte分化和被用来控制这些实验。2.0引物序列设计利用基因工具软件(Biotools Inc .)、埃德蒙顿、AB、加拿大)及其特异性被爆炸基因库数据库中验证。的合成是由IDT(美国DNA整合技术、珊瑚镇IA)。记录研究了磷脂酶A2 (PLA2G16和PLA2G4),环氧酶1和2 (PTGS1和PTGS2), PGF合成酶aldo-keto还原酶1 b1 (AKR1B1) PGI合成酶(PTGIS)、前列腺素D合酶(PTGDS)、前列腺素E合成酶(ptg, PTGES2和PTGES3)、铂族元素受体1,2,3,4 (PTGER1, PTGER2、PTGER3 PTGER4),和前列腺素FP受体(PTGFR)。引物序列补充表1中列出,见补充材料网上http://dx.doi.org/10.1155/2014/451620。楚de定量实时PCR进行测量的魁北克基因表达研究中心平台(魁北克、QC、加拿大)。

2.9。统计分析

学生的测试进行检查仓库的差异意味着基铂族元素₂和PGF_2α释放主preadipocytes或脂肪组织外植体,信使rna表达水平的成绩单在培养preadipocytes检查,和铂族元素₂和PGF_2α产量在preadipocyte分化。分析重大变化在预定端点(0,6、24和192 h后诱导分化)两个仓库,三个实验因素定义:病人供体(随机因素),仓库,和测量四个时间点(固定因素)。分析了后者的使用重复测量因素非结构化的协方差矩阵。仓库和计划之间的交互端点被认为是。缺失值没有估算。我们使用剩余最大似然估计的方法和Kenward-Roger方法估计分母自由度固定效果的测试。正常单变量的假设与Shapiro-Wilk测试验证了柯列斯基分解的误差分布的统计模型。布朗和列文的活力四射变异测试数据被用来验证方差的同质性。学生的搭配测试进行评估仓库脂肪组织信使rna表达水平的差异记录检查的脂肪组织。皮尔森相关系数是计算脂肪组织之间量化关系mRNA表达的成绩单和肥胖测量。日志——或者boxcox-transformed非正态分布的变量。所有数据都意味着±SEM。统计分析与统计包R v3.0.2。(R统计计算的基础,维也纳,奥地利)和JMP软件版本4.0或SAS v9.4 (SAS研究所有限公司、卡里、数控、美国)。

3所示。结果

3.1。铂族元素₂和PGF_2α释放脂肪组织外植体和主Preadipocytes皮下和网膜的隔间

图1显示了铂族元素₂和PGF_2α释放由皮下和网膜的外植体或主preadipocyte文化超过24小时。脂肪组织外植体倾向于释放更多的铂族元素₂比PGF_2α在这两种脂肪组织隔间()(图1(一))。释放PGF_2α由网膜的外植体明显高于比皮下脂肪组织外植体()(图1(一))。网膜的外植体也倾向于有更高的铂族元素₂释放与皮下外植体()。图1 (b)表明preadipocyte文化释放更多的铂族元素₂比PGF_2α在这两种脂肪组织隔间()。类似于脂肪组织外植体,PGF的释放_2α由网膜的preadipocytes显著高于皮下preadipocytes ()(图1 (b))。网膜的preadipocytes也倾向于释放更多的铂族元素₂而皮下preadipocytes ()。

3.2。PG合成相关基因的表达水平或信号在整个脂肪组织和初级Preadipocytes皮下和网膜的隔间

考虑到网膜的铂族元素₂和PGF_2α释放主要preadipocytes和脂肪组织外植体是高于皮下脂肪细胞,我们还检查了仓库的脂肪组织的差异表达多个基因编码酶参与PG合成或PG受体。信使RNA的这些基因在整个脂肪组织评估在46岁女性。表1显示了这个示例的特点。根据平均BMI(28.0公斤/米²)和身体成分测量,女性超重和覆盖范围广泛的肥胖的价值观。

记录检查被检测到在整个组织中脂肪隔间和大多数显示重要的得宝(图的差异2)。PTGDS,具体来说,COX-1、AKR1B1 PTGIS PTGES3, PTGER1信使rna表达水平明显高于相比,网膜的皮下脂肪组织(对于所有)。ptg PLA2G16表达水平,PTGFR, PTGER3, PTGER4在皮下和网膜脂肪组织相比显著提高(对于所有)。得宝差异无显著意义PLA2G4, cox - 2, PTGES2, PTGER2表达水平。PTGER1 mRNA丰度在整个组织(即弱。,低于2000册/μ克总RNA)。

子样品的病人,这些记录的表达也在培养初级preadipocytes检查。记录研究检测在初级preadipocytes脂肪隔间和大多数显示重要的得宝(图的差异3)。cox - 2表达水平的COX-1, AKR1B1, ptg明显高于在网膜的皮下主preadipocytes(相比对于所有)。高表达的趋势PLA2G4A和PTGDS网膜的preadipocytes观察(两个)。信使RNA的表达PTGER3明显高于在皮下和网膜preadipocytes相比()。高表达的趋势在观察皮下preadipocytes PTGFR ()。得宝差异无显著意义PLA2G16, PTGIS, PTGES2, PTGES3, PTGER1, PTGER2信使rna表达水平。信使RNA表达水平PTGER1和PTGER4 preadipocytes(即非常低。,低于2500册/μg总RNA PTGER1和低于300册/μ克总RNA PTGER4)。

3.3。PG酶的表达水平——或者在Preadipocyte Receptor-Coding基因分化

检查是否脂肪组织表达PG-synthesizing酶和PG受体是调节preadipocyte分化期间,我们测量这些记录在0 h, 6小时,1天,诱导分化后8天。正如预期的那样,图4(一)表明,PPAR的mRNA表达显著诱导分化细胞脂肪隔间相比,未分化的细胞,如预期从治疗()。与这些结果一致,在分化细胞中脂滴的积累(8天)后也观察到油红O-staining和相差显微镜(图4 (b))。皮下PPAR信使rna丰度在各个时间点上均明显高于测试相比,网膜的PPAR信使rna丰富,重要得宝效果()(图4(一))。

preadipocyte诱导分化后的8天内,PLA2G16和PTGER3 mRNA表达在脂肪隔间都显著增加(数据5(一个)和5(左))而COX-1, cox - 2、PTGIS ptg mRNA丰富脂肪仓库都下降(对于所有)(数据5 (b),5 (c),5 (f),5 (g))。有趣的是,网膜的cox - 2 mRNA之前非常丰富的诱导分化和显著减少6小时后,与一个重要time-by-depot交互()(图5 (c))。AKR1B1 mRNA的表达两种脂肪高隔间观察诱导分化后一天()(图5 (d)),但这成绩单显著低于分化细胞(8天以后),而未分化细胞()。PTGFR观察表达类似的模式。这个成绩单略下降6小时后,特别是在皮下仓库,但一天后的显著增加仓库()(图5 (j))。PTGDS mRNA表达倾向于增加只网膜的分化细胞(time-by-depot互动,)(图5 (e))。PTGES2 mRNA表达在这两种脂肪隔间后显著增加一天相比,未分化的细胞()(图5 (h))。没有观察到显著差异在PGTES3 mRNA表达分化(图5(我))。PTGER2 mRNA表达在这两种脂肪隔间是显著增加诱导分化后6小时,但这成绩单在分化细胞减少,特别是在皮下得宝(time-by-depot互动,)(图5 (k))。PTGER1 PTGER4只有弱表达未分化和分化细胞(即。,低于2000册/μ克总RNA PTGER1和低于1000册/μ克总RNA PTGER4)。PTGER1水平逐渐下降后8天分化的脂肪隔间(数据未显示)。显著降低表达PTGER4观察诱导分化后6小时相比,控制脂肪隔间()。然而,这种记录往往是高分化细胞相比,控制(数据未显示)。

仓库的差异这些成绩单preadipocyte分化中也被观察到。更具体地说,皮下PLA2G16 mRNA表达明显高于相比网膜的PLA2G16 mRNA表达()(图5(一个))。网膜COX-1 cox - 2、AKR1B1 ptg mRNA表达相比也明显高于皮下细胞(对于所有)(数据5 (b),5 (c),5 (d),5 (g))。皮下PTGER3 mRNA丰度明显高于相比网膜的PTGER3 mRNA表达诱导分化后()(图5(左))。观察差异不显著得宝PTGDS mRNA丰富,PTGIS, PTGES2, PTGES3, PTGFR, PTGER2 preadipocyte分化的诱导期间(数字5 (e),5 (f),5 (h),5(我),5 (j),5 (k))。

铂族元素₂和PGF_2α由这些细胞也释放介质的测量0,6小时,1天,诱导分化后8天。检查仓库的差异,网膜的和皮下铂族元素₂和PGF_2α产量的基础上计算了这些测量。网膜的铂族元素₂分泌率明显高于皮下铂族元素₂分泌率(,图6(一))。此外,网膜的PGF_2α分泌速度往往高于皮下PGF_2α分泌率(,图6 (b))。

3.4。整个脂肪组织PG酶或Receptor-Coding基因的表达水平与身体肥胖和身体脂肪分布

PG酶的表达水平之间的联系,或者receptor-coding基因在脂肪组织和身体成分或脂肪分布进行测量来测试假设腹部肥胖与脂肪组织表达PG-synthesizing改变和/或PG酶受体通过脂肪形成,刺激的成绩单是那些与肥胖程度关联最好。表2表明皮尔逊相关系数之间的信使rna表达水平的一些记录检查和身体成分或脂肪分布测量。PLA2G16 mRNA表达网膜脂肪组织是积极和总脂肪组织面积显著相关,脂肪细胞直径(对于所有)。AKR1B1 mRNA表达脂肪隔间是积极和与瘦体重显著相关()。表达的文字记录在皮下脂肪组织也积极与全身脂肪量显著相关,脂肪组织领域,和脂肪细胞的大小(对于所有)。PTGDS mRNA表达网膜脂肪组织与内脏脂肪组织面积呈正相关()。网膜的之间的趋势观察PTGDS mRNA表达和全身脂肪量以及网膜脂肪细胞直径(两个)。表达的文字记录在皮下脂肪组织没有明显与体成分和脂肪分布的测量。PTGER3 mRNA表达网膜脂肪组织总量呈正相关,和内脏脂肪组织和脂肪细胞大小(对于所有)。PTGER4 mRNA在脂肪丰富仓库与身体脂肪分布指数和网膜的脂肪细胞大小(对于所有)。PTGER4 mRNA表达在皮下脂肪组织呈正相关,皮下脂肪细胞大小和身体成分(对于所有)。PTGES2 mRNA表达网膜脂肪组织只与内脏脂肪组织面积呈正相关(数据未显示)。COX-1之间没有发现显著的关联,cox - 2 PTGIS, ptg, PGTES3, PTGFR, PTGER1或PTGER2 mRNA表达脂肪舱和身体成分或脂肪分布测量(数据没有显示)。

4所示。讨论

据我们所知,这是第一个研究清楚调查脂肪depot-specific铂族元素₂和PGF_2α释放与表达模式组合的几个参与PG酶合成信号在人类preadipocytes或整个脂肪组织。此外,我们确定哪些记录是调制响应preadipocyte分化之间的联系,我们检查了身体成分或脂肪分布的测量,这些记录在人类的表达水平皮下和网膜脂肪组织。我们发现培养preadipocytes和大网膜移植培养舱释放更多的铂族元素₂和PGF_2α比皮下仓库和相应的记录显示一致的仓库的差异。在preadipocyte分化,铂族元素₂和PGF_2α网膜的比皮下细胞分泌率高和一致的仓库记录参与铂族元素的差异₂和PGF_2α合成也被观察到。记录过程中刺激脂肪生成是那些与肥胖相关的最好测量,表明与肥胖相关的细胞数量和规模的变化影响PG-synthesizing基因和PG受体表达。

在这项研究中一个重要的发现是,preadipocytes和大网膜脂肪组织外植体舱释放更多的铂族元素₂和PGF_2α比皮下仓库。更高的COX-1表达式的结果,AKR1B1 PTGES3, PTGIS,和PTGDS网膜的与皮下脂肪组织以及更高的COX-1表达式,cox - 2, AKR1B1, ptg, PTGDS网膜的与皮下培养preadipocytes与这些结果一致。先前一些研究证实,两个考克斯是病原反应酶的合成PG (11,16]。在我们的研究中,高表达COX亚型在内脏脂肪可能解释得宝PG合成的差异。Farb et al。38]最近在严重肥胖受试者,考克斯,ptg, PTGDS,内脏脂肪组织和PTGIS调节,这与我们的结果高度一致。他们还注意到,铂族元素的释放₂和6-keto PGF_1α在内脏和皮下脂肪相比显著高于文化[48小时后38]。Quinkler等人还报道,COX-1和PTGDS mRNA表达水平高相比,网膜的皮下脂肪组织(31日]。此外,我们之前发现内脏preadipocytes炎症信号的PGF更加敏感_2α释放(8]。在目前的研究中,我们的结果表明倾向网膜脂肪细胞释放前列腺素COX-derived代表令人信服的证据支持这一概念,大网膜是不同于皮下的脂肪组织内分泌功能和内脏脂肪组织导致炎性表型(39]。Depot-specific表达模式参与PG合成的关键酶或信号会在内脏肥胖的病理生理作用。符合这一假说,法布等人证实后卫的环氧酶通路参与内脏脂肪组织的血管内皮功能障碍38]。

在目前的研究中,我们观察到皮下PPAR的mRNA表达γ显著高于大网膜的隔间。与之前的研究结果相一致关于仓库脂肪形成的差异(40- - - - - -44),preadipocytes皮下脂肪间似乎有更高的区分而preadipocytes和内脏脂肪的能力。有趣的是,在preadipocyte分化,我们发现铂族元素的生产速度₂和PGF_2α在皮下脂肪低舱和一致的仓库参与铂族元素差异也观察到的成绩单吗₂和PGF_2α合成(考克斯,AKR1B1 ptg)。这些仓库差异在PG合成诱导preadipocyte分化与铂族元素的观念相一致₂和PGF_2α可能antiadipogenic功能。实际上,正如前面提到的,在体外研究表明,铂族元素₂和PGF_2α抑制preadipocyte分化的早期阶段,通过他们的特定的受体(24- - - - - -28,45]。考虑我们的研究的设计,我们不能对因果关系的结论。然而,我们的研究结果并不排除潜在的动力对脂肪细胞分化的影响。受损的脂肪生成是一个关键因素将肥胖和代谢并发症(40),进一步的研究是必要的检查这两个后卫如何调节人体脂肪组织的可扩展性。

据我们所知,这是第一个研究清楚地报告之间的联系肥胖或内脏脂肪积累和几个PG-synthesizing酶或PG受体的表达在人类脂肪组织。很多重要的表达水平之间的相关性被发现几个成绩单和肥胖测量。AKR1B1表达水平在两个脂肪总量的隔间呈正相关措施和内脏脂肪过多。只有网膜的PTGDS PLA2G16表达式与肥胖相关指标。受体的表达水平EP3和EP4也与身体成分和脂肪分布指数呈正相关,特别是在网膜的隔间EP3受体在这两种脂肪隔间EP4受体。这些结果的一个引人注目的方面是所有重要的相关性观察是积极的。多个显著正相关性与脂肪细胞的大小间接暗示表达模式PG-synthesizing或PG酶受体在脂肪组织可能反映的比例大,成熟脂肪细胞脂肪组织在每个样本。在肥胖个体,脂肪组织的扩张会导致增加脂肪细胞的大小(肥大)和增加脂肪细胞数量(增生)4,5]。我们建议,我们描述的相关模式反映了调制的影响肥胖脂肪组织细胞组成,进而影响PG-synthesizing酶和PG受体。

符合一个调节肥胖对基因表达的影响,成绩单,肥胖也有显著相关性比未分化细胞分化细胞中高度表达。相比之下,大多数的酶,不相关的肥胖是弱表达分化细胞相比,未分化的细胞。以类似的方式,记录没有调制在分化,如PTGES3和皮下PTGDS没有身体成分和脂肪分布的重要关联。AKR1B1似乎是一个例外模式作为其分化后表达明显减少了8天。然而,我们还发现瞬态增加其表达分化后1天。这可以解释AKR1B1表达式之间的积极联系整个组织和身体成分指标的相关分析。同意这些结果,藤森等人表明,Akr1b3人类AKR1B1的小鼠直接同源,弱表达3 t3-l1 preadipocytes但增加分化开始后然后迅速减少(46]。在后者中,cox - 2表达调制在类似的方式46]。我们的研究结果是一致的COX-1和cox - 2的表达水平在分化有所下降。谢等人也曾观察到,考克斯都分化后表达下调3 t3-l1细胞(47]。Akr1b3的瞬时表达式的基础上区分3 t3-l1细胞,藤森等人表明Akr1b3参与通过PGF抑制脂肪形成的早期阶段_2α合成和信号通过FP受体(46]。如前所述,我们也报道称,AKR1B1功能PG合酶在人类8,20.,21]。这些发现在脂肪组织提高AKR1B1这种酶的潜在作用的可扩展性脂肪组织的代谢并发症腹部肥胖。

先前ptg的表达已经调查过在脂肪细胞45,48),但所涉及的特定的同种型铂族元素的生产₂从来没有在人类脂肪组织明确指出。藤森等人最近证明ptg负责铂族元素₂合成3 t3-l1细胞(16]。ptg的海图和Riendeau证明表达在很大程度上减少小鼠肥胖组织,而PTGES2和PTGES3表达式显示轻微或没有变化48]。欣然地等人还显示,脂肪细胞与人体皮下和内脏脂肪组织病态肥胖的个体倾向于释放更少的铂族元素₂比瘦的人(49]。我们的研究结果并不完全整合与这些之前的分析,我们发现没有ptg之间的相关性,PTGES2或PTGES3 mRNA表达和总肥胖测量。我们研究了女性在精益中度肥胖范围而不是病态肥胖个体可能解释这些差异。谢等人发现ptg表达增强,胞质形式(PTGES3)水平不变期间小鼠3 t3-l1分化[47]。相反,藤森等人表示,所有三个亚型的蛋白和mRNA水平ptg(1、2和3)中持续表达的脂肪生成(16),这不是与我们的结果一致。关于铂族元素₂我们表明,EP1受体受体,是在整个脂肪组织和preadipocytes弱表达。我们还发现EP4受体迅速下降后6 h分化的感应,这是符合的一项研究表明铂族元素₂-EP4信号抑制脂肪细胞分化[16]。此外,我们发现EP3受体的表达明显高于分化细胞,间接支持EP3受体的概念是针对成熟脂肪细胞(12]。

应该承认这项研究的局限性。我们只有表达数据和转录后的或转化的修改可能会影响蛋白质含量不同。在我们的研究中,我们调查了一个相当大的样本的患者,我们也有肥胖水平的详细数据和脂肪组织分布以及内脏和皮下脂肪组织样本。然而,我们不能推断我们的发现。此外,我们不能确定是否主要PG-secreting stromal-vascular分数的细胞是脂肪组织由其他人(50- - - - - -52]。这是由于这样的事实:PG释放preadipocytes和脂肪组织外植体没有规范化的比较值。事实上,PG释放脂肪组织外植体被毫克标准化组织而附着preadipocytes PG释放的主要文化是表示为一个总蛋白量的函数。还需要进一步的研究来理解这些酶的表达的机制变化在腹部肥胖与脂肪细胞的分化。

总之,大网膜细胞间释放更多的PGF_2α和铂族元素₂比皮下仓库和相应的记录显示一致的仓库的差异。肥胖的调节脂肪组织表达PG-synthesizing酶和PG受体。这可能发生在adipogenesis-induced这些转录表达的变化。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

作者承认的贡献研究协调员,妇产科医师、护士、放射技师楚de魁北克以及参与者的合作和贡献的哔叽Simard (IUCPQ)的统计分析。本研究支持营运资金从加拿大卫生研究院研究所的性别和健康安德烈Tchernof(拖把- 64182)。Andreanne Michaud由昏聩de矫揉造作的du Quebec-Sante。

补充材料