文摘gydF4y2Ba
T细胞免疫球蛋白粘蛋白(TIM)蛋白质调节T细胞的激活和宽容。TIM-1扮演着一个重要的角色在免疫反应的调节和自身免疫性疾病的发展。TIM-1 TIM-4是一种天然配体,TIM-1的交互和TIM-4参与调节辅助T细胞反应和调制(Th) Th1 / Th2细胞因子的平衡。遗传病的(BD)是一种慢性疾病,多系统与关节炎的炎症性疾病,肠道,黏膜与皮肤的,眼部,血管,和中枢神经系统的参与。Tim-1表达较低的单纯疱疹病毒诱导BD小鼠模型相比,在无症状的BD正常(BDN)老鼠。Tim-4 BD老鼠的表达高于BDN老鼠。在这项研究中,我们调查了蒂姆表达式与BD-like BD小鼠模型症状。Tim-1 Tim-4表达式是由小干扰rna注入到一个表达载体或双相障碍小鼠模型。的gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量注入BD老鼠导致BD-like症状和降低严重程度评分的变化。治疗Tim-4 siRNA也改善了BD-like症状和减少的严重程度得分伴随着upregulation调节性T细胞。我们表明,调节Tim-1或Tim-4 BD-like症状小鼠的影响。gydF4y2Ba
1。介绍gydF4y2Ba
T细胞免疫球蛋白和粘蛋白域(TIM)的家庭位于染色体11 b1.1在老鼠身上,由几个成员(gydF4y2Ba蒂姆gydF4y2Ba1 - 8)。在人类,它位于5号染色体q33.2和包括三个成员(gydF4y2Ba蒂姆gydF4y2Ba1,3,4)[gydF4y2Ba1gydF4y2Ba]。个人蒂姆家庭成员可能作为哮喘易感性标记,过敏和自身免疫性疾病,以及潜在的辅助T细胞表面标记(Th) 1型和Th2细胞(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。因此,人类的gydF4y2Ba蒂姆gydF4y2Ba基因家族是至关重要的监管Th1 / Th2介导免疫反应(gydF4y2Ba2gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
TIM-1首次发现是甲肝病毒细胞受体1 (gydF4y2Ba3gydF4y2Ba,gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)和肾损伤分子,KIM-1 [gydF4y2Ba5gydF4y2Ba,gydF4y2Ba6gydF4y2Ba]。TIM-1 CD4的表达gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞活化及其表达式后持续优先Th2但不是Th1细胞(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。TIM-1调节免疫反应中起着重要的作用和自身免疫性疾病的发展。的high-avidity anti-Tim-1抗体增强实验性自身免疫性脑炎的严重性增加autopathogenic Th1和Th17响应,而low-avidity抗体抑制autopathogenic Th1和Th17反应(gydF4y2Ba8gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
TIM-1 TIM-4是一种天然配体(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba),只表示在抗原递呈细胞,包括树突细胞(dc)和巨噬细胞(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba),它介导凋亡细胞的吞噬作用和保持宽容中扮演一个重要的角色gydF4y2Ba11gydF4y2Ba,gydF4y2Ba12gydF4y2Ba]。TIM-1 TIM-4交互调节Th细胞反应和调节Th1 / Th2细胞因子的平衡(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。DC-derived TIM-4维护TIM-1 Th2细胞在一个稳定的状态和维持Th2极化(起着至关重要的作用gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。TIM-4绑定TIM-1有不同的对T细胞增殖的影响。Tim-4-Ig一贯导致的高剂量的增加与T细胞受体T细胞增殖在结扎,而低浓度的Tim-4-Ig抑制T细胞增殖(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。人类TIM-1也与其他类型的免疫功能紊乱有关,如过敏性皮炎,过敏,风湿性关节炎,哮喘,和系统性红斑狼疮(SLE) [gydF4y2Ba14gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba18gydF4y2Ba),这表明Tim-1可能调节免疫反应。此外,TIM-4表达外周血单核细胞(PBMCs)也会增加在系统性红斑狼疮患者gydF4y2Ba13gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
遗传病的疾病(BD)是一个Th1-polarized [gydF4y2Ba19gydF4y2Ba),慢性、多系统与关节炎的炎症性疾病,胃肠黏膜与皮肤的,眼部,血管,和中枢神经系统的参与。这种疾病需要长期与周期性发作和逐渐恶化gydF4y2Ba20.gydF4y2Ba]。双相障碍的病因还不清楚;然而,病毒感染一直假定的一个主要因素。摘要以来首次提出一种病毒病原学(gydF4y2Ba21gydF4y2Ba),他的假设验证通过检测病毒在唾液gydF4y2Ba22gydF4y2Ba)、肠道溃疡(gydF4y2Ba23gydF4y2Ba),和生殖器溃疡(gydF4y2Ba24gydF4y2Ba,gydF4y2Ba25gydF4y2BaBD患者。随后,单纯疱疹病毒(HSV)接种的耳垂ICR小鼠导致BD-like症状的发展(gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。表现在小鼠接种HSV包括多个症状如口腔溃疡、生殖器溃疡、皮肤溃疡、眼部症状,肠溃疡、关节炎、神经介入,以及皮肤结痂。这些症状的频率类似于双相障碍患者(gydF4y2Ba27gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
TIM-1和TIM-4尚未研究了在双相障碍直到现在。在这项研究中,我们调查了蒂姆表达式与BD-like BD小鼠模型症状。Tim-1表达和分析了Tim-4 BD老鼠和BD-like症状的变化观察通过调节Tim-1或Tim-4表达式。此外,细胞表型和细胞因子水平变化后的免疫细胞被证实的Tim-4 BD差别upregulation Tim-1或对这些老鼠。gydF4y2Ba
2。材料和方法gydF4y2Ba
2.1。抗体和试剂gydF4y2Ba
鼠标anti-CD4、anti-Tim-1 anti-Tim-4、anti-CD8a anti-CD122, anti-CD11b, anti-CD11c, anti-CD25抗体以及anti-Foxp3染色设备买来eBioscience(美国圣地亚哥,CA)。gydF4y2Ba
2.2。动物实验gydF4y2Ba
只有雄性老鼠(4 - 5周大)感染了HSV 1型(1×10gydF4y2Ba6gydF4y2Ba空斑形成单位/毫升,F株)生长在维洛细胞如前所述gydF4y2Ba26gydF4y2Ba]。我们使用麻醉剂的混合物组成的Zoletil (Virbac实验室,卡罗,法国)和Rompun(拜耳、首尔、韩国)。Zoletil和Rompun的比例是1:4,这是管理的剂量40gydF4y2BaμgydF4y2BaL /鼠标(tiletamine 10毫克/公斤,zolazepam 10毫克/公斤,和甲苯噻嗪盐酸36毫克/公斤)通过肌肉注射。病毒接种间隔10天进行了两次,后16周的动物被观察到。动物是依照协议批准亚州大学医学院动物保护委员会(机构批准号:amc - 102)。gydF4y2Ba
2.3。BD-Like症状gydF4y2Ba
多个症状观察小鼠HSV接种后,和12%的HSV-injected老鼠发达BD-like症状。消失的症状或> 20%降低损伤尺寸大小分类是有效的。测定双相障碍严重程度评分之后,确定BD活动指数的价值,概述在BD活动形式(gydF4y2Bahttp://www.behcet.ws/pdf/BehcetsDiseaseActivityForm.pdfgydF4y2Ba)。表现出的症状患者,包括口腔溃疡、生殖器溃疡、红斑、皮肤脓疱,皮肤溃疡,joints-arthritis,腹泻、模糊或红眼(左,右),降低视力(左,右),失去平衡,变色的皮肤,和肿胀的脸BD小鼠模型的选择和分析。每个症状的评分,总分是用来确定双相障碍严重程度评分。gydF4y2Ba
2.4。gydF4y2BaTim-1gydF4y2BaDNA结构gydF4y2Ba
一个gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba构造一个细胞外国旗抗原决定基生成标签(gydF4y2Ba28gydF4y2Ba]。cDNA克隆小鼠的整个编码序列gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba构造。简单来讲,gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba开放阅读框(不包括起始密码子和信号序列)放大从这个克隆通过聚合酶链反应和结扎成pCDEF3表达质粒(gydF4y2Ba29日gydF4y2Ba]。所有的DNA结构被自动化的DNA测序验证。使用的所有质粒被两个经过纯化Endo-Free列(美国试剂盒,就是查,CA)如前所述[gydF4y2Ba30.gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba
2.5。制备Tim-4小核RNA)gydF4y2Ba
Tim-4核(siTim-4)被Genolution合成药品,Inc .(首尔,韩国)。Tim-4 siRNA合成序列的意义:5′- CUA AAU CAC AUC AGA UCA ACA GCA GUU 3′和反义:5′- CUG CUG UUG AUC佐治亚大学UGU高斯UUA GUU 3′。转染的Tim-4 siRNA试剂jetPEI (PolyPlus-transfection、Llkirch、法国)被用来注入到老鼠。gydF4y2Ba
2.6。gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量和Tim-4 siRNA BD老鼠gydF4y2Ba
十gydF4y2BaμgydF4y2Ba克gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量是每隔两天四次腹腔注射到老鼠BD BD-like症状出现时,其次是2周的观察。控制被注射pCDEF3空向量。五gydF4y2BaμgydF4y2Bag的siRNA Tim-4腹腔内注射三次每隔2天到双相障碍小鼠表达下调Tim-4,紧随其后的是一个观察2周。炒siRNA作为消极的控制(Genolution制药有限公司、韩国、韩国)。gydF4y2Ba
2.7。流式细胞术gydF4y2Ba
PBMCs和淋巴结细胞被分离出小鼠和红细胞从细胞悬浊液在ACK的解决方案,然后用磷酸缓冲盐(PBS)。细胞与anti-mouse surface-stained抗体(CD4, CD8、CD11b CD11c, CD25、CD122, Tim-1,和Tim-4) 30分钟在黑暗中在4°C。使用一个anti-mouse Foxp3-staining缓冲区设置根据制造商的指示来检测Foxp3细胞。简单,细胞被固定使用修复/烫洗后的缓冲区1×透化作用缓冲然后孵化anti-mouse Foxp3抗体。进行分析,细胞被封闭,然后人口分析了染色细胞流式细胞分析仪(流式细胞仪第二章;美国新泽西,正欲富兰克林湖)≥10000的淋巴细胞。gydF4y2Ba
2.8。酶联免疫吸附测定(ELISA)gydF4y2Ba
血清收集的第一个政府后14天gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量和Tim-4 siRNA BD老鼠。血清进行了分析使用商业ELISA试剂盒检测小鼠白介素(IL) 6(研发系统、明尼阿波利斯、锰)、肿瘤坏死因子(TNF)gydF4y2BaαgydF4y2Ba(研发系统),IL-17(研发系统),il - 4(研发系统),和干扰素(IFN)gydF4y2BaγgydF4y2Ba(研发系统),根据制造商的指示。ELISA读者Bio-Rad模型170 - 6850标,和样本读波长450纳米。gydF4y2Ba
2.9。统计分析gydF4y2Ba
所有的数据表示为平均值±标准偏差。统计实验组之间的差异决定使用学生的gydF4y2Bat -gydF4y2BaBonferroni调整测试。使用9.3.0.0 MedCalc版本进行了统计分析。一个gydF4y2Ba被认为是显著的。gydF4y2Ba
3所示。结果gydF4y2Ba
3.1。Tim-1和Tim-4表达细胞的频率在正常健康,BD正常(BDN)和BD老鼠gydF4y2Ba
Tim-1的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞在细胞分析淋巴结(LN)、脾(SP), PBMCs正常健康的(也不)和BDN(1型单纯疱疹病毒接种但没有症状)小鼠和流式细胞仪与BD的老鼠相比。在LN, Tim-1的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba双相障碍小鼠细胞显著低于BDN老鼠(BDN与BD (%): Tim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)与gydF4y2Ba(gydF4y2Ba),gydF4y2Ba;CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)与gydF4y2Ba(gydF4y2Ba),gydF4y2Ba;CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)与gydF4y2Ba(gydF4y2Ba),gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba1(一)gydF4y2Ba)。在SP, BD老鼠显示频率显著低于也或BDN老鼠(也与BDN与BD (%): Tim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)与gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)与gydF4y2Ba(gydF4y2Ba),也没有与双相障碍gydF4y2Ba,BDN与双相障碍gydF4y2Ba;CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)与gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)与gydF4y2Ba(gydF4y2Ba),也没有与双相障碍gydF4y2Ba,BDN与双相障碍gydF4y2Ba)。CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba三组之间细胞显示出类似的频率(图gydF4y2Ba1 (b)gydF4y2Ba)。在PBMCs BD老鼠的频率略低于BDN,但并不显著(BDN (gydF4y2Ba)与双相障碍(gydF4y2Ba)(%):Tim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba;CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba;CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)。水平明显高于双相障碍小鼠比和老鼠(图gydF4y2Ba1 (c)gydF4y2Ba)。这些数据表明,Tim-1表达细胞的频率在BD老鼠相比下调BDN老鼠。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
(c)gydF4y2Ba
Tim-4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞也分析了LN、SP和PBMCs也,BDN, BD老鼠。在LN, Tim-4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba双相障碍小鼠细胞明显高于也和BDN老鼠(也与BDN,与BD (%):gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)与gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)与gydF4y2Ba(gydF4y2Ba),也不与BDNgydF4y2Ba5、与双相障碍,gydF4y2Ba01,BDN与双相障碍gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba2(一个)gydF4y2Ba)。在SP, Tim-4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞BD老鼠也明显高于那些也不是老鼠(也与BD (%):gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)与gydF4y2Ba(gydF4y2Ba),gydF4y2Ba)。然而,BDN和BD老鼠之间差异不显著(图gydF4y2Ba2 (b)gydF4y2Ba)。PBMCs Tim-4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2BaBD老鼠细胞高于或老鼠(图gydF4y2Ba2 (c)gydF4y2Ba)。此外,在腹膜巨噬细胞,Tim-4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba双相障碍小鼠细胞明显高于也和BDN老鼠(也与BDN与BD (%):gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)与gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)与gydF4y2Ba(gydF4y2Ba),也与BDN,gydF4y2Ba,也没有与双相障碍,gydF4y2BaBDN与双相障碍,gydF4y2Ba)。没有观察到也和BDN老鼠之间的差异(图gydF4y2Ba2 (d)gydF4y2Ba)。此外,我们还研究了CD11b的频率gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-4gydF4y2Ba+gydF4y2Ba和CD11cgydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-4gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞在LN和SP。在LN,标记BD老鼠高于和BDN老鼠(还是(gydF4y2Ba)与BDN (gydF4y2Ba)与双相障碍(gydF4y2Ba)(%):CD11bgydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-4gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba与gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,也与BDN,gydF4y2Ba,也没有与双相障碍,gydF4y2BaBDN与双相障碍,gydF4y2Ba;CD11cgydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-4gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba与gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,也与BDN,gydF4y2Ba,也没有与双相障碍,gydF4y2BaBDN与双相障碍,gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba2 (e)gydF4y2Ba)。在脾细胞,CD11c的表情gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-4gydF4y2Ba+gydF4y2Ba在也没有细胞类似于LN (gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba),BDN (gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba)和双相障碍小鼠(gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba)(不与BDN,gydF4y2Ba,也没有与双相障碍,gydF4y2BaBDN与双相障碍,gydF4y2Ba)。相比之下,CD11b的频率gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-4gydF4y2Ba+gydF4y2BaBD老鼠细胞明显低于那些不,但是高于BDN老鼠(图gydF4y2Ba2 (f)gydF4y2Ba)。这些数据表明,BD老鼠Tim-4表达细胞的频率调节在BDN老鼠相比。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
(c)gydF4y2Ba
(d)gydF4y2Ba
(e)gydF4y2Ba
(f)gydF4y2Ba
3.2。管理gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量上调Tim-1的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞在体内LNgydF4y2Ba
我们调查的变化BD-like症状按照规定Tim-1表达式。的gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba表达载体提高BD小鼠移植Tim-1表达式。的gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量是腹腔内注射10、30、50gydF4y2BaμgydF4y2Bag /鼠标到老鼠也每隔2天的两倍。Tim-1的频率gydF4y2Ba+gydF4y2BaLN的细胞注入控制向量组的相比去年注射后的第二天。Tim-1的表达gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞在10gydF4y2BaμgydF4y2BaggydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量注射组(gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba)显著高于控制向量注射组(10gydF4y2BaμgydF4y2Ba旅客:gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba,gydF4y2Ba;50gydF4y2BaμgydF4y2Ba旅客:gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba3gydF4y2Ba)。然而,30 (gydF4y2Ba)和50gydF4y2BaμgydF4y2Bag (gydF4y2Ba)gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量表达式注射组显示低于10gydF4y2BaμgydF4y2Bag注射组。因此,10gydF4y2BaμgydF4y2Ba克的gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量用于后续实验。gydF4y2Ba
3.3。管理gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba矢量影响BD-Like症状gydF4y2Ba
十gydF4y2BaμgydF4y2Ba克gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量是腹腔内注入BD小鼠四次每隔两天,观察2周紧随其后。皮肤和生殖器溃疡管理后改善gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量相比,那些在控制vector-injected组(图gydF4y2Ba4(一)gydF4y2Ba)。另外,严重程度评分gydF4y2Ba之前和gydF4y2Ba在控制向量组和1周gydF4y2Ba第一次注射后2周内的控制向量(gydF4y2Ba)。的严重程度评分gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量组gydF4y2Ba在注射之前,gydF4y2Ba在注射后1周(gydF4y2Ba),gydF4y2Ba在2周后注射在BD老鼠(gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba4 (b)gydF4y2Ba)。注射后的严重程度评分降低gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量,而控制向量注入并没有导致差异。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
(c)gydF4y2Ba
(d)gydF4y2Ba
两周后的第一个政府gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量BD老鼠,孤立LN和Tim-1 PBMCs进行了分析gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞的流式细胞仪。在LN, Tim-1的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量组注射相比略高的控制向量注射组(Con与Tim-1 (%):gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)与gydF4y2Ba(gydF4y2Ba),gydF4y2Ba)。然而,CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba和CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞类似的控制向量注射组(图gydF4y2Ba4 (c)gydF4y2Ba)。Tim-4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞(图也没有不同gydF4y2Ba4 (d)gydF4y2Ba)。在PBMCs Tim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞被略低gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量组注射,但CD4细胞gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,Tim-4gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞没有不同的(数据gydF4y2Ba4 (c)gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba4 (d)gydF4y2Ba)。有趣的是,CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞注入Tim-1向量组略高于控制向量注射组(Con与Tim-1 (%):gydF4y2Ba(gydF4y2Ba)与gydF4y2Ba(gydF4y2Ba),gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba4 (c)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
3.4。gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba矢量管理影响监管的细胞表型gydF4y2Ba
几个细胞表型分析了LN和PBMCs BD管理后的老鼠gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量。CD4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD25gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaFoxp3gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD25gydF4y2Ba+gydF4y2BaFoxp3gydF4y2Ba+gydF4y2Ba(Treg调节性T细胞在LN没有显著改变gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba矢量控制相比,注射组(Con (gydF4y2Ba)与Tim-1 (gydF4y2Ba)(%):CD4细胞gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD25gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba;CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaFoxp3gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba;Treg,gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba5(一个)gydF4y2Ba)。但是,在PBMCs, CD4细胞gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD25gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaFoxp3gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,Treg细胞gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量注射组显著高于控制向量注射组(Con (gydF4y2Ba)与Tim-1 (gydF4y2Ba)(%):CD4细胞gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD25gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba;CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaFoxp3gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba;Treg,gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba5(一个)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD122gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞是新发现的,视为Treg细胞(gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba,参与抗炎反应(gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]。另一种类型的Treg细胞、CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD122gydF4y2Ba+gydF4y2BaLN的T细胞,也分析了gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量注射组(Con (gydF4y2Ba)与Tim-1 (gydF4y2Ba)(%):gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba5 (b)gydF4y2Ba)。在PBMCs CD122gydF4y2Ba+gydF4y2Ba和CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD122gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞的gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量注射组也高于控制向量注射组(Con (gydF4y2Ba)与Tim-1 (gydF4y2Ba)(%):CD122gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba;CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD122gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
我们的研究表明,gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba矢量调节Treg细胞和CD122gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞在BD老鼠。老年病的细胞表型可能参与改善BD-like症状后注入Tim-1向量。gydF4y2Ba
3.5。促炎细胞因子的表达下调gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量政府BD老鼠gydF4y2Ba
血清分析ELISA在2周后gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba矢量管理到老鼠BD确定细胞因子的水平。IL-17水平gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量注射组显著低于对照组(Con (gydF4y2Ba)与Tim-1 (gydF4y2Ba)(pg / mL):gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)。肿瘤坏死因子-gydF4y2BaαgydF4y2Ba也显著降低gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量组相比,对照组注射(Con (gydF4y2Ba)与Tim-1 (gydF4y2Ba)(pg / mL):gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)。il - 6水平gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量注射组减少(Con (gydF4y2Ba)与Tim-1 (gydF4y2Ba)(pg / mL):gydF4y2Ba与72年。gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)。相比之下,il - 4的略微增加gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量注射组(Con (gydF4y2Ba)与Tim-1 (gydF4y2Ba)(pg / mL):gydF4y2Ba与gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)。但是,干扰素,gydF4y2BaγgydF4y2Ba水平之间没有差别gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba和控制向量注射组(图gydF4y2Ba6gydF4y2Ba)。因此,这些结果表明,gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量可能下调促炎细胞因子在BD老鼠。gydF4y2Ba
3.6。小干扰rna治疗Tim-4表达下调的表达Tim-4在正常健康的小鼠gydF4y2Ba
在双相障碍小鼠,Tim-4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞是高于还是和BDN老鼠在LN细胞和腹膜巨噬细胞(图gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)。siTim-4被注入小鼠腹腔内也下调Tim-4gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞,Tim-4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞在腹膜巨噬细胞,流式细胞仪进行了分析。Tim-4核(siTim-4) 2、5或10gydF4y2BaμgydF4y2Bag /鼠标或负控制(数控)炒核(2和5gydF4y2BaμgydF4y2Bag /鼠标)注射(NC: 5gydF4y2BaμgydF4y2Bag和siTim-4-2 5和10gydF4y2BaμgydF4y2Bag (gydF4y2Ba):gydF4y2Ba%与gydF4y2Ba% (gydF4y2Ba),gydF4y2Ba% (gydF4y2Ba),gydF4y2Ba% (gydF4y2Ba))(图gydF4y2Ba7(一)gydF4y2Ba)。siTim-4下调Tim-4gydF4y2Ba+gydF4y2Ba巨噬细胞剂量依赖性和显示显著差异在5gydF4y2BaμgydF4y2Bag和10gydF4y2BaμgydF4y2Bag管理组。因此,5gydF4y2BaμgydF4y2Bag注射用于以下实验。确定的时间疗效Tim-4核,5gydF4y2BaμgydF4y2Ba克siTim-4注入,Tim-4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba巨噬细胞后,流式细胞仪分析了24、48和72小时。siTim-4显著下调Tim-4gydF4y2Ba+gydF4y2Ba巨噬细胞,直到72小时相比,数控。Tim-4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba在48小时最低(数控与siTim-4 (gydF4y2Ba):24小时,gydF4y2Ba%与gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba;48 h,gydF4y2Ba%与gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba;72 h,gydF4y2Ba%与gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba7 (b)gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
3.7。管理siTim-4 BD-Like症状变化gydF4y2Ba
五gydF4y2BaμgydF4y2Ba克siTim-4是每隔两天三次腹腔内注入BD老鼠和老鼠观察2周(图gydF4y2Ba8(一个)gydF4y2Ba)。siTim-4管理后,BD-like症状,如皮肤和生殖器溃疡,与对照组相比。阴性对照组,严重程度评分gydF4y2Ba之前,gydF4y2Ba在一个星期gydF4y2Ba),gydF4y2Ba在2周后第一个老鼠注入BD (gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)。siTim-4治疗组得分gydF4y2Ba之前,gydF4y2Ba在1周(gydF4y2Ba),gydF4y2Ba在2周后注射到老鼠BD (gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba8 (b)gydF4y2Ba)。在1和2周后的第一个政府siTim-4 BD老鼠,从腹腔巨噬细胞分离和分析为Tim-4流式细胞仪。Tim-4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞1和2周后siTim-4治疗往往低于阴性对照组,但差异不显著(1周:gydF4y2Ba%与gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba2周:gydF4y2Ba%与gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba8 (b)gydF4y2Ba)。然而,在LN, Tim-4gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,CD11bgydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-4gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,CD11cgydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-4gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,Tim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞siTim-4治疗组在控制类似治疗组在1周后第一个siTim-4注入(数字gydF4y2Ba8 (c)gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba8 (d)gydF4y2Ba)。即使在第一次注射后2周,这些标记是不不同的(数据未显示)。在这些结果,BD-like症状改善siTim-4治疗和减少严重程度评分。gydF4y2Ba
(一)gydF4y2Ba
(b)gydF4y2Ba
(c)gydF4y2Ba
(d)gydF4y2Ba
3.8。Treg siTim-4治疗双相障碍小鼠细胞调节gydF4y2Ba
CD4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD25gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaFoxp3gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,Treg (CD4细胞gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD25gydF4y2Ba+gydF4y2BaFoxp3gydF4y2Ba+gydF4y2Ba)细胞的流式细胞仪分析了1和2周后第一siTim-4治疗双相障碍小鼠(图gydF4y2Ba9gydF4y2Ba)。1周后,Treg细胞略微增加siTim-4治疗双相障碍小鼠相比数控治疗组(数控与siTim-4: CD4细胞gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD25gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba%与gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba,gydF4y2Ba;CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaFoxp3gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba%与gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba,gydF4y2Ba;Treg,gydF4y2Ba%与gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)。2周后,Treg细胞明显高于在siTim-4治疗双相障碍小鼠比数控治疗组(数控与siTim-4: CD4细胞gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD25gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba%与gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba,gydF4y2Ba;CD4gydF4y2Ba+gydF4y2BaFoxp3gydF4y2Ba+gydF4y2Ba,gydF4y2Ba%与gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba,gydF4y2Ba;Treg,gydF4y2Ba%与gydF4y2Ba%,gydF4y2Ba,gydF4y2Ba)。这些结果表明,Treg细胞数量的增加与击倒的Tim-4 BD老鼠。gydF4y2Ba
3.9。治疗siTim-4降低血清水平的IL-17 BD老鼠gydF4y2Ba
管理siTim-4 BD老鼠后,分析了IL-17 ELISA的血清水平并与数控siRNA治疗双相障碍小鼠。IL-17水平倾向于减少siTim-4治疗组相比,在数控治疗组,但差异不显著(数控与siTim-4 (gydF4y2Ba):gydF4y2Bapg / mL和gydF4y2Bapg / mL,gydF4y2Ba)(图gydF4y2Ba10gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba
4所示。讨论gydF4y2Ba
双相障碍小鼠表达下调Tim-1水平和调节Tim-4水平LN, SP, PBMCs,腹膜巨噬细胞相比BDN老鼠。管理gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量调节Tim-1的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba小干扰rna表达下调细胞,Tim-4 Tim-4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞。管理gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量BD-like改善症状,如生殖器和皮肤溃疡和严重程度评分降低。TIM-1表达降低活动的系统性红斑狼疮患者相比,在不活跃的患者(gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。人类TIM-1与免疫功能紊乱有关,如过敏性皮炎,过敏,风湿性关节炎,哮喘,和系统性红斑狼疮gydF4y2Ba14gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba18gydF4y2Ba]。我们的数据表明,T细胞表型相关的Tim-1管理后并没有改变多少gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量。有趣的是,CD4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba在PBMCs增加T细胞gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba矢量控制注射组相比注射组。实际上,TIM-1 CD4的表达gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞活化后,其表达式优先持续Th2但不是Th1细胞(gydF4y2Ba1gydF4y2Ba,gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。肖等人报道,Tim-1-Fc触发CD4的频率显著增加gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞(gydF4y2Ba33gydF4y2Ba]。在我们的研究中,Treg细胞调节的gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量BD注射组。其他Treg细胞、CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD122gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞,在PBMCs和LN也更高gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量注射组与对照组相比。CD8gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD122gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞是新发现的,视为Treg细胞(gydF4y2Ba31日gydF4y2Ba和影响抗炎反应gydF4y2Ba32gydF4y2Ba]。我们的研究结果表明,影响Tim-1 BD-like症状的功能与Treg和CD8有关gydF4y2Ba+gydF4y2BaCD122gydF4y2Ba+gydF4y2BaT细胞。gydF4y2Ba
最近的研究表明,IL-17可能引发慢性自身免疫性炎症中发挥主导作用,被认为是必不可少的T细胞介导结肠炎和促进炎症gydF4y2Ba34gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba36gydF4y2Ba]。协会IL-17和BD患者il - 22生成时也被报道gydF4y2Ba37gydF4y2Ba,gydF4y2Ba38gydF4y2Ba]。肿瘤坏死因子-gydF4y2BaαgydF4y2Ba超表达与急性和慢性炎性疾病,如感染性休克、肠道疾病、克罗恩病、类风湿性关节炎、过敏性皮炎,牛皮癣,BD (gydF4y2Ba39gydF4y2Ba]。生产过剩的il - 6在风湿性关节炎中发挥作用,青少年特发性关节炎(gydF4y2Ba40gydF4y2Ba),炎症性肠病(gydF4y2Ba41gydF4y2Ba),和系统性红斑狼疮gydF4y2Ba42gydF4y2Ba]。anti-Tim-1抗体(高活动性/织)是一种炎性th17细胞的装置。TIM-1-TIM-4互动参与的规定Th细胞反应和调制Th1 / Th2细胞因子的平衡gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。我们的数据也表明,管理gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量减少促炎细胞因子,如IL-17, TNF -gydF4y2BaαgydF4y2Bail - 4和il - 6,但Th2型细胞因子的调节gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量注射组。最近,眼的调节细胞因子il - 22生成BD患者被anti-IL-6和anti-TNF——也表达下调gydF4y2BaαgydF4y2Ba(gydF4y2Ba37gydF4y2Ba]。这些结果与我们的研究结果相似。gydF4y2Ba
BD老鼠显示显著增加Tim-4 LN和腹膜巨噬细胞相比也和BDN老鼠。Tim-4的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞表达下调当Tim-4 siRNA管理和NC组小鼠相比。siTim-4政府倾向于减少Tim-4 BD老鼠gydF4y2Ba+gydF4y2Ba腹膜巨噬细胞的细胞。siTim-4管理BD老鼠显示改善症状如皮肤和生殖器溃疡、关节炎和显示降低严重程度评分。但是,Tim-4gydF4y2Ba+gydF4y2Ba细胞与T细胞表型siTim-4治疗后没有改变。TIM-4是TIM-1配体(gydF4y2Ba7gydF4y2Ba),不是表现在T细胞,而是专门表达的抗原递呈细胞,包括DCs和巨噬细胞(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba10gydF4y2Ba]。两组报道,Tim-4缺陷小鼠129或b6背景发展很少或没有自身免疫(gydF4y2Ba9gydF4y2Ba,gydF4y2Ba43gydF4y2Ba]。结合改善症状,Treg siTim-4治疗组显著调节细胞与对照组相比,和IL-17水平下降。在我们之前的研究中,Treg细胞过继转移BD老鼠也改善了BD-like症状(gydF4y2Ba44gydF4y2Ba]。此外,Treg细胞的频率较低的患者的自身免疫和炎症性疾病,如克罗恩氏病(gydF4y2Ba45gydF4y2Ba),多发性硬化(gydF4y2Ba46gydF4y2Ba),和系统性红斑狼疮gydF4y2Ba47gydF4y2Ba),比健康对照组和不活跃的病人。TIM-1-TIM-4互动是很重要的对于调节T细胞增殖和调制Th1 / Th2细胞因子的平衡gydF4y2Ba7gydF4y2Ba]。我们的数据表明,调节Treg细胞siTim-4可能有助于改善BD-like引起的症状。gydF4y2Ba
总之,Tim-1的频率gydF4y2Ba+gydF4y2Ba双相障碍小鼠细胞表达下调BDN相比,老鼠。管理gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量BD老鼠BD-like症状改善和减少的严重程度评分调控Treg细胞和显示促炎细胞因子。此外,治疗siTim-4调节Treg细胞和改进BD-like症状,是有关Tim-1 Tim-4表达式和Tim-1-Tim-4交互。此外,小干扰rna表达下调Tim-4 IL-17的水平,这可能是参与改善BD-like症状。因此,Tim-1和Tim-4的监管是有效改善BD-like症状在老鼠身上。gydF4y2Ba
利益冲突gydF4y2Ba
本研究没有利益冲突。gydF4y2Ba
作者的贡献gydF4y2Ba
的gydF4y2BaTim-1gydF4y2Ba向量是真诚地提供了从匹兹堡大学教授劳伦斯·p·凯恩。gydF4y2Ba
承认gydF4y2Ba
本研究支持韩国科学与工程基金会(KOSEF)授予r01 - 2008 - 000 - 20474 - 0,韩国卫生技术研发项目,省卫生、福利、和家庭事务(A100535)和2010 - 0011130和2013 r1a1a3008248韩国国家研究基金会(NRF)由教育部、科学和技术。Ju a .垫片进行了实验,Eun-So李讨论结果,孙Seonghyang设计研究中,a .垫片和孙Seonghyang写道。gydF4y2Ba