文摘

背景。对乙酰氨基酚(APAP即)是一种常用的止痛和退热的。在高剂量时,APAP即是一个临床问题在美国和欧洲,经常导致严重的肝损伤和潜在的急性肝衰竭。研究表明,抗氧化剂和抗炎剂有效地防止APAP即过量所致急性肝毒性。方法。本研究试图调查的保护作用b . trimera针对APAP-induced肝损伤大鼠。肝功能指标ALT和AST,氧化应激生物标志物,抗氧化参数,检查和组织病理学变化。结果。的预处理b . trimera减毒血清ALT和AST的活动,增强了政府APAP即。此外,预处理和提取酶SOD的活性降低和增加过氧化氢酶的活性和总谷胱甘肽的浓度。组织病理学分析证实了减轻肝损伤和减少APAP即引起的病变。结论。王亚南行动的b . trimera提取可能依赖于它的影响减少造成的氧化应激APAP-induced肝损伤大鼠模型。一般意义。这些结果的提取b . trimera潜在的候选药物能够保护肝脏免受APAP即过量造成的损害。

1。介绍

肝脏是解毒的主要网站和体内药物暴露的主要目标(1];因此,药物引起的肝损伤是一个重大的公共卫生问题,占所有病例的一半以上的急性肝衰竭2]。

对乙酰氨基酚(APAP即)是一种常用的止痛和退热的代理。在治疗剂量,它通常是安全和耐受性良好。然而,严重的对乙酰氨基酚过量导致严重和致命的肝毒性3]。一些个人经验APAP即毒性甚至在治疗剂量少于4克/天,而且,在儿科人群,大多数APAP即过量是无意的4]。地下排水沟设置等。5]报道一例严重的肝毒性在治疗剂量的APAP即成年男人。事实上,APAP即过量药物引起的急性肝衰竭的最常见原因(在英国和美国6,7]。

APAP即相关的毒性由细胞色素P450 bioactivation亲电代谢物n -乙酰苯醌亚胺(NAPQI)。在治疗剂量,NAPQI由谷胱甘肽(GSH)有效解毒,消除通过尿液或胆汁;然而,supratherapeutic剂量,glucuronidation和硫酸盐化作用途径变得饱和,大量bioactivation APAP即肝脏谷胱甘肽池耗尽,导致氧化应激(8]。这种氧化应激可能触发信号通路通过线粒体毒性,最终导致细胞死亡(1]。大量的证据显示了潜在的氧化应激参与对乙酰氨基酚的毒性(9,10]。

多项研究表明,抗氧化剂和抗炎剂有效地防止对乙酰氨基酚过量所致急性肝中毒(11- - - - - -13]。

一些草药,它们的有效成分和配方,用于治疗各种各样的临床疾病和为社会提供好处。他们的保护作用是通过抗氧化酶(如SOD、猫、销售税和GR),修改很多途径和蛋白质,包括DNA损伤/修复过程[14],Nrf-2 [15),和异型生物质响应元素(16),从而保持prooxidant /体内抗氧化平衡[1]。

在这种背景下,我们强调Baccharis trimera,俗称“carqueja”,菊科家庭成员和一个本地灌木从南巴西、巴拉圭、乌拉圭和阿根廷。药用茶准备从灌木的天线部分用于民间医药治疗不仅胃肠道和肝脏疾病,而且炎症过程(17]。由于这些生物效应,化学成分的研究b . trimera进行,证明这种植物有许多具有生物活性的化合物,如类黄酮、二萜、三萜烯(18]。三萜烯已报告是主要负责其抗炎活性(19,20.),而黄酮类化合物,由于其抗氧化活性,与保护身体免受活性氧(ROS) (21]。

本研究调查的影响b . trimera在氧化应激的调制和评估的预防效果b . trimera在acetaminophen-induced肝损伤。

2。材料和方法

2.1。试剂

化学试剂,包括DTNB [5,5′-dithio-bis (2-nitrobenzoic酸),2,4-dinitrophenylhydrazine (DNP)和硫代巴比土酸(稍后通知),买来Sigma-Aldrich(圣路易斯,密苏里州,美国)。对乙酰氨基酚(APAP即)(200毫克/毫升)获得Janssen-Cilag制药、巴西。的工具测量血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)是诊断Labtest,巴西。

2.2。收集的植物材料

天线的部分b . trimera收集在2011年8月在Ouro Preto,米纳斯吉拉斯,巴西。标本,凭证数OUPR 22.127,被Viviane r·斯坎伦教授和存入标本Jose Badini UFOP。

2.3。准备的提取

天线的部分植物在通风干燥炉、喷在机械工厂,并存储在塑料瓶。获得hydroethanolic提取,大约100克的植物提取蒸馏水和70%的酒精的比例1:1 24 h。在旋转蒸发真空过滤和蒸发的溶剂被执行。形成的粗提取液,用百分比收益率为8 - 9%,然后稀释与磷酸盐(PBS, pH值7.4);的浓度为600毫克/公斤体重使用在活的有机体内。提取制备的方法是基于光亮型等的工作。22)做了一些调整。

2.4。LC-DAD-ESI-MS分析

分析使用一个UPLC Acquity(水域)离子阱质谱仪配备一个大气压化学电离(APCI)接口操作在以下条件:积极的和消极的离子模式;毛细管电压3500 V;毛细管温度、320°C;源电压、5 kV;蒸发器温度、320°C;针电晕电流、5马;和鞘气、氮、27 psi。分析在整个扫描模式下运行(100 - 2000 u)。质/ MS分析另外执行在一个UPLC Acquity(水域)和氦气体碰撞,碰撞能量被设定为30 eV。色谱分离是ACQUITY UPLC本·(1.7μ米,50×2毫米身份证。)(水域)。水的流动相由0.1%甲酸(溶剂)和乙腈0.1%甲酸(溶剂B)洗脱协议划分的最小值,线性梯度从5%到95%流量为0.3毫升min⁻¹,进样体积是4.0μl .紫外线光谱注册从190到450纳米。在四极质谱分析仪器装有电喷射在负模式(图源1)。离子喷雾电压:−4 kV;孔板电压:−60 V。

2.5。在体外测试:细胞培养

细胞株细胞银行收购,里约热内卢联邦大学(UFRJ)。肝细胞培养在75厘米²包含MEM培养基生长瓶(肉红玉髓)。消息灵通的,牛胎儿血清,10% (v / v)和1% (v / v)的混合青霉素(200 U /毫升)和链霉素(200μg / mL)被添加到媒体。瓶是存储在烤箱在37°C和湿润有5%二氧化碳(有限公司₂)。这种媒介取代每两或三天取决于细胞的融合单层和亚文化(段落)。当瓶融合达到了100%,媒介是吸尘和细胞单层与磷酸盐生理盐水冲洗两次没有钙和镁(PBS)。后,分离层,用0.20%胰蛋白酶和0.02% EDTA溶液。接下来,进行细胞计数与0.3%台盼蓝纽鲍尔室。

2.6。毒性试验与麻省理工

细胞的细胞系收购银行,里约热内卢联邦大学(UFRJ)。我们添加了5.0×10³HEPG2的培养基MEM (10% v / v牛胎儿血清和1% v / v青霉素、链霉素)的混合物。板块在湿润孵化室有限公司为5%₂在37°C 1 - 72小时。这一次后,上层的移除,20μL MTT添加和孵化30分钟。吸光度是阅读在570 nm标(热板)。HEPG2是孵化的1、2,3% (50μL)b . trimera提取1和24小时评估细胞的可行性。计算用来评估细胞生存能力的百分比(治疗细胞/吸光度控制吸光度)×100。控制被分配100%的可行性。

2.7。在活的有机体内测试:动物

联邦大学的实验室实验营养Ouro Preto菲舍尔(UFOP)提供了男白化病老鼠实验中使用;动物是大约12周大,体重约180克。个人所有动物都被关在笼子里放置在一个环境控制温度、光、湿度,或动物收到商业的鼠粮和水随意。这项工作是按照国际标准进行动物保护和巴西大学动物实验的伦理原则,和协议在动物伦理委员会批准的使用(CEUA) UFOP(166/2011协议2011/82)。

的实验中,32老鼠分成四组根据他们的治疗。对照组(C)收到1.0毫升PBSb . trimera(Bt)组600毫克/公斤b . trimera提取、对乙酰氨基酚(APAP即)组单一剂量的对乙酰氨基酚835毫克/公斤,和b . trimera+对乙酰氨基酚(Bt + APAP即)组600毫克/公斤b . trimera提取和一剂一小时后对乙酰氨基酚835毫克/公斤。所有治疗都由填喂法和之间的时间间隔b . trimera预处理和APAP即剂量的工作是基于Meotti et al。23)和Ajith et al。24]。动物麻醉和安乐死APAP即剂量后24小时。APAP即使用的剂量和实验是基于日圆等的工作。25]。接受835毫克/公斤的动物APAP即口头说明,工具包LabTest, ALT和AST活性更高。这种活动的增加达到一个峰值后24小时内APAP即管理工作。

2.8。制备肝组织

肝脏组织收集后立即安乐死的动物。确定羰基蛋白浓度,200毫克的组织均质在50 mM磷酸盐缓冲剂(pH值6.7)和1毫米EDTA。确定硫代巴比土酸活性物质的浓度(TBARS)、过氧化氢酶和超氧化物歧化酶活性,100毫克的肝组织中均质磷酸盐缓冲剂(pH值7.4)。同样,确定总谷胱甘肽浓度,100毫克的肝组织均质在5% sulfosalicylic缓冲区。均质化后,样品在10.000 g离心10分钟4°C。上层清液的收集和用作生物样品。

2.9。测定氧化应激标记

2.9.1。硫代巴比土酸活性物质(TBARS)

TBARS浓度确定基于硫代巴比土酸氧化脂质(稍后通知)绑定。这个测量是执行根据Buege和欧斯特(26]。

2.9.2。蛋白质羰基化作用

蛋白质氧化的活性氧导致的形成羰基衍生品可以被计量的敏感方法。使用方法2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH),这与羰基化合物反应生成相应的腙可以分析spectrophotometrically,尤其有用。进行蛋白质羰基化作用的测量根据Levine et al。27]。

2.10。测定抗氧化防御系统

2.10.1。超氧化物歧化酶(SOD)活性

总超氧化物歧化酶(SOD)的活性测定使用工具包(美国MI开曼化学公司)。简而言之,肝组织均质在寒冷的20毫米玫瑰(pH值7.2)包含1毫米EGTA,蔗糖甘露醇210毫米和70毫米。10毫升的上层清液中使用的测试。通过添加黄嘌呤氧化酶反应被启动。板是孵化瓶20分钟在室温下,和吸光度测量450海里使用板读者(Biotek ELx808)。

2.10.2。过氧化氢酶(CAT)

过氧化氢酶活性决定基于其转化为过氧化氢的能力(H₂O₂成水和氧气分子。通过Aebi[描述的进行了分析28]。

2.10.3。总谷胱甘肽浓度

谷胱甘肽存在于细胞主要在其减少的形式(谷胱甘肽),代表了大约90%的总谷胱甘肽在细胞中。剩余金额的形式氧化谷胱甘肽(GSSG)。确定总谷胱甘肽的水平(GSG + GSSG)在我们的生物样本,我们使用一个σ工具包,它采用一个基于减少DTNB动力学方法[5,5′-dithiobis (2-nitrobenzoic酸)],TNB spectrophotometrically以412海里。解决方案减少谷胱甘肽(G4251-Sigma)是用来确定标准曲线。总谷胱甘肽表达nmol /毫升的样品。

2.10.4。谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)活动

谷胱甘肽过氧化物酶的细胞活性测定工具包(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)是用来衡量组织提取谷胱甘肽过氧化物酶活动。减少NADPH吸光度测量在340纳米的氧化NADPH辅酶ii是表明谷胱甘肽过氧化物酶的活动,因为酶的病原因子耦合反应。酶活性表达为单位/毫升。

2.10.5。谷胱甘肽还原酶活动(GR)

谷胱甘肽还原酶(GR)活性测定使用工具包(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)。谷胱甘肽还原酶至关重要的谷胱甘肽氧化还原循环保持足够的水平减少细胞谷胱甘肽,它作为一种抗氧化剂与自由基反应和有机过氧化物。谷胱甘肽还原酶的活性测定遵循的增加引起的吸收减少DTNB 412海里。酶活性表达为单位/毫升。

2.11。实时定量rt - pcr检测

从50毫克组织总RNA提取使用试剂盒试剂(生命表达载体技术、钙、美国)根据制造商的协议和resuspended 30μL RNase-free水。浓度和纯度的RNA是估计spectrophotometrically A260 / A280比率(NanoVue,通用电气医疗集团,英国)。共有1μg RNA被转换为互补使用益生元(dT)和高容量cDNA逆转录工具包(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)根据制造商的建议。

实时定量PCR (qPCR)进行使用权力SYBR绿色PCR主混合试剂(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)在最后一个反应体积的12μ0.1 l .反应包括μg cDNA和0.5μL(每个引物(正向和反向,10μ米)。Zn-SOD正向和反向引物序列,Mn-SOD,猫,谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)和gamma-glutamylcysteine (δgcs)获得出版核苷酸序列(29日]。反应是使用ABI棱镜7300执行序列检测器(应用生物系统公司)在下列情况下:50°C 2分钟,10分钟95°C和40周期15秒的95°C, 1分钟和60°C。

证实了产品的特异性获得的解离曲线放大产品的分析。作为内部控制,管家基因的表达使用18岁。使用C比较获得的数据进行了分析_T方法。所有分析都是一式三份。

2.12。组织学评价

肝脏碎片不超过4毫米直径是固定在10%甲醛溶液,然后脱水,diaphanized,嵌入在石蜡。石蜡的部分大约4μm是通过旋转切片机切片嵌入式碎片。部分是安装在清洗和脱脂玻璃幻灯片。幻灯片是可视化的苏木精和伊红染色组织学损伤。

2.13。统计分析

数据表示为平均值±标准偏差(SD)。所有数据受到正常测试。在确定数据是正态分布,我们选择使用学生的测试。一个值< 0.05被认为是显著的。执行的测试是使用GraphPad Prism 4.00版本Windows(美国圣地亚哥,CA)。

3所示。结果

3.1。LC-DAD-ESI-MS Hydroethanolic提取分析

hydroethanolic提取的b . trimera我们确定了五类黄酮在LC-DAD LC-DAD-ESI-MS获得的色谱图,如表所示1。

3.2。在体外化验:Hydroethanolic提取物的毒性b . trimera在肝细胞(HEPG2)

孵化后(表1和24小时2),观察到细胞处理提取保持高生存能力的89.0%和98.6%,分别,没有表现出明显的毒性。

3.3。在活的有机体内化验:效果b . trimera对肝细胞损伤的生物标志物

图3显示了不同治疗组血清转氨酶的活性。ALT和AST转氨酶显著提高(),9.8和6.3倍,分别在APAP-intoxicated动物。治疗b . trimera显著抑制血清转氨酶的活性的海拔ALT和AST,被发现5.0——3.6倍低于APAP-intoxicated动物,分别。

3.4。的影响b . trimera在APAP-Induced氧化损伤

我们评估蛋白质和脂类的氧化损伤测量在肝组织中氧化应激标志物。具体地说,我们分析了蛋白质羰基化作用和TBARS组织。结果如图4表明羰基化作用的浓度显著增加蛋白质在动物的肝脏中毒APAP即nonintoxicated相比对照组。然而,治疗APAP-intoxicated老鼠b . trimera导致减少肝蛋白质羰基化作用浓度比未经处理的b . trimera组。此外,我们观察脂质过氧化增加老鼠APAP即nonintoxicated动物相比,陶醉了b . trimera治疗也能降低肝脂质过氧化作用相比治疗组。因此,这些结果说明治疗b . trimera减少氧化损伤的能力。

3.5。的影响b . trimera抗氧化状态

探讨抗氧化酶参与调停的自由基清除活性b . trimera细胞内抗氧化酶的mRNA水平和活动被测量在不同的组。SOD和CAT的mRNA水平和活动图所示5。

SOD和CAT功能协调清除超氧化物自由基从细胞系统。APAP-intoxicated组显示Zn-SOD增加(图5(一个))和Mn-SOD(图5 (b))表达相比,控制动物。不同亚型的表达的增加SOD伴随着这种酶总活性的增加与APAP即(图组中陶醉5 (d))(单位/毫克蛋白)与控制(单位/毫克蛋白)。APAP-intoxicated组处理b . trimera,和活动的mRNA水平明显低于各自的控制(APAP即组)。在这项研究中,mRNA水平和过氧化氢酶的活性显著降低()APAP-treated老鼠,这组中表达减少和活动是预防醉酒APAP即和处理b . trimera。

图6显示有显著增加δgc(图6(一)在动物的肝脏基因表达与APAP即陶醉。治疗b . trimera能够扭转这种形象,减少的表达吗δgc。尽管表达的增加δgcs,减少总谷胱甘肽的浓度与APAP即动物的肝脏陶醉。然而,治疗b . trimera能够扭转这种减少(图6 (b))。

结果在图7显示的信使rna酶活性减少GPx(数字7(一)和7 (b))和酶的活动GR(图7 (c))APAP-intoxicated老鼠相比,控制老鼠的肝脏。b . trimera能够增加GPx的mRNA水平和GR活动。没有观察到变化的活动的老鼠的肝脏GPx和GR只有提取。

3.6。组织病理学

微观观测显示正常组织学与普通肝组织的形态控制(图8(一个)),b . trimera组(图8 (b))。APAP-intoxicated组(图8 (c)的形式),细胞损伤可见水肿的退化,炎症、出血。的b . trimera治疗(图8 (d))相比,大大提高了肝脏形态学APAP-intoxicated老鼠。

4所示。讨论

研究旨在提出新的治疗策略越来越包括植物提取物和其他天然产品的使用。在我们的实验室进行的研究证明了有益的潜力hydroalcoholic提取的b . trimera在APAP即引起的毒性30.]。外围中性粒细胞的老鼠这种药物陶醉了,提取能够调节生产活性氧(ROS)和活性氮物种(RNS)的方法。威廉姆斯et al。(2014)研究了中性粒细胞的激活在APAP-induced肝毒性和证明ROS生成由NADPH氧化酶不是一个关键事件在这种药物引起的肝损伤。然而,他们还发现,中性粒细胞在外周血APAP即管理后被激活。虽然炎症细胞的贡献APAP即引起的肝损伤仍有争议(31日),先天免疫反应和不同来源的活性物种的生产影响肝脏的与许多疾病有关。例如,中性粒细胞与肝脏损伤缺血期间,内毒素,阻塞性胆汁郁积在动物模型(9,32]。

hydroalcoholic提取物的药理效应b . trimera在我们的实验室调查。LC-DAD-ESI-MS hydroalcoholic提取的分析显示类黄酮,黄酮和黄酮化合物的糖甙(图2)。

许多研究发现,引起的肝毒性APAP即是氧化应激的结果,导致改变线粒体蛋白质由于谷胱甘肽的耗竭,导致抑制细胞呼吸的细胞死亡(33]。因为描述的生物效应中的类黄酮提取,本研究调查的影响b . trimera在氧化应激的调制和评估的预防效果b . trimera在acetaminophen-induced肝损伤。

尽管缺乏研究相关的毒性b . trimera组织病理学改变最近发现,怀孕的大鼠的肝脏治疗hydroethanolic提取的植物22];此外,罗德里格斯et al。21)表明,b . trimera消费后产生了一些基因毒性和诱变效应的高剂量的提取。

在这种背景下,分析其毒性,肝消息灵通的G2细胞被孵化的存在与否b . trimera提取获得的细胞生存能力/毒性的关系。化验后,发现hydroalcoholic提取没有呈现显著的毒性,并维持细胞生存能力89.0%和98.6%的潜伏期1 h和24 h后,分别。这些值显示无统计差异。

基于这些结果,我们想知道这些b . trimera提取能够逆转APAP即引起的肝毒性。要做到这一点,首先,我们分析了肝酶的活动AST和ALT, AST和ALT都是细胞内酶存在于大量肝细胞的细胞质中。肝细胞的损伤或破坏这些转氨酶释放到血液循环(34]。我们的研究表明,APAP即引起了ALT和AST活性显著增加。然而,与植物提取物预处理恢复这个活动类似的值控制。高剂量的APAP即与更高的ALT和AST活性相关(35,36]。的能力b . trimera为了防止这些酶的活性的增加很明显,其化学成分发挥重要的王亚南活动。

除了这些肝酶的活动分析,氧化应激水平的产品也被描述的发生氧化损伤(37]。在这些产品物质活性硫代巴比土酸(TBAR)和蛋白质羰基化作用。这些物质被用作标记的水平氧化还原平衡的脂质过氧化作用和蛋白质氧化、分别在肝细胞(38]。

在我们的结果中,动物醉酒APAP即提出了高水平的蛋白质羰基化作用和TBAR。然而,预处理b . trimera提取物能够降低这些化合物的含量值与各自的控制。众所周知,植物,因为它们目前的抗氧化成分,有效减少引起的脂质过氧化作用和蛋白质氧化APAP即[39,40]。这种现象的一个解释是,这些植物化学物质能够减少动物的肝脏氧化应激的陶醉与高剂量的药物(41]。

因为b . trimera表明这样一个显著的影响在氧化应激产品的开发,我们评估其影响抗氧化酶的表达和活性。的保护作用发生几种中药及其有效成分通过抗氧化酶(如SOD、猫、GPx和GR),保持prooxidant /抗氧化平衡身体。从细胞系统消除活性氧,SOD和CAT功能协调清除超氧化物自由基(1]。我们的研究结果表明,动物的肝脏中毒SOD-Zn APAP即呈现高表达和SOD-Mn亚型。然而,治疗b . trimera能够调节这个表达式值的类似控制动物的肝脏。这一基因表达的增加伴随着较高的SOD酶活性。尽管SOD酶是一种抗氧化剂,它的研究表明,一些超表达实际上是有害细胞(42]。ROS的毒性作用,被观察到在许多细胞overexpressing SOD与高浓度的H₂O₂和氧化损伤伴随氢氧自由基的形成43]。这意味着SOD upregulation导致高H₂O₂营业额。

我们的研究结果表明,动物的肝脏中毒与APAP即呈现低表达的猫。然而,b . trimera治疗能够调节这个表达式值的类似控制动物的肝脏。这一基因表达下降伴随着CAT酶活性较低。猫活动被发现后显著降低有毒APAP即剂量(44]。我们的结果相似,猫活动后明显减少有毒APAP即侮辱。这将允许ROS和过氧化氢的累积,从而加剧肝细胞损害NAPQI发起。治疗b . trimera提取废除APAP即的影响和诱导增加猫的活动。这表明抗氧化成分的参与在促进快速、高效的消费产生的活性氧APAP-mediated P450 bioactivation [36]。

谷胱甘肽(GSH / GSSG)被认为是主要的细胞内氧化还原缓冲。谷胱甘肽中扮演一个重要的角色在清除ROS和保护在《生物大分子》杂志上的硫醇45]。在正常情况下,谷胱甘肽主要是发现减少的形式(谷胱甘肽)和多少量的氧化形式(GSSG) [46]。谷胱甘肽的耗竭与增强有关毒性化学物质,包括APAP即[47]。我们目前的研究结果表明,动物的肝脏APAP即陶醉了,甚至呈现高δgc活动,提出了总谷胱甘肽的水平低于控制动物的肝脏。然而,预处理b . trimera增加的总谷胱甘肽水平APAP-treated动物。这些结果表明,b . trimera可以发挥其王亚南和自由基清除活动通过阻止自由基的形成源自APAP即新陈代谢以及过氧化反应产品和提高抗氧化防御系统。这个假说是由最近的发现表明,提取可能是介导的抗氧化和王亚南活动通过增强抗氧化防御系统和增加自由基抑制由于重要的抗氧化因素的存在48]。

谷胱甘肽的抗氧化效果直接关系到GPx GR,关键酶的氧化还原体内平衡的维护通过保护细胞免受自由radical-generated毒性(1]。我们的结果显示一个下降的信使rna酶GPx活性和酶的活动GR肝脏的老鼠相比,治疗后24 h APAP即控制老鼠。GR是一种中起关键作用的酶氧化应激APAP即;降低其活动会导致中断GSSG谷胱甘肽和之间的循环,因此,缺乏谷胱甘肽。尽管APAP即GR活动的障碍不是很好理解,至少有两个假设提出解释这发生,一个调用直接行动的活性氧或有毒的醛和另一个将影响NAPQI-GSH共轭形成的谷胱甘肽S-transferase [49]。

GPx活性较低是一个早期的后果的扰动prooxidant /抗氧化平衡的前(50]。抑制GPx对扑热息痛肝细胞毒性的易感性增加,表明对乙酰氨基酚的毒性作用的一个组成部分,包括物种的形成由GPx解毒酶(51]。黄酮类化合物被证明防止扑热息痛毒性通过抑制脂质过氧化反应和增加谷胱甘肽浓度(52]。因此,植物提取物的还原能力GPx活性的丧失是最有可能由于黄酮类化合物的存在。引人注目的GPx活性的增加b . trimera治疗组与组只收到APAP即可能是由于槲皮素和黄酮除了其他抗氧化剂。

由于抑制GPx,本研究得出的结论是,肝细胞损伤的结果H的稳态水平的增加₂O₂和氢过氧化物53]。虽然这个建议表明,氧化应激是谷胱甘肽耗竭的决定性因素,也有证据支持的相反顺序事件;即,ROS生产谷胱甘肽的耗竭54]。换句话说,抗氧化酶的水平,如果与此同时分析,使我们能够推断APAP即提出了高浓度的动物中毒肝H₂O₂,因为较高的SOD活性导致ERO产量很高,和较低的猫和GPx活动防止H₂O₂来自被中和。

确认的王亚南效果b . trimera提取APAP即造成的损失,进行组织病理学分析。APAP-intoxicated动物治疗b . trimera提取相比,改善了组织病理学APAP-intoxicated集团没有治疗。

总之,目前的研究表明,hydroalcoholic提取b . trimera有对APAP-induced王亚南在大鼠肝毒性。增强抗氧化酶水平和减少数量的过氧化反应产品建议的主要机制b . trimerahydroalcoholic提取防止APAP即引起的肝损伤的发展(图9)。此外,我们的研究小组发表的最近的一项研究表明,提取的b . trimera也能调节NADPH氧化酶的活性的外围中性粒细胞的老鼠APAP即[陶醉了55]。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

这项研究是企业管理学院德基金会支持的“尽管做Estado de米纳斯吉拉斯(FAPEMIG),慰问Nacional de Desenvolvimento Cientifico e学府(CNPq) Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de含量比(CAPES-PNPD), Centro de Educacao联邦Tecnologica de米纳斯吉拉斯(CEFET-MG),和大学联邦de Ouro Preto (UFOP),巴西。作者感谢玛丽亚Terezinha博士实验室的巴伊亚Doenca de恰加斯Ouro Preto, MG,巴西、ABI的使用棱镜7300序列检测器(应用生物系统公司)。