文摘
目的。评估FGF -TGF -轨道,COX2的表达和免疫活性的细胞组织的患者严重和轻微的坟墓”之影响。病人和方法。轨道组织来自27个患者:(1)严重(),是临床活动得分(CAS)为8.5(标准差2.5);和(2)温和的(),指的是中科院的2.2 (0.8 SD),和从10个人接受追求。的表达CD4 +、CD8 +、CD20 +和CD68 FGF -TGF -,COX2在轨道组织评估通过免疫组织化学方法。结果。我们展示了主要的CD4 + T细胞在严重。CD68表达观察纤维连接区域的轻微去是健壮的严重,而著名的TGF -表达式被认为在所有。增加FGF -表达式的成纤维细胞和脂肪细胞中观察到严重。患者没有发现COX2的表达。结论。巨噬细胞和CD4 T淋巴细胞都参与到主动/严重和长期的炎症阶段轨道组织。FGF -和TGF -表达可能导致组织重构、纤维化和炎症的延续轨道组织去尤其严重。
1。介绍
坟墓”之影响(去)是一个毁容,有时致盲疾病,特点是轨道组织的炎症和肿胀,纤维化和脂肪形成的主要特性(1]。
很明显,易受疾病表现最有可能反映了轨道的高度专业化的功能组织,一个独特的脂肪得宝,缓冲全球2]。雷根斯堡等人发现,在患者中,25%有轨道脂肪和肌肉卷在一个特定的参考范围。增加脂肪的体积,特点是突出,是在大约14%的患者(3]。然而,只有3 - 5%的患者有严重疾病剧烈的疼痛,炎症,影响视觉角膜溃疡或压缩视神经病变(4]。
稀疏单核细胞浸润被脂肪结缔组织和肌肉内肌内膜(5,6]。炎症初期阶段的大多数细胞CD4 +和CD8 + T淋巴细胞和B淋巴细胞只是偶尔见过(7,8]。巨噬细胞大量增加疾病和早期少所以年末疾病(9]。炎症细胞、T和B淋巴细胞和巨噬细胞以及肥大细胞浸润轨道与轨道成纤维细胞和放大炎症/免疫反应(9]。人类T淋巴细胞激活表达cyclooxygenase-2和生产前列腺素驱动人类轨道成纤维细胞分化为脂肪细胞(10]。此外,参与CD40的轨道成纤维细胞触发透明质酸的合成和激活炎症环氧酶(11]。
当暴露在TGF -,Thy-1+成纤维细胞分化与著名的细胞质myofibroblasts肌动蛋白丝,可以参与炎症、修复、纤维化和负责组织重构在去12,13)(图1)。
TGF -和其他炎症介质(IL-16咆哮)阐述了由常驻巨噬细胞和成纤维细胞触发T细胞迁移或直接参与炎症(14]。炎症环氧酶(COX2)通常是表示在极低的水平在正常基础生理条件。COX2在轨道fibroadipose表示上级组织去;似乎有越来越严重的眼病的正相关,表明可能与COX2的表达和轨道炎症的关系(15,16]。
细胞类型的居住在去组织preadipocytes和效应器细胞和成纤维细胞是最有可能的目标轨道的免疫过程(12]。纤维发生的生长因子、氧自由基和细胞因子释放炎性细胞行动轨道preadipocytes, para -或自分泌的方式,刺激脂肪形成,纤维母细胞增殖和粘多糖的合成。表达式的FGF -在轨道/脂肪结缔组织与更高的CAS建议去直接关系其重要作用的严重性(去17]。
因此我们决定执行一项研究,旨在比较白细胞渗透模式和炎症(COX2)和profibrotic (FGF -TGF -)/轨道脂肪结缔组织的细胞因子环境轻微和严重患者在减压手术。
2。材料和方法
2.1。病人和控制
人类轨道组织获得了来自27个患者(26岁女性和1男)去坟墓的分类根据欧洲小组之影响,接受轨道减压过程,从轨道组织银行的眼科和埃森大学。手术时患者的平均年龄为44.5岁(范围26-47)。
控制脂肪/结缔组织来自10个人(9女性和1男)轨道手术追求没有历史的或任何轨道炎性疾病。
手术标本的轨道脂肪/结缔组织,并立即获得snap-frozen在液态氮,直到使用。
去(CAS)的临床活动分数估计根据Mourits et al。18]。眼科疾病的严重程度估计使用NOSPECS分类(没有迹象或症状;只有迹象,没有症状;的迹象;突出;眼部肌肉的参与;角膜的参与;和减少视力视力)[19]。
2.1.1。严重的患者去
严重的患者()(NOSPECS IV-VI)所需的轨道由于视神经骨减压压缩和有限的眼外肌功能(22标本)。意思是甲状腺疾病持续时间2.5(标准差1.5)年1.2(标准差1.0)年。所有患者手术前收到> 1的循环类固醇团,但2收到轨道辐照。临床活动得分的平均值为8.5(标准差2.5)。
2.1.2。轻度患者去
轻度患者()(NOSPECS iii iv)接受轨道减少突出或脂肪切除骨减压。意思是甲状腺疾病持续时间3.9(标准差2.0)年和3.3 (SD−1.9)。类固醇团和接收轨道辐照是相似的患者严重。临床活动得分的平均值为2.2(标准差0.8)。
2.2。方法
评价蛋白质表达的是使用免疫组织化学的方法完成的。deparaffinisation和补液后,抗原决定基检索进行了设想Flex目标检索解决方案(DAKO)高博士内生氧化物酶被孵化的部分在甲醇和3%氢过氧化物酶20分钟。下一个幻灯片和特殊类型的抗体(表孵化1)。显色剂设想Flex (DAKO)申请10分钟30分钟后跟民建联的解决方案。幻灯片然后用苏木精复染色,光学显微镜下检查。免疫组织化学评估每个蛋白表达是由病理学家。免疫染色的强度是评价随机10字段下20 x放大。结果表示为与强阳性染色细胞的百分比如下:≤10%阳性细胞−负(−),在11%和50%之间(+),≥51%阳性细胞(+ +)20.]。
适当的积极的和消极的控制进行。
3所示。结果
3.1。T细胞在坟墓”之影响
在温和的类型我们观察到T淋巴细胞CD4阳性(T助手)在组织6 9温和的情况下;主要是T细胞分散在整个组织和旁边的小血管。在2样本T帮手一起细胞毒性T细胞(CD8 +);然而T CD8在少数。3温和去T细胞缺席。
3.1.1。T细胞严重
T淋巴细胞中观察到20的22个严重。T细胞是CD4阳性T助手;只有2例我们也观察到一些CD8 + T细胞毒性细胞。
3.1.2。B淋巴细胞在去
我们没有观察到的B淋巴细胞在几乎所有标本严重和轻微的(只有1异常严重,我们观察到一个焦点的渗透B淋巴细胞)。
3.1.3。CD68在温和的表达式
在所有轻微的去组织我们观察到存在CD68阳性cells-both巨噬细胞和成纤维细胞。这些细胞被分散在整个组织中,特别是更多的纤维结缔组织,而不是脂肪。在4 9例细胞被众多著名的(见表2)。
3.1.4。CD68表达严重
在所有严重的标本我们观察巨噬细胞和成纤维细胞;主要是细胞被众多,散布在整个组织(15例我们评估染色+ +)。的患者数量和CD68的百分比表达在得分0,在检查1、2组(见表3)。
3.1.5。cox - 2表达轻微和严重
我们没有观察到COX2染色,在轻微和严重的病例。这可能的解释与前面的类固醇治疗在几乎所有的病人。
3.1.6。FGF -在温和的表达
在温和的去组织我们观察到的表达FGF -。染色观察主要在脂肪细胞和成纤维细胞组织。FGF -也表达了组织内的血管的内皮细胞。然而只有2的9温和去被评估为(+ +)。
3.1.7。FGF -表现在严重
所有的严重病例显示FGF -脂肪组织中的表达以及成纤维细胞的结缔组织。也FGF -表达在众多的小血管。在几乎所有的研究严重病例标本(15)FGF -表达式被估计为(+ +)。病人的数量和比例的FGF -表达式中得分0,在检查1、2组(见表3)。
3.1.8中。TGF -在温和的表达
所有的温和的去检查标本显示TGF -表达主要是成纤维细胞内的结缔组织纤维组织;然而表达主要是分散的。
3.1.9。TGF -表现在严重
大多数严重的去检查标本提出强烈的TGF -和扩散模式表达式,在众多的结缔组织纤维组织内成纤维细胞。
有正相关与CD4和FGF - ca值TGF -和CD68表达式(见表4)。
4所示。讨论
眼球后的组织标本一般不可以从早期的患者,积极去未经免疫调节治疗(与糖皮质激素或放射治疗)。
Avunduk等人研究了4活检标本活跃之前没有免疫抑制治疗(21]。他们表明,CD4 +和CD8 +细胞,其中很大一部分是CD45RO +细胞。10月(轨道结缔组织)的渗透HLA-Dr + CD25 +和TNF -α细胞表明Th1-type免疫反应的干扰促炎细胞因子(TNF -α)可能在疾病发病机理的重要21]。
最近海拔CD4, CD8比率和增强分泌il - 6、il - 10, TNFαPBMCs中被检测到的病人与对照组(22]。
类似于我们的研究,以前检查轨道组织标本接受免疫抑制治疗的患者去显示主要CD4 +渗透,只有20 - 30%的浸润细胞CD3 + CD8 +细胞(23,24]。
杨等人研究了轨道OCT-derived T细胞系使用免疫组织化学方法,从去和他们说CD3 + T细胞标记在大约100%的情况下可以检测到。此外,T细胞系主要由CD4 +细胞(24]。杨和同事也发现类似的结果,他们成立于104年10月活检的T细胞克隆3去发现大约70 - 80%患者CD3 + CD4 +和大约20 - 30%是CD3 + CD8 +细胞(24]。不过,在发表论文检查患者治疗全身性类固醇和/或轨道放疗。在之前的研究中,Eckstein等人显示主要的眶CD4 + T细胞浸润在升高和缺乏CD8 +和CD20 + B淋巴细胞(25]。这些结果与我们的研究结果一致。
陈等人发现,巨噬细胞浸润的发病机制中扮演重要角色可以通过过度MCP-1 [26]。巨噬细胞的浸润是位于之间的主要血管周围和成熟的脂肪细胞。巨噬细胞浸润并没有减弱的长时间。他们还发现,MCP-1的表达去轨道脂肪含量高于轨道脂肪的控制(26]。在我们的研究中,我们演示了CD68巨噬细胞的浸润纤维结缔组织和脂肪组织表达严重超过轻微(数字3 (c)和3 (d))。此前,Eckstein等人在轨道组织记录增加移民巨噬细胞CD14和RFD7涌入25]。这种细胞的存在和强烈的相关性疾病活动现场显示强劲的炎性分泌物(26]。Eckstein等人得出的结论是,这些巨噬细胞从刚招募单核细胞渗透,但不是当地居民巨噬细胞(25]。最近在走,它已经发现,肥大细胞,单核细胞,巨噬细胞可能激活轨道成纤维细胞通过分泌尤其是PDGF-AB PDGF-BB [27]。
马托斯等人研究了免疫组织化学表达生长因子(igf - 1, a, PDGF-B、FGF和VEGF)坟墓的眼病患者(17]。igf - 1表达积极的在29.2%的情况下。与中科院高有直接关系(临床活动得分)。当中科院等于或高于5被认为是,igf - 1表达的百分比是54.5%。FGF表达在5例(20.8%)有直接关系在所有那些高CAS(> 5),提出了重要的积极作用(45.4%)。他们得出的结论是,在所有的病人,除了一个,用积极的FGF的表达,igf - 1和VEGF CAS大于5,表明这些生长因子的这样一个重要的角色在坟墓的眼病的发病和严重程度17]。重要的纤维结缔组织的增生严重被认为在我们的标本(图2 (c))。除了我们的研究FGF表达增加在成纤维细胞(图4(一))和脂肪细胞(图4 (b))是观察到严重的结缔组织。
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易和徐观察高COX2的表达在眼球运动眼病和Bloise等人证明了温和的治疗和口服双氯芬酸钠是一种很好的和安全的治疗选择28,29日]。Vondrichova等人显示COX2在病人过度活跃的阶段相比,慢性阶段。此外,他们发现,双氯芬酸环氧酶抑制剂与敌对的影响,γ- ppar成熟脂肪细胞的数量减少了约50% (16]。最近衰减白介素- 1 (IL)全身的环氧酶- 2 (COX)和前列腺素(PG) E2在轨道成纤维细胞表达患者眼球运动眼病(TAO)已经被证明能降低炎症(30.]。这个语句将与我们的结果一致,没有cox - 2的表达在我们的标本,因为大多数的研究轨道减压前患者接受糖皮质激素可能阻碍了COX2授权的炎症。
5。结论
巨噬细胞和CD4 T淋巴细胞都参与到主动/严重和长期的炎症阶段轨道组织。FGF -和TGF -表达可能导致组织重构、纤维化和炎症的延续轨道组织去尤其严重。COX2通路可能受到系统性类固醇治疗。
缩写
| CD: | 集群的区别 |
| 中科院: | 临床活动得分 |
| COX2: | 环氧酶2 |
| FGF -: | 纤维母细胞生长因子 |
| 走: | 格雷夫斯氏之影响 |
| MCP-1: | 单核细胞化学引诱物蛋白质 |
| 咆哮: | 调节激活正常T细胞表达和分泌 |
| TGF -: | 转化生长因子-。 |
伦理批准
这项研究是医学伦理委员会批准的埃森大学的德国。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
承认
这项研究是由医学科学院比亚韦斯托克批准号133 - 69852 L。