文摘

supercritical-carbon二氧化碳流体提取的野菊花Linne。(CFE)已被证明是有效地抑制炎症。本研究的目的是调查CFE的预防措施和潜在机制对急性肺损伤(ALI)引起的脂多糖(LPS)的老鼠。阿里被诱导气管内的滴剂LPS的肺,和地塞米松是作为积极的控制。结果表明,预处理与CFE减弱LPS-induced肺组织病理改变,减少湿/干比和促炎细胞因子(TNF -制品的产品α,il - 1β和il - 6),抑制炎症细胞迁移和蛋白质泄漏,抑制MPO和MDA的水平,调节抗氧化能力的酶(SOD, CAT, GPx)。此外,预处理与CFE的激活,使之抑制NF -κB和TLR4的表达/ MyD88。这些结果表明,CFE施加潜在的保护作用对LPS-induced阿里在老鼠和阿里的潜在治疗药物。它的机制是至少部分与TLR4信号通路的调节有关。

1。介绍

急性肺损伤(ALI)及其严重,急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的临床问题引起的急性和过度炎症反应刺激在空域和肺实质,涉及alveolar-capillary膜损伤,中性粒细胞招聘、血管渗透性增加,肺水肿,呼吸衰竭(1- - - - - -3]。阿里和ARDS危及生命的问题,总是导致多器官功能障碍综合征(插件),重要的发病率和死亡率在危重患者(1,2]。虽然阿里已经明确定义的病态和几个候选人治疗策略已被临床申请阿里(3- - - - - -5),目前还没有有效的治疗策略但相对值得注意的死亡率(2,6]。因此,开发新颖有效的预防和治疗是急需的。

脂多糖(LPS),革兰氏阴性菌细胞外膜的主要成分,已被定义为一个关键风险因素和突出的刺激在阿里的发病机制3,7]。定义,LPS诱导中性粒细胞入渗的挑战,引发急性炎症反应,并生成早期肺部病变,导致阿里的发病和发展(3,8,9]。因此气管内的滴剂LPS实验动物,有明确的临床关系阿里,但没有系统性炎症的过程,是适合和可再生的初步药理研究小说的药物或其他治疗药物(8- - - - - -10]。一旦进入主机,LPS激活toll样受体4 (TLR4), TLR总科的主要传感器作为跨膜蛋白和信号转导分子(5,7,11]。TLR4可以激活核因子- (NF -)κ88 B蛋白通过骨髓分化因子(MyD88)通路(5,11]。然后激活NF -κB诱发的促炎细胞因子如肿瘤坏死因子(TNF)α白介素- 1 (IL)β,il - 6 (11- - - - - -13),导致血管内中性粒细胞招募到肺泡和肺实质空间(14,15),其次是蛋白酶释放和活性氧(ROS)生成与脂质过氧化作用恶化密切相关(如丙二醛、MDA)和抗氧化酶(如超氧化物歧化酶SOD;过氧化氢酶,猫;谷胱甘肽过氧化物酶,GPx)活性下降8,14]。因此,药物关注表达下调TLR4信号通路和/或抑制相关的炎症反应为阿里(提供潜在的治疗效果5,11]。

野菊花Linne (c . indicum),一个中医,一直被用于一些急性呼吸系统疾病的治疗,包括感冒,咳嗽,急性支气管炎,急性喉炎,急性咽炎,高疗效、低毒性(16]。supercritical-carbon二氧化碳流体提取的c . indicum(CFE)作为一种好材料已得到广泛的应用在许多中药制剂,例如,c . indicum颗粒和胶囊17,18]。最重要的是,《中医配方命名的一个关键成分c . indicum软胶囊(也称为CPZ在先前的研究),一种抗流感药物的作用与抗炎活动密切相关(18]。CFE也被证明具有强大的抗炎作用,和底层机制有关的upregulations抗氧化酶和downregulations NF -κB和一些促炎细胞因子,如肿瘤坏死因子-α,il - 1β,il - 6 (17,18]。

尽管CFE显示抗炎优点,其潜在影响防止LPS-induced阿里仍不清楚。因此,在本研究中,我们旨在评估CFE LPS-induced阿里在小鼠的影响。和潜在机制说明,TLR4的表达/ MyD88和NF -的磷酸化κB p65 /我κBα也被评估。

2。材料和方法

2.1。药物和化学物质

脂多糖(LPS)和地塞米松(Dex)从σ购买有限公司有限公司(圣路易斯,美国),和仙居制药有限公司有限公司(浙江、中国)。磷酸缓冲盐(PBS),钠十二烷基硫酸聚丙烯酰胺凝胶(sds - page),脱脂奶,Tween-20,渐变- 80热费希尔Sci买来。美国有限公司(MA)。Hexadecyltrimethylammonium溴化(HTAB)和o邻联茴香胺买来TCI有限公司(日本东京)。其他化学物质都是试剂级的。

2.2。CFE的准备

超临界流体有限公司₂提取的野菊花Linne (CFE)准备和提供的新药研究与开发研究所,广州中医药大学(很多。20121104)。在我们以前的《化学分析中,35个化合物,并用gc - ms鉴定,5化合物被HPLC-PAD再次确认和量化(CFE的简短的化学调剖是列在表中1)[17]。在本文实验CFE样本稀释0.5%渐变- 80成适当的剂量。

2.3。实验动物

雄性昆明小鼠(公里)(20 - 25克)从广东省医学实验动物中心购买(证书号码scxk2008 - 0002,广东省,中国)。动物被保存在12小时光明/ 12小时黑暗循环下常规温度(°C)和湿度(%)与标准饮食和干净的水随意。所有的动物都被致命的注射戊巴比妥钠牺牲。所有实验根据美国国立卫生研究院的指导的护理和使用机构批准的实验室动物和动物保健和使用委员会广州中医药大学。

2.4。实验设计

2.4.1。积极的控制设置,动物组和LPS-Induced阿里

敏捷被频繁使用的是一个积极的控制剂在各种ALI模型在实验设置。和明确的效益和效果,敏捷适用于积极的控制剂筛选和评估新的治疗药物19- - - - - -21]。因此,敏捷被选为积极的控制剂和普通剂量的5毫克/公斤(订单)用于本研究[19- - - - - -21]。

评估死亡率,120小鼠随机分为5组(虚假的集团),LPS组和CFE(80和120毫克/公斤)组。CFE组给定的CFE(40、80和120毫克/公斤,订单)。而虚假的组和LPS组有渐变- 80,连续7天。上届政府一小时后,所有的动物进行麻醉。和老鼠从LPS组和CFE团体都被赋予了一项单一的气管内的滴剂20毫克/公斤有限合伙人(10毫克/毫升,用PBS稀释;20μL / 10 g),而小鼠体重的虚假的组被给予同等体积的PBS。操作后,所有组的老鼠被监控和记录任何动物死亡的时候每6小时到120小时。每组的死亡率在120小时内使用卡普兰Meier方法计算和比较。

在其他的实验中,小鼠随机分为6组(),虚假的组、LPS组,CFE(40、80和120毫克/公斤)组,和敏捷集团(5毫克/公斤)。CFE团体和敏捷集团有CFE(40、80和120毫克/公斤,订单)和敏捷(5毫克/公斤,订单。)每天一次,连续7天。在此期间,虚假的组和LPS组被给予相同体积的渐变- 80。上届政府一个小时后,老鼠通过腹腔注射戊巴比妥钠麻醉(30毫克/公斤)。之后,从LPS组小鼠,敏捷,和《团体都被赋予了一项单一的气管内的滴剂5毫克/公斤有限合伙人(2.5毫克/毫升,刚与PBS稀释;20μL / 10 g),而小鼠体重的虚假的组被给予同等体积的PBS。在这个模型中,所有的动物存活了24小时后,气管内的有限合伙人的滴剂剂量的5毫克/公斤,优化和可重复的,根据我们的初步实验(数据未提供)。

2.4.2。标本收集

有限合伙人后24小时内滴注法,30每组的小鼠被随机分为三部分,每一部分10老鼠。第1部分是用于支气管肺泡灌洗液(BALF)准备和肺湿/干重(W / D)比测量。总之,手术麻醉后,老鼠被暴露出气管和夹右主支气管。然后每个动物的左肺灌洗了三次总量为1.5毫升Hanks-Balanced-Salt解决方案使用静脉留置针。BALF复苏率超过90%。然后鼠标是牺牲,对肺是收获的W / D比率测量。第2部分是用于肺组织准备和组织病理评价。简而言之,鼠标牺牲后,左肺了,立刻放入适量的precold PBS,均质使用组织溶解二世高通量组织均化系统(试剂盒有限公司、希尔登,德国)。然后在4°C匀浆是离心机。100年μL的上层清液用于蛋白质测量和其余立即被收集并存储在−80°C MPO的进一步分析,MDA,促炎细胞因子(TNF -α,il - 1β,il - 6)和抗氧化酶(SOD, CAT, GPx)。同时,正确的肺是收获病理组织检查。第3部分是留给TLR4的免疫印迹分析,MyD88, NF -κB p65,和我κBα。总之,鼠标是牺牲,肺组织被收获,立即冻结,并存储在液态氮。

2.5。测量肺W / D比率

肺W / D比率测量根据先前的研究。总之,切除的肺涂抹干燥和重获得“湿”的重量,然后在烤箱在80°C 48小时获得“干”的重量。然后计算的W / D比率为“湿”的“干”的重量。

2.6。BALF蛋白质的测量内容和BALF细胞计数

BALF离心机在800 g×10分钟在4°C,和上层清液收集蛋白质含量的测定。测量的蛋白质BALF的内容进行使用商业BCA试剂盒(Beyotime生物技术研究所、上海、中国)和BALF表示为毫克/毫升。然后沉淀细胞resuspended precold PBS和彩色Wright-Giemsa工具包(南京建成生物工程研究所、南京、中国)cytospin准备。项总细胞,中性粒细胞,巨噬细胞然后通过hemacytometry双盲的表现。

2.7。MPO化验

MPO活性的测定是通过HTAB方法执行。简而言之,样本与KPO混合₄缓冲(50毫米,pH值6.0)HTAB (0.5%)。反应和孵化后15分钟37°C, H中的酶化验的活动₂O₂/o邻联茴香胺缓冲在460 nm Multiskan微型板块分光光度计(热费希尔科学。美国沃尔瑟姆)。结果表示为单位/毫克的蛋白质。

2.8。组织病理检查

肺活检的收集,在4%多聚甲醛溶液固定,脱水,石蜡嵌入式,分为4μm。组织部分被苏木精和伊红染色工具包(圆),Beyotime生物技术研究所),检查,并拍照使用TE2000-S倒置显微镜(尼康有限公司,东京,日本)。据此前报道,组织学变化包括中性粒细胞浸润,间质水肿、充血(或出血),和透明膜形成评价,每个变化的严重程度得分在0(正常)4(严重)的病理学家蒙蔽了本研究。最后,整个组织学损伤评估根据sum-scores(0正常,1到5是最小的;6到10温和;11到15温和;16岁到20岁那么严重)。结果提出了微观领域的每组的得分手段。

2.9。MDA, SOD, CAT, GPx化验

MDA测定进行了与商业MDA测定试剂盒(Beyotime生物技术研究所)通过硫代巴比土酸反应物质的方法(TBARS)。在布里干酪,MDA和TBARS之间的反应表现在100°C,从而形成一个红色的复杂TBARS,可以记录和测量在532海里。SOD, CAT, GPx测量使用商用设备(Beyotime生物技术研究所)根据制造商的指示,分别。简单地说,黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶(XOD)超氧化物自由基反应,生成2 - (4-iodophenyl) 3 - (4-nitrophenol) 5-phenyltetrazolium氯形成红色甲瓒染料,可以以532海里。猫是衡量生产N - (4-antipyryl) 3-chloro-5-sulfonate-p-benzoquinonemonoimine,将检测到520海里。和GPx测量研磨的检测内容和NADPH,这会被记录在340海里。

2.10。肿瘤坏死因子- ELISA测定α,il - 1β,il - 6

肿瘤坏死因子-α,il - 1β,il - 6使用商用ELISA试剂盒测定(e美国生物科学有限公司,CA)。总之,稀释标准或样本添加到96孔板预镀与多克隆抗体亲和纯化特定的鼠标TNF -α,il - 1β分别,il - 6。然后用多克隆抗体酶联井被添加和孵化37°C 60分钟,其次是最终洗5次。强度检测到在450纳米测量后的衬底的解决方案,持续15分钟。水平的肿瘤坏死因子-α,il - 1β根据标准曲线计算,il - 6。

2.11。免疫印迹试验对TLR4、MyD88和NF -κB

提取的蛋白质从肺组织进行T-PER组织蛋白提取试剂盒(Beyotime生物技术研究所)。拔牙的核和胞质蛋白从肺部进行核和胞质蛋白提取试剂盒(Beyotime生物技术研究所)。蛋白质含量测定采用BCA蛋白质分析工具和等量的蛋白质被添加在每口井的10% SDS页面。然后,蛋白质分离和转移到PVDF膜由电泳系统(Bio-rad有限公司,赫拉克勒斯,美国)。由此产生的膜被封锁Tween-20 Tris-buffered-saline含有0.05% (TBS-T),补充5%脱脂牛奶在室温下2小时,和紧随其后的是TBS-T洗液。然后膜与相关具体主要抗体anti-NF—孵化κB p65抗体,anti-IκBα抗体(细胞信号技术有限公司,妈,美国),anti-TLR4抗体,和anti-MyD88抗体(TX,圣克鲁斯有限公司美国)在一夜之间在4°C,分别,紧随其后的是洗TBS-T和孵化与peroxidase-conjugated二级抗体室温1小时。与增强化学发光标记蛋白质的检测进行免疫印迹检测工具。和相对蛋白质含量归一化β肌动蛋白(圣克鲁斯有限公司)蛋白质作为内部标准。

2.12。统计分析

数据提出了的意思SEM和统计分析与Systatσ情节软件windows(版本12.00)。参数分析的数据单向方差分析,其次是Tukey-Kramer测试,由克鲁斯卡尔-沃利斯检验和非参数的数据进行了分析,其次是邓恩的测试。kaplan meier死亡率的研究进行分析的方法。和被认为是具有统计学意义。

3所示。结果

3.1。《对生存率的影响

如图1相比,假组存活率为100.0%,有限合伙人挑战明显LPS组的生存率下降到约25.0% 11(120小时内)。相反,存活率CFE-treated组(40、80和120毫克/公斤)显著提高到62.5%,75.0%,和83.3%,分别在剂量依赖性的方式(对于所有的人,对LPS组)。数据表明CFE预处理具有潜在的预防死亡率阿里老鼠LPS引起的。

3.2。CFE的影响肺W / D比率

阿里老鼠是评估的W / D比率肺水肿的严重程度进行评估。,如图2(一个)与假组相比,有显著增加(约2倍)的肺W / D比率LPS组()。然而,与CFE的预处理(40、80和120毫克/公斤),肺W / D的水平比是剂量依赖性抑制,而有限合伙人组(对于所有的人,)。数据显示,肺W / D比率显著抑制与CFE的预处理。

3.3。在BALF CFE蛋白质含量的影响

小鼠的肺血管的渗透性是衡量BALF的蛋白质含量。而虚假的集团,有限合伙人的BALF蛋白质水平显著提高LPS组(,图2 (b))。相反,蛋白质含量CFE组(40、80和120毫克/公斤)明显抑制剂量依赖性的方式,与LPS组相比,)。

3.4。CFE的影响BALF细胞计数

如图3,LPS组BALF细胞计数显著增加总细胞(图3(一个)),中性粒细胞(图3 (b))和巨噬细胞(图3 (c))(与虚假的)。然而,准确度和CFE(40、80和120毫克/公斤)和敏捷(5毫克/公斤)明显降低所有相关细胞计数CFE团体和敏捷小组,分别(对于所有的人,对LPS组)。

3.5。在MPO活性CFE的影响

MPO作为函数索引显示中性粒细胞浸润,代表的水平MPO-derived氧化剂生成和肺组织损伤(5,8,14]。作为有限合伙人集团的预期成果,在肺组织MPO活性,显著升高,大约9折的虚假的集团(,而虚假的集团),如图4。然而,LPS组相比,MPO活动CFE-treated(40、80和120毫克/公斤)和Dex-treated(5毫克/公斤)组显著抑制(对于所有的人,)。

3.6。组织病理学检查CFE的影响

组织病理学分析调查CFE对生理参数的影响。正如所料,假组显示正常结构和肺组织(图中没有组织病理学改变5(一个))。另一方面,有限合伙人的挑战,LPS组的肺功能明显受损,与各种病理变化包括出血、间质水肿、肺泡壁增厚,肺实质炎症细胞的浸润,肺泡空间(图5 (b))。作为实验团体和积极的团体,组织病理学变化明显减弱敏捷(图的预处理5 (c))和《(40毫克/公斤,图5 (d);80毫克/公斤,图5 (e);和120毫克/公斤,图5 (f)),分别相比,LPS组。此外,类似的抑制效应是在半定量的分析发现组织学变化的生长残痕,这促进了阿里的严重程度的评价(图5 (g))。结果表明,预处理与CFE减毒阿里小鼠诱导的肺损伤的严重程度有限合伙人和改进的条件肺组织剂量依赖性的方式。

3.7。CFE的影响在MDA, SOD, CAT, GPx水平

氧化应激在阿里的过程中扮演至关重要的重要的作用引起的有限合伙人,和氧化损伤诱导膜磷脂的脂质过氧化和抗氧化失活的酶(SOD, CAT, GPx),最终在MDA生成(5,8,14]。LPS组肺组织MDA水平显著增加,而虚假的集团(),见表2。然而,组织使用CFE(40、80和120毫克/公斤)以及敏捷(5毫克/公斤)显示MDA水平显著下降(对于所有的人,对LPS组)。此外,SOD的活动,猫,和GPx LPS组明显减少,与虚假的组(相比,),如表所示2。相反,准确度和CFE(40、80和120毫克/公斤)显著提高SOD,猫,GPx活动(对于所有的人,对LPS组),剂量依赖性的方式。

3.8。《TNF -的影响α,il - 1β,il - 6水平

而虚假的集团,TNF -的水平α,il - 1β,il - 6在LPS组显著提高(对于所有的人,、表3)。政府与CFE(40、80和120毫克/公斤)对肿瘤坏死因子的水平——抑制效果α(,而有限合伙人组)。此外,与CFE预处理(40、80和120毫克/公斤)下调il - 1的水平β和il - 6, LPS组相比,)。

3.9。CFE的影响在TLR4 MyD88 / NF -κB表达式

为了探测CFE的潜在机制保护LPS-induced阿里在老鼠身上,TLR4的表达,MyD88, NF -κB在肺进一步调查。如图6免疫印迹的,数据显示,TLR4的表达/ MyD88 / NF -κ有限合伙人B信号通路被激活的LPS组(对于所有的人,,而虚假的集团)。然而,准确度和CFE(80和120毫克/公斤)抑制我的磷酸化κBα和TLR4的表达和MyD88(对于所有的人,对LPS组),尽管40毫克/公斤的低剂量没有减少我的磷酸化水平κBα和MyD88,统计。另一方面,在《(80和120毫克/公斤)组,p65亚基的表达NF -κB在肺在细胞核表达下调和调节在细胞质中,和我的水平κBα显著增加(对于所有的人,对LPS组),如图6。在这项研究中,结果表明,预处理与CFE(80和120毫克/公斤)同时拥有高效downregulations TLR4和MyD88-dependent NF -κB信号通路,在LPS-induced阿里老鼠。

4所示。讨论

在本研究中,我们评估CFE LPS-induced阿里在小鼠的影响。和数据表明,CFE减弱LPS-induced肺组织病理改变,拒绝湿/干比和促炎细胞因子产品,抑制炎症细胞迁移和蛋白质泄漏进入肺部,抑制MPO水平和脂质过氧化作用,调节酶抗氧化的能力,表达下调的激活NF -κB和TLR4的表达和MyD88。这些建议对LPS-induced阿里CFE发挥潜在的保护作用。

有限合伙人的挑战会导致浆液性液体的泄漏进入肺组织,导致肺部水肿,典型症状的急性炎症反应在肺22]。和肺部水肿总是通过测量一个代表性的指数,评估肺W / D比率(22,23]。基于肺W / D的剂量依赖性衰减比例CFE(40、80和120毫克/公斤)预处理组,与CFE显示预处理能显著抑制肺水肿在阿里的老鼠。另一方面,BALF总蛋白质含量,肺通透性指数,下调了CFE的预处理;它还表明,预处理与CFE(40、80和120毫克/公斤)具有衰减行动由有限合伙人肺通透性增强。有限合伙人的挑战也直接刺激炎症细胞的渗入。尤其是中性粒细胞迁移到肺实质和肺泡空间已经显示在阿里的过程(关键作用23,24]。中性粒细胞分泌MPO和导致产品MPO-derived氧化剂和肺组织的损伤23,24]。因此中性粒细胞的浸润通常是由MPO的能力(23,24]。正如预期的那样,数据显示,小鼠与LPS挑战提出了大量炎症细胞的渗透,包括中性粒细胞和巨噬细胞进入肺。然而,与CFE预处理改善这些变化显著减少细胞的数量和减轻LPS-induced MPO活动的增加。这些结果也进一步证明中性粒细胞呼吸爆发和肺组织损伤被CFE减毒治疗。此外,在肺组织的病理检查结果显示,炎症反应在阿里和肺损伤小鼠CFE减毒的治疗剂量依赖性的方式。总之,结果alveolar-capillary屏障和炎症反应以及组织学证据表明CFE具有显著保护作用在老鼠LPS-induced阿里。

在肺组织氧化应激的发病机制的研究中也是一个重要因素阿里(5,25,26];因此,在肺组织氧化应激评估。如今,活性氧的水平(ROS)被称为古典氧化应激指数(5,26,27]。ROS是含有氧气和化学活性分子很容易与生物大分子反应导致脂质过氧化,蛋白质失活,dna突变,最后组织损伤(5,26,27]。早期的阿里•LPS引起的中性粒细胞反应,包括呼吸爆发和脱粒,刺激细胞迅速释放活性氧,如超氧化物自由基()、过氧化氢(H₂O₂)和羟基自由基()[25,27,28]。另一方面,MPO催化产生次氯酸(HOCl)归类为ROS,为有限合伙人挑战作出反应和/或杀死其他病原体25,27,28]。ROS主要攻击polyunsaturated-fatty酸细胞和等离子体膜导致MDA的阵型,脂质过氧化产物(27,29日]。因此,MDA的积累是常用的作为一个标记明显脂质过氧化的程度,在某种程度上,氧化应激和抗氧化状态的水平(26,29日]。与MDA测定的结果,预处理与CFE被发现对MDA的形成有明显的抑制作用,这清楚地表明,小鼠肺组织氧化应激的阿里是缓解。此外,ROS提出了通过一系列独立调解细胞损伤机制包括抗氧化防御系统的失活组成的各种抗氧化酶SOD等猫,GPx [25,29日,30.]。这些酶可以最小化、清除和消除活性氧的形成,保护宿主免受氧化应激损伤(30.- - - - - -32]。因此,有效的抗氧化剂可以减轻氧化应激的阿里直接消除自由基或通过提高抗氧化酶的防御系统26,30.,32,33]。在这项研究中,CFE也显著调节活动的SOD, CAT, GPx,被观察到显著减少sepsis-induced阿里啮齿动物(34,35和阿里患者临床27,36]。因此,结合MDA测定的结果,我们推测CFE可以有效降低氧化应激在阿里。

临床与实验研究表明LPS诱导肺泡巨噬细胞和内皮细胞的激活,导致许多促炎和趋化细胞因子的生产15,37]。肿瘤坏死因子-α,il - 1β,良好的细胞因子il - 6参与阿里的炎症反应13,38,39]。这些细胞因子,结合其他促炎因子,进一步刺激中性粒细胞迁移的渗透到肺组织和发起、放大,并使整个或局部炎症反应在阿里15,40]。肿瘤坏死因子-α,主要是由单核细胞/巨噬细胞,是最早和主要内生中介过程的炎症反应,可引起炎症级联,导致的血管内皮细胞损伤,诱发其他肺泡上皮细胞产生细胞因子,如il - 6 (40,41]。提高肿瘤坏死因子-α结合与TNF -α受体在肺组织,导致酶的漏出细胞器,导致肺实质损伤(15]。il - 1β扮演一个关键的角色在急性肺损伤的进展。它可以抑制流体运输在远端肺上皮细胞造成表面活性剂异常和增加蛋白质渗透率alveolar-capillary障碍(13]。il - 6是最常见的炎性细胞因子之一,和它的循环水平已经被证明是优秀的预测急性呼吸窘迫综合征的严重程度不同的目的,如败血症、急性胰腺炎(15,40,42]。在现在的研究中,预处理与CFE显著抑制TNF -的生产α,il - 1β,il - 6在肺。促炎因子的抑制产品是依照《反对组织病理损伤的保护作用。和CFE的抑制促炎细胞因子治疗应该有助于其对阿里的保护作用。

NF -κB是一种重要的核转录因子,免疫和炎症反应中起着关键作用的规定促炎细胞因子,趋化因子和粘附分子(12,43,44]。不受控制的激活的NF -κB通路参与了许多急性和慢性炎症性疾病的发病机制,特别是阿里(43,45]。在正常情况下,NF -κ我是隐藏在细胞质中κBs (46,47]。一旦激活,NF -κ我B p65抑制蛋白质的分离κB和把从细胞质到细胞核,它触发特定的目标基因的转录,如肿瘤坏死因子-α,il - 1β,il - 6 (37,48]。检测肿瘤坏死因子的抑制机理α,il - 1βil - 6产品,我们测试了CFE NF -的影响κ我激活和κB降解[37]。有限合伙人的刺激,我的磷酸化水平κB蛋白和核NF -κB p65蛋白显著增加。然而,这种趋势被逆转CFE预处理、免疫印迹分析显示我κ退化和NF - BκB p65激活明显被预处理与CFE的剂量80毫克/公斤和120毫克/公斤。此外,我们发现40毫克/公斤的CFE并不影响我κ退化和NF - BκB p65激活统计,尽管事实上它具有抑制倾向。因此,结果表明,对LPS-induced阿里CFE的保护作用,在某种程度上,可能归因于NF -差别的角色对这些κB通路。

有限合伙人在阿里的开发和发展上发挥了关键作用[5,22,49,50]。TLR4,作为一个重要的模式识别受体的宿主免疫反应和基本上游传感器有限合伙人从病原体和微生物,会检测有限合伙人,然后触发激活NF -κB和其下游反应通过MyD88依赖或独立通路(5,7,49,50]。因此TLR4是有限合伙人的基本上游传感器(7,11,49,51];有必要调查CFE的抗炎作用是否发挥虽然TLR4-mediated通路。我们的数据表明,增强有限合伙人TLR4的表达明显下调挑战与CFE的预处理剂80和120毫克/千克,这与我的水平变化κBαNF -κB p65和其他促炎细胞因子,在阿里小鼠肺组织。因此,总之,如图7,我们推测CFE可以抑制LPS的绑定TLR4在NF -κB信号通路,导致减少促炎细胞因子的生产和衰减的肺部炎症反应。然而,没有任何进一步的实验消除MyD88-independent途径的参与,我们不可能解决和证明的结论TLR4激活NF -κ通过MyD88-independent B通路。因此,明确规定CFE TLR4信号通路的需要进一步的研究。

5。结论

本研究的实验证据表明,《能有效减弱LPS-induced阿里在老鼠身上。CFE的保护作用与TLR4信号通路的调节有关。这些实验结果表明CFE是阿里的潜在治疗药物。

缩写

CFE:	supercritical-carbon二氧化碳流体提取的野菊花Linne
有限合伙人:	脂多糖
阿里:	急性肺损伤
ARDS:	急性呼吸窘迫综合征
插件:	多器官功能障碍综合征
BALF:	支气管肺泡灌洗液
ELISA:	酶联免疫吸附测定
敏捷:	地塞米松
肿瘤坏死因子-α:	肿瘤坏死因子-α
il - 1β:	Interleukin-1β
il - 6:	白细胞介素- 6
MPO:	髓过氧物酶
MDA:	丙二醛
SOD:	超氧化物歧化酶
猫:	过氧化氢酶
GPx:	谷胱甘肽过氧化物酶
TLR4:	toll样受体4
MyD88:	88年骨髓分化因子
NF -κB p65:	核因子k B p65
我κBα:	抑制ακB
ROS:	活性氧
):	苏木精和伊红。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

作者的贡献

小李吴邦国委员长和摘要薛瑄冯贡献同样这项工作。

确认

这项工作是支持由广东省科技重大项目(项目号2012 a080202002),广东省高校珠江学者资助计划(2011)和国家大学生创新创业训练计划项目(201310572024)。