文摘
最新的几个作者讨论了细胞之间的相互作用过程中形成炎性浸润炎症性肠病(IBD),主要处理内镜活检标本。这些通常只包含粘膜。我们评估全肠道壁部分,似乎是特别重要的在克罗恩病(CD)的患者。我们的研究的目的是评估血管密度和血小板反应蛋白- 1的表达之间的关系(TSP-1)和血管内皮生长因子受体1 (VEGFR-1)在肠壁全层组织片段取自患者结肠切除术后,比较那些与IBD non-IBD对照组。组织学部分与抗体应用CD-31, TSP-1, VEGFR-1和病理学家使用计算机辅助的形态学分析。我们的研究显示显著提高血管密度和血管面积比例在所有患者肠道壁层CD相比控制。我们还演示了血管密度分布差异溃疡性结肠炎(铜)和CD和铜和控制之间的关系。但是我们没有发现显著相关性结果和VEGFR-1或TSP-1表达式。我们的结果可能表明存在不同,TSP-1独立通路的抗血管炎症性肠病。
1。介绍
溃疡性结肠炎(铜)和克罗恩病(CD)被称为慢性炎症性肠病(IBD)。对炎症性肠病病因仍有一些争议。与炎症性肠病相关的因素中,血管生成在临床症状的发展中扮演重要的角色。它已经表明,炎症性肠病的恶化增加血管生成特别是在溃疡性结肠炎(1,2]。这一发现了抗血管新生治疗IBD的概念,是由Danese et al。3]。
据报道,抗血管生成在炎症性肠病的发展可以测量的检测血小板反应蛋白(4,5]。抗血管生成以来几乎总是与血管生成有关,大量的血管生成因子表示尽可能同行血小板反应蛋白。其中,血管内皮生长因子(VEGF)被认为扮演重要角色通过刺激内皮细胞的迁移和增殖(ECs)和angiogenesis-related基因的表达。有7种VEGF家族和两个受体VEGFR-1 VEGF-A VEGFR-2最重要的血管生成(6,7]。血小板反应蛋白(TSP)是450 kD胶粘剂最初发现于血小板糖蛋白α颗粒(8]。血小板反应蛋白是细胞外基质的粘附分子,包括层粘连蛋白、纤连蛋白、纤维蛋白原、血管性血友病因子。血小板反应蛋白分泌的糖蛋白,调节cell-matrix交互,影响血小板聚集,并支持中性粒细胞趋化性和附着力9]。血小板反应蛋白- 1 (TSP-1)称为一个反血管增生的因素。有几篇文章TSP-1在IBD的角色,其中大部分基于动物模型(4,5]。
我们的研究的目的是评估血管生成与VEGFR-1和血小板反应蛋白- 1的表达相关性是否调解在维持血管生成和抗血管生成之间的平衡在炎症性肠病。我们已经决定利用计算机辅助的形态学促进血管密度和免疫组织化学的分析强调了血管生成因子的表达。
2。材料和方法
我们分析了全层肠壁组织部分经常准备的福尔马林固定,石蜡包埋组织样本。所有样品都收集在IBD的结肠切除术后。我们所有IBD-affected肠切除,因为炎症的一个活跃的阶段。铜内部提出了五年级的疾病,根据炎症组织学分级量表评估在溃疡性结肠炎弋波et al。10]。与CD显示肠道疾病的严重阶段根据弋波(11]。而对照组的患者接受肠切除检测不到发炎由于迹象,nonvascular条件。所有标准票房程序期间收集组织标本。患者的数量在每组表所示1。
只有一个组织片段包含完整的肠壁厚度收集从每个病人。在炎症性肠病组组织碎片收集从网站所涉及的疾病。对照组使用成立的碎片收集从宏观上改变肠道壁。所有组织样本都浸泡在福尔马林溶液,嵌入在石蜡,并根据标准分为4部分测微计、组织病理学协议。
一个部分在每种情况下与苏木精和伊红染色经常评估疾病或确认的程度缺乏病理学(对照组)(见图1,2,3)。
其他部分与抗体应用CD-31(突出血管壁),血小板反应蛋白- 1和VEGFR-1(对)的表达。抗体和各自的稀释如表所示2。执行可视化En-Vision Flex可视化系统(Dako)。所有抗体都是早些时候验证为常规使用免疫组织化学在我们的设施。
应用部分随后被拍到和分析。
我们使用徕卡的形态学分析定量电视显微镜工作站以及ImageJ自定义宏(12- - - - - -14]。
每一层的血管壁分别进行了分析。血管密度评估是基于两个parameters-immunostaining反对CD31每平方毫米,部分血管覆盖面积的百分比。血小板反应蛋白表达是由两个独立评估病理学家半定量的方式。VEGFR-1表达式是通过计算评估显示,内皮细胞免疫组织化学反应的容器。免疫组织化学表达VEGFR-1如图4。
统计分析的结果(Mann-Whitney执行测试,Kruskall-Wallis测试,相关分析)的使用编程语言(15]。
3所示。结果
数据5- - - - - -7显示血管密度值在肠组织层墙在我们的研究中。
(一)
(b)
(c)
(d)
(一)
(b)
(c)
(d)
我们发现在统计上有显著差异的两个平均船数和平均血管面积分数在克罗恩病相比,正常肠溃疡性结肠炎相比正常肠(见表3,数据6和8)。
(一)
(b)
(c)
(d)
血管面积百分比差异溃疡性结肠炎和控制是微不足道的黏膜下层、肌层固有层。有趣的是,我们的研究结果显示,subserosa血管密度明显高于对照组患者相比,溃疡性结肠炎如图6和8。
我们还展示了显著差异在两个平均船数和平均血管面积分数在所有层在克罗恩病和溃疡性结肠炎()。
我们的研究没有显示出显著相关性IBD类型和VEGFR-1 (Flt1)之间的表达和血管密度和VEGFR-1表达式(见表4和图7)。
TSP-1偶尔被发现(4例,肠上皮细胞内表达,见图9)只有在IBD患者样本(在铜和1 3 CD),它似乎artifactual而不足以做出任何之间的统计相关性TSP-1表达和血管密度或VEGFR-1表达式。我们发现强有力的内部控制免疫组织化学反应的thrombocytes血管。回答标题的问题,我们无法找到一个严格的相关性血小板反应蛋白和血管内皮生长因子受体表达。
4所示。讨论
我们的研究结果支持宏观和微观模式的情况下与炎症性肠disease-intensive血管堵塞的活跃阶段。我们还发现显著增加的血管几乎所有的四层的肠道壁而比较克罗恩病和溃疡性结肠炎与正常肠道壁。与CD31染色显示的重要性不仅允许评估血管的数量也显示血管扩张。增加血管计数可以支持血管生成伴随着VEGF的事实。然而,在我们看来,Flt1 (VEGFR1)不是一个标记angiogenesis-this研究没有显示显著反应在正常和IBD肠子。这是相反Konno等人谁说表达Flt-1(等)增加活跃的铜(16]。我们相信更好的标记血管生成可能是另一个的表达VEGF receptor-VEGFR2 (KDR / Flk-1),也研究了相同的作者。VEGFR2在血管生成中的重要性也描述了费拉拉et al。6和臼井仪人等。17]。我们分享Scaldaferri等人的意见指出,诱导后的结肠炎,VEGF-A和VEGFR-2的表达明显增强,而没有增加的表达VEGFR-1观察(18]。只有四个积极的血小板反应蛋白表达的发现在我们的研究中可以通过几种机制来解释。我们所有的炎症性肠病的病例收集患者从急性和疾病的严重阶段。这可以解释inflammation-induced TSP-1表达的变化。同时,增加刺激血管生成途径可以完全抑制抗血管生成(抑制血小板反应蛋白表达)。也有可能的抗血管生成途径IBD依靠TSP-1以外的介质。我们也不能排除我们的抗体反应与不同抗原表位TSP-1(非特异性)导致artifactual染色。我们的研究结果并没有证实之前的报告可能TSP-1的角色。Zak等人,Punekar et al。4,5]研究了TSP-1-deficient小鼠实验性结肠炎和建议TSP-1可能减少血管生成。Alkim等人研究了只有粘膜标本,发现TSP-1较高的表达在炎症性肠病组与健康对照组(19]。我们找不到这种相关性因为TSP-1组织反应是零星的和虚弱。我们想强调,研究肠道壁的厚度与大多数报道处理样本肠道粘膜。根据我们的调查结果,血管数量的增加,他们成为肠道壁的扩张在所有层(特别是在克罗恩病)显示,血管生成是一个主要的病理过程不仅发生在肠道壁的粘膜,还在其他层。
承认
这项研究受到了医学研究生教育中心的资助号合同下。501-1-09-12-12。