文摘

感染艾滋病毒的患者心血管疾病的风险大大提高。几个标记包括osteoprotegerin已被证明参与动脉粥样硬化的发展。osteoprotegerin,我们调查了t细胞表型之间的关系和动脉粥样硬化评价颈动脉内膜中层厚度(c-IMT) 94年HIV阳性患者抑制抗逆转录病毒疗法Framingham分数< 10%。至于对照组,24阴性的受试者参加。c-IMT被超声评估。CD4 + / CD8 + t细胞激活(CD38 + HLADR +)和衰老(CD57 + CD28−)通过流式细胞仪测定。通过酶联免疫试剂盒il - 6和功能水平测定。c-IMT HIV +的更高比控制。在HIV阳性患者中,44.7%有病理c-IMT(≥0.9毫米)。CD8 + t细胞活化功能、衰老和HIV阳性患者的血浆水平高于控制。 Subjects with pathological c-IMT exhibited higher CD8+ immune activation and immunosenescence and OPG levels than subjects with normal c-IMT. Multivariate analysis showed that age, CD8+ CD38+ HLADR+, and CD8+ CD28− CD57+ were independently associated with pathological c-IMT. Several factors have been implicated in the pathogenesis of atherosclerosis in HIV patients. Immune activation and immunosenescence of CD8+ T cell together with OPG plasma levels might be associated with the development and progression of early atherosclerosis, even in the case of viral suppression.

1。介绍

艾滋病病毒感染者,增加寿命,似乎有心血管疾病(CVD)的风险大大超过艾滋病毒阴性的人。现在看来明显,感染艾滋病毒本身和抗逆转录病毒疗法(ART)与心血管疾病和代谢疾病的风险更高。心血管疾病,发生在一般人随着年龄增长,似乎与艾滋病病毒感染者的过早老化,发生在较早的年龄比未感染艾滋病毒感染对象(1,2]。此外,最近的研究表明hiv阳性个体风险升高也例病毒学抑制和Framingham分数较低3]。过早衰老的一个重要方面是免疫激活和随之而来的免疫衰老导致胸腺退化,降低循环幼稚T细胞数量的增加CD4 +细胞分化CD28−T细胞和促炎细胞因子水平的增加4- - - - - -7]。最近的研究介绍了假设慢性炎症,免疫激活,免疫衰老可能与顺向动脉粥样硬化引起的内皮细胞激活/功能障碍在艾滋病毒感染的设置8]。一些标记,如VCAM-1、ICAM-1和血管性血友病因子抗原,可以可靠地表明动脉粥样硬化内皮细胞的激活增加。肿瘤坏死因子-α(肿瘤坏死因子-α)与心肌功能障碍导致的急性冠脉综合征和高水平的c反应蛋白和il - 1和il - 6与亚临床动脉粥样硬化(9- - - - - -12]。此外,新的可溶性标记包括osteoprotegerin(功能)、肿瘤坏死因子超家族的成员,已经被证明参与动脉粥样硬化的发展和进展(13,14]。考虑到与公开的心血管疾病相关的发病率和死亡率,亚临床疾病的早期识别和管理之前的并发症明显心血管疾病发展的15]。测量颈动脉内膜中层厚度(c-IMT)曾被与冠状动脉粥样硬化的程度和增加c-IMT预测未来的CVD事件(16]。我们的研究的目的是探讨淋巴细胞t细胞表型的关系,il - 6,功能和血浆水平与动脉粥样硬化评价c-IMT在抑制艾滋病毒阳性患者的艺术。

2。材料和方法

2.1。道德声明

研究方案设计根据《赫尔辛基宣言》二世是经当地伦理委员会批准。所有的病人给书面知情同意参加。

2.2。病人

我们招募了118名患者的“Sapienza大学公共卫生和传染病的罗马。九十四人感染艾滋病毒的科目48周以来艺术与检测不到病毒血症(< 37拷贝/毫升)和低心血管疾病风险定义为Framingham分数< 10%。至于对照组,我们招募了24阴性个体匹配在年龄、性别和Framingham分数。对于每个病人,我们收集医疗和家庭历史、生活方式、吸烟状况、艺术、hiv rna天顶,最低点CD4 +细胞计数。当前的淋巴细胞CD4 +和CD8 + T细胞计数是由流仪分析(MACSQuant分析器,Miltenyi研究,德国)和HIV - 1 RNA等离子体水平定量探测到反向聚合酶链反应(Amplicor艾滋病毒监测;罗氏诊断系统,Branchburg,新泽西,1.5版本,l.o.d。37拷贝/毫升)。甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL)测定血液样本。身体质量指数(BMI)计算(公斤/米²),为每个单独的记录。由于高巨细胞病毒对免疫衰老的影响,为了消除由于免疫激活和巨细胞病毒作为一个混杂因素,只包括巨细胞病毒阳性受试者在研究人群。排除标准是年龄< 18岁,先前的病毒学失败,最近种由艾滋病诱发的疾病,肝炎病毒合并感染,和其他的并发症(代谢综合症、糖尿病、动脉高血压、肾病、和内分泌功能障碍)。

2.3。il - 6和Osteoprotegerin检测

il - 6与酶联免疫试剂盒测定(eBioscience Bender MedSystems, Inc .,维也纳,奥地利)。试验的检测极限是3.1 pg / mL。Osteoprotegerin(功能)水平衡量ELISA试剂盒(基于Gruppe,维也纳,奥地利)。试验的检测极限是0.12 pmol / L。

2.4。免疫激活和免疫衰老

淋巴细胞表面表型进行评估通过流式细胞术使用新鲜的外周血。激活和衰老CD4 +和CD8 + T细胞的分析,以下fluorochrome-labeled抗体被用于:太平洋Blue-CD3 (BioLegend 500 uL) FITC-CD28 (BioLegend 2毫升),PE-CD57 (BioLegend 2毫升),PerCp / Cy5.5-HLA博士(BioLegend 500 uL)、Pe / Cy7-CD8 (BioLegend 2毫升),CD38-APC (BioLegend 2毫升),和APC / Cy7-CD4 (BioLegend 2毫升)。流式细胞分析仪的校准使用MACSQuantTM校准珠子和自动补偿标志着珠子(BDTM CompBeads anti-mouse搞笑,k)和无名珠子(BDTM CompBeads负控制的边后卫)。溶解的红细胞,流式细胞仪赖氨酸溶液(BD,赖氨酸的解决方案)。流式细胞分析仪用于分析MACSQuant分析仪与8通道和数据分析软件使用FlowJo V10。在每次收购之前,进行自动校准和补偿。免疫激活被定义为HLADR + CD38 +免疫衰老而被定义为CD57 + CD28−[17,18]。

2.5。颈动脉内膜中层厚度测量

c-IMT测量获得了为每个病人用b型超声记录7到14 MZ阵列探测器(Esaote技术)。患者必须在一个黑暗的房间里躺在仰卧位略微伸展过度,必须把脖子到另一侧。颈总、分岔,至少第一个2厘米的颈内动脉进行长时间运行和短轴。此外,3测量在每个颈内动脉的远和近壁,特别是颈动脉分叉和灯泡和1厘米后分岔。均值(表示为毫米)3测量在每个站点的颈内动脉(左和右)计算每个病人和用作内部c-IMT的最终测量。根据公布的人口研究,我们定义正常c-IMT IMT < 0.9毫米和病理c-IMT IMT > 0.9毫米(19]。为了避免interoperator差异,所有c-IMT的测量是由一个操作符。

2.6。统计分析

与学生的连续数据进行了分析测试,而非参数Mann-Whitney测试申请值不是正态分布。皮尔森相关系数是用于相关性。线性回归模型测试评估淋巴细胞t细胞表型之间的关系,il - 6,功能和c-IMT。探索与c-IMT相关的独立因素,多变量逻辑回归。数据表示为(范围)或中位数均值±标准差(SD)。一个< 0.05被认为是具有统计学意义的价值。统计分析使用占据(版本9)软件(美国占据公司LP,大学城,TX)。

3所示。结果

3.1。研究人口的特征

94感染艾滋病毒的低心血管疾病风险的受试者(Framingham分数< 10%)、72(76.5%)的男性和22(23.5%)是女性的平均年龄年。52.1%的不吸烟者和平均体重指数公斤/米²。中值最低点和当前淋巴细胞CD4 +细胞计数195.5 T细胞/ mmc(4 - 1318)和643.5 cell / mmc(范围159 - 1705),分别。94感染艾滋病毒的艺术科目,62.7%是π,37.3%是基于NNRTI方案。所有患者巨细胞病毒阳性。意思是血浆总胆固醇的浓度mg / dL,高密度脂蛋白胆固醇等于等于mg / dL,低密度脂蛋白胆固醇mg / dL,甘油三酯等于mg / dL。所有的受试者接受降脂治疗。研究人口的一般特征进行了总结表1。

3.2。颈动脉内膜中层厚度

c-IMT高HIV +的控件(平均数±标准差:与mm;值中位数:0.835和0.475毫米。)。HIV阳性患者,52/94(55.3%)表现出正常c-IMT,而42/94(44.7%)的病理c-IMT。

3.3。免疫激活

艾滋病毒阴性的病人相比,hiv阳性个体表现出更高水平的CD4 + T淋巴细胞表达HLADR + CD38 +(中间值分别为1.6%和0.34%,)和CD8 + HLADR + CD38 +(中间值分别为2.1%和0.69%,)。患者病理c-IMT有更高的表达CD4 +和CD8 + T淋巴细胞HLADR + CD38 +(中间值分别为1.96%和1.35%,;中间值分别为2.27%和1.99%,职责。比正常c-IMT患者(图)1)。

3.4。免疫衰老

hiv阳性个体表现出更高层次的T淋巴细胞CD4 +和CD8 + CD28 + CD57−(中间值分别为2.08%和0.87%,;中间值分别为7.44%和0.62%,、职责)与艾滋病毒阴性的病人。患者病理c-IMT有更高的表达T淋巴细胞CD4 +和CD8 + CD28 + CD57−(中间值分别为2.1%和2%,;中间值分别为11.9%和4.8%,职责。比正常c-IMT患者(图)2)。在线性回归分析中,有一个积极的相关性淋巴细胞T CD8 + HLADR + CD38 +和CD8 + CD28 + CD57−()。此外,T淋巴细胞CD4 +最低点之间的负相关,T淋巴细胞CD4 +和CD8 + T HLADR + CD38 + (和、职责)。同样的趋势观察T最低点和淋巴细胞CD4 + T淋巴细胞CD4 + CD28 + CD57−和CD8 + CD28 + CD57−。

3.5。Osteoprotegerin和白细胞介素- 6

功能感染艾滋病毒的患者的血浆水平明显高于健康对照组(平均数±标准差:pmol / L和pmol / L;中位数:5.6和3.5 pmol / L) ()(图3(一个))。il - 6在艾滋病毒阳性受试者血浆水平高于阴性个体(平均数±标准差与pg / mL;中位数:44.3和36.5 pg / mL) ()。患者病理c-IMT功能有更高的血浆水平(平均6.22 pmol / L和4.86 pmol / L值,)(图3 (b)等离子体)和il - 6水平(中间值46 pg / mL和40.7 pg / mL,比正常c-IMT患者)。此外,CD8 + T淋巴细胞HLADR + CD38 +呈正相关功能与等离子体水平()。虽然没有统计学意义,CD4 + T淋巴细胞HLADR + CD38 +, CD4 + CD28 + CD57−和CD8 + CD28 + CD57−与更高的功能和il - 6等离子体水平相关。

3.6。单变量和多变量分析

单变量模型揭示了一个重要的关联c-IMT和年龄()、诊断时间(),T淋巴细胞CD8 + CD28 + CD57−(),CD4 + T淋巴细胞HLADR + CD38 + (),c-IMT逆相关性和T淋巴细胞CD4 +最低点()。此外,HIV +主题与病理c-IMT T淋巴细胞CD4 +最低点低于HIV +主题与正常c-IMT ()。然而,当这些数据被多变量逻辑回归分析,只有年龄(OR = 1.008;置信区间CI = 1.005 - -1.011;),π暴露(OR = 1.050;置信区间CI = 0.992 - -1.111;),CD8 + T淋巴细胞HLADR + CD38 + (OR = 1.234;CI = 1.006 - -1.042;)和T淋巴细胞CD8 + CD28 + CD57−(OR = 1.008;CI = 1.004 - -1.011;)被证实是独立与c-IMT(表相关联2)。

4所示。讨论

已知的心血管疾病,发生在较早的年龄比未感染艾滋病毒感染对象(1,20.]。过早衰老的一个重要方面是免疫激活和随之而来的免疫衰老导致胸腺退化,降低循环幼稚T细胞,数量的增加CD4 +细胞分化CD28−T细胞,和增加的促炎细胞因子(il - 6、TNF水平α)[4,18,21- - - - - -25]。最近的研究介绍了假设慢性炎症和免疫激活可以促进动脉粥样硬化的发生和发展在艾滋病毒感染的设置26- - - - - -30.]。此外,它已被广泛描述艺术有牵连在动脉粥样硬化过程中,尤其是基于π的方案(31日]。在这项研究中,我们评估了淋巴细胞t细胞表型和il - 6和功能之间的关系在艾滋病毒阳性患者血浆水平和c-IMT艺术。我们招收了118名患者中,94例艾滋病毒感染48周以来艺术与检测不到病毒血症(< 37拷贝/毫升)和低心血管疾病风险定义的Framingham分数< 10%和24阴性个体匹配在年龄、性别、和Framingham分数。我们观察到c-IMT增加艾滋病毒阳性患者比健康对照组,HIV阳性患者,42/94(44.7%)病理c-IMT(≥0.9毫米)。几项研究表明,测量c-IMT一直与冠状动脉粥样硬化的程度,增加c-IMT是预测未来的CVD事件。c-IMT强烈等传统危险因素与男性,老化,超重,高血胆固醇、糖尿病和胰岛素抵抗,吸烟,,特别是高血压,大概是因为媒体肥大(16]。新的或各种脂蛋白等新兴风险因素,心理状态,血浆粘度,和半胱氨酸也伴随着c-IMT值。在艾滋病毒感染的设置,其他因素在动脉粥样硬化的发病机制和发展中发挥作用,艾滋病毒本身就是主要的球员之一。艾滋病确定慢性炎症状态与免疫系统的激活和进步的老化(4,23- - - - - -25]。最近,一些作者也建议一个协会之间的t细胞激活/衰老和亚临床颈动脉疾病的标志,即使在患者稳定艺术(9,30.]。在这篇文章中,我们观察到一个更高层次的激活和衰老CD4 +和CD8 + T淋巴细胞比一般人群HIV阳性个体中,虽然艺术提供了全面抑制HIV病毒血症。此外,艾滋病主题与病理c-IMT显示水平的免疫激活和正常的免疫衰老高于HIV-subjects c-IMT。炎症和内皮细胞激活的角色/功能障碍在动脉粥样硬化的发展一直得到广泛的研究在普通人群和几个标记,如VCAM-1 ICAM-1,和血管性血友病因子抗原,可以可靠地表明动脉粥样硬化内皮细胞的激活增加。肿瘤坏死因子-α已经与心肌功能障碍导致的急性冠脉综合征和高水平的il - 1和il - 6与亚临床动脉粥样硬化(9,10]。此外,新的可溶性标记包括功能已被证明参与动脉粥样硬化的发展和进展(32- - - - - -34]。功能/等级/ RANKL系统、肿瘤坏死因子超家族成员,主要涉及骨改建计划,参与免疫和血管系统(35- - - - - -38]。事实上,RANKL表达成骨细胞细胞及其前体激活受体(排名),破骨细胞表达的细胞及其前体,从而促进破骨细胞形成,激活,延长破骨细胞的生存。RANKL的影响被分泌的糖蛋白功能,这对RANKL充当诱饵受体。RANKL /功能的变化比骨骼疾病的发病机理至关重要。骨骼和心血管疾病之间的关系是已知的;功能在这个比赛,从骨头到血管系统视为一座桥。在心血管疾病的作用功能仍然有争议。功能可能导致内皮功能障碍通过阻断RANKL信号就是能保护细胞内激活内皮一氧化氮合酶途径等途径,来增加炎症细胞的粘附和迁移的内皮和活动metalloproteases [32,39,40]。在先前的研究中,我们发现hiv阳性个体功能等离子体水平高于健康对照组,表明一个功能离子水平和心血管疾病之间的联系。功能增加艾滋病毒阳性患者中血浆浓度低的心血管风险可能表明功能开发过程与动脉粥样硬化的早期阶段。我们功能显示,血浆浓度在艾滋病毒感染与动脉粥样硬化相关主题Framingham分数较低。功能因此,等离子体测量可能是一个有用的和非侵入性的工具在早期临床实践,以区分受试者患动脉粥样硬化的风险(13]。虽然在多变量分析功能还没有被发现是一个独立的因素与c-IMT,功能感染艾滋病毒的患者的血浆水平明显高于健康对照组()和患者病理c-IMT有hiv阳性个体功能离子水平高于正常c-IMT ()。功能此外,等离子体水平严格与CD8 + T淋巴细胞HLADR + CD38 +,支持与免疫激活,细胞因子的生产和动脉粥样硬化。因此,我们的假设是高水平的免疫激活和免疫衰老的CD8 T细胞功能可能会影响生产导致hiv阳性个体c-IMT增加。功能测量血浆水平与CD8 T细胞免疫激活和免疫衰老可能是一个有用的和非侵入性参数以确定hiv阳性个体中早期动脉粥样硬化心血管风险较低。

5。结论

几个因素已经与艾滋病患者的动脉粥样硬化的发病机制。年龄、π暴露和CD8 + T淋巴细胞HLADR + CD38 +和CD8 + T CD57 + CD28与c-IMT−被证实是独立相关。总之,CD8 + T细胞的免疫激活和免疫衰老功能与等离子体水平可能与早期动脉粥样硬化的发展和发展在感染艾滋病毒的患者中,甚至在病毒抑制。

利益冲突

作者都没有任何冲突或潜在的利益冲突。

承认

描述的项目支持的“Sapienza大学公共卫生和传染病的罗马。

补充材料