文摘

我们检查了乙醇提取来自的治疗效果苎麻(林)。Gaudich小鼠模型的实验性结肠炎。治疗70%乙醇提取来自b .妮维雅(EBN)剂量的100,200,或500毫克/(公斤·d)改善结肠缩短,体重,疾病活动指数(DAI),和DSS-induced结肠炎小鼠的组织病理学评分。DSS显著增加的水平在结肠癌组织中环氧合酶- 2 (COX)相对于未经处理的对照组。EBN在100、200、或500毫克/(公斤·d) cox - 2水平降低DSS-treated老鼠。此外,EBN下降的DSS-induced分泌炎性细胞因子白细胞介素- 6 (il - 6)和趋化因子单核细胞趋化蛋白1 (MCP-1)。综上所述,这些数据表明b .妮维雅提取是有效预防结肠炎。

1。介绍

炎症性肠病(IBD),如溃疡性结肠炎(UC),炎性疾病。等抗炎药物柳氮磺胺吡啶、类固醇和非甾体类抗炎药物已经用于治疗UC (1];然而,这些药物疗效有限,因为它们相关的副作用和不同病因的加州大学。实验性结肠炎模型被用来确定治疗药物和阐明潜在的生理机制的加州大学(2]。广泛用于DSS-induced结肠炎模型概括UC的组织学特征(2]。管理DSS诱导结肠炎在扩散到肛门直肠,导致炎症变化包括地下室变形、溃疡、炎症细胞的浸润2]。

许多调查人员,他们表明,免疫功能紊乱导致加州大学的发展,强调了考克斯在UC发病机理的重要性。考克斯有三个亚型,COX-1 2和3 (3]。在哺乳动物细胞中,COX-1持续表达;然而,cox - 2表达诱导的炎症反应。最近,COX-3被证明被COX-1一样的基因编码。炎症反应是由致病性感染刺激,导致生产的促炎细胞因子和趋化因子4]。在IBD患者促炎细胞因子和趋化因子,如il - 6和MCP-1调节肠道粘膜(4]。因此,抑制细胞因子的生产通过使用代理是一个潜在的治疗策略,减轻炎症性肠病的症状。

调查人员提出的几种自然代理作为治疗炎症性肠病等多种疾病。越来越多的证据表明,这些天然药物依赖的治疗效果降低生产和cox - 2细胞因子水平的能力在体外和体内5]。例如,Serpylli草减少了提取三硝基苯磺酸(TNBS)或DSS-induced结肠炎通过减少水平的肿瘤坏死因子(TNF)α和il - 6的分泌细胞因子和趋化因子MCP-15]。茄属植物tuberosuml .简历Jayoung表皮color-fleshed土豆,据说抑制cox - 2的表达,减少的严重程度DSS-induced小鼠结肠炎(6]。

苎麻(林)。Gaudich(荨麻科)是一种开花的植物,通常被用来治疗一些疾病和治愈伤口在亚洲国家包括中国、韩国、菲律宾和泰国(7,8]。以前,我们发现b .妮维雅降低脂多糖(LPS)诱导分泌的促炎细胞因子如TNF -α并通过抑制il - 6 p38和c-Jun n端激酶(物)8];然而,的能力b .妮维雅控制DSS-induced结肠炎的影响还没有被调查。我们之前工作的结果促使我们决定b .妮维雅展品在DSS-induced结肠炎模型小鼠抗炎效果。

2。材料和方法

2.1。试剂

cox - 2和β肌动蛋白抗体从开曼群岛获得化学(美国安阿伯市MI)和细胞信号技术(美国贝弗利,MA),分别。辣根peroxidase-conjugated二级抗体来自圣克鲁斯生物技术(圣克鲁斯、钙、美国)。DSS购买从议员生化药剂(极光,哦,美国)。

2.2。的制备b .妮维雅提取

b .妮维雅树叶Seocheon县提供的办公室(Seocheon,韩国),一个凭证标本存放。EBN准备从叶子如前所述8]。

2.3。实验性结肠炎

实验性结肠炎诱导3% DSS如前所述[9]。短暂,8-week-old雄性C57BL / 6小鼠从查尔斯河获得韩国(首尔,韩国),被安置在一个温度22日至26日°C下12 h光/暗周期与免费的水。在1周时间的适应,老鼠被随机分为以下5组小鼠(8 /组):未经处理的(DSS), DSS-treated (3% DSS)、DSS + EBN 100 (3% DSS和EBN每天100毫克/公斤体重),DSS + EBN 200 (3% DSS和EBN在200毫克/(公斤·d)),和DSS + EBN 500 (3% DSS和EBN在500毫克/(公斤·d))。治疗组的自来水没有DSS 8天。DSS单独和DSS + EBN口头管理7天。

老鼠进了每日体重,形成粪便,粪便隐血。减肥、粪便形成和粪便隐血平均分数确定戴。分数分配如下:体重变化(0:< 1%,1:1 - 5%,2:5 - 10%,3:10 - 15%,或4:> 15%),粪便隐血(0:- 2:积极,或者4:总出血),和粪便形成(0:正常,2:便溏或4:腹泻)。如前所述(执行得分9]。7天,老鼠通过心脏穿刺牺牲在氯胺酮和甲苯噻嗪麻醉和结肠组织中被孤立。

2.4。MCP-1和il - 6量化

血液样本收集和il - 6和MCP-1水平测量使用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒(研发系统,明尼阿波利斯,美国)根据制造商的指示。

2.5。组织病理学分析

在福尔马林固定,石蜡包埋结肠部分用苏木精和伊红染色())。结肠炎的程度是评估对出现水肿,损伤程度,白细胞浸润,地穴损失,损失的杯状细胞(如前所述9]。这些标准得分如下:炎症严重程度(0:没有,1:轻微,2:温和,或3:严重),损伤程度(0:没有,1:粘膜,2:粘膜和粘膜下,或3:透壁的),和地下室损伤(0:没有,1:损伤基底三分之一的地穴,2:损伤基底三分之二的地穴,3:只有表面上皮完整,或4:整个墓穴和上皮细胞的损失)。

2.6。蛋白质的提取和免疫印迹分析

细胞细胞溶解与裂解缓冲(50毫米Tris-HCl, pH值8.0,5毫米EDTA, 150毫米氯化钠,NP-40 1%, 1毫米PMSF,蛋白酶抑制剂鸡尾酒,和磷酸酶抑制剂鸡尾酒)。总蛋白收集,然后使用SDS-polyacrylamide凝胶电泳分离。蛋白质被转移到硝化纤维素纸和免疫印迹分析探测到使用特定抗体。

2.7。统计分析

统计分析的结果是学生的差异以及群体之间。数据显示平均值±标准偏差(SD)至少3独立实验一式三份。被认为是显著的。

3所示。结果

3.1。EBN改善结肠缩短,戴在DSS-Induced结肠炎小鼠体重

我们之前的工作建议b .妮维雅有抗炎作用LPS-induced RAW264.7巨噬细胞通过减少细胞因子水平(8]。因此,我们调查是否b .妮维雅炎症性肠病有抑制作用,加州大学,通过使用一个实验性结肠炎小鼠模型。如数据所示1(一)和1 (b)、治疗3% DSS减少结肠长度、体重,戴相对于对照组。管理EBN轻度减少结肠缩短DSS-treated组。造成的体重减少3% DSS处理显著提高了管理EBN在100,200和500毫克/公斤·d(图1 (c))。3% DSS治疗腹泻和直肠出血引起的,两个标准得分和包含在傣族(图1 (d))。傣族减少小鼠由EBN在100,200和500毫克/(公斤·d)。

3.2。组织病理学评分减少管理EBN DSS-Induced结肠炎小鼠

我们下一个通过执行)染色进行了组织学分析。如数据所示2(一个)和2 (b)治疗,3% DSS诱导炎症反应影响结肠架构,细胞渗透,地穴缩短或损失,杯状细胞耗竭。管理EBN显著降低浸润细胞的数量,粘膜损伤、水肿。我们取得了炎症的严重程度(见材料与方法)。老鼠接受3% DSS的组织病理学评分高于那些属于治疗组。组织病理学评分明显改善EBN时在100年,200和500毫克/公斤·d(图2 (b))。

3.3。MCP-1 EBN降低il - 6的水平,cox - 2在DSS-Induced结肠炎小鼠

炎性细胞因子il - 6和炎症趋化因子MCP-1扮演中心角色(5]。此外,炎症性疾病,如加州大学的发展是由cox - 2介导的。因此,我们研究是否EBN降低il - 6, DSS-induced结肠炎小鼠MCP-1, cox - 2的水平。如图3(一个)DSS治疗显著增加在结肠癌组织中cox - 2的水平相对于未经处理的对照组。EBN管理局(200毫克/公斤和500毫克/公斤)减少了cox - 2水平升高的响应DSS治疗。DSS治疗也显著增加的生产血清il - 6和MCP-1相对于控件(数字3 (b)和3 (c))。显著降低il - 6的生产和管理EBN MCP-1 DSS-treated组(数字3 (b)和3 (c))。EBN的最大效果获得了100毫克/公斤。这些结果表明,EBN已经与诱导UC小鼠的抗炎作用,介导的,至少在某种程度上,通过减少cox - 2的水平,il - 6, MCP-1。

4所示。讨论

以前,我们表明,乙醇提取b .妮维雅发挥抗炎效应通过抑制p38和物LPS-induced RAW264.7细胞巨噬细胞(8]。作为一个扩展的研究中,我们调查了抗炎的功效b .妮维雅在一个实验结肠炎小鼠模型。我们发现b .妮维雅改善DSS-induced实验性结肠炎。EBN能够降低结肠缩短,体重下降,戴,组织病理学评分与DSS治疗(数据有关1和2)。此外,cox - 2水平减少管理EBN DSS-treated老鼠(图3)。

b .妮维雅历来在亚洲国家用来预防疾病和减少炎症7,8]。大量研究报道b .妮维雅是一种生物活性代理,表现出抗真菌和抗氧化性能7,8,10]。自然的功能属性代理被认为与多酚含量(11]。我们之前的研究表明,植物多酚具有有益的影响(12]。b .妮维雅包含多种多酚化合物包括绿原酸、芸香苷luteolin-7-glucoside,柚皮苷、橘皮苷,tangeretin [8]。因此,我们推测b .妮维雅能够减少炎症反应和多酚化合物是负责这个效果吗。一些药物治疗,包括柳氮磺胺吡啶,已经用于治疗炎症性肠病的患者包括加州大学(1]。类固醇或非甾体类抗炎药物也被用于治疗炎症性肠病(1]。然而,这些药物可以导致患者严重的副作用。因此,调查人员提出替代药物和天然产物表现出类似的活动可以用来治疗炎症性肠病(柳氮磺胺吡啶13,14]。例如,植物多酚改善UC已报告。一个生物类黄酮的种子中提取出来的藤黄属植物可乐、kolaviron展品anticolitis效应通过减少一氧化氮,髓过氧化物酶活动,TNF -α,il - 1β在DSS-induced结肠炎小鼠13]。这些影响的kolaviron与柳氮磺胺吡啶。类黄酮的橘皮苷和戴秉国也已被证明能够降低il - 6水平DSS-induced结肠炎小鼠(14]。柳氮磺胺吡啶减少戴和il - 6水平DSS-induced结肠炎小鼠在相同的条件下,表明橘皮苷可以用来预防结肠炎。此外,包括细胞因子il - 6是一个关键的目标橘皮苷和柳氮磺胺吡啶治疗(14]。在冒号白细胞入渗粘膜组织损伤,导致炎症反应涉及细胞因子和趋化因子MCP-1 [15]。Anticolitis药物如柳氮磺胺吡啶显著减少结肠炎和嗜中性粒细胞/巨噬细胞浸润减少细胞因子和趋化因子水平(16,17]。Polyphenol-rich特级初榨橄榄油可以调节巨噬细胞活化,减少细胞因子的生产在加州大学(18]。在这项研究中,DSS增加血清il - 6水平和MCP-1相对于控制老鼠(数字3 (b)和3 (c))。有趣的是,EBN显著降低了生产管理的il - 6和MCP-1 DSS-treated集团(数字3 (b)和3 (c))。这些数据符合以前的工作表明sulfasalazine-like自然代理作为抑制剂在加州大学细胞因子的生产。因此,我们假设EBN是抑制细胞因子的生产和块白细胞浸润在加州大学,和柳氮磺胺吡啶的方式相似。然而,我们无法阐明抑制细胞因子的精确机制EBN生产DSS-induced结肠炎小鼠。我们还发现管理EBN降低cox - 2的水平,增加了DSS治疗(图3(一个))。cox - 2是一个相当大的目标UC治疗DSS诱导的强大在结肠癌组织中cox - 2表达(19]。选择性cox - 2抑制剂产生治疗效果对TNBS和DSS-induced结肠炎(通过减少细胞因子水平20.]。在这项研究中,我们证明了DSS治疗显著增加在结肠癌组织中cox - 2的水平(图3(一个)),这表明cox - 2的水平调节DSS-induced结肠炎模型。一些研究报告,polyphenol-rich特级初榨橄榄油会使cox - 2的水平(18)和多酚白藜芦醇降低cox - 2水平在实验结肠炎模型(21),这表明多酚具有anticolitis活动。这里,我们证明EBN,富含多酚类物质如绿原酸、芸香苷,luteolin-7-glucoside,柚皮苷、橘皮苷,tangeretin,降低cox - 2的水平,升高的DSS治疗(图3(一个))。因此,我们假设多酚可能是一个潜在的因素减少EBN结肠炎。

5。结论

我们证明了一个乙醇提取b .妮维雅发挥抑制作用对结肠炎发病机制,提高结肠缩短,体重,戴,组织病理学评分DSS-induced结肠炎小鼠。此外,我们发现EBN结肠组织中cox - 2水平相对较低。这些发现表明,b .妮维雅是有效预防炎症性肠病包括溃疡性结肠炎。我们的研究有助于理解的潜在功能和潜在机制b .妮维雅生物活性。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

确认

这项研究支持由Seocheon县办公室及韩国食品研究院,韩国。