文摘
脑源性神经营养因子(BDNF)是神经营养因子家族的一员。神经系统外,BDNF表达各nonneural组织,如牙周韧带、牙髓和成。虽然脑源性神经营养因子的作用在牙周再生已经表明,脑源性神经营养因子的函数牙周疾病尚未研究。本研究的目的是分析BDNF水平在慢性牙周炎患者牙周组织(CP)和牙周健康对照组(HC)。所有受试者rs4923463和rs6265基因分型脑源性神经营养因子多态性。牙周组织收集了ELISA,髓过氧化物酶(MPO)和显微分析28个CP患者及29个HC科目。BDNF水平增加CP患者相比,HC科目。一个负相关时观察分析BDNF浓度和il - 10在牙周组织发炎。没有频率的BDNF基因型差异CP和HC受试者被观察到。然而,脑源性神经营养因子基因型GG与BDNF水平上升有关,肿瘤坏死因子-α,CXCL10 CP患者。总之,BDNF似乎与牙周疾病相关的过程,但脑源性神经营养因子的具体作用仍需要澄清。
1。介绍
牙周健康可以被描述为“一个动态的活动促炎/抗微生物细胞因子来控制感染是通过抗炎机制优化平衡,防止不必要的炎症”(1]。在科目容易牙周病(PD),炎症反应的不平衡导致的过度生产促炎细胞因子和随后的牙周附着丧失(2]。另一方面,控制机制防止过度组织损伤(3]。此外,释放组织再生的因素可能导致牙周再生通过调节牙周韧带的功能细胞,内皮细胞、成牙骨质细胞(4]。在此设置,生成脑源性神经营养因子(BDNF)据报道增强牙周组织再生(4,5]。BDNF是生成家族的一员,由血管内皮细胞和成骨细胞的表达,免疫,神经细胞(6]。脑源性神经营养因子是参与报道关节炎症过程和产量增加针对促炎细胞因子(6]。
虽然脑源性神经营养因子的作用在牙周再生提出了,没有可用的信息是关于脑源性神经营养因子和牙周疾病。本研究的目的是测量的BDNF水平与慢性牙周炎患者牙周组织。rs6265和rs4923463多态性的存在脑源性神经营养因子及其与炎症相关基因和临床参数也被评估。
2。材料和方法
2.1。主题和样品收集
28 CP患者牙周诊所治疗,牙科学院的大学联邦德·米纳斯吉拉斯(UFMG、巴西),参加本研究。牙周组织样本中获得牙周手术。病人在这项研究中遇到以下入选标准:以前的CP的历史,根据先前描述的诊断标准:(1)展示多个牙与探测深度高于5毫米,(2)与临床表现出两个以上网站附件损失比6毫米深,和(3)表现出病变分布在两个以上的牙齿在每个象限(7]。符合以下标准的患者被排除在外:(1)有吸烟史,(2)使用的抗生素,(3)使用抗炎和/或免疫抑制药物前6个月期间,和(4)的历史(即任何系统性疾病。、免疫、自身免疫性疾病、糖尿病)。对照组(HC)由29年龄和性别匹配的牙周健康的第三臼齿切除手术的病人登记。
牙周检查执行在两组患者中,CP和HC,在初始访问确定探测深度(PD),临床附着丧失(CAL)和探测(BOP)出血。防喷器被认为是积极的,如果出血发生后30秒内探测(8]。每个牙齿测量进行口中6处(近中颊的、midbuccal distobuccal, mesiolingual, midlingual,和distolingual)。所有的测量都是由相同的考官。考试的时候每个病人的外周血样本来自处理和多态性的决心。
从所有的病人获得书面知情同意。研究机构伦理委员会批准的协议(协议324/08)。
2.2。炎性浸润评价
牙周组织样本牙周袋或健康的口腔黏膜中提取在手术过程中影响第三臼齿在10%缓冲福尔马林固定,石蜡嵌入式,减少纵向(3μ米)。部分deparaffinized,水化,沾着他走时炎性浸润的评价。炎症细胞数在四个领域在两个独立的部分,使用光学显微镜(Axioskop 40蔡司;卡尔蔡司、哥廷根、德国)400 x放大。数据表示为总炎症细胞/字段。
2.3。ELISA
IL-17A的浓度,脑源性神经营养因子,il - 10, TNF -α和趋化因子CXCL10测定牙周组织的酶联免疫吸附试验(ELISA)使用商用设备(研发系统,明尼阿波利斯,美国)。执行的分析是根据制造商的指示。标仪的波长为492 nm。每个细胞因子的检测下限是15 pg / mL, 3.9 pg / mL, 5.5 pg / mL, 20 pg / mL,和4.5 pg / mL,分别IL-17A, il - 10, TNF -α、脑源性神经营养因子和CXCL10。使用标准曲线测定的数据准备每个试验和细胞因子/趋化因子的表达为皮克每100毫克的组织。
2.4。髓过氧物酶
牙周组织样本也用于髓过氧化酶(MPO)活动的决心,中性粒细胞酶标记,如前所述9]。MPO活性均质牙周组织中被酶反应评估,吸光度测量在450海里。MPO内容表示为相对单位从标准曲线计算基于MPO活动从5%酪蛋白peritoneal-induced中性粒细胞并行化验。
2.5。DNA分离和基因型分析
总基因组DNA提取血液样本使用QIAamp DNA血液迷你包(美国试剂盒,瓦伦西亚,CA)根据制造商的指示。的数量和质量、完整性、DNA分析NanoDrop分光光度计(热科学、威明顿、德、美国)。
TaqMan pcr检测从应用生物系统公司获得,Inc .(福斯特城、钙、美国)。每个各自的SNP的检测识别代码脑源性神经营养因子rs6265 rs4923463。放大都在ABI 7900 h进行热循环仪(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)基因分型结果使用TaqMan大师混合和遵循制造商的建议放大条件。
2.6。数据分析
数据表示为平均值±标准偏差(SD)。卡方检验分析被用来测试基因型频率的偏差哈迪温伯格平衡。牙周组织的细胞因子水平及基因多态性频率由学生的比较以及和卡方测试。值< 0.05被认为是具有统计学意义。所有数据使用SPSS分析17(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。
3所示。结果
3.1。临床和炎症参数
示例包括在当前的研究中是由年龄和性别匹配的组。PD的临床特性、卡尔和CP的防喷器明显高于HC组()(表1)。CXCL10 IL-17A的水平,il - 10, TNF -α,BDNF在牙周组织中比在控制(图更大的CP患者1)。此外,MPO活性和牙周组织的炎性浸润,以多形核的单核白细胞,CP的明显高于HC组(图2)。
(一)
(b)
(c)
(d)
(e)
(一)
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(d)
牙周组织的BDNF和il - 10水平是负相关(,),而没有相关性脑源性神经营养因子和IL-17A, TNF -α、CXCL10或临床观察参数(PD、卡尔和BOP)。
3.2。协会之间的多态性和临床牙周参数
临床研究后,多态性的频率(脑源性神经营养因子)在血液样本评估HC和CP(表2)。这些基因型的频率同意哈迪温伯格平衡()。的分布脑源性神经营养因子组(表之间的多态性是相似的2)。
我们也调查了这些多态性是否与临床牙周参数更糟。如表所示3没有临床参数的差异发现,当比较基因型。
3.3。脑源性神经营养因子基因型差异显示脑源性神经营养因子的表达,在牙周组织炎症介质
脑源性神经营养因子和炎症介质的水平CXCL10和TNF -α增加在GG基因型的脑源性神经营养因子rs6265多态性(图3(一个),3 (b),3 (c)),但MPO水平没有显著改变(图3 (d))。在脑源性神经营养因子rs4923463多态性的BDNF和MPO水平没有差异,但CXCL10和肿瘤坏死因子的水平α更高的AA基因型患者(数据吗3 (e)- - - - - -3 (h))。
(一)
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(c)
(d)
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(f)
(g)
(h)
4所示。讨论
广泛的nonneural周围组织或细胞在免疫系统表达神经营养因子及其受体。因此,促有丝分裂的神经营养因子和免疫监管职能的讨论(6,10- - - - - -12]。据报道,生成BDNF参与炎症反应(13),其产量增加反应促炎细胞因子(14]。本研究首次证明BDNF水平增加牙周组织的慢性牙周炎与健康受试者相比。同意我们的发现,脑源性神经营养因子被发现在骨关节炎患者的血浆高水平(15和类风湿性关节炎患者6]。虽然一些作者(15)报道,BDNF水平自述疼痛有显著相关性,其他人(6)没有发现脑源性神经营养因子和关节炎的临床参数之间的联系。我们没有观察到协会的BDNF水平与临床参数。
几项研究分析BDNF rs6265多态性在精神疾病16- - - - - -18]。到目前为止,很少有研究调查了rs4923463多态性(16,18- - - - - -20.]。rs4923463毗邻功能多态性rs6265 Val66Met [19]。当一项研究发现SNP rs4923463之间的相关性和注意缺陷/多动障碍、精神分裂症、双相情感障碍和自杀的风险,另一项研究没有发现任何相关性精神分裂症和rs4923463多态性(18]。
以前,两个研究评估脑源性神经营养因子的镇定效果多态性在骨21,22),但没有可用在牙周疾病的研究。在目前的研究中我们没有发现差异脑源性神经营养因子CP患者之间基因型分布和控制。然而,我们发现,受试者GG (rs6265)基因型表达高水平的BDNF在牙周组织,与以前的报告显示,协议BDNF-M66变异改变细胞内贩卖和损害脑源性神经营养因子的分泌23]。另一方面,rs6265多态性与生产无关的BDNF多发性硬化症患者免疫细胞(24]。有趣的是,苏格兰民族党rs6265 phosSNP报道,这意味着这个SNP调节蛋白质磷酸化(22]。苏格兰民族党rs6265影响substrate-kinase BDNF蛋白之间的相互作用和CHEK2激酶调节site T62 BDNF磷酸化。受试者AA基因型携带者相比表现出更低的骨密度G航空公司(22]。具体地说,脑源性神经营养因子- - - - - -V66(主要的等位基因G在rs6265)转染显著增加成骨细胞的表达特定的标记(OPN,BMP2,高山在细胞培养中)和促进成骨细胞分化和成熟(22]。协会与骨代谢rs6265还建议在最大的荟萃分析包括欧洲和东亚血统的32961人。研究表明,rs6265股骨颈骨密度。他们发现,纯合子较小的等位基因携带者(AA)相比大大减少BMD主要G等位基因携带者(GA和GG) (21]。
据报道,BDNF能够诱导il - 10表达的增加(25]。然而,BDNF和il - 10的负相关性牙周炎患者中观察到的样本。il - 10可以抑制促炎细胞因子的释放从单核细胞/巨噬细胞,因此可以抑制脂多糖和干扰素γ全身的分泌炎性细胞因子(例如,TNF -α,il - 1β、il - 6、CXCL8等)(26]。在牙周病,il - 10被认为是降低疾病严重程度(27]。
先前的研究表明,脑源性神经营养因子诱导牙周组织再生活化的成牙骨质细胞分化、血管内皮细胞迁移(4,也有一个积极的影响骨重塑(5,28]。这个数据表明,脑源性神经营养因子在骨重塑的作用和任何改变生成水平可以在骨修复产生影响。
最后,我们观察到CP受试者GG (rs6265)和AA基因型(rs4923463)表明TNF水平上升α和CXCL10。CXCL10有几个角色,比如chemoattraction巨噬细胞、T细胞、NK细胞和树突细胞(2]。这些细胞是重要的组织修复(29日]。此外,先前的研究表明,暴露在脑源性神经营养因子显著作用增强TNF -α水平在体外(30.],TNF -α预处理增加扩散、动员和成骨分化在体外(31日]。我们可以假设BDNF的同时增加,TNF -α患者,CXCL10主人的GG基因型可能试图诱导牙周治疗。所以,如果这些患者进行牙周治疗后,他们可以显示更高水平和更好的组织再生相比,病人不展览GG基因型。
总之,BDNF似乎与牙周发病机制以及参与组织修复。这里获得的结果为未来的研究提供一个基准与一大群患者帮助加强和理解在牙周疾病神经营养因子的影响。
利益冲突
作者宣称没有利益冲突有关的出版。
确认
本研究支持的斗篷,CNPq FAPEMIG。